Tecidos embrionários e de larvas de Drosophila melanogaster, muitas vezes contêm uma mistura altamente heterogénea de tipos de células, o que pode complicar a análise da expressão dos genes nestes tecidos. Assim, para analisar os perfis de expressão de genes específicos de células a partir de tecidos de Drosophila, pode ser necessário isolar os tipos de células específicas, com elevada pureza e em rendimentos suficientes para aplicações a jusante, tais como o perfil de transcrição e imunoprecipitação da cromatina. No entanto, a morfologia celular irregular em tecidos, tais como o sistema nervoso central, juntamente com a população rara de tipos específicos de células nestes tecidos, pode apresentar desafios para os métodos tradicionais de isolamento de células, tais como por microdissecção laser e células activadas por fluorescência (FACS) . Aqui, uma abordagem alternativa para caracterizar os perfis de expressão de genes específicos de células usando o isolamento com base em afinidade de núcleos marcados, em vez de células intactas, está descrito. Núcleos do c específicoell tipo de interesse são geneticamente marcado com um marcador EGFP localizada envelope nuclear utilizando o sistema de expressão binário Gal4/UAS. Estes núcleos marcaram-EGFP pode ser isolado utilizando anticorpos contra GFP que são acoplados a esferas magnéticas. A abordagem descrita neste protocolo permite o isolamento de núcleos coerente de tipos de células específicas no sistema central nervoso larvas de Drosophila em elevado grau de pureza e em quantidades suficientes para análise de expressão, mesmo quando estes tipos de células compreendem menos de 2% da população total de células na tecido. Esta abordagem pode ser usada para isolar os núcleos a partir de uma ampla variedade de Drosophila embrionárias e tipos de células de larvas usando condutores Gal4 específicas, e podem ser úteis para o isolamento de núcleos a partir dos tipos de células que não são adequados para FACS ou microdissecção a laser.\nTecidos de Drosophila, tais como o sistema nervoso central contém uma mistura complexa de tipos de células. Assim, para analisar os perfis de expressão de genes específicos de células a partir de tecidos de Drosophila, que é necessário em primeiro lugar isolar uma população homogénea de células específicas em quantidades suficientes para permitir aplicações a jusante. Os métodos para isolar as células de tecidos intactos incluem microdissecção a laser, e de células activadas por fluorescência (FACS) de células inteiras. Enquanto FACS tem sido usado para isolar as células e os núcleos a partir de embriões de Drosophila e de Caenorhabditis elegans para a expressão do gene e cromatina de perfis 1-3, FACS e microdissecção laser pode ser difícil de realizar com sucesso em tecidos que contêm tipos de células altamente misturados entre si ou que contêm células com morfologia irregular, tais como os neurónios. Para ultrapassar esta dificuldade, os núcleos, em vez de células podem ser isoladas a partir de tipos de células específicos e utilizado para subsequente gene perfil de expressão. Importante, com base em análise de expressão de mRNA microarray utilizando amostras de RNA nucleares apresenta resultados geralmente comparável à realizada utilizando RNA total 4, 5. Além disso, a análise da expressão de genes usando o RNA nuclear tem sido usado com êxito para estudar a expressão de genes em vários organismos, incluindo C. elegans, Arabidopsis thaliana, de Drosophila, e seres humanos 4, 5 2, 3.\nVárias abordagens têm sido recentemente descrita para o isolamento de populações específicas de núcleos marcados a partir de tecidos de Drosophila que são adequados para análise da expressão do gene e / ou da cromatina imunoprecipitação. O isolamento lote de cromatina tecido-específicas para o método de imunoprecipitação (bits-chip) utiliza FACS para isolar núcleos fixos com base na expressão de tipo específico de célula de energia nuclear localizada GFP 2. Esta abordagem tem sido successfully utilizado para analisar a distribuição de modificações de histonas e factores de transcrição, utilizando a imunoprecipitação da cromatina de núcleos isolados a partir da mesoderme de embriões de Drosophila 2. No entanto, as abordagens baseadas em FACS pode ser menos adequado para o isolamento de núcleos marcados que constituem apenas uma pequena proporção de uma população mista, devido ao aumento do tempo de classificação necessária para obter números adequados para aplicações a jusante. Para superar estas limitações, vários grupos têm utilizado técnicas de isolamento à base de afinidade para purificar os núcleos, que são marcadas com um epitopo específico de um tipo de célula particular. O isolamento dos núcleos marcados em tipos específicos de células de método (intacto) desenvolvidos para uso em Arabidopsis thaliana, 6, 7, foi recentemente adaptado para uso em Drosophila 8. Neste método, uma proteína de fusão de envelope nuclear que é um substrato para in vivo biotinilação é coexpressed com a Escherichia coli biotina ligase BirA em tipos específicos de células. Núcleos marcados com biotina podem ser, posteriormente, purificado a partir de populações mistas, utilizando a afinidade de isolamento à base de estreptavidina. Utilizando esta abordagem, os núcleos foram rotulados com sucesso e isolado a partir da mesoderme de embriões de Drosophila, em que uma proteína de fusão de envelope nuclear foi expresso sob o controlo de um potenciador específico para mesoderme 8. Os autores também geradas proteínas de fusão de envelope nucleares que podem ser expressas em qualquer tipo de células sob o controlo da sequência reguladora GAL4 UAS 9. Esta abordagem é capaz de isolar rapidamente subconjuntos de núcleos marcados a partir de populações mistas, mas requer três construções transgénicas separadas e podem, portanto, ser inadequada para aplicações genéticas particulares. Recentemente, uma aproximação tem sido descrita na qual SOL (S AD1 e C-84 da ONU) proteínas contendo o domínio que se localizam na membrana interior do envelope nuclear foram etiquetados comas proteínas fluorescentes e expresso sob o controlo do sistema Gal4/UAS 10. Os núcleos foram isolados na presença de detergente não iónico para remover a membrana externa do envelope nuclear, e de afinidade-purificada utilizando esferas magnéticas acopladas a anticorpos anti-GFP. Esta abordagem foi usada com sucesso para isolar pequenas populações de núcleos marcados de subtipos neuronais específicas no cérebro adulto de Drosophila 10.\nAqui, um protocolo para o isolamento de núcleos marcados a partir de uma população mista de células a partir de tecido de larvas de Drosophila é descrito. Este método foi desenvolvido de forma independente, mas é semelhante ao método descrito por Henry et al. 10 Em primeiro lugar, os núcleos foram marcadas com um marcador fluorescente que é expresso apenas em tipos de células específicos em Drosophila melanogaster para facilitar o subsequente isolamento de núcleos marcados a partir de populações mistas usando uma abordagem baseada em afinidade. Para identificar os núcleos,foi utilizado o domínio KASH (K larsicht / D nc-1 / S ino h omology). O domínio KASH é um domínio de transmembrana que se localiza na membrana externa do envelope nuclear, em parte através de interacções com proteínas contendo o domínio SUN dentro do espaço perinuclear 11. O domínio KASH C-terminal de proteínas, tais como as de Drosophila MSP-300 e Klarsicht ancora estas proteínas para a membrana nuclear externa, ao passo que os seus domínios N-terminais interagir com proteínas do citoesqueleto tais como actina ou microtúbulos no citoplasma 12-14. As construções foram geradas em que o domínio de Drosophila KASH MSP-300 foi fundido com o terminal C de EGFP, sob o controlo da sequência reguladora GAL4 UAS no vector pUAST attB-15, 16. Usando a integração específica de sítio phiC31, moscas transgénicas foram geradas em que os UAS-EGFP :: MSP-300 KASH transgene foi inserido no locus no cromossoma attP23L 17. A UAS-EGFP :: MSP-300 KASH moscas podem ser cruzadas com moscas que expressam Gal4 o condutor em um tipo particular de células, o que resulta na expressão do alvo de EGFP na membrana nuclear externa no tipo celular de interesse. Núcleos marcados podem então ser purificados a partir de populações de células misturadas, utilizando anticorpos contra GFP acoplados a esferas magnéticas. Nesta abordagem, não é necessária a utilização de detergente não iónico, porque a etiqueta de EGFP está localizada ao lado citoplasmático da membrana nuclear externa, e é, portanto, acessível aos anticorpos.\nO protocolo abaixo descrito pode ser utilizado para isolar / enriquecer núcleos marcados com EGFP de tipos específicos de células de Drosophila em tecidos larvais, para quantificar a pureza e o rendimento de núcleos isolados, e para extrair o RNA nuclear apropriado para a transcrição reversa-reacção da polimerase em cadeia quantitativa (qRT -PCR), a análise da expressão do gene. O isolamento e purificação de afinidade-núcleos (excluindo tissue dissecção) pode ser realizada em menos de uma hora. Os resultados são apresentados mostrando que os núcleos da glia podem ser isolados com sucesso a partir do lóbulo óptica das larvas e do olho do disco imaginal, e usado para posterior análise da expressão do gene. Prevê-se que esta abordagem seja útil para o isolamento / enriquecimento de núcleos marcados a partir de tecidos embrionários e de larvas, em que as células alvo constituem menos de 5% da população geral. Todas as ações de Drosophila e plasmídeos gerados por este estudo estão disponíveis a partir dos autores, mediante solicitação.\n1. Geração e Caracterização de EGFP :: KASH Drosophila\nCruz Gal4 motorista voa para UAS-EGFP :: MSP-300 KASH voa. Alternativamente, moscas recombinantes que transportam tanto o condutor de Gal4 e do transgene UAS-EGFP :: MSP-300 KASH pode ser gerada utilizando técnicas genéticas convencionais. Esta segunda abordagem é vantajoso se forem necessárias grandes quantidades de progenitura.\nCaracterizar a expressão do marcador EGFP :: KASH usando técnicas de microscopia padrão. Nota: expressão EGFP pode ser observada por técnicas de microscopia de padrão em dissecadas, fixas tecidos de Drosophila, ou em conjunto larvas, e não requer a utilização de um anticorpo.\nDeterminar o padrão de expressão de EGFP :: KASH marcador em todo o organismo sob um microscópio de fluorescência de dissecação (ver Materiais PDF). Nota: Muitos controladores de Gal4, incluindo o controlador de repo-GAL4 mostrado na Figura 1, n exibemonspecific padrões de expressão em outros tecidos, tais como larvas da glândula salivar (ver Resultados).\nAnalisar o padrão de expressão de EGFP :: KASH no tecido dissecado de interesse através de microscopia confocal.\nFixar o tecido de interesse, utilizando formaldeído numa concentração final de 4%, e ADN de mancha utilizando DAPI, a uma concentração final de 0,1 ug / ml para visualizar a localização da EGFP :: KASH marcação em relação ao ADN.\nAquisição de imagens utilizando uma objectiva de 40x / 1,30 óleo de imersão ou uma objectiva 20X / 0,75 imersão de óleo, dependendo do tamanho do tecido de interesse. As seguintes condições de excitação / emissão podem ser utilizados para a aquisição de imagens: 408 nm/425-475 nm (DAPI), 488 nm / 525-550 nm (GFP).\n2. Isolar Núcleos de Drosophila larval Tecidos\nPreparar equipamentos para a dissecção dos tecidos larval e posterior isolamento núcleos. Note-se quedechorionated embriões inteiros também pode ser utilizado como material de partida, se desejado. Recomenda-se utilizar tecidos de larvas parcialmente dissecados em vez de larvas inteira, se o tipo de células de interesse está presente em um tecido específico, tal como o disco imaginal. Isto reduz a ligação não específica, e também elimina os problemas que podem ser causados pela expressão de alguns condutores Gal4 em células não alvo.\nPreparar dois pares de pinças cortantes (ver Materiais PDF), um 9-siliconizada bem placa de vidro (ver Materiais PDF) e PBT (1x PBS, pH 7,4, 0,1% de Tween-20).\nPrebind o anticorpo GFP às pérolas magnéticas. Esta etapa deve ser iniciada antes do início da dissecção. Adicionar 10 uL de pérolas magnéticas (Invitrogen, ver Materiais PDF) e 2 ug de anticorpo GFP (Roche, ver Materiais PDF) para 400 ul de tampão de lavagem (1x PBS, pH 7,4, 2,5 mM de MgCl 2) em um tubo de 1,5 ml . A quantidade de pérolas e o anticorpo utilizado pode ser optimizada se necessário, com base na quantidade de alvo na samplo e a afinidade de ligação do anticorpo às pérolas.\nIncubar as pérolas e o anticorpo com rotação durante pelo menos 30 min à temperatura ambiente,.\nColocar o tubo de 1,5 ml contendo as contas e do anticorpo no suporte magnético (ver Materiais PDF) e permitem que as esferas se liguem ao magnética para aproximadamente 1-2 min. Retirar o sobrenadante contendo o anticorpo não ligado e tampão de lavagem, utilizando uma pipeta de 1 ml. Os grânulos permanecerá ligada à parede do tubo de 1,5 ml, no lado adjacente ao íman.\nLave as contas duas vezes com 1 ml de tampão de lavagem de cada vez, conforme descrito no ponto 2.1.4. Remover o tubo de 1,5 ml a partir da cremalheira magnética e inverter momentaneamente para misturar os grânulos e tampão de lavagem, durante cada etapa de lavagem.\nGuarde as contas ligadas a anticorpos em tampão de lavagem até que esteja pronto para continuar com o passo 2.7. As contas não devem ser autorizados a secar em qualquer fase do protocolo.\nDissecar tecidos larvais em PBT e transferir tecidos dissecados paraum poço da 9-bem prato. Normalmente, a dissecção do lobo óptico e olho disco imaginal de 100 larvas de terceiro instar fornece material suficiente para a análise de expressão gênica a jusante após isolamento núcleos.\nLavar o tecido isolado em tampão de extracção nuclear (10 mM HEPES-KOH, pH 7,5, 2,5 mM de MgCl 2, 10 mM de KCl) em um tubo de 1,5 ml. Transferir tecidos larvais isoladas para um homogeneizador Dounce de 1 ml (ver Materiais PDF) em gelo que contém 1 ml de tampão de extracção nuclear fresco. Incubar no gelo por 5 min. Não é necessário adicionar os inibidores de protease, se o RNA é para ser extraída a seguir ao isolamento de núcleos.\nPerturbar o tecido por 20 ciclos com o pilão solta e depois incubar a amostra em gelo durante 10 minutos para permitir que as células inchar. Extrair os núcleos das células, utilizando 15 pancadas com o pil apertado. O número de golpes com os pilões soltos e apertados precisa ser otimizado para diferentes tecidos e tipos de células; excesso de homogeneização pode resultar emnúcleos cortados, enquanto homogeneização insuficiente não irá extrair todos os núcleos do tecido.\nFiltrar o homogeneizado, que contém os restos nucleares e celulares, por meio de um 40 um tamanho de poros de filtro (ver Materiais PDF) que foi prerinsed com tampão de homogeneização nuclear. Recolhe-se o homogeneizado filtrado num tubo fresco.\nColetar amostras de pré-isolamento para posterior análise para determinação do rendimento de núcleos, a integridade núcleos, e para determinar os níveis de transcrição de genes-alvo antes de núcleos isolados.\nTransferência de 50 ul do homogenato filtrado para um tubo de 1,5 ml fresco utilizando uma pipeta. Esta é a amostra de pré-isolamento. Adicionar 500 mL de reagente Trizol (ver Materiais PDF, CUIDADO), invertido para misturar e armazenar a -20 ° C para posterior isolamento do RNA (passo 3.1).\nTransferir 20 uL de homogeneizado do filtrado para um novo tubo de 1,5 ml.\nAdicionar DAPI para uma concentração final de 0,1 ug / ml, e incUbate amostra em gelo durante 10 min.\nTransferir núcleos DAPI-manchadas de uma lamela revestido poli-lisina, e coloque sobre uma lâmina de microscópio. Selar a lamela usando claro unha polonês.\nVerifique a integridade núcleos, e presença de núcleos GFP de interesse que usam o microscópio fluorescente. Nota: Não é necessário fixar os núcleos, ou para manchar para GFP se esses slides são analisadas razoavelmente rápido após a preparação (dentro de 24 horas).\nTransferência de 10 ul do homogenato filtrado para um novo tubo de 1,5 mL e adicionar 90 ul de tampão de lavagem (1x PBS, pH 7,4, 2,5 mM de MgCl2). Adicionar DAPI para uma concentração final de 0,1 ug / ml, e incubar em gelo durante 10 min. Determine o rendimento núcleos na amostra pré-isolamento usando um hemocitômetro para contar os núcleos DAPI-positivos usando epifluorescência sob um objetivo ar 10X.\nColocar o tubo de 1,5 ml contendo as contas de anticorpo ligado (preparado na secção 2.1.6) num rack magnético,e permitir que as pérolas magnéticas de se ligar ao íman, pelo menos, 2 minutos, conforme descrito na secção 2.1.4. Remover o tampão de lavagem das pérolas com o anticorpo ligado, usando uma pipeta de 1 ml, e adiciona-se o homogeneizado filtrado do passo 2.5 para o tubo de 1,5 ml usando uma pipeta de 1 ml.\nInverter o tubo várias vezes para misturar e incubar a 4 ° C durante 30 min com extremidade-sobre-extremidade agitação. Evitar bolhas no tubo, se possível, uma vez que estas podem resultar na aglomeração dos núcleos.\nColocar o tubo de 1,5 ml contendo as contas e homogeneizado ligados a anticorpos em uma cremalheira magnética, e permitem que as esferas magnéticas para se ligar ao íman, pelo menos, 2 minutos, conforme descrito na secção 2.1.4. Remover o homogenato contendo a fracção de núcleos não ligada, utilizando uma pipeta de 1 ml.\nLava-se a amostra 3x com 1 ml de tampão de lavagem de cada vez. Remover o tubo de 1,5 ml contendo as contas de vidro, núcleos ligados e tampão de lavagem a partir da prateleira e inverter a mistura várias vezes, em seguida, colocar o tubo na cremalheira magnético como descritono passo 2.9 e remover o sobrenadante utilizando uma pipeta de 1 ml.\nAdicionar 150 ul de tampão de lavagem para os grânulos, os quais devem ser ligados aos núcleos de alvo. Esta é a amostra de pós-isolamento. Preparar amostras para análise de microscopia e extração de RNA subseqüente.\nTransferir 20 uL da amostra de pós-isolamento de um novo tubo de 1,5 ml e mancha com DAPI e analisar tal como descrito na secção 2.6.2. Contar o GFP + / + e DAPI GFP-/DAPI + núcleos capturados por esferas magnéticas para determinar a pureza da GFP enriquecido + núcleos na amostra de pós-isolamento.\nAdicionar 1 ml de reagente Trizol para o restante da amostra de pós-isolamento, inverter para misturar e armazenar a -20 ° C para subsequente isolamento de ARN (passo 3.1). Nota: As amostras em Trizol pode ser armazenada durante várias semanas, caso seja necessário a -20 ° C. Não é necessário para eluir os núcleos dos grânulos magnéticos antes da extracção de ARN usando o reagente Trizol, because os grânulos não interferir com o subsequente isolamento do RNA.\n3. Determinar níveis de transcrição em núcleos isolados de tecidos larval\nIsolar RNA a partir das pré-isolamento e de pós-isolamento amostras preparadas nas seções 2.6.1 e 2.11.2 usando o protocolo padrão descrito para a extração de RNA baseado em Trizol (ver Materiais PDF) com as seguintes modificações:\nA seguir à precipitação do sedimento de ARN, adicionar 19,2 mL de água sem RNase e 0,8 ul de reagente RNASecure (ver Materiais PDF) para o sedimento e incubar a 60 ° C durante 20 min para inactivar ARNases.\nDeterminar a concentração de RNA com um corante fluorescente de ligação-ARN, tais como o kit de ensaio de RNA Qubit (ver Materiais PDF) utilizando o 2,0 Fluorometer QubitR seguindo o protocolo do fabricante.\nSintetizar ADNc, utilizando uma ampliação de transcriptase reversa, tais como a EpiScript kit da transcriptase reversa e iniciadores oligodT seguindo as instruções do fabricante. Nota: normalmente, de 50 a 100 ng de RNA gera ADNc suficiente para realizar a expressão de genes múltiplos análises. Quantidades equivalentes de pré-isolamento e RNA pós-isolamento deve ser utilizada para gerar ADNc.\nAdicionar 180 mL de água isenta de nuclease para o cDNA de amostra de 20 ul para diluir este antes da análise em tempo real de 10 vezes por PCR quantitativa (qPCR). Esta diluição é um passo importante, porque as amostras não diluídas de cDNA pode inibir a qPCR.