A influência do D-limoneno como promotor de absorção do ácido\n5-aminolevulínico para Terapia Fotodinâmica do câncer de pele:\nda permeação e retenção cutâneas\nTese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas para a obtenção do título de Doutor em Ciências Farmacêuticas\nÁrea de Concentração: Medicamentos e Cosméticos\nOrientado: Wagner Luiz Heleno Marcus Bertolini\nOrientadora: Profa. Dra. Maria Vitória Lopes Badra Bentley\nDedico este trabalho a todos que, direta ou indiretamente, contribuíram\npara que eu pudesse alcançar este momento. Todos que participaram,\nde qualquer forma que tenha sido, creio que deixaram um pouco de si\npara que eu realizasse mais uma etapa em minha vida.\nEm momentos de agradecimentos muitas vezes podemos ser\ninjustos e incorrer no erro de esquecimento de alguém que tenha\ncontribuído. Porém, àqueles que participaram mais frequentemente e\ncontribuíram em vários aspectos e etapas deste trabalho, meu mais\nsimples e sincero obrigado.\nAo técnico de laboratório José Oreste Del Ciampo, o primo, pela\najuda principalmente nas dermatomizações.\nAo técnico de laboratório Henrique Diniz, o primo II, pela ajuda no\nque se refere aos animais do biotério, entre outras.\nÀs colegas doutorandas Fábia Rosseti e Aline Carollo pelo auxílio\ne disposição em me ajudarem nas técnicas empregadas.\nUm agradecimento especial à minha orientadora Vitória que, no\ninício desta tese era minha orientadora e já no decorrer desta não era\nmais: havia se tornado uma referência em minha vida pessoal, me\nincentivando em momentos muito difíceis a seguir em busca da\nrealização pessoal e da felicidade que alcancei ao me tornar pai.\nÀ minha esposa Lucimara, que sempre me orienta, me ensina, me\nfortalece e contribui das mais diversas formas.\nÀs colegas Ana Luiza Degani e Raquel Tassara, que me\nauxiliaram e me incentivaram a não desistir da batalha deste trabalho.\nE agradecer a Deus pelo presente ofertado, que foi a chegada de\nminha filha Ludmila. Chegou como um raio de luz irradiando felicidade e\nalegria a todos que a conhecem. E agora, também, pela conclusão de\nmais uma etapa em minha vida acadêmica.\nBERTOLINI, WAGNER L. H. M. A influência do D-limoneno como promotor de absorção do ácido 5-aminolevulínico para Terapia Fotodinâmica do câncer de pele: avaliação in vitro e in vivo da permeação e retenção cutâneas. 2009 118f. Tese (Doutorado). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto Preto – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009.\nO câncer é a segunda doença principal do planeta, muito próximo de se tornar a mais incidente. Os tratamentos tradicionais do câncer, tais como cirurgia, radioterapia e quimioterapia apresentam severos efeitos colaterais ao paciente devido à citotoxicidade que podem causar às células normais, além das cancerosas. Objetivando minimizar estes efeitos indesejáveis pesquisadores de diversas áreas afins vislumbram novas técnicas, novos tipos e formas de tratamentos que apresentem um melhor perfil terapêutico; que possam agir de forma mais seletiva contra as células cancerosas, minorando os efeitos indesejáveis em relação às células saudáveis. Dentre as técnicas pesquisadas destaca-se a Terapia Fotodinâmica (TFD). Esta é uma técnica de tratamento nova e promissora. A técnica do tratamento consiste em aplicar, no tecido alvo, substâncias fotossensibilizantes, posteriormente ativadas com luz de comprimentos de onda específicos, com a finalidade de produzir destruição celular, por meio da ação de produtos citotóxicos fotoativados. Destaca-se a seletividade apresentada pela técnica, que deve ser reconhecida como uma das vantagens entre as técnicas empregadas no tratamento do câncer. O presente trabalho objetiva verificar a influência do D-limoneno como promotor de permeação do ácido 5-aminolevulínico (5-ALA) em aplicação tópica. Isto visa aumentar a permeação do 5-ALA quando aplicado topicamente. O 5-ALA é convertido a protoporfirina-IX (PpIX) pela via do ciclo Heme. Esta é um potente agente fotossensibilizador endógeno. O interesse no uso deste promotor foi aumentar a taxa de penetração do 5-ALA, possibilitando a permeação de maiores quantidades do fármaco em questão. Para isto foram realizados estudos de permeação in vitro do 5-ALA, em concentração de 1% (p/p) utilizando-se\nformulações (emulsões O/A) com diferentes concentrações do promotor D-limoneno (0, 5, 10, 20 e 30%), (p/p). Observou-se que o fluxo in vitro do 5-ALA através da pele\nsignificativo, evidenciando, assim, um efeito eficiente do D-limoneno como promotor. Experimentos in vivo foram conduzidos em camundongos objetivando a análise do\nefeito da formulação na produção e acúmulo de PpIX na pele. Observou-se que o D-limoneno aumentou significantemente a quantidade de PpIX extraída da pele. Os resultados in vitro e in vivo mostraram o potencial do D-limoneno como promotor de\nabsorção cutânea para o 5-ALA para a TFD tópica do cancer de pele.\nBERTOLINI, WAGNER L. H. M. D-limonene influence in the cutaneous penetration enhancer for 5-aminolevulinic acid in photodynamic therapy of skin cancer: in vitro\nand in vivo skin permeation and retention studies. 2009 118f. Thesis (Doctoral).\nFaculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto Preto – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009.\nThe topical administration of 5-ALA has been distinguished on skin cancer photodynamic therapy (PDT) because of its efficiency in the treatment of tumors and the reduced phototoxic collateral effects. However, this effectiveness is limited by its low penetration in the skin. A proposal to optimize the 5-ALA penetration in the skin is the use of cutaneous penetration enhancers, which seek to alter the cutaneous barrier for many bioactive molecules. The aim of this work was the pharmaceutical development of formulations containing D-limonene as a cutaneous penetration enhancer, seeking the increase of the cutaneous penetration of 5-ALA for skin cancer PDT. The in vitro flux of 5-ALA present in 1% (w/w) from different formulations\ncontaining D-limonene (20 e 30% w/w) was significantly increased after 12 hours of experiment, in comparison with formulations without D-limonene, mainly for the formulations containing 20% and 30% of D-limonene with 1% of 5-ALA (1,45 and 2,01 times, respectively). The stratum corneum (SC) and [epidermis + dermis] without SC retention were also significantly increased, showing an enhancer effect of the promoter. In addition, in vivo experiments were accomplished in mice, with the\npurpose of analyzing the formulation effect on the PpIX production and accumulation in the skin. It was observed that the penetration enhancer's presence significantly increased the amount of PpIX extracted from the skin. Both in vitro and in vivo results\nshowed the potentiality of the formulations containing D-limonene as a cutaneous penetration enhancer for 5-ALA delivery on the skin cancer PDT.\nA palavra câncer (neoplasia) está associada ao sinônimo de sequelas, sofrimento e morte, para a maioria das pessoas. A desinformação ou falta do uso de métodos de prevenção, por parte da população, constitui uma das principais barreiras para enfrentar esse mito e prevenir a atual situação do câncer no Brasil e no mundo: a segunda causa de morte por doença.\nAs neoplasias podem ser definidas como proliferações desorganizadas de células, que apresentam um crescimento autônomo e perda da diferenciação celular. Este tipo de célula evolui independentemente dos mecanismos que, normalmente, controlam a proliferação e a diferenciação celular, transformando o organismo em uma espécie de hospedeiro de células neoplásicas. Os agentes causadores das neoplasias podem ser físicos, químicos ou biológicos, sendo responsáveis por modificações genéticas das células que proliferam sem controle (LOPEZ et al., 2003).\nSegundo a Organização Mundial de Saúde (OMS), se medidas urgentes não forem tomadas, o câncer passará a ocupar o primeiro lugar em mortalidade até 2020, principalmente nos países em desenvolvimento.\nCerca de dois milhões de novos casos são diagnosticados anualmente no mundo todo, e a expectativa é de que esses números continuem a aumentar (NA et al., 2001). A maior parte está associada à exposição excessiva a radiação\nultravioleta e, por isso, os cânceres de pele são mais comuns na face e nas áreas do corpo que ficam mais expostas (MELNIKOVA et al., 2005).\nO câncer de pele é um dos tipos mais freqüentes da doença no Brasil. Segundo dados do Instituto Nacional do Câncer (Inca) do Ministério da Saúde, mais de 113 mil pessoas apresentarão diagnóstico positivo da doença neste ano, no país. Nos Estados Unidos, o número de novos casos beira um milhão de pessoas com câncer todos os anos. Um estudo coordenado por dermatologista da Mayo Clinic, nos Estados Unidos da América, revelou que nos últimos 30 anos houve um aumento de 74% no número de pessoas com menos de 40 anos com câncer de pele. Apesar de o câncer de pele surgir com mais freqüência na cabeça e no pescoço (90%), o estudo mostrou que em 40% dos casos a doença aparece em outras partes do corpo, refletindo os descuidos durante o banho de sol (CHRISTENSON et al., 2005).\ncaso de exposição solar em períodos de grande incidência de raios UV, principalmente em banho de sol entre 10h e 15h (PARRISH et al., 1978). Grande parte das pessoas parece não compreender as consequências devastadoras, aliadas à negligência do uso diário do protetor solar. Tais protetores devem ser, geralmente, superiores ao Fator de Proteção Solar (FPS) 15.\nSabe-se que a exposição à radiação ultravioleta promove alguns efeitos benéficos como: aquecimento corpóreo e síntese de vitamina D, que promove a retenção de cálcio nos ossos; ação antidepressiva e efeito fotoprotetor, que em doses moderadas estimula a síntese de melanina. Esta exposição à radiação ultravioleta pode também provocar inúmeros efeitos danosos como: queimaduras, fotoenvelhecimento e cânceres de pele, dependendo da exposição (PATEL et al.,\n1992; HORRIOT et al., 1995; BERSET et al., 1996; VANQUERP et al., 1999).\nA exposição à radiação UV está associada ao desenvolvimento de tumores cutâneos, particularmente o carcinoma celular escamoso, o carcinoma basocelular e o melanoma (PERLIS & HERLYN, 2004).\nPesquisas nesta área mostram que a radiação UV pode danificar o DNA e o material genético, pode causar lipoxidação levando à produção de radicais livres, causar inflamação; romper a comunicação celular; modificar a expressão gênica em resposta ao estresse e enfraquecer a resposta imune da pele (RANGARAJAN e ZATZ, 2003). Além disso, aumenta o risco de câncer cutâneo, promove o fotoenvelhecimento e exacerba dermatoses fotossensíveis (TAYLOR et al., 1990;\nWOLF et al., 1993).\nO DNA é a biomolécula mais afetada pela radiação UV, pois apresenta maior absorção do comprimento de onda nessa faixa de emissão. Existe uma estreita relação entre os comprimentos de onda ultravioleta provenientes da luz solar e sua participação na geração destas doenças na pele, especialmente nos melanócitos, células escamosas e basais. Ainda não estão bem elucidados ou correlacionados os comprimentos de onda e os mecanismos de ação envolvidos.\n1.1. A radiação UV e a pele\nA radiação ultravioleta é um poderoso agente etiológico da maioria dos casos de câncer de pele humano (ELDER, 1989; JHAPPAN et al., 2003). É, todavia, a\nprincipal responsável pelos fotodanos cutâneos e é dividida em três categorias: UVC (100-290 nm), UVB (290-320 nm) e UVA (320-400 nm) (EPSTEIN, 1990).\nFigura 1: Características dos raios ultravioleta quanto à incidência na Terra. Disponível em: www.solamigo.org; obtido em 28/09/2007.\nOs raios UVC não atingem a superfície da Terra em quantidade significativa, pois são filtrados na camada de ozônio. Portanto, podem se constituir em risco para as populações de países que sofrem deterioração da camada de ozônio (em que poderíamos citar a Austrália). Pode, assim, tornarem-se perigosos (KOH e LEW, 1994).\nA radiação ultravioleta, especialmente a radiação UVB, que é a maior carcinogênica para o homem (GREEN et al., 1999), é a principal responsável pelo\ndesenvolvimento do câncer da pele. Provoca mutação no DNA com ativação de oncogenes e supressão de respostas imunes locais.