\nPrepara-se uma mistura principal qPCR com polimerase e dNTPs, 4 pmoles de cada um de iniciador directo e inverso, fez-se com água esterilizada, para o volume de reacção final de 20 ul.\nProjete primers qPCR para atingir genes que são esperados para ser expressa no tipo celular de interesse, e no estágio de desenvolvimento em que o tecido é coletada. Conceber iniciadores para abrangem um intrão, se possível, de modo que genómico eprodutos de PCR de cDNA podem ser distinguidos. Nota: Se o perfil do tipo de célula alvo a expressão do gene não é conhecida, os iniciadores contra eGFP, que deve ser expresso especificamente na população de núcleos com etiquetas, pode ser utilizado para optimizar o protocolo para um tipo particular de células e tecidos (Tabela 1).\nDeterminar os níveis relativos de transcritos de cada gene de interesse em amostras pré-e pós-isolamento de isolamento por comparação com uma série de diluição de cDNA preparado a partir de todo o tecido. Níveis de transcrição de genes-alvo deve ser normalizada a um gene de referência, tais como Rpl32 (ou, de preferência vários genes de referência).\nO controlador de repo-GAL4 (Bloomington número de stock 7415) é expresso especificamente nas células da glia do sistema nervoso Drosophila em vários estágios de desenvolvimento 18. As moscas foram geradas que estavelmente expressam UEA-EGFP :: MSP-300 KASH sob o controlo do controlador de repo-GAL4 utilizando técnicas genéticas convencionais. Para caracterizar o padrão de expressão da EGFP :: KASH transgene nestes moscas, o padrão de expressão da GFP no lóbulo óptica dissecados e olho disco imaginal a partir de larvas de terceira instar foram examinadas utilizando microscopia confocal. Tecidos dissecados foram contrastadas com DAPI para marcar o DNA e com α-chaoptin 19 para etiquetar axónios dos fotorreceptores (mAb24B10, ver Materiais PDF). Figura 1A mostra que a EGFP dirigida repo-GAL4 :: KASH transgene é expresso em células gliais nos lobos ópticos e olho disco imaginal no padrão de expressão esperado. De acordo com uma ampliação maior,Expressão EGFP é observada em um padrão circular em torno do ADN DAPI-positiva, consistente com a localização nuclear de envelope do EGFP :: KASH Tag (Figura 1B). Expressão EGFP pode ser detectado tanto em fixo e nos tecidos não fixados, sem a necessidade de amplificação do sinal, utilizando um anticorpo contra GFP; anticorpos contra GFP não foram usados para visualizar a expressão EGFP :: KASH nas imagens mostradas nas Figuras 1 e 2. Para determinar se o transgene EGFP :: KASH é expresso de forma não específica em quaisquer outros tecidos em larvas de Drosophila, a expressão da GFP foi analisada em larvas de terceiro instar inteiro usando um microscópio de fluorescência de dissecação. Notavelmente, a expressão não específica do EGFP :: KASH transgene foi observada em níveis elevados nas glândulas salivares de larvas de terceiro instar. Isto indica que o controlador de repo-GAL4 tem actividade em alguns outros do que as células gliais na fase larval do desenvolvimento tipos de células. Assim, para isolar especificamente glinúcleos al, o lóbulo óptica e olho disco imaginal a partir de larvas de terceira instar foram isolados utilizando uma dissecção antes da homogeneização e afinidade-isolamento.\nPara confirmar que este protocolo é adequado para a extracção de núcleos a partir de tecidos de Drosophila, e a estimativa da percentagem de núcleos marcados presentes num dado tecido, a amostra de pré-isolamento (secção 2.6.2) a partir de homogeneizados obtidos a partir do lóbulo óptica e olho disco imaginal de repo-GAL4 UAS-EGFP :: MSP-300 KASH larvas de terceiro instar foi examinada. Figura 2A mostra uma imagem representativa da amostra de pré-isolamento obtido utilizando microscopia confocal. Nesta imagem, a presença de núcleos é indicado por eventos DAPI-positivo. Também são observados Um pequeno número de GFP positivas, núcleos gliais DAPI positivas pouco dispersos. Estimamos que os núcleos GFP positivas representam menos do que 2% do total da população de núcleos nesteamostra (Figura 2A). O rendimento total de núcleos de lóbulo óptica e olho discos imaginais que foram dissecados a partir de 100 larvas foi determinada para a amostra de pré-isolamento, tal como descrito na secção 2.6.3 (Tabela 2). Um exemplo típico de pré-isolamento de 100 lóbulo óptica e olho discos imaginais dissecados continham entre 0,8 e 1,2 x 10 7 núcleos, dos quais cerca de 2% eram GFP-positiva. Figura 2B mostra uma imagem representativa de núcleos DAPI-positivas na região definida do hemocitómetro. Note-se que os núcleos estão intactas, e manter uma forma circular coerente sob as condições de extracção utilizadas no protocolo (Figuras 2A e 2B).\nPara determinar se este protocolo pode ser utilizado para isolar e / ou altamente enriquecer populações específicas de núcleos marcados a partir de tecidos que contêm populações de células misturadas, α-GFP revestidas com anticorpo contas magnéticas eram usod para isolar núcleos marcados a partir de homogeneizados obtidos a partir do lóbulo óptico e olho disco imaginal de 100 repo-GAL4, UAS-EGFP :: MSP-300 KASH larvas de terceiro instar. Nas Figuras 2C e 2D, pode ser visto que a EGFP :: KASH marcado glial ligam núcleos para as esferas magnéticas revestidas α-GFP e são observadas na amostra de pós-isolamento (secção 2.11.1) após a separação magnética. Embora as esferas magnéticas exibem alguns autofluorescência no canal de GFP, estes podem ser facilmente diferenciados dos núcleos de talão ligado a pelo seu tamanho pequeno (2,8 mm para as esferas magnéticas contra cerca de 5 mm para os núcleos) e falta de coloração com DAPI. Os GFP + / DAPI + núcleos são responsáveis por mais de 95% dos eventos positivos DAPI na amostra de pós-isolamento. Assim, o alvo marcado população núcleos são altamente enriquecido na amostra de pós-isolamento em relação ao pré-isolamentoamostra. A maioria dos núcleos da amostra indicam pós-isolamento forte nuclear envelope localizada fluorescência da GFP, e são geralmente rodeado por pérolas. No entanto, é possível que um pequeno número de núcleos não marcados podem também estar presentes na amostra. Assim, embora os resultados na Figura 2C e na análise da expressão do gene na Figura 3 (ver abaixo) indica que o alvo marcado população núcleos gliais é altamente enriquecida, a possibilidade de alguns núcleos a partir de outros tipos de células não-específicos também estão presentes na amostra não pode ser excluída. Recomenda-se que os utilizadores optimizar este protocolo para o seu tipo particular de célula e de tecido de interesse para maximizar o enriquecimento da população de núcleos de alvo, e para eliminar os núcleos não específicos de ligação. Em particular, a proporção de material de partida em relação ao anticorpo e pérolas é provável que seja importante para o enriquecimento óptimo de núcleos de alvo. Por este motivo, as gamas do totalnúmeros de núcleos presentes nas amostras de pré-isolamento típicos são apresentados na Tabela 2. Com base nos números totais de núcleos presentes na amostra pré-isolamento, e a percentagem estimada de células gliais na população mista do lóbulo da óptica do olho e do disco imaginal, o teor máximo de núcleos na amostra de pós-isolamento foi prevista para estar entre 1,6 5 x 10 e 2,4 x 10 5 núcleos. No entanto, utilizando o hemocitómetro para determinar o rendimento de núcleos, conforme descrito no passo 2.6.3, o rendimento de núcleos real obtido na amostra de pós-isolamento era entre 1,3 x 10 4 a 2,7 x 10 4 núcleos. Estes rendimentos núcleos representam estimativas muito ásperas porque as contas presentes na amostra pós-isolamento parece afetar o carregamento preciso do hemocitômetro. Alguns núcleos GFP positivas são observadas no homogeneizado não ligado, indicando que nem todos os núcleos GFP positivas nos sampla ligam para as contas de forma eficiente, nas condições utilizadas neste protocolo. O aumento do tempo de ligação ou de efectuar os passos de isolamento sequenciais poderia potencialmente aumentar este rendimento, mas este pode vir à custa de tanto a pureza e integridade do RNA. Usando as condições descritas no presente protocolo, quantidades suficientes de ARN pode ser obtida na amostra de pós-isolamento para jusante a análise da expressão do gene por qRT-PCR (Tabela 2). Assim, este protocolo é capaz de rapidamente e com rigor isolar núcleos-alvo a partir de tecidos que contêm populações mistas de células. Além disso, é capaz de isolar especificamente núcleos alvo que constituem apenas uma pequena proporção, menor do que 5%, do que as células de uma dada população.\nPara confirmar ainda que a amostra de pós-isolamento foi altamente enriquecido para a população de núcleos glial alvo, os níveis de transcritos de quatro genes diferentes no pré-isolamento pós-isolamento amostras foram comparadas por RT-qPCR. Os níveis de transcrição de elav, nrv2 e eGFP foram determinados em duas amostras, e normalizada para o gene de referência, Rpl32, que é expresso em níveis equivalentes de células gliais e no sistema nervoso central circundante (Figura 3). A diferença vezes na amostra de pós-isolamento é mostrado em relação à amostra pré-isolamento, o qual é definido como um. Na Figura 3, a amostra de pós-isolamento mostra níveis de transcrição significativamente inferiores do específico do gene elav neuronal em relação à amostra pré-isolamento. Isso indica que os núcleos de células neuronais estão sub-representadas na amostra pós-isolamento. Em contraste, os níveis de transcrição elevados de ambos o gene nrv2 enriquecido glial-10 e eGFP estão presentes no pós-isolamentoção da amostra em relação à amostra pré-isolamento. Este resultado indica que a amostra de pós-isolamento é altamente enriquecida para a população de núcleos glial alvo. É importante notar que os níveis de transcritos medidos neste protocolo representam transcritos nucleares, e, por conseguinte, é provável que indicam os níveis de transcrição activa em vez de mRNA de estado estacionário. Expressão reprodutível de repo não foi detectado em ambos os exemplos de pré-ou pós-isolamento de isolamento, o que sugere que a proteína Gal4 expresso pelo condutor repo-GAL4 pode persistir após transcrição activa do gene endógeno repo cessou. Isto é consistente com os resultados de outros estudos em que núcleos marcados usando o promotor twi não mostram os níveis de enriquecimento de transcritos twi, talvez devido a diferenças no tempo de desenvolvimento de transcrição contra a estabilidade da proteína 8. Taken conjunto, estes resultados demonstram que o protocolo descrito pode ser usado com sucesso para enriquecer altamente núcleos alvo a partir de tecidos que contêm populações misturadas de células, e que os núcleos isolados são adequados para análise da expressão do gene.\nFigura 1. Padrão de expressão de repo-GAL4, UAS-EGFP :: MSP-300 KASH linha voar. (A) Em larvas de terceiro instar, repo-GAL4 dirige a expressão do transgene UAS-EGFP :: MSP-300 KASH em células gliais na óptica lobo, perseguir óptica (os) e olho disco imaginal (ed). O envelope nuclear em células gliais é rotulado com EGFP :: KASH (verde). R1 - R8 axónios de células fotorreceptoras são rotulados com α-chaoptin (mAB24B10, vermelho) para comparação, e DNA é stainada com DAPI (roxo). Núcleos gliais GFP-rotulados são visíveis ao longo da lâmina (la) no lobo óptico (marcado por setas). Barra de escala, 50 mm. (B) imagem ampliação Superior dos gânglios da lâmina do lóbulo óptico que contém EGFP :: KASH rotulado núcleos de células gliais. Barra de escala, 50 mm. Imagens confocal foram adquiridos usando um 40X / 1,30 óleo ou uma 20X / 0,75 objetivo óleo de imersão, e usando comprimentos de onda de excitação / emissão de 408 nm nm/425-475 (DAPI); 488 nm/525-550 nm (GFP); 561 nm/595-620 nm (Alexa 5,6,8 ). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.\nFigura 2. Caracterização dos núcleosem "pré-isolamento" e "pós-isolamento" amostras. (A) Imagem representativa de um repo-GAL4, UAS-EGFP :: MSP-300 KASH amostra pré-isolamento analisados usando um X 20 / 0,75 objetiva de imersão em óleo e padrão microscópio confocal. DNA é corado com DAPI (azul), e EGFP :: KASH marcado núcleos gliais são mostrados em verde (marcado por setas). Barra de escala, 50 mm. (B) imagem representativas dos núcleos DAPI-corados de uma amostra pré-isolamento em um hemocitómetro utilizando uma objectiva de 10 X de ar e de um microscópio de epifluorescência padrão. Grids hemocitômetro são mostrados em cinza claro. Só núcleos DAPI-positivos são mostrados nesta imagem, como GFP fluorescência não era visível no âmbito deste objectivo no microscópio de epifluorescência. (C) Imagem representativa de um repo-GAL4, UAS-EGFP :: MSP-300 KASH amostra pós-isolamentoanalisados como descrito para o painel A. EGFP O isolado :: KASH marcado núcleos gliais (marcadas por setas) mancha positivamente para DAPI, e estão rodeados por as contas, que autofluoresce em baixos níveis no canal de GFP. Barra de escala, 50 mm. (D) imagem ampliação Superior de EGFP isolado típico :: KASH marcado núcleos gliais (marcado pela seta) cercado por esferas. Barra de escala, 5 mm. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.\nFigura 3. Dados qRT-PCR representativos de "pré-isolamento" e amostras de "pós-isolamento". Níveis de transcrição de genes alvo foram determinadas por qRT-PCR de pré-ISOLation e pós-isolamento amostras obtidas a partir de repo-GAL4, UAS-EGFP :: lobos ópticos MSP-300 KASH e olho discos imaginais. Todos os níveis de transcrição são normalizados para níveis de transcrição Rpl32, e a amostra de pré-isolamento para cada gene alvo é definido como um. Os resultados representativos de um experimento biológico são mostrados para os seguintes genes: elav, nrv2 e eGFP.\nGene Sequência iniciadora (5 '-3') Tamanho do produto da PCR (bp)\nTabela 1. Iniciadores utilizados para a análise de qRT-PCR.\nNúmero total de núcleos na amostra pré-isolamento Estimativa do número total de núcleos na amostra pós-isolamento Rendimento de RNA a partir de amostra de pós-isolamento (GN)\nTabela 2. Núcleos representativos e os rendimentos obtidos de ARN.Gamas típicas de núcleos e os rendimentos obtidos a partir de amostras de RNA pré-isolamento e de pós-isolamento de 100 lobo óptica dissecados e olho discos imaginais da repo-GAL4, UAS-EGFP :: genótipo MSP-300 KASH, em que as células da glia são rotulados com EGFP :: KASH. Os núcleos foram quantificados como descrito em 2.6.3 e o ARN foi quantificado tal como descrito em 3.1.2.\nEste protocolo pode ser utilizado para isolar ou enriquecer especificamente altamente núcleos marcados a partir de populações de células mistas na Drosophila embrionárias ou tecidos larvais. Usando este protocolo, os núcleos podem ser isoladas a partir de tecidos dissecados em aproximadamente 1 hora. A pureza e o rendimento dos núcleos isolados devem ser determinadas experimentalmente para cada tipo de célula. Pode ser difícil de quantificar os núcleos de talão ligado a na fase de pós-isolamento do protocolo usando um hemocitómetro causa dos grânulos presentes na amostra. Assim, se o número exacto de núcleos são necessários para uma aplicação a jusante, será necessário estimar rendimento núcleos com base em um método alternativo, como o conteúdo de DNA. Cálculos exactos das rendimento núcleos não são necessários para a análise da expressão do gene se o ARN pode ser isolado e quantificado com sucesso. Recomenda-se a utilização de um método com base em fluorescência para a quantificação de rendimento de ARN, como foi encontrado que a determinação espectrofotométrica da concentração de RNAnestas amostras de baixa concentração é altamente variável.\nHá dois aspectos importantes do protocolo que irão influenciar o seu sucesso: a escolha do esferas magnéticas e de anticorpos. Esferas magnéticas que são acopladas para GFP ou proteína G estão disponíveis comercialmente a partir de várias fontes diferentes. No entanto, é altamente recomendado o uso de proteína G esferas magnéticas disponíveis da Invitrogen para o procedimento descrito no presente protocolo, por duas razões principais. Em primeiro lugar, o tamanho dos grânulos de Invitrogen em 2,8 um é ligeiramente menor do que o tamanho médio dos núcleos nos tipos de células que foram examinados, o que é cerca de 5 um (Figura 2D). Esferas magnéticas que são menores (por exemplo, 50 nm, μMACS α-GFP, Miltenyi Biotech) não se ligam rapidamente a estilo de lote-imans de lavagem, e as colunas fornecidas para esses grânulos podem entupir com extractos de tecidos das larvas. Maiores esferas magnéticas (por exemplo, 10 mM, a proteína G PureProteome magnético Beads, Millipore) não se ligam bem aos núcleos em nossos testes preliminares, e estes também apresentam forte autofluorescência nos mesmos canais que tanto DAPI e GFP, tornando difícil a identificação de núcleos na amostra ligado a talão por meio de técnicas de microscopia de padrão. Para além da escolha de contas magnéticas, é importante o uso de um anticorpo GFP que funciona bem para a imunoprecipitação, mas que não tem fundo inespecífico elevado. Para ajudar na reprodutibilidade deste protocolo, temos utilizado um anticorpo monoclonal contra GFP. Anticorpos policlonal de coelho contra GFP também foram testadas com sucesso em nossos estudos preliminares, mas estes tendem a ter maior fundo inespecífica. Outros anticorpos monoclonais também foram testados (por exemplo, do Desenvolvimento Estudos Hybridoma Bank), com variados níveis de sucesso. Assim, a escolha do anticorpo é um factor importante para o isolamento de núcleos marcados.\nEmbora neste protocolo, descrevemos métodos para detarminho níveis de transcrição de genes em núcleos isolados, prevê-se que o método descrito nos passos 2,1-2,11 também será adequado para o isolamento de núcleos, que podem ser utilizados para a subsequente análise de imunoprecipitação de cromatina. Se o tecido é fixado em 1% de formaldeído antes da homogeneização (passo 2.3), em seguida, os tecidos dissecados pode ser recolhida ao longo de vários dias e o material isolado suficiente para realizar uma análise de imunoprecipitação da cromatina. Com base em contagens obtidas usando o hemocitômetro, que fornecem apenas estimativas aproximadas, como discutido acima, que normalmente obtido 1,3 x 10 4 e 2,7 x 10 4 núcleos gliais do disco imaginal olho e lobo óptica de 100 larvas (Tabela 2). Assim, utilizando a abordagem, deve ser exequível para obter material suficiente para realizar uma análise de imunoprecipitação da cromatina, dependendo da abundância do tipo de célula alvo, e o epitopo de interesse.\nUma aplicação genética útil deste técQue é que ele pode ser usado para marcar positivamente núcleos em tipos específicos de células em embriões ou larvas que são homozigóticos para um alelo mutante recessivo letal. Para conseguir isto, duas unidades separadas mosca deve ser gerada, em que o alelo mutante de interesse é recombinado com um condutor de Gal4 específica, ou com o transgene UAS-EGFP :: MSP-300 KASH no terceiro cromossoma. Se moscas portadores do alelo mutante e condutor de Gal4 são cruzadas com moscas que transportam os alelos mutantes e o transgene UAS-EGFP :: MSP-300 KASH, apenas progenitura que têm ambas as cópias do alelo mutante vai ser marcado com GFP no tecido em que o condutor de Gal4 é expresso. Assim, os efeitos específicos de células de alelos recessivos letais podem ser examinados nos estágios embrionários ou de larvas, antes da fase de letalidade. Esta técnica genética tem sido usado para rotular positivamente células no músculo embrionário que eram homozigotos para mutações na subunidade SAGA, sgf11 1 </ Sup>.\nAgradecemos Janice Fischer para fornecer o plasmídeo UAS-EGFP :: MSP-300 KASH. O anticorpo mAB24B10 foi obtido a partir do Desenvolvimento Estudos Hybridoma Banco desenvolvido sob os auspícios do NICHD e mantido pela Universidade de Iowa, Departamento de Biologia. O estoque de repo-GAL4 (BL7415) foi obtido a partir do Bloomington Stock Center na Universidade de Indiana. O apoio da American Cancer Society Institutional Research Grant (IRG # 58-006-53) para a Universidade Purdue Centro para Pesquisa do Câncer é reconhecida com gratidão. Jingqun Ma é apoiado por uma Pesquisa Agrícola em Purdue Estágios em Alimentação e Agricultura da Universidade de Purdue.