\nbasal da epiderme e causam principalmente danos diretos ao DNA, tais como, dímeros pirimidínicos, os quais podem promover mutações que podem levar à carcinogênese (MACCUBBIN et al., 1995; LARSSON et al., 2005); podem causar\neritema, imunossupressão, inibição da síntese de DNA, RNA, alterações da síntese de proteínas, lise das membranas celulares e mutação celular, nos casos de carcinomas de células basais e escamosas. Sua incidência aumenta consideravelmente durante o verão, especialmente nos horários entre 10 e 16 horas, quando a intensidade dos raios atinge o seu máximo.\nEstes raios são parcialmente bloqueados pela camada de ozônio. A diminuição de 1% desta provoca o aumento de 2% da radiação UVB na superfície do planeta, o que gera uma elevação potencial da incidência de câncer de pele (http://www.fismed.ufrgs.br/sol_efeitos.htm, acessado em dezembro 2008).\nA exposição prolongada a estes raios sem os devidos cuidados e medidas de proteção podem desencadear a doença do câncer de pele no indivíduo. A excessiva exposição solar da população durante a segunda metade do século passado é a principal causa do aumento na prevalência do câncer de pele (URBACH, 1991; ARMSTRONG; KRICKER, 2001).\nOs raios ultravioletas tipo A (UVA) compõem a maior parte do espectro ultravioleta (formado por raios tipo A, B e C) e possuem intensidade constante durante todo o ano, atingindo a pele praticamente da mesma forma durante o inverno ou o verão. Sua intensidade também não varia muito ao longo do dia, sendo pouco maior entre 10 e 16 horas que nos outros horários do dia. Têm comprimento de onda entre 320 a 400 nm (a luz visível vai de 400 a 800 nm). Penetram profundamente na pele, sendo o principal responsável pelo fotoenvelhecimento. Tem importante participação nas fotoalergias e também predispõe o indivíduo ao surgimento do câncer de pele.\nOs raios UVA induzem a formação de espécies reativas de oxigênio (EROs), acarretando danos às membranas celulares e, também, danos ao DNA, principalmente na forma de quebra da fita e ligação cruzada proteína-DNA (GODAR\net al., 1993). Interagem indiretamente na derme reticular, induzindo a produção de\nradicais livres que podem causar envelhecimento precoce ou fotoenvelhecimento e indução tumoral (MATSUI e DELEO, 1991; KOH e LEW, 1994; PACKER, 1994; LINGE, 1996; SCHARFETTNER-KOCHANEK et al., 1997). Além disso, a radiação\nal., 1998), imunossupressão (DUMAY et al., 2001) e instabilidade genômica\n(PHILIPSON et al., 2002). Estudos epidemiológicos associam o melanoma à\nexposição intensa à luz solar na infância e, principalmente, ocasionado pela exposição à radiação UVA (MOAN et al., 1999). Apesar de serem menos\ncarcinogênicos do que os UVB, proporcionalmente, os raios UVA atingem de 10 a 100 vezes mais a superfície da Terra (HERBERT, 1983).\nApesar de que qualquer pessoa possa ser acometida pela doença, algumas pessoas fazem parte de um grupo de maior risco. Existem vários fatores que podem contribuir para tal. Dentre estes fatores de risco poderíamos citar algumas características físicas destas pessoas tais como apresentarem pele, olhos e cabelos claros do que em pessoas de pele escura (ARMSTRONG; KRICKER, 2001); pessoas que apresentam geralmente queimaduras decorrentes da exposição solar, apresentando menor efeito de bronzeamento, indivíduos com uma exposição ao sol por períodos prolongados, seja por motivo de lazer ou por exigência ocupacional, e os que possuem história familiar de tumor na pele (CUMMINGS et al., 1997).\nExistem vários outros fatores que poderíamos citar, entre estes: o fator fenotípico, a exposição contínua ao sol (sendo este o fator que mais contribui para o surgimento da doença) sem as devidas medidas de fotoproteção, predisposição genética, exposição à radiação ionizante, exposição a carcinógenos químicos, tais como, o tabaco, hidrocarbonetos industriais, fuligem e arsênio (BARON & GREENBERG, 2000; GOTTLOBER et al., 1999); exposição a certos subtipos de\npapiloma vírus humano (HUMPHREYS, 2001).\nPessoas que vivem em países tropicais, como Brasil e Austrália (país com o maior registro de câncer de pele no mundo) estão mais expostas a esse tipo de doença (URBACH, 1997; GREEN et al., 1996). O Quadro 1 relaciona os efeitos\nQuadro 1: Efeitos do excesso de sol sobre a pele e os olhos\n1. Fotoenvelhecimento Pele ressecada\n2. Fitofotodermatite (pelo trabalho com plantas,\ntintas e ceras) Prurido e hiperemia na pele\n3. Queimaduras solares Eritemas de vários graus\n4. Dermatites de contato (pelo uso de inseticidas\ne fungicidas) Prurido e hiperemia na pele\n5. Câncer de pele (carcinoma e melanoma) Lesões hipercrônicas na pele\nTonturas,vertigens, tremores,delírios e convulsões.\n7. Prostração térmica\nDor de cabeça, tonturas, mal estar, fraqueza e inconsciência 8. Redução da defesa imunológica Infecções de repetição, leucopenia\n9. Catarata Perda de visão (cristalino opaco)\n10. Pterígio Conjuntivite solar\n11. Pindécula Tumor na pálpebra\nFonte: www.solamigo.org em 28/09/2007.\n1.2. Tipos de Câncer de pele\nOs três tipos mais comuns de câncer de pele são os denominados de câncer tipo basocelular e espinocelular (câncer do tipo não-melanoma) e melanoma cutâneo maligno (melanoma) (ARMSTRONG; KRICKER, 2001).\nOs tumores cutâneos malignos não-pigmentados são representados principalmente por dois tipos de alteração do epitélio: o carcinoma basocelular (BCC) e o carcinoma espinocelular (ECC). Estes tipos representam o mais comum e mais grave dentre os tipos de neoplasma maligno em humanos (BASTIAENS et al., 1998,\nO número de casos novos estimados para o Brasil em 2008 e também 2009 é de 55.890 casos em homens e de 59.120 casos novos em mulheres. Estes valores referem-se aos casos de câncer do tipo não melanoma. Estes valores correspondem a um risco estimado de 59 casos novos a cada 100 mil homens e 61 para cada 100 mil mulheres (INCA/MS 2009).\nO risco estimado por sexo e região para este tipo de câncer, segundo o INCA/MS para 2008 e a previsão para 2009 está apresentado na Tabela 1.\nA incidência do câncer tipo melanoma aumentou abruptamente nos últimos 50 anos, atingindo principalmente populações de pele branca (AUTIER, 2004). No Brasil é o tipo de câncer de pele menos freqüente, sua letalidade é elevada, porém sua incidência é baixa (2.710 casos novos em homens e 3.050 casos novos em mulheres). As maiores taxas estimadas em homens e mulheres encontram-se na região Sul do país (INCA/MS 2008).\nTabela 1: Incidência de casos de câncer de pele por sexo afetado e regiões do país (para cada 100.000 habitantes) em 2006 e previsão para 2008/2009.\n2006 2008 2006 2008/2009\nSul 89 82 93 82\nSudeste 70 68 69 64\nCentro-Oeste 52 45 73 64\nNordeste 44 47 50 53\nNorte 32 27 32 28\nFonte: INCA/2009 http://www.inca.gov.br\n1.2.1. Carcinoma basocelular (BCC)\nFigura 2: BCC (A), forma plano-superficial (B) e forma nódulo-ulcerativa (C).\nFonte: (A) http://www.dermatologia.net acesso em 29/01/2008 às 18:56h e (B e C) INCA/MS, 2008\nÉ um tumor que raramente entra em metástase. Pode se manifestar de várias maneiras. Feridas que não cicatrizam ou lesões que sangram com facilidade devido a pequenos traumatismos, como o roçar da toalha, podem ser um BCC. Acomete, principalmente, a região da cabeça e pescoço e está relacionado à intensa exposição solar (SHELTON, 2001; LAUTH; UNDEN; TOFTGARD, 2004). Embora não seja letal, pode ocasionar desfiguração e morbidade devido à destruição do tecido local ou como resultado de tratamento cirúrgico (HOWELL et al., 2005). É um\ntipo de câncer mais comum em adultos, acima dos 40 anos. Porém, não são raros os casos de pessoas com menos de 30 anos. Observa-se a ocorrência principalmente em pessoas de pele clara, que se queimam facilmente e apresentam sardas (HUMPHREYS, 2001).\n1.2.2. Carcinoma espinocelular (ECC)\nFigura 3: Câncer de pele tipo espinocelular.\nFonte: www.dermatologia.net, obtida em 17/09/2007\nÉ comum acometer áreas de mucosa aparente, como a boca ou o lábio, cicatrizes de queimaduras antigas ou áreas que sofreram irradiação (raios X). Pode ocorrer, também, a partir de ceratoses actínicas, que são lesões pré-cancerosas decorrentes da exposição prolongada e repetida da pele ao sol.\nEste tipo de câncer acomete indivíduos de pele clara. Porém, é mais comum do que o tipo basocelular em indivíduos não-brancos. Em indivíduos de pele clara está relacionado com histórico de queratose actínica e ocorre predominantemente em homens e mulheres acima dos 40 anos (HUMPHREYS, 2001).\nFigura 4: Imagens de melanomas. Fonte: www.gbm.org.br\nEmbora só represente 4% dos tipos de câncer de pele (portanto, menos freqüente do que os outros tumores de pele anteriormente citados), o melanoma é o mais grave devido à alta possibilidade de formação de metástases (FOUNDATION SKIN CANCER, 2006). Sua letalidade é mais elevada (INCA, 2006), pois é um câncer mais agressivo (Figura 5). Por isto, é de extrema importância o diagnóstico precoce para a sua cura.\nApesar de ser mais freqüente nas áreas da pele comumente expostas ao sol, o melanoma também pode ocorrer em áreas de pele não expostas. Este tipo de câncer apresenta algumas características básicas (Figura 6) tais como: assimetria (formato irregular), bordas irregulares (limites externos irregulares), coloração variada (uma mesma lesão apresentando várias cores: preta, castanho, branca, avermelhada ou azul) e diâmetro maior que 6 milímetros.\nTal tipo de câncer possui alto potencial de mortalidade e sua incidência aumentou muito nas últimas décadas. Ocorre principalmente entre 40 e 60 anos, porém, 20% dos pacientes possuem menos de 40 anos. Acomete o tronco e as pernas nos homens e mulheres, respectivamente (BRUCE; BRODLAND, 2000).\nFigura 6: Câncer de pele tipo melanoma e suas características e metástase em perna de uma paciente. Fontes: www.dermatologia.net, obtida em 17/09/2007; www.pathguy.com(Metástase); www.ariyan.com/pix/Services/melanoma.\n1.2.4. Tratamento e Prevenção\nO tratamento de tumores malignos não-pigmentados geralmente é feito através de aplicação de laser, eletrodissecção, criocirurgia, cirurgia, radioterapia ou quimioterapia tópica (empregando-se os compostos 5-fluoracil e podofilina). Tais terapias apresentam alto custo. Podem apresentar taxa de recidiva por volta de 10% e, normalmente, suas cicatrizes apresentam áreas com hipo ou hiperpigmentação. Outros efeitos colaterais podem ocorrer, tais como processos inflamatórios graves, dor e irritação. Estes efeitos podem permanecer por várias semanas (WAGNIERES\net al., 1998; DE ROSA & BENTLEY, 2000).\nA quimioterapia é um tratamento à base de fármacos citotóxicos que impedem a proliferação celular, principalmente das células neoplásicas que possuem uma alta velocidade de crescimento. Entretanto, a quimioterapia também afeta células normais desencadeando uma série de efeitos colaterais como diarréia, dores abdominais, úlceras, emese e queda de cabelo.\nA radioterapia induz morte celular por ação de radiações ionizantes, que podem ser eletromagnética (raios X ou gama) ou particulada (partículas e , prótons e nêutrons), que eliminam o tecido neoplásico. Entretanto, a radiação atinge os tecidos normais causando reação inflamatória local como cistite, dermatite e retinite.\nA cirurgia é utilizada para a retirada de tecidos neoplásicos localizados e não é indicada para casos de metástase. Tais tratamentos clássicos são demorados e causam desgaste e sofrimento aos pacientes e familiares. Por isto, necessita-se de técnicas terapêuticas que visem minimizar ou eliminar estes efeitos colaterais indesejados, buscando melhores resultados estéticos, eficientes, menos destrutivos, não agravando casos de pacientes com varias lesões (PENG et al., 1995;\nWENNBERG et al., 1996, SZEIMIES et al., 1996; ZEITOUNI et al., 2001; STENDER;\nWULF, 1996; SZEIMIES; KARRER, 1996).