Bancada de Granito para Cozinha Industrial Mauá - Bancada de Granito para Cooktop - Martins Ribeiro Mármores\n» Serviços » bancadas de granito » bancada de granito para cooktop » bancada de granito para cozinha industrial Mauá\nA bancada de granito para cozinha industrial Mauá é a escolha natural para a instalação deste tipo de equipamento. Ideal para pequenas cozinhas, onde existe a impossibilidade de instalação de fogões convencionais, que ocupam bastante espaço. O uso da pedra confere um ar mais sofisticado e serve como um excelente acabamento, agregando maior beleza estética para o ambiente.\nEstá procurando por bancada de granito para cozinha industrial Mauá? Conte com a Martins Ribeiro Mármores e tenha a solução que você busca da área de Marmoraria, são diversas opções de serviços oferecidas, como Pedras de Granito, Pedras de Mármore, Pias de Granito, Pias de Mármore, Marmorarias e Escadas. Com equipamentos modernos, e instalações em ótimo estado, a empresa é capaz de suprir a necessidade de seus clientes, conquistando sua confiança. Disponibilizamos também Bancada de Granito Branco para Banheiro e Bancada de Mármore Cozinha Americana. Por isso, aproveite a sua chance para entrar em contato e saber mais. Nossos atendentes estão dispostos a sanar todas as suas dúvidas sobre os trabalhos oferecidos. Saiba mais!\nPara saber mais sobre Bancada de Granito para Cozinha Industrial Mauá\nO conteúdo do texto "Bancada de Granito para Cozinha Industrial Mauá" é de direito reservado. Sua reprodução, parcial ou total, mesmo citando nossos links, é proibida sem a autorização do autor. Crime de violação de direito autoral – artigo 184 do Código Penal – Lei 9610/98 - Lei de direitos autorais.