\nA prevenção do câncer de pele, inclusive os melanomas, inclui ações de prevenção primária por meio de proteção contra luz solar. Tais ações demonstraram serem efetivas e de baixo custo (CARDINEZ et al., 2004; AFAQ; ADHAMI;\n1.3. Terapia Fotodinâmica\nA Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma técnica que pode ser considerada “recente” na ciência e na terapêutica, pois teve aplicação científica a partir de metade do Século XX. Porém, o uso da luz para algum tipo de terapia é muito antigo. Consta que há mais de 4.000 anos os egípcios e orientais foram os precursores no uso desta terapia, por eles denominada de Helioterapia (Hélio em alusão ao Deus Sol) (MOAN & PENG, 2003) através da ingestão de alguns tipos de plantas concomitante à exposição à luz solar, para tratar várias doenças, em que poderíamos citar o vitiligo (BUDAVARI, 1989; STERNBERG, 1998).\nEm 1900, Raab descreveu a ação de corantes acridina e luz solar sobre\nParamecia, demonstrando que este organismo unicelular pode morrer sob essas\nVários pesquisadores realizaram diferentes trabalhos vislumbrando o uso de luz e de corantes para tratamentos de algumas doenças. Entre estes poderíamos citar Finsen, cura de Lupus vulgaris, em 1901; Trappeiner, em 1903, realizou\naplicação tópica do corante eosina e propôs o tratamento de um câncer de pele; Meyer-Betz, em 1913, com um auto-experimento em que injetou uma substância que pensava ser hematoporfirina apresentando resultado somente após se expor à luz, com fotossensibilidade na pele por vários meses; Policard (1924), estudou porfirinas visando a produção de fototoxicidade, principalmente em tumores malignos; Bonnett (1999) buscou a cura da varíola e tuberculose; ALLISON et al.,(2004) visaram a cura\nda varíola e tuberculose.\nDurante o transcorrer dos tempos vários outros estudos foram realizas. Diversas substâncias foram empregadas buscando atingir melhores resultados do processo. Um dado importante desta técnica é que se observou um acúmulo preferencial destes fotocompostos em tumores implantados em camundongos e ratos e que a incidência de luz proporcionava regressão da doença, conforme observou Schwartz na década de 60. Baseado nestes resultados, Lipson obteve sucesso no tratamento de câncer de mama através da irradiação seletiva do tumor, tornando-se este caso um marco inicial da TFD como terapia clínica para câncer.\num agente sensibilizante, luz e oxigênio combinados para destruição de um tecido tumoral (DOUGHERT et al., 1978).\nOs compostos porfirínicos tiveram seus estudos iniciados em meados dos anos 70 para uso em TFD, culminando com o desenvolvimento do Photofrin II®\n(refinamento do HpD) por Dougherty. O Photofrin® é o único medicamento aprovado (no final de 1998) pela FDA/EUA (Food and Drug Administration) para o tratamento do câncer com a técnica de TFD.\nDeseja-se que estas drogas tenham um melhor perfil de ação, menores efeitos indesejáveis, menor custo, melhor facilidade de aplicação, etc.\nNovos estudos e a procura por novos compostos a serem usados em TFD levaram à descoberta de vários fármacos fotossensíveis. Surgiram, assim, vários fármacos novos como o Levulan® Kerastick, um pró-fármaco, que tem tratamento preferencial em lesões de pele na face e escalpo e a recente aprovação do Visudyne®, (http://www.visudyne.com, acessada 18/09/07), medicamento aprovado\npara o tratamento de degeneração macular, no início de 2000, por diversos países. Entre 1999 e 2001 foram aprovados os compostos ácido 5-aminolevulínico (5-ALA) e seu éster metil 5-aminolevulinato, que podem atuar como precursores do fotossensibilizador endógeno protoporfirina IX (PpIX). Estes foram aprovados nos EUA e Europa, respectivamente, para o tratamento de queratose actínica e carcinoma basocelular superficial ou não (BROWN; BROWN; WALKER, 2004).\nEm função de novos fármacos e tecnologias a TFD tornou-se a opção preferencial nos casos de terapia para diversas doenças cutâneas, devido à busca de tratamentos com boa adesão (ORTEL et al., 1996) e que não apresentassem os\nefeitos colaterais negativos observados nos tratamentos usuais para o câncer de pele.\n1.3.2. Alguns Aspectos da Terapia Fotoquímica\numa das grandes vantagens no tratamento do câncer (BROW; BROWN; WALKER, 2004; ZEITOUNI; OSEROFF; SHIEH, 2003).\nFigura 7: Representação esquemática do princípio da Terapia Fotodinâmica. Fonte: http://dfm.ffclrp.usp.br/fabio/fotoquimioterapia.htm\nO uso da TFD baseia-se no efeito fotodinâmico, em que ocorrem reações fotoativadas. Os mecanismos destas reações foram intensivamente investigados com técnicas que permitiram descrever, de uma forma clara, processos envolvendo os estados excitados, tais como: espectroscopia acoplada à fotólise relâmpago ou\nflash-fotólise; espectroscopia de emissão; ressonância paramagnética eletrônica\n(RPE) e espectroscopia no estado excitado, entre outras. A absorção de um fóton por uma espécie A leva à formação de uma espécie A• de vida curta,\neletronicamente excitada, conforme Esquema a seguir:\nA + h →→→→ A••••\nA energia absorvida pode ser dissipada quimicamente ou fisicamente, conforme o Esquema abaixo:\nA• → →→\n→ produto primário →→→→ produto final (a)\nA• →→→→ A + hνννν (b)\nO estado da espécie produzida na excitação depende da energia do fóton de luz absorvido. A espécie no estado excitado pode sofrer diferentes processos conforme mostrado na Figura 8.\nFigura 8: Mecanismos (Tipo I e II) de geração de ROS pela combinação de luz, fotossensibilizador (FTS) e oxigênio no estado fundamental (3O2). O\nfotossensibilizador no estado singlete fundamental (S0) é irradiado com luz visível\ngerando fotossensibilizador no estado singlete excitado (S1). S1 pode decair para um\nestado triplete excitado (T1) gerando radical superóxido (3O2·-) (mecanismo Tipo I)\ne/ou oxigênio singlete (1O\n2) (mecanismo Tipo II). Estas ROS reagem com\nbiomoléculas formando biomoléculas oxidadas (fonte: modificado de Silva, 2003).\nA TFD exibe três mecanismos de ação frente à destruição do tumor. Inicialmente as espécies reativas de oxigênio podem matar diretamente as células tumorais. Outra possibilidade é causar dano às veias associadas ao tumor, produzindo trombos e acarretando o infarto do tumor. Por fim, pode ativar uma resposta imune contra as células do tumor (DOLMANS et al., 2003).