São Paulo – pessoas. – x\nSão Paulo – pessoas.\n11/10/2007 18/12/2015 por facadax, publicado em FOTO\nAtração e repulsão. Proporcionalidade. Centro (marisa e cores), Radial Leste (alturas) e Itaim Bibi(guarda-chuva).\nPost anteriorUm morroquino impaciente com o périplo em Madrid\nPróximo postA gaivota cega (parte 2)


São Paulo x São Caetano: Onde Assistir Ao Jogo AO VIVO Pelo Paulista\nO campeonato Paulista volta a ser disputado após paralização devido a Pandemia.\n10/04/2021 às 08:30 - atualizado em 10/04/2021 às 01:54\nA partida entre São Paulo e São Caetano pelo campeonato paulista acontece nesse sábado, dia 10, às 20h. O Paulistão até então seguia paralisado devido a pandemia e o decreto da cidade de SP. Mas após algumas reuniões, as partidas irão retornar e já temos o Tricolor recebendo o Azulão em sua casa.\nO confronto coloca frente a frente o Lider do Grupe B, São Paulo, contra lanterna do Grupo D, São Caetano.\nOnde assistir São Paulo e São Caetano ao vivo\nA partida entre São Paulo e São Caetano pelo campeonato paulista terá a transmissão do Premiere, mas também deixaremos o link para a narração da partida no fim da matéria.\nSão Paulo e São Caetano pelo Campeonato Paulista\nO Tricolor volta a campo líder do grupo B, com sete pontos, assim podendo se distanciar caso vença a partida de hoje. Todavia, o Time vem de uma derrota para o Novorizontino por 2 a 1 em um jogo com muitos erros defensivos e essa paralisação serviu para apaziguar a situação. O São Paulo vinha de duas goleadas aplicadas por 4 a 0, destaque para o Clássico contra o Santos.\nProvável escalação do São Paulo: Volpi; Arboleda, Bruno Alves (MIranda) e Léo; Igor Vinicius, Luan, Rodrigo Nestor, Daniel Alves e Reinaldo; Vitor Bueno (Eder) e Pablo. Técnico: Hernán Crespo.\nUltima partida do São Caetano na derrota para o Corinthians – Foto: Leonardo Lima\nO São Caetano, lanterna do Grupo D, com apenas um ponto conquistado, foi um dos poucos times a atuar durante a paralisação – o time enfrentou o Corinthians, em Volta Redonda, no dia 14 de março e perdeu pelo placar mínimo.\nO time do ABC paulista está passando por muitas dificuldades financeiras, assim correndo grandes riscos de ter suas atividades paralisadas futuramente.\nProvável escalação do São Caetano: Luiz; Nickolas, Lucas Dias, Caetano e Fernando; Warian, Charles e Diego Cardoso; Filipe Carvalho, William Amorim e Carlinhos. Técnico: Wilson Júnior\ncomo assistir são paulo são paulo hoje spfc