\npossibilidade tornou-se alvo de pesquisas para novas técnicas de fotodiagnóstico (STRINGER E MOGHISSI, 2004).\nO estado triplete do fotossensibilizador pode apresentar dois tipos de mecanismo. Tais mecanismos são denominados de Tipo I e de Tipo II:\nMecanismo Tipo I: Após absorção da luz por substratos e/ou corantes exógenos presentes nos tecidos celulares o composto fotoativo no estado S1 ou\nT1 pode, por reações de oxidação e redução com diferentes biomoléculas, ser\nfotorreduzido a ânion radical, que por transferência de um elétron à molécula de oxigênio, gera espécies reativas (denominadas como EROs) como peróxidos (ROO-), ânion superóxido (O2-), ânion radical hidroxila (OH•-), etc, que atacam\ncentros específicos dentro dos sistemas celulares, desencadeando a morte de tais tecidos ou apoptose celular. Finalizando, o fotossensibilizador volta para seu estado fundamental. Poderíamos citar a excitação de porfirinas em presença de substâncias redutoras (SHARMAN et al., 2000).\nMecanismo Tipo II: Outro caminho possível para o estado excitado triplete gerado é o de transferência de energia para o oxigênio molecular. A molécula no estado T1 transfere sua energia para a molécula de oxigênio cujo estado\nfundamental é tripleto (3O\n2), formando seu estado excitado singleto (1O2). O\noxigênio singleto é o fator intermediário no processo fotodinâmico, sendo o principal responsável pela inativação da célula. O 1O2 pode induzir várias\nFigura 9:Diagrama de Jablonsky, mostrando os processos físicos que podem ocorrer após uma molécula absorver um fóton com energia da faixa ultravioleta ou visível. S0 é o estado\nfundamental. S1 e T1 são os estados excitados singleto e tripleto de menor energia,\nrespectivamente. S2 é um segundo estado excitado singleto. As setas retas representam os\nprocessos envolvendo fótons, e as setas onduladas são as transições não-radioativas. Fonte: SKOOG et al., 1996.\nO fator que determina se ocorrerá reação do Tipo I ou Tipo II é a competição entre o substrato e o oxigênio molecular pelo estado excitado do sensibilizador. Em sistemas atualmente usados clinicamente, a porcentagem de ocorrência do mecanismo tipo I é de aproximadamente 10% enquanto a ocorrência do mecanismo tipo II é de até 90 %. Este parâmetro pode variar, dependendo, entretanto, das características do sensibilizador usado e da natureza do alvo da sua ação.\nAtualmente alguns grupos (MARTINS et al., 2004; NICHOLSON et al., 2003;\nDE ROSA & CRUTCHLEY, 2002) trabalham nos estudos envolvendo a absorção de um segundo fóton a partir do estado excitado triplete (T1), gerando estados tripletes\nde maior energia (Tn) que resultam na degradação do fotossensibilizador em outras\nespécies radicalares, independente da presença de oxigênio.\nA eficácia de TFD é atribuída a reações bimoleculares entre os estados excitados S1 e T1 do sensibilizador e as moléculas alvo ou de oxigênio formando seu\noutro reagente é maior. Isso diminui a probabilidade de perda de energia de excitação sem começar a reação.\nA TFD poderá ser aplicada clinicamente também em várias outras áreas como na dermatologia, na oftalmologia (tratamento de degenerações maculares) e na imunologia (terapia de doenças autoimunes), entre outros.\nAtualmente, a TFD é indicada no tratamento de lesões pré-cancerosas (queratose actínica, por exemplo), câncer de pele tipo não-melanoma e doenças de pele não cancerosas, como a psoríase (BAGNATO et al., 2005; BROWN; BROWN;\nWALKER, 2004; DE ROSA; BENTLEY, 2000; IBBOTSON et al., 2004; MCGILLIS;\nFEIN, 2004; ZEITOUNI; OSEROFF; SHIEH, 2003).\nA TFD apresenta várias vantagens onde se inclui o tratamento simultâneo de tumores múltiplos, boa aceitabilidade pelo paciente, tempo de cura relativamente curto e bons resultados estéticos. Seu custo também é considerado efetivo e pode ser útil em pacientes que recusam ou que não podem se submeter às cirurgias (ZEITOUNI; OSEROFF; SHIEH, 2003).\nO uso da TFD para o tratamento de melanoma ainda não foi substancialmente pesquisado em nenhum estudo, em parte devido à dificuldade em se alcançar boa penetração da luz em lesões pigmentadas. Outro fator seria a natureza agressiva da doença (BROWN; BROWN; WALKER, 2004).\nFigura 10: Exemplo de um carcinoma tratado com TFD no Brasil. Aqui temos o aspecto inicial da lesão; logo após a TFD; 8 dias após a TFD e 70 dias após o tratamento.\nFonte: Dados do Prof. J. P. Tardivo (Faculdade de Medicina da Fundação do ABC).\nNa TFD tópica podem ser utilizadas diversas fontes de luz (Figura 11), tais como, laser e fonte de luz não convergente (BROWN; BROWN; WALKER, 2004; DE ROSA; BENTLEY, 2000; IBBOTSON et al., 2004). A fonte de luz utilizada deve exibir\num espectro de característica adequada, que coincida com o comprimento de onda de máxima absorção do fotossensibilizador aplicado (DE ROSA; BENTLEY, 2000). Fotossensibilizadores com bandas de absorção acima de 600 nm são, normalmente, alvos para uso na TFD. Os comprimentos de onda maiores penetram mais profundamente o tecido (IBBOTSON et al., 2004) e os de menores comprimentos de\nFigura 11: Dispositivo LED desenvolvido no Brasil que permite a iluminação de grandes áreas com intensidades de luz usuais de 150 mW/cm2.\nFonte: BAGNATO et al., 2004.\nDOUGHERTY (1989) foi o primeiro a reportar o uso clínico da TFD com o fotossensibilizador derivado da hematoporfirina (HpD) para o tratamento de diversos tumores, incluindo o câncer de pele. A desvantagem da utilização deste fotossensibilizador é o longo período necessário para a fotossensibilização da pele e sua baixa absorção na região do comprimento de onda vermelho, onde a penetração da luz é favorecida (LOPEZ et al., 2004).\n1.3.3. Os fotossensibilizadores\nA TFD consiste na administração de um fotossensibilizador ou seu precursor por diferentes vias (tópica, oral, intravascular, ou injeção local intra-tumoral). Uma grande vantagem da TFD é que separadamente, nem o fotossensibilizador nem a luz visível produzem efeitos deletérios para o paciente e funcionam somente quando atuam juntos na região do corpo a ser tratada, evitando, assim os efeitos colaterais graves para organismo.\nespécies reativas de oxigênio, em que o oxigênio singlete é a principal espécie responsável pela citotoxicidade (GIBSON et al., 1999).\nGeralmente a regressão de um tumor por tratamento em TFD apresenta algumas etapas comuns, tais como:\n• necrose massiva do tumor após 72h do tratamento; • formação de ferida na região do tumor após 3 a 4 dias;\n• desaparecimento da ferida e total regressão do tumor após 13 dias, com\ncicatrização da pele e crescimento de pelos após 20 dias (Figura 10).\nOs agentes fotossensibilizantes são compostos que absorvem energia da luz visível em comprimento de onda específico. Tais fotossensibilizantes são capazes de utilizar essa energia para induzir reações em outras moléculas, como o oxigênio molecular intracelular. A TFD é realizada mediante a presença de três componentes básicos: (i) o agente fotossensibilizante, (ii) o oxigênio molecular e, (iii) a luz (CASTANO; DEMIDOVA; HAMBLIN; 2005; SHARMAN; VAN LIER; ALLEN, 2004).\nPara que a TFD seja considerada ideal o fotossensibilizador utilizado não deve ser tóxico nas doses clínicas utilizadas e deve se concentrar principalmente em tecidos malignos do que em tecidos normais, promovendo uma alta taxa de concentração tumor/tecido normal (BAGNATO et al., 2004).\nA utilização tópica do fotossensibilizador permite altas concentrações no tecido local em comparação a outras vias, sendo que o fotossensibilizador não é detectado no plasma. Seu custo é menor que os outros métodos de administração e possui menos reações adversas sistêmicas (WONG et al., 2003).\nA seletividade dos fotossensibilizadores parece ser decorrente do aumentado metabolismo apresentado pelas células neoplásicas, que levariam, deste modo, ao maior acúmulo do fotossensibilizador quando comparado às quantidades acumuladas por células normais. Estas células neoplásicas apresentam um menor\nclearance do que as células normais, favorecendo, portanto, o acúmulo do\nfotossensibilizador (ZENZEN e ZANKL, 2004). Muitos destes, por sua vez, apresentam alta afinidade por lipoproteínas de baixa densidade (LDL).\nAs células tumorais apresentam maior quantidade de receptores para as LDL quando comparadas às células normais. Em função disso observa-se maior difusão destes agentes para o interior das células tumorais, por endocitose (PENG et al.,\n1990; REDDI, 1993). A permeabilidade das veias tumorais é aumentada, permitindo assim maior fluxo de nutrientes e de agentes fotossensibilizantes para dentro do tumor (KRAMMER, 2001).\nVários outros fatores contribuem para uma maior retenção do fotossensibilizador. Entre estes poderíamos ressaltar a baixa solubilidade e a deficiente drenagem linfática nos tecidos tumorais (HENDERSON & DOUGHERT, 1992).\nAs protoporfirinas, devido ao seu uso há mais de quinze décadas, fazem parte da classe de fotossensibilizadores mais estudada e empregada na TFD. Têm boa aceitabilidade devido a apresentarem toxicidade mínima quando na ausência de luz e poucas interações com outros fármacos. Apesar de apresentar como aspecto negativo o fato de sensibilizar a pele por prolongado período de tempo, o que pode levar o paciente a riscos de fototoxicidade durante o tratamento, tais fármacos são muito empregados em tratamentos oncológicos combinados (NOWIS et al., 2005).\nPara se contornar estes aspectos negativos das protoporfirinas o uso de pró-fármacos é uma possibilidade em amplo desenvolvimento, pois, estes exibem a vantagem de levar à formação do fotossensibilizadores apenas in situ. Poderíamos\n1.4. O ácido 5-aminolevulínico (5-ALA)\nO acúmulo endógeno de protoporfirina IX (PpIX), um fotossensibilizador endógeno, induzido pela administração tópica ou sistêmica de 5-ALA, tem sido abordado e usado atualmente em TFD.\nTal abordagem terapêutica é uma promissora opção para terapias variadas, em que poderíamos citar o tratamento de várias doenças, incluindo lesões tumorais e pré-tumorais, desordens vasculares proliferativas. A organização FDA (Food and Drug Administration) dos Estados Unidos e Organismos da Europa aprovaram recentemente a aplicação para tratamento de queratose actínica e carcinomas de células basais (ZEITOUINI et al., 2003).\nSabe-se que a PpIX pode ser sintetizada em todas as células que possuem mitocôndria e que é formada com rigoroso controle endógeno, ocorrendo em praticamente em todas as células nucleadas. A PpIX apresenta uma maior afinidade e propensão em se acumular em tecidos com alta atividade celular. A acumulação do fotossensibilizador em tecidos doentes não é específica para doenças neoplásicas ou pré-neoplásicas.\nO 5-ALA é um pró-fármaco, precursor metabólico de porfirinas endógenas, que pode ser convertido, através de rota biossintética do heme em PpIX. A PpIX é um eficiente agente fotossensibilizador endógeno, que é ativado pela luz e é altamente fluorescente.\nKennedy et al. (1990) introduziram método alternativo com o uso do ácido\n5-ALA tópico, o que possibilitou uma maior margem de segurança dos efeitos fototóxicos no local de aplicação, diferentemente dos derivados porfirínicos veiculados sistemicamente. Estes causam uma fotossensibilidade mais ampla e difusa por um período mínimo de quatro semanas.\nO uso tópico do 5-ALA apresenta um perfil muito favorável em termos de propriedades terapêuticas, possibilitando a restrição dos efeitos fototóxicos gerados na área da aplicação (MORTON et al., 2002; KENNEDY et al. 1992; KENNEDY et al.\nO nome químico para o 5-ALA na forma de cloridrato (fármaco empregado neste estudo) é hidrocloreto do ácido 5-amino-4-oxopentanóico. Apresenta massa molar de 167.59 Da. A fórmula estrutural do 5-ALA está representada na Figura 12.\nFigura 12: Estrutura química do ácido 5-aminolevulínico (5-ALA).\nO fármaco de nome comercial Levulan® Kerastick tem como princípio ativo o\nácido 5-aminolevulínico, e o fabricante é o DUSA Pharmaceuticals.\nO 5-ALA na forma de cloridrato, 5-ALA.HCl, é um sólido branco, fotossensível, higroscópico, bastante solúvel em água e ligeiramente em etanol. Quando usado como solução tópica a 20% em uma mistura de 354 mg de 5-ALA.HCl, 1,5 mL de etanol em água (48% v/v) e polietilenoglicol apresenta estabilidade limitada a 2 horas após a mistura.