Joao Marques Carvalho: Depressão – exame de sangue – Ômega 3\nDepressão – exame de sangue – Ômega 3\nO site UOL Ciência e Saúde divulgou “Um estudo realizado na Itália e coordenado pelo médico Massimo Cocchi, professor da Universidade de Bolonha e presidente da ARNA (Associação italiana de Pesquisadores em Nutrição e Alimentos) [que] sugere que é possível diagnosticar a depressão a partir de um exame de sangue simples e barato.”\nAbaixo alguns trechos do artigo que poderá ser lido clicando aqui.\nCocchi relata que a análise clínica é feita a partir das plaquetas consideradas “embaixadoras” dos neurônios: os lipídios presentes nessa parte do sangue espelhariam o que existe nas células cerebrais, indicando a presença da depressão.\n"A comunicação entre as células é gerenciada por neurotransmissores; a recepção das mensagens ocorre através das membranas celulares, que estão ligadas à estabilidade do humor. Se as células perdem uma das suas principais características, a fluidez, esse equilíbrio se desfaz e podemos ser levados aos altos e baixos emocionais ou à síndrome depressiva", diz o médico.\nAs investigações do italiano revelaram que o ácido graxo envolvido nessa estabilidade é o araquidônico (AA), ácido graxo essencial, da família do Ômega 6. Dependendo dos seus diferentes níveis, é possível estabelecer se um indivíduo é são ou se está deprimido. "O excesso de AA é um fortíssimo indício do estado depressivo do paciente, podendo indicar até a possibilidade de suicídio", alerta.\nEle acrescenta que a descoberta esclarece a relação existente entre depressão e doenças cardiovasculares (arteriosclerose, infarto ou cardiopatias), pois o AA favorece os processos inflamatórios que desencadeiam essas enfermidades.\nA surpresa foi identificar entre os jovens esportistas 26,7% de alto risco de depressão, confirmando os estudos da Organização Mundial de Saúde (OMS) sobre o assunto (mais de 20% dos jovens sofrem com doenças de natureza psicológica, e o suicídio está em terceiro lugar no ranking das causas de mortes nesse grupo em muitos países).\nNa Itália, um milhão e meio de pessoas sofrem com a depressão, enquanto são mais de cinco milhões os que tiveram um evento da doença ao longo da vida. Entre as crianças, seis em cada 1.000 são afetadas. Para Cocchi, sua descoberta tem importância porque servirá como instrumento de prevenção, especialmente entre idosos, mulheres (grávidas) e adolescentes.\nO trabalho será oficialmente apresentado ao Ministério da Saúde italiano no próximo mês de dezembro, mas já conta com o apoio do Nobel de Química Kary Mullis, que foi à Itália a convite de Cocchi para avaliação bioquímica da descoberta. Mullis declarou que a pesquisa é revolucionária: "Basta pensar que com essa metodologia será possível saber se um paciente tem intenção de suicidar-se. Trata-se de uma revolução do ponto de vista filosófico, médico e religioso".\nPor ser também especialista em dietologia e alimentos, Cocchi sugere uma dieta preventiva para a depressão. Ela deve ser do tipo mediterrânea, rica em antioxidantes: frutas, verduras, ácidos graxos polinsaturados ômega 3, presentes nos peixes, além de chocolate, café e vinho tinto. Além disso, ele recomenda uma redução do consumo de carne vermelha, que é rica em AA. A vitamina E (presente no azeite de oliva) é outro componente fundamental, protegendo células ameaçadas pelo AA, segundo ele.\n"Eu [psiquiatra Alexandrina Meleiro] nunca pediria um exame relacionado com o AA. Mas o bom profissional deve sempre solicitar exames laboratoriais nos casos de depressão. Se o estudo for confirmado, teremos mais um exame importante à disposição."\nPublicada por João Marques em 23:34\nEtiquetas: ANTI-INFLAMATÓRIO, ARTERIOSCLEROSE, DEPRESSAO, DIETA MEDITERRÂNEA, NUTRICAO, ÔMEGA-3


Aberto da Croácia começa nesta terça-feira, com oito brasileiros - CBTM\nAberto da Croácia começa nesta terça-feira, com oito brasileiros\nBrasileiros alcançaram o pódio duas vezes na última etapa do Circuito Mundial, na Eslovênia\nFOTO: Eric Jouti em ação na final do Aberto da Eslovênia. Crédito: ITTF.\nRio de Janeiro (RJ), 09 de abril de 2018.\nPor: Assessoria de Imprensa CBTM\nComeça nesta terça-feira (10/4), com maciça presença de atletas brasileiros, o Aberto da Croácia, torneio nível Challenge do Circuito Mundial de Tênis de Mesa. O país está representado em todas as categorias no evento, que fecha uma sequência de competições em continente europeu. Antes, Espanha (Guadalajara) e Eslovênia (Otocec) receberam disputas do mesmo nível nas últimas duas semanas.\nEm Zagreb, o Brasil terá oito atletas competindo: Eric Jouti, Thiago Monteiro, Vitor Ishiy, Carlos Ishida, Gustavo Yokota e Vitor Santos (os três últimos também na sub-21), além de Bruna Takahashi e Lin Gui entre as mulheres. Bruna, tal como Ishida, Yokota e Santos, jogará a categoria de base.\nA esperança é de que os brasucas possam colher novamente bons resultados, tal como fizeram nos dois anteriores. Na Espanha, Vitor Ishiy alcançou às quartas de final, mesmo resultado de Gustavo Tsuboi e Eric Jouti no individual na Eslovênia. Tsuboi e Jouti ficaram com a prata nas duplas em Otocec, assim como Bruna Takahashi arrematou o bronze no sub-21.\nPara Hugo Hoyama, técnico da Seleção Brasileira que acompanha a delegação, a confiança segue inabalável, embora o desafio seja mais árduo.\n"Com certeza esperamos bons resultados na Croácia, embora esse torneio tenha jogadores melhores ranqueados do que na Eslovênia. Mas existem boas chances sim, principalmente com a Bruna no sub-21, que pode buscar um resultado tão bom ou melhor do que o obtido na última semana".\nFalando espeficamente das meninas, já que é técnico da Seleção feminina, Hoyama ainda destacou que a sequência de jogos é importante para a preparação para o Mundial da Suécia, cada vez mais próximo.\n"É muito importante para elas manterem o ritmo e terem confiança para que soltem o jogo e cheguem bem preparadas para fazerem o melhor pelo nosso país. Elas continuarão treinando na Europa, eu volto para o Brasil, mas nos encontraremos antes do evento na Suécia", explicou.\nExceto Eric Jouti e Bruna Takahashi (tanto no adulto como no sub-21), que só estreiam no dia 12 por estarem diretamente na chave principal do torneio, os demais brasileiros começam sua trajetória no evento na fase de grupos já nesta terça-feira. Confira os jogos, com horário de Brasília:\n11h40 - Thiago Monteiro x Timur Kelbuganov (KAZ)\n5h20 - Gustavo Yokota x David Serdaroglu (AUT)\n11h40 - Gustavo Yokota x Zokhid Kenjaev (UZB)\n5h20 - Carlos Ishida x Vildan Gadiev (RUS)\n11h40 - Vitor Ishiy x Florian Gnudde (BEL)\n7h - Vitor Santos x Guilhermo Martinez (ESP)\n13h10 - Vitor Santos x Elias Ranefur (SWE)\n10h20 - Gustavo Yokota x Carlos Caballero (ESP)\n10h20 - Vitor Santos x Luka Mladenovic (LUX)\n10h20 - Carlos Ishida x Mathan Simon (ISR)\n13h55 - Lin Gui x Elena Troshneva (RUS)


Todo O Melhor Orador 2021 :: devregister.org\nOs maiores oradores da história - Falar bem, que mal tem.\nEntendemos que a possibilidade da mulher expor suas ideias e seus direitos é algo recente, e talvez por isso, ao buscarmos os melhores oradores da história, seja tão difícil vermos mulheres sendo citadas. Mas aproveito o assunto para reforçar que a The Speaker apoia o empoderamento feminino. Todos os anos a Toastmaster International realiza conferências para eleger o melhor orador do mundo. Nesse ano, a disputa pelo título de melhor orador durou seis meses e teve mais de 30 mil pessoas disputando o tão sonhado título. O treino, para Jobs, visava lapidar, além de sua performance, o próprio roteiro de seu discurso, que ele aprimorava palavra a palavra, com o mesmo rigor que aplicava ao desenvolvimento dos produtos da Apple. O resultado pode ser conferido nessa célebre apresentação do iPad, em que cada pausa, ênfase e repetição, é pensada. O discurso de formatura deve transmitir a identidade, os desafios e aspirações de toda a turma. Por isso, fica muito claro para todos os convidados quando o texto é copiado. O orador precisa deixar a preguiça de lado e separar um momento de tranquilidade para enumerar todas as experiências da turma e, assim, redigir um texto original. 16/06/2008 · Eu não tive a felicidade de conhecer Joaquim Nabuco, o melhor orador do Brasil. Você poderia indagar: se você não conheceu, como pode saber que foi o melhor? Por relatos. Felizmente, gente que sabia fazer uma boa descrição deixou para a posteridade essas preciosas informações. Mais.\n“Quando nasce um Orador, todos notam. Aqui e em outras dimensões. O Orador é o Maestro das palavras, assim como os Anjos são perante os Cânticos Celestiais. Com os mesmos “Dons”, quais os Anjos, com seus Cantos e Sons, consagram-se, Líderes em Conversão, os Oradores o faz com as palavras e seu conhecimento assíduo ao debruçar sob. O melhor discurso de orador dos últimos tempos, vale a pena ler e rir muito, parabéns João Pimenta. Boa noite à todos, Como foi apresentado, hoje, falo como o orador da turma. Aí começa o drama do orador. Todos observam essas manifestações corporais de nervosismo, menos quem fala, menos o orador, que vive esse drama de não saber o que acontece com seu corpo no momento em que expõe suas idéias. E como esse nervosismo pode se manifestar em meu corpo enquanto eu falo? – você, leitor, pode estar se perguntando. O que é que faz com que um. consulte Mais informação. Isto é o que uma apresentação de alto nível é tudo sobre: ousadia em ser capaz de abrir e compartilhar seu amor de um tópico com o audience- paixão que leva à confiança, quase ao ponto de ser um com o topic- e uma genuíno mensagem que derrama do coração.\nConta-se que Demóstenes, à força de perseverança, ultrapassou o problema da gaguez declamando poemas enquanto corria na praia contra o vento e também, sendo esse o facto mais conhecido, forçando-se a falar com seixos na boca. Após treinamento que demandou enorme esforço, Demóstenes venceu a gagueira e se tornou o maior orador da Grécia. Se o seu problema é não conseguir falar em público, este é um dos livros sobre oratória mais importantes para você! Aprenda COMO ser um exímio orador e manter o seu público interessado em você e nas suas ideias com esta leitura.\nOs segredos dos melhores oradores da História - The.\nSignificado de Orador no Dicio, Dicionário Online de Português. O que é orador: s.m. Pessoa que pronuncia um discurso diante do público. Homem eloquente, que fala bem e. Demóstenes foi, sem dúvida, o maior orador da antiguidade. Com certeza não teve voz tão melodiosa e vocabulário mais sofisticado quanto seu desafeto Esquines, contra quem debateu em uma de suas mais memoráveis contendas, “A Oração da Coroa”. Eu não tive a felicidade de conhecer Joaquim Nabuco, o melhor orador do Brasil. Você poderia indagar: se você não conheceu, como pode saber que foi o melhor? Por relatos. Felizmente, gente que sabia fazer uma boa descrição deixou para a posteridade essas preciosas informações. Mais importante ainda, sabendo como era a comunicação. Uma oportunidade de fazer apresentações extraordinárias e encantar multidões, expressando suas ideias com clareza, entusiasmo e energia. O Formação de Oradores e Palestrantes é o curso que vai elevar, a níveis extraordinários, as suas apresentações. Saiba mais aqui.\nA convenção Toastmaster International elege anualmente o melhor orador do mundo. A disputa de 2017 durou seis meses e mais de 30 mil pessoas competiram pelo título. O evento final foi no final de agosto, em Vancouver, no Canadá, e contou com apenas nove concorrentes. O vencedor, o indiano Manoj Vasudevan, é empresário e .\nQuando falamos da oratória devemos lembrar quem começou a colocar esse poder da comunicação em prática. Ao longo dos anos tivemos diversos oradores que mudaram o mundo onde vivemos hoje, e que ficaram para história com sua frases e discursos que arrastavam multidões. Um dos maiores oradores brasileiros foram: Rui Barbosa, famoso Águia.\n02/10/2019 · “Oradores acreditam que mostrar todo o conteúdo da discussão logo nos primeiros momentos pode ajudar a audiência a absorver melhor o material, mas isso é um engano. Teria o mesmo efeito, por exemplo, que os criadores de ‘Vingadores: Guerra Infinita’ contarem o que acontece em ‘Ultimato’ antes do filme ser lançado.\nE pode tirar vantagem de sua função wireless para se conectar o telefone tablet ou outro dispositivo Bluetooth. Este dispositivo é conhecido como um Take Away, como carregar com você em qualquer lugar, a qualquer hora. 1-O melhor desempenho de áudio. 2- O orador melhor desenhado por Bose que segue para todo o lado. 02/11/2017 · Como Ser um Orador Público Eficiente. Até mesmo os oradores mais experientes sentem um frio na barriga antes das apresentações, com receio de que a palestra não atinja o público de modo eficaz. Felizmente, é muito simples aperfeiçoar as sua. Importância do orador e do juramentista na formatura. Como já foi dito, em toda formatura que você for — em especial na colação de grau — vai se deparar com a figura do orador, que é um aluno escolhido para fazer o discurso que representa seu curso na solenidade. DISCURSO ORADOR Boa noite a todos. Meus cumprimentos ao Excelentíssimo Vice-reitor da Universidade Estadual do Maranhão, o Professor Walter Canales, em nome de quem saúdo todas as autoridades da mesa, e outras aqui presentes. Cumprimento também: o.\nForça de vontade: Para conseguir ser o maior orador da Antigüidade, procurava declamar diante da praia, vencendo com a voz o ruído, o barulho das ondas, além de ter o costume de correr, subir montanhas recitando trechos de autores gregos para desenvolver o fôlego. Que exemplo de determinação e força de vontade! O gênio fala sobre as histórias que o motivaram a perseguir o sucesso em todas as etapas de sua brilhante carreira, motivando assim cada um dos jovens que o ouviam. Uma das frases que marcou o discurso foi: “lembrar que você irá morrer é a melhor maneira que conheço para evitar o pensamento de que se tem algo a perder”. 16/12/2019 · Como Ser um Ótimo Orador. De acordo com dados estatísticos, muitas pessoas têm mais medo de falar em público do que de morrer. A ideia de ter que ser o centro de atenção de uma plateia deixa muita gente com frio na barriga, mas a situação n. Oradores: os 6 tipos que o público não gosta de escutar; Oradores: os 6 tipos que o público não gosta de escutar Se ganhar a atenção de alguém em um simples diálogo já é difícil, imagine o esforço que envolve conquistar 10, 20 ou 300 pessoas? Quando um orador entra em ação precisa usar da melhor forma o tempo que seu público. O indiano Manoj Vasudevan foi eleito o melhor orador do mundo. A disputa ocorreu entre mais de 30 mil pessoas e foi organizada pela convenção Toastmaster International, que elege anualmente o melhor orador do mundo. Manoj Vasudevan é empresário e consultor de gestão.\nSegundo Plutarco a paixão Demóstenes pela oratória surgiu quando ainda criança teve o privilégio de presenciar um discurso pronunciado por Calístrato, um importante e eloqüente orador de seu tempo, fato este que o deixou tão maravilhado que o mesmo abandonou todos os outros tipos de estudo e dedicar-se exclusivamente ao estudo da. 29/09/2019 · Com o nosso conselhos sobre o que olhar para fora, juntamente com estas dicas, você terá um alto-falante de alto nível criado em nenhum momento a todos. Para Concluir para os melhores oradores do teto. Compra de alto-falantes de teto pode rapidamente sair caro se você decidir ir tudo para fora e, em seguida, pagar um profissional para. Eu não tive a felicidade de conhecer Joaquim Nabuco, o melhor orador do Brasil. Você poderia indagar: se você não conheceu, como pode saber que foi o melhor? Por relatos. Felizmente, gente que sabia fazer uma boa descrição deixou para a posteridade essas preciosas informações.\nO melhor orador do Brasil - Carreira - UOL Economia.\n07/05/2013 · 11 táticas dos oradores de sucesso para apresentações Confira as melhores estratégias para usar na hora de falar em público seja para uma grande plateia ou para poucas pessoas, segundo especialistas no assunto.


Governadores eleitos se mobilizam por aprovação da reforma da Previdência | ND\nO governador eleito João Doria disse ao Broadcast, serviço de notícias em tempo real do Grupo Estado, que o objetivo da mobilização é fazer uma grande articulação das bancadas para a “reforma ir para frente”. “De preferência, a reforma total. Se não for possível, a parcial”, disse.\nEx-secretária de Fazenda de Goiás, a economista e sócia da consultoria Oliver Wyman Ana Carla Abrão disse que a expectativa é de adesão dos novos governadores. “Começar com cinco governadores já é um passo muito forte”, afirmou.\nSegundo o secretário do Tesouro, que permanecerá no cargo, o apoio dos governadores é fundamental para a aprovação da proposta. A reunião da equipe econômica ocorrerá antes do Fórum dos Governadores, marcado para fevereiro, que deverá contar com a presença de Bolsonaro. “Novos governadores estão interessados em colocar a Previdência em debate. Eles estão mais mobilizados.”\nMansueto afirmou que entre as propostas que estão sendo estudadas pela equipe de Jair Bolsonaro há “convergência” para a fixação de uma idade mínima para aposentadoria, regra de transição, critérios mais homogêneos para todos os trabalhadores, com a redução dos regimes especiais de Previdência.\n“A reforma é muito importante para os governadores, porque dois terços dos servidores inativos são de regimes especiais com aposentadorias sendo concedidas em média com 49 anos”, disse o secretário do Tesouro Nacional. As informações são do jornal O Estado de S. Paulo.\n(Adriana Fernandes e Lorenna Rodrigues, Brasília)\nEduardo Leite Helder Barbalho João Doria Romeu Zema Ronaldo Caiado\nRodada decisiva no Campeonato Catarinense: Comentário de Fábio Machado\nNo programa SC no Ar desta quarta-feira (21), o comentarista esportivo do Grupo ND falou sobre a últ ...


O governador Ratinho Junior (PSD) determinou a antecipação do pagamento do 13.° salário dos funcionários estaduais para o próximo dia 04 de dezembro\nO governador Ratinho Junior (PSD) determinou a antecipação do pagamento do 13.° salário dos funcionários estaduais para o próximo dia 04 de dezembro. O valor será depositado integralmente na conta de aproximadamente 265 mil servidores ativos, pensionistas e aposentados. A folha adicional chega a R$ 1,701 bilhão, sendo R$ 925 milhões para ativos e R$ 776 milhões de inativos.\nO senador Flávio Arns (Podemos) destacou o Projeto de Lei de sua autoria que torna mais rigorosas as punições para atos de improbidade administrativa. “Este Projeto de Lei garante mais rapidez e eficiência à Lei de Improbidade Administrativa e impõe maior rigor ao combate a atos ilícitos praticados contra a Administração Pública. O combate à corrupção deve ser um ato constante observado por nós representantes do povo”, afirma Arns.\nO deputado estadual Paulo Litro (PSDB) destacou o investimento destinado, pelo governo do Estado, para a implantação de terceiras faixas e melhorias na PR-280, entre Marmeleiro e o entroncamento com a BR-153. “Serão melhorados 130 quilômetros da principal rodovia do sudoeste do Paraná, com investimento de R$ 35 milhões. Uma importante conquista que atende uma antiga demanda da população”, afirma o deputado.\nO TCU divulgou um relatório que aponta 903 candidatos no Paraná, que possuem patrimônio acima de R$300 mil, como beneficiários do auxílio emergencial até julho. Na lista, aparecem 29 postulantes ao cargo de prefeito, 34 ao de vice-prefeito e 830 candidatos a vereador. Curitiba lidera o número de candidatos nessa condição.\nProdução industrial do Paraná é destaque no Brasil. A produção industrial do Paraná cresceu 7,7% entre agosto e setembro deste ano. É o maior resultado entre os 15 locais analisados pelo IBGE no País. Segundo o Instituto, desempenho é cinco pontos percentuais maior do que a média dos outros estados. Para especialistas esse é um indicativo de retomada da economia.\nO presidente do TRE-PR, desembargador Tito Campos, e o secretário de Estado da Saúde, Beto Preto, alertaram sobre a necessidade de um trabalho intenso em prol da segurança sanitária no dia da eleição, 15 de novembro. Beto Preto lembrou que “são mais de 8 milhões de eleitores aptos ao voto, nos 399 municípios do Paraná. É preciso que todos sigam as normas sanitárias, usem máscara e mantenham o distanciamento”.\nOAB Paraná lança novo Portal de Transparência em 2021. A reestruturação já está em curso e trará um detalhamento maior de informações. De acordo com o Diretor Tesoureiro da Seccional, Henrique Gaede, “a medida faz parte de um dos compromissos assumidos por essa gestão, estando em linha com as expectativas de toda a advocacia no que se refere à prestação de contas de qualquer gestão”.\nO Complexo Hospitalar do Trabalhador, a Liga Paranaense de Combate ao Câncer e o Pequeno Cotolengo do Paraná – Dom Orione, receberam o Prêmio Pátria Voluntária, do governo federal. O Prêmio Nacional atua como incentivo ao Voluntariado, ‘Prêmio Pátria Voluntária’, foi criado 2019 e teve sua primeira edição em fevereiro de 2020. A premiação foi entregue por Jair Bolsonaro e sua esposa e recebida pela primeira-dama Luciana Saito Massa.\nO TSE disponibiliza dois aplicativos que conferem ainda mais transparência ao processo eleitoral. Por meio do app Resultados, qualquer pessoa pode acompanhar e obter os resultados das eleições em sua cidade a partir dos votos já apurados. Já o app Boletim na Mão disponibiliza ao cidadão uma cópia digital dos resultados das seções eleitorais, possibilitando que o eleitor atue como um fiscal das ações durante o pleito.\nControlador da Copel\nNelson Tanure, é o novo controlador da Copel Telecom. Tanure já participou de outras grandes transações, a citar aqui a Tim e a Oi. Comandou o Jornal do Brasil e a TV JB, além de ter negócios na indústria petroquímica é sócio na Gafisa, ramo da construção civil. O novo controlador é especialista em criar fundos de investimento para comprar ativos com problemas financeiros ou de gestão, um expert na área de grandes negócios.\nO WhatsApp conta agora com um novo recurso muito esperado desde o anúncio do WhatsApp Pay, o botão de compras. O que fica disponível, num primeiro momento, é a utilização do canal de compra, para acessar o catálogo dos produtos ofertados por aquele contato comercial. A rede social, espera autorização do Banco Central para começar a oferecer a etapa do pagamento dentro da plataforma.\nO ministro do Supremo Tribunal Federal, Alexandre de Moraes, testou positivo para covid-19. Em nota, a assessoria da Corte informa que Moraes está assintomático e sob os cuidados do infectologista David Uip. “Durante o período de isolamento em sua residência, em São Paulo, ele manterá as atividades profissionais normalmente”, completou o tribunal.\nO ministro da Economia, Paulo Guedes, afirma que uma das prioridades para o próximo ano é a privatização da Eletrobras e dos Correios. Outra companhia na mira do ministro é o Porto de Santos. Guedes avalia que o governo possui uma dívida praticamente imparável. Para conter isso, a saída é a venda de estatais e imóveis da União.\nGoverno federal lançou o Plano de Retomada do Turismo. A iniciativa traz projetos e ações que buscam resultados efetivos e concretos para a área até 31 de julho de 2021. As medidas reúnem esforços da iniciativa pública e privada, do terceiro setor e também do Sistema S, que inclui o Sesc, o Senai, o Sesi e o Sebrae. “O que acontece aqui hoje é uma grande aliança em favor da retomada do turismo brasileiro”, afirma o ministro do Turismo, Marcelo Álvaro Antônio.\nLeia também: Corredor bioceânico\nTópicos relacionados:ADI-PRcoluna adicoluna adi paranáedicao-2181\nDireito & Justiça22 minutos atrás