\nA síntese endógena do 5-ALA é normalmente controlada com rigor pela enzima ALA-sintetase, provavelmente através do nível intracelular de Heme. Quando se administra exogenamente o 5-ALA para a célula, subverte-se esse controle resultando no acúmulo da PpIX, que é convertida em heme pela ferroquelatase pela adição de ferro ao núcleo da PpIX. Uma vez que essa conversão é um processo lento (CORREA et al., 2003), níveis elevados de PpIX são encontrados no tecido. O\nacúmulo intracelular de PpIX deve ser alcançado no tecido para produzir um efeito fotodinâmico. Este necessita da exposição à luz (FUKUDA, 1993).\nFigura 13: Ciclo do Heme. Enzimas ALA Sintetase (A); ALA desidratase (B); porfobilinogênio deaminase (C); uroporfirinogênio co-sintase (D); uroporfirinogênio descarboxilase (E); coproporfirinogênio oxidase (F); protoporfirogênio oxidase (G) e ferroquelatase.\nUm mecanismo de feedback negativo controla a síntese de 5-ALA quando da presença de heme livre (KAPPAS et al., 1989). Um artifício que pode ser empregado\nAo se comparar a estrutura do 5-ALA com as das porfirinas (conforme se pode observar na Figura 14), verifica-se que este apresenta uma estrutura molecular bem simples, pequena, hidrossolúvel.\nFigura 14: Fórmula Estrutural da Protoporfirina IX e 5-ALA, respectivamente.\nPeng e colaboradores (1995) observaram que o 5-ALA tem a propriedade de penetrar seletivamente em estrato córneo neoplásico, enquanto que em estrato córneo de tecido normal isto praticamente não ocorre.\nHá várias vantagens na fotossensibilização por PpIX induzida pelo 5-ALA. Uma delas é que o organismo elimina PpIX e outros compostos metabólicos produzidos após administração tópica de 5-ALA rapidamente, o que limita o risco da fotossensibilidade de 1 a 2 dias (WEBBER et al., 1997).\nDe Felício e colaboradores (2008) fizeram um amplo estudo do uso do 5-ALA para TFD em câncer de pele não melanoma e observaram várias vantagens tais como: minimamente invasiva e alternativa em pacientes com dificuldades, impossibilidade, alto risco ou recusa do procedimento cirúrgico; possibilidade de tratamento ambulatorial, de lesões múltiplas em sessão única ou em sítios de pobre cicatrização, de reaplicações ou do emprego posterior de outros procedimentos terapêuticos, e notadamente a superioridade dos resultados estéticos.\nA eficiência da TFD-ALA tópica está relacionada com a baixa habilidade do 5-ALA em penetrar na pele. Este é um dos grandes problemas na utilização tópica do 5-ALA, uma molécula hidrofílica que apresenta carga. Tais características limitam sua permeação no estrato córneo que depende de vários parâmetros, como, por exemplo: sua concentração na pele, permeabilidade do fármaco e taxa de conversão do 5-ALA em PpIX (SVAASAND et al., 1996).\nO caráter hidrofílico/hidrofóbico de um fotossensiblizador influi diretamente no seu estado de agregação e também no seu transporte e incorporação pelas células. Tem sido observado que quanto mais hidrofóbico for o fotossensibilizador, maior sua incorporação pelas células tumorais e melhor o efeito da TFD (BONNET, 1995).\n1.5. Permeação de fármacos\nO transporte de fármacos pela pele é complexo, pois, além da estrutura e propriedades distintas que esta apresenta, muitos outros fatores influenciam a penetração cutânea dos fármacos. Dentre estes fatores podemos citar: 1) a molécula penetrante e suas propriedades físico-químicas; 2) o sistema de liberação do fármaco e 3) a combinação de pele, fármaco e sistema de liberação (RANADE, 1991).\nA permeação cutânea de fármacos pode ser descrita em três fases principais: 1) liberação da molécula do fármaco da formulação para a superfície da pele; 2) partilha e difusão da molécula pela pele; e 3) distribuição da molécula no local de ação pela circulação sistêmica. Qualquer um dos dois primeiros passos é limitante para a taxa de permeação. Modificações nas propriedades do fármaco (coeficiente de partilha, solubilidade, etc) e/ou da formulação ou sistema de liberação podem facilitar a penetração de ativos de interesse.\n1.6. Anatomia e Histologia da pele\nFigura 15: Representação esquemática das camadas da pele.\nO EC representa, ao mesmo tempo, uma barreira protetora natural contra a penetração de compostos exógenos tóxicos, ataques físicos, excessiva perda de água ou de outro componente natural do corpo (CHIEN, 1992) e o principal órgão de comunicação com o exterior.\nEsta barreira biológica é composta de três camadas principais: (i) epiderme, (ii) derme e (iii) hipoderme, que apresentam como principais características básicas:\ni. epiderme: é a camada mais externa, porção epitelial de origem ectodérmica, avascular, composta de epitélio pavimentoso estratificado. Local de renovação celular contínua. As células epiteliais são mantidas juntas principalmente por pontes interligadas que são responsáveis pela integridade da pele (JACOB e FRANCONE, 1970). É essencialmente dividida em duas partes: a parte mais interna, que corresponde à epiderme viável (150 µm) (HOUK; GUY, 1988) e o\nestrato córneo, que constitui a parte mais externa. A epiderme viável é subdividida em quatro subcamadas: estrato lúcido, estrato granuloso, estrato espinoso e estrato germinativo, sendo responsável pela multiplicação e diferenciação de células, que dão origem às células do estrato córneo. O estrato córneo é a camada mais superficial da epiderme (5 a 8 µm, chegando\nexcepcionalmente a 20 µm). Mais de 90% de suas células são corneócitos\ncom queratina. Nos mamíferos esses corneócitos estão distribuídos em aproximadamente quinze camadas (CEVC, 2004) e encontram-se associados com numerosos desmossomas. Entre os corneócitos há uma grande quantidade de material lipídico, altamente organizado, que funciona como um “cimento” extracelular, vedando os espaços entre as células. Esses lipídeos compreendem ácidos ceramidas (41%), ácidos graxos (9%), colesterol (27%), ésteres de colesterol (10%) e pequena quantidade de colesterol sulfato