Pessoas com problemas cardiovasculares, ocasionados principalmente por entupimento de artérias, precisam de acompanhamento médico constante para manter a saúde em dia, já que nenhum alimento, sozinho, é capaz de curar artérias que já estão doentes. No entanto, existem comidas que podem evitar o entupimento das artérias e o colesterol. Uma reportagem da revista norte-americana Shape listou alimentos que são considerados "limpadores" naturais de artérias:\nAbacate: o consumo diário da fruta pode derrubar os níveis de colesterol ruim e aumentar o bom colesterol no organismo.\nGrãos integrais: ricos em fibra, alimentos como arroz integral e aveia, por exemplo, elimina as moléculas de colesterol do organismo.\nSalmão: peixes ricos em ômega-3, como salmão e atum, ajudam a aumentar o colesterol bom no sangue e diminuem os riscos de ataque cardíaco.\nAspargo: o alimento é capaz de reduzir as chances de ataque cardíaco por controlar a pressão arterial.\nBrócolis: boa fonte de fibra, que controla a pressão arterial e o colesterol, o alimento ainda é rico em vitamina K.\nCanela: a especiaria tem poder antioxidante e ajuda a diminui a gordura no sangue.\nEspinafre: o alimento é capaz de reduz em até 11% as chances de doenças cardíacas por ser rico em potássio e acido fólico.\nMelancia: pouco calórica, a fruta ajuda a reduzir a pressão sobre vasos sanguíneos.\nAzeite de oliva: usado para cozinhar ou dar mais sabor a saladas, ele pode diminuir as chances de um AVC.\nNozes: boas fontes de gordura monosaturada, vitamina E e ômega-3, elas são capazes de reduzir os níveis de colesterol ruim no sangue.\nRomã: comum apenas nas festas de fim de ano, a fruta limpa as artérias e mantém sob controle a pressão arterial.\nSuco de laranja: dois copos da bebida por dia já são capazes de diminuir a pressão arterial e trabalhar a favor das funções dos vasos sanguíneos.\nCranberries: apesar de pouco consumida no Brasil, a fruta é rica em potássio e também tem poder de limpar artérias, diminuindo riscos de ataque cardíaco.\nCafé: consumido de forma moderada, cerca de até quatro xícaras por dia, a bebida diminui em 20% as chances de um ataque cardíaco.\nChá verde: são inúmeros e conhecidos os benefícios da bebida para a saúde. Um deles é baixar os níveis de colesterol do organismo.


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O Laboratório de Informática de Graduação do Instituto de Química (LIG/IQ) tem como finalidade propiciar um suporte no processo ensino-aprendizagem, destinado prioritariamente aos discentes, ao desenvolvimento de atividades curriculares e para o uso da internet como ferramenta de pesquisa e assuntos de natureza acadêmica, objetivando a maximização do acesso à informação aos seus usuários.\nO LIG/IQ dispõe de 15 máquinas, com o sistema operacional UBUNTU, para livre utilização dos alunos de graduação, e funciona sob a supervisão de 8 alunos-monitores bolsistas, selecionados pela Pró-Reitoria de Graduação (PR-1) e voluntários, que estão disponíveis para a assessoria em situações de dúvidas decorrentes do uso do sistema, para a preparação de material pedagógico e eventuais problemas nos equipamentos.\nA coordenação do LIG e a Direção do IQ publicam Regulamento Interno, em anexo, que estabelece os procedimentos para organização das rotinas de controle e utilização do laboratório de informática, durante o período de pandemia de Covid-19, e prevê que o usuário deverá efetuar reserva através do preenchimento do formulário disponibilizado. O novo horário de funcionamento do LIG será de segunda a sexta, das 10:00 às 14:30.\nFormulário para efetuar reserva: https://forms.office.com/r/z8qcMgyvtr\nRegulamento para utilização do LIG-IQ\nOrientações para retorno gradativo presencial do LIG-IQ\nRelação dos monitores do Laboratório de Informática de Graduação do IQ-UFRJ:\nArthur Pezzin Ton (Engenharia Eletrônica e de Computação)\nBeatriz de Souza Moraes (Química com Atribuições Tecnológicas)\nBianca Louhanne D. P. R. S. Silva (Ciências Biológicas – Modalidade Biofísica)\nFabio Ferreira Lopes (Química com Atribuições Tecnológicas)\nHelio Cheble Machado (Engenharia Eletrônica e de Computação)\nJoão Matheus Chagas Sousa (Química com Atribuições Tecnológicas)\nLetícia Tavares Dos Santos (Engenharia Eletrônica e de Computação)\nVitor Viganor Cossetti (Engenharia Eletrônica e de Computação)\nHorário dos Monitores:\nDe segunda a sexta de 10:00h as 14:30h.\nAgora também estamos na Rede Social https://instagram.com/lig_iqufrj\nAcompanhe-nos e fique por dentro das informações e novidades!


Síndrome Da Criança Adotada :: nycemoves.com\nRejeitada 20 vezes criança com Síndrome de Dowb e adotada por homem gay. Luca enfrenta o preconceito de muitas pessoas que não admitem que um homem solteiro e homossexual possa adotar uma criança. “A minha história e a da Alba esmaga diversos estereótipos no que se refere a paternidade, religião, família e tantas outras coisas. Para a psicóloga Bianca Krauss, que contou sua história no começo da reportagem sobre o filho adotado que tem a condição genética, adotar é uma atitude que vai além dessa vida. “Para mim, me fez muito bem. Eu e meu marido estamos pensando em adotar outra criança, mas quero uma mais velha, com sete, oito ou nove anos. 27/09/2019 · Rejeitada por 20 famílias: menina com síndrome de down é adotada 'Vou passar o resto da minha vida com uma garota que eu amo e faremos coisas incríveis juntos', disse o pai.\nRESUMO. Este artigo apresenta como é o processo de aprendizagem de uma criança com síndrome de Down, que devido sua anomalia possui memória de curto tempo e necessita de uma atenção especial e uso de materiais concretos para melhor compreensão, sendo importante dinamizar as estratégias a serem adotadas para organizar a atividade mnésica. O menino Davi, que nasceu com síndrome de Down e há três anos encontrou sua nova família. Crédito da foto: Arquivo pessoal. Enquanto muitas pessoas no Brasil sonham com a chegada de um novo filho ou filha, existem mais de quatro mil crianças e adolescentes em abrigos em busca de um lar. “Uma criança com síndrome de Down será quase sempre uma força positiva na vida de seus pais e irmãos”. Novas pesquisas sobre a síndrome de Down apresentam um quadro extremamente positivo da forma como a síndrome de Down pode afetar indivíduos e famílias. Luca Trapanese é um rapaz italiano e gay de 41 anos que há muito tempo sonhava em ser pai. Ele realizava trabalhos sociais em casas que cuidam de crianças com síndrome de down quando surgiu por lá a pequena Alba, uma garota de apenas 1 mês de idade abandonada pela mãe. Foi o que aconteceu a Carla Penteado, que é mãe de três meninas com necessidades especiais, todas adotadas. Marcela, a mais velha, foi adotada em Aracaju e para conseguir ter a guarda da criança, Carla precisou se mudar para a cidade para comprovar residência.\nOs reflexos para a criança da dissolução do vínculo de filiação formado no processo adotivo sob o enfoque. A criança adotada vive, de um modo. do receio que os pais adotivos têm de não serem aceitos pelo filho adotado. A solução para essa síndrome de rejeição se encontra na convivência afetiva durante a primeira. O principal para lidar com uma criança adotada que se comporta de maneira MUITO difícil, pois difícil já será naturalmente, é seguir as seguintes dicas: Tenha certeza de sua intenção. com o ato de adotar. Se for por pena, dó ou compaixão, a dificuldade começa aí, pois a criança não agirá com gratidão.\nEste estudo irá abordar a devolução das crianças no processo de adoção, acentuando de que forma este ato influenciará no desenvolvimento desta criança bem como na sua forma de relacionar-se com o meio em que está inserido. Para tal estudo, tomamos como base o único caso documento sobre o assunto ocorrido em São Luís – MA no ano de.


Hidratação da pele tem que ser profunda | Veja Saúde\nO creme ideal deve ir muito além de deixar o toque macio e um cheiro agradável\nPor Thaís Manarini 1 jun 2021, 10h09\nPara ser eficiente, hidratação da pele depende do produto certo. Foto: People Images/Getty Images/SAÚDE é Vital\nEm pesquisa da marca Bepantol Derma, conduzida pelo Ibope, 61% das 2 mil brasileiras entrevistadas concordaram que a hidratação da pele só é eficaz se for profunda. Significa que 39% precisam aprender mais sobre o tema.\nDe acordo com a dermatologista Flávia Ravelli, de São Paulo, só uma pele bem hidratada exerce plenamente suas funções — que são várias, incluindo atuar como nossa primeira barreira de defesa contra inimigos externos.\nSó que muitos produtos agem de forma superficial, proporcionando apenas a maciez. São os cosméticos. “Por outro lado, há os dermocosméticos, que, além de garantir o toque gostoso, tratam a pele”, frisa. É nessa categoria cheia de atribuições que devemos focar.\nA dermatologista Flávia Ravelli resolve seis questões sobre hidratação\nA pele vive sofrendo agressões — poluição, vento, calor etc. Para recuperá-la, hidrate todos os dias.\n“Aplique o hidratante corporal de três a cinco minutos após o banho”, orienta Flávia. A penetração é melhor.\nCotovelos, joelhos e calcanhares tendem a ser mais ressecados por causa de atritos constantes.\nEtiqueta do banho\nPelo bem da barreira cutânea, a chuveirada deve ser morna e rápida. Esqueça as buchas vegetais.\nE o rosto oleoso?\nEle requer hidratação, sim. Caso contrário, a acne pode piorar. “Indicamos produtos específicos”, diz Flávia.\nTem sabonete aliado?\nSim. Há uma classe chamada syndet, sem agentes agressivos. Mas não substitui o hidratante em si.\nUm bom hidratante precisa…\n…impedir a evaporação da água da pele\n…preencher os espaços entre as células\n…funcionar como uma esponja, atraindo água para a pele\n…ajudar na renovação das células.


#Lula70: Personalidades exaltam legado do ex-presidente Lula | Blog do Esmael\n“Nós contamos e precisamos muito de você. Hoje e por muito tempo”, disse Luiz Marinho, prefeito de São Bernardo do Campo, na série de depoimentos de políticos, atletas e outras personalidades em homenagem aos 70 anos do ex-presidente Lula; João Pedro Stédile, do MST, por sua vez, enviou uma mensagem de esperança: “Que o senhor possa seguir ajudando o povo brasileiro a se conscientizar sobre nossos inimigos e percorrendo esse Brasil levando uma voz de esperança”; “O senhor levou o desenvolvimento econômico aonde as pessoas já não acreditavam mais”, acrescentou ainda Luiz Pezão, governador do Rio de Janeiro; o cantor Zeca Pagodinho, o ministro da Cultura, Juca Ferreira; a diretora e produtora de cinema Tata Amaral; Sebastião Salgado, um dos maiores fotógrafos do mundo, e sua esposa, Lélia Wanick Salgado, participaram igualmente da iniciativa; um dos vídeos mais assistidos e compartilhados foi o da equipe do Corinthians, com o técnico Tite, o gerente de futebol Edu Gaspar e os jogadores Cássio, Felipe, Ralf, Danilo e Jadson.\nEm comemoração aos 70 de Lula, nesta terça-feira, o Instituto Lula divulgou diversas mensagens de políticos, atletas e outras personalidades em homenagem ao ex-presidente.\n“Nós contamos e precisamos muito de você. Hoje e por muito tempo”, disse Luiz Marinho, prefeito de São Bernardo do Campo.\n“Parte destes 70 anos foi dedicado ao povo do Rio de Janeiro, que se libertou. O senhor levou o desenvolvimento econômico aonde as pessoas já não acreditavam mais”, destacou ainda Luiz Fernando Pezão, governador do Rio de Janeiro.\nPrevious Previous post: Coluna do Marcelo Araújo: Pátio da Setran, quem paga essa conta?\nNext Next post: Professor Wilson Picler desiste de concorrer à Prefeitura de Curitiba


Com golpe cresce extrema pobreza no Brasil, afirma CEPAL. – Voz Operária\n27 de janeiro de 2019 Voz Operária Brasil Deixe um comentário\nA Comissão Econômica para América Latina e Caribe, a CEPAL (órgão das Nações Unidas) divulgou dados que mostram que, entre o período de de 2016 e 2017, a pobreza aumentou 19,9% e a pobreza extrema saltou de 4% para 5,5%, ou seja, 11,4 milhões de brasileiros vivem na miséria. Já o IBGE, estima que 15,2 milhões de pessoas vivem abaixo da linha da extrema pobreza em nosso país, em comparação seria quase a população total do estado do Rio de Janeiro (16,7 milhões).\nPelo relatório da CEPAL, estimasse que em 2018 existam 182 milhões de pessoas pobres na América Latina (29,6% da população) e 63 milhões (10% da população) na miséria. Em 2002, haviam 57 milhões de pessoas em situação de miséria na América Latina, impulsionada pela má evolução do Brasil, país mais populoso da região.\nLista de 15 países e a taxa de pobreza extrema e pobreza.\nDesigualdade social caiu na última década, mas reduziu a queda nos últimos anos.\nImpulsionada pelo processo de mudanças, que levou ao poder governos de Esquerda que aplicaram fortemente em políticas públicas, na última década houve uma redução considerável da pobreza e miséria na América Latina e Caribe. Porém a América Latina e Caribe, é a região mais desigual do planeta. Por um lado abriga algumas das maiores fortunas do mundo e também milhões de pessoas vivendo nas mais degradantes condições humanas.\nO coeficiente de Gini (medida para calcular a desigualdade), caiu de 0,543 em 2002 para 0,466 no ano de 2018 (quanto mais o índice perto de zero significa igualdade absoluta). Ocorreu a redução do ritmo da diminuição das desigualdades nos anos recentes. Entre 2002 e 2008, a diminuição anual média da desigualdade foi de 1,3%, entre 2008 e 2014 o ritmo caiu para 0,8%, e entre 2014 e 2017 para 0,3%.\nO relatório mostra a taxa de crescimento da renda necessária para fazer cair a pobreza e a metade dos níveis atuais até 2030. Na comparação com outros treze países, o Brasil é o que precisaria apresentar a segunda maior taxa de crescimento da renda caso não haja queda na desigualdade no país, como mostra o gráfico.\nSalário baixo é um dos principais responsáveis pelo crescimento da pobreza.\nSegundo o documento, 40% da população da América Latina e Caribe ganham salários menores do que o valor do salário mínimo estipulado por seus países. Essa proporção é muito mais elevada entre as mulheres (48,7%) e os jovens de 15 a 24 anos (55,9%). Entre as mulheres jovens esse número alcança, 60,3%. O documento não trás informação com o recorte racial destes dados.\nUm dos elementos para os baixos salários é o grande peso da informalidade e trabalho precarizado. De acordo com o relatório, um em cada cinco trabalhadores latino possuem renda abaixo da linha de pobreza de seu país, cifra que chega a 35% no caso da população rural.\nO trabalhador brasileiro ganha o 3° menor salário mínimo da América Latina, ficando na frente apenas do México e da Colômbia. Com a Reforma Trabalhista aprovada pelo governo golpista Temer, que estabelece o trabalho intermitente e demais medidas de retirada de direitos, o salário não acompanhou o crescimento de reajustes dados pelos governos petistas. Mesmo sabendo que metade da força de trabalho no país recebe menos que o salário mínimo, a política econômica do golpe é de arrocho salarial.\nA luta dos governos progressistas para reduzir a pobreza e o descaso dos governos golpistas e neoliberais.\nApresentação do relatório da CEPAL, dia 24/01 no Chile.\nO Relatório aponta que, em 2003 a 2015, o Brasil sob a liderança dos governos do Partido dos Trabalhadores (Lula e Dilma), esteve na vanguarda da luta contra a pobreza e a miséria na América Latina e Caribe, fazendo despencar os índices de pobreza e pobreza extrema em toda região. Agora com o golpe, o Brasil arrasta o subcontinente no retrocesso ao combate à miséria e pobreza.\nDesde 2007, quando iniciou a onda de golpes na América-Latina, a pilhagem dos recursos naturais autorizada pelos governos satélites dos Estados Unidos é o principal fator para o crescimento da miséria. Além disso, medidas que desregulamentam as relações de trabalho, tal como a Reforma Trabalhista, e medidas de desmonte nas políticas públicas desprotegem a população.\nLeia o relatório da CEPAL\nPrevious Post: “EUA não estão por trás do Golpe de Estado, estão à frente.”\nNext Post: A dialética da polarização e as eleições cariocas ao governo do estado em 2018


Saiba como calcular o número estimado de pessoas numa manifestação - BLOG DO PRIMO\nSaiba como calcular o número estimado de pessoas numa manifestação\nComo saber o números de pessoas presente em um determinado evento público? Quem faz a contagem?\nAlguém passa uma lista de assinaturas, entrega fichas ou faz chamada?É comum, sempre depois que ocorre algum evento de grande magnitude, a divulgação de números de pessoas feita pela polícia, organizadores, imprensa, etc. Entretanto, estes números quase sempre não conferem.\nExiste uma certa tendência dos organizadores de determinado evento em ‘inflar’ o número de pessoas que participaram. Em um evento político, o partido que organiza sempre tende a aumentar o número de pessoas, já o partido contra tende a diminuí-lo. Como chegar em um número satisfatório e próximo ao real?\nDe acordo com engenheiros e estudiosos, o número de pessoas que cabem em 1 m², em um local com grande concentração de pessoas, é de no máximo 7 pessoas(pessoas com estaturas medianas e com peso de 60 kg). Isso com as pessoas se espremendo umas nas outras. É mais objetivo levar em consideração um número de 3 a 4 pessoas, mas este número ainda pode variar.\nNa imagem à esquerda, os limites foram estipulados analisando as diversas fotos originais do evento. Com a ajuda do Google Earth, foi traçada a área total e multiplicado pelo número de pessoas por metro quadrado. Na multidão na foto, estima-se aproximadamente 2.835 pessoas, sem levar em consideração o total de pessoas nos arredores e espalhados fora da área calculada.\nOs dados que a polícia divulga não são para serem usados pela imprensa, mas para fins de cálculo do número efetivo de polícias para os próximos eventos do porte, portanto, apenas estes números não podem ser levados em consideração.\nCostumo analisar todas as fotos de alta resolução dos eventos, muitas vezes tiradas de ângulos estratégicos, e as imagens são comparadas com imagens de satélites para cálculo de área disponível para o público, que de fato são os únicos dados concretos para comparação.\nAnalisando a imagem da rua e definindo os limites da multidão, considerando o tamanho de 7 metros para a largura da rua sem a calçada e duas pessoas por metro quadrado, estima-se mais de 3 mil pessoas para o evento na imagem.\nFonte: Milton-Tecnólogo em Segurança no Trabalho\n← José Agripino é massacrado nas redes sociais\tDilma chora ao falar sobre manifestações →\n1.477 comentários sobre “Saiba como calcular o número estimado de pessoas numa manifestação”\n14/06/2017 às 22:30\n12/09/2017 às 03:51\nI just want to tell you that I am very new to weblog and actually loved your web page. Very likely I’m planning to bookmark your website . You really come with excellent articles and reviews. With thanks for sharing with us your webpage.


Regaço, Bebê, Avião | pastibet.net\nAo viajar com seu bebê, você pode levar, na cabine do avião, um artigo pessoal, como bolsa, mochila ou malinha de bebê, desde que não ultrapasse as medidas máximas permitidas, de 45 x 35 x 20 cm altura, largura e comprimento, além de um sistema de retenção infantil cadeira certificada, assento de elevação ou outro ou um carrinho. Existe cobrança para levar carrinho de bebê e bebê conforto no avião? Viajando com um bebê de colo de até dois anos incompletos, você pode despachar, de graça, um carrinho ou um bebê conforto e uma cadeirinha de transporte. Em voos nacionais, se precisar levar outros itens, eles serão descontados da franquia de bagagem dos pais. Viajar com bebês em avião. O cantor Niall Horan, integrante do grupo One Direction, era uma dessas pessoas que estava viajando junto com os pais da pequena Marit. Em seu perfil no Twitter, ele mostrou o que recebeu do casal logo que entrou no avião e contou como foi o voo ao lado da família.\n06/08/2015 · Viajando de avião com bebês recém nascidos Gisele Delaia - Mãe de dois no Canad. Se o avião estiver vazio e teu bebê conforto for homologado para uso aeronáutico, você poderá levá-lo em um assento extra o meu, da Chicco, comprado nos EUA não estava, então não pude entrar com ele. Porém, acho que só é vantagem para bebês maiores. Não existem desculpas para não viajar com o bebê em avião. Toquem nas nuvens com o seu bebê! De acordo com os pediatras, os bebês estarão preparados para viajar em avião a partir dos dez dias ou duas semanas após o nascimento, ainda que alguns viajem antes. 17/08/2017 · O que esperar de uma viagem internacional com bebê!! Se você curtiu se inscreva no canal, ative o sininho para receber notificação de quando entrar video novo e me siga nas redes sociais: Instagram: @josyfbassoto.\nSylvio Monteiro explica que os bebês costumam cumprir o tempo e horário de sono que estão acostumados. "Se for um voo longo, de 12 horas, por exemplo, ele vai dormir por cerca de nove horas e vão faltar apenas três horas. Mas o melhor calmante para o bebê é o colo da mãe.". Brasileira cria método que faz bebês dormirem 12 horas seguidas. 11 dúvidas sobre viagens de avião com bebês Da documentação para embarcar aos direitos da criança a bordo, elencamos as principais respostas que você precisa saber para pegar aeronave com o seu filho. 17 dicas para viajar com o bebê de avião Saiba como evitar enjoos, dores de ouvido e quais documentos são necessários na hora de embarcar. Por Lígia Menezes colaboradora access_time 28 out 2016, 05h29 - Publicado em 9 jun 2015, 11h36. chat_bubble_outline more_horiz. “A experiência de viajar com o meu bebê de avião” Muitos pais ficam tensos na primeira viagem do filho. Confira o relato de uma mãe que passou por isso, tentou se programar da melhor forma possível, mas ainda assim não obteve o resultado esperado.\nKeurig K Cafe Cyber Monday Promoções\nRaging Bull Company\nTorta De Hambúrguer Com Cobertura De Purê De Batata\nPoemas Engraçados Do Amor Da África Do Sul\nDia Da Ovulação Posso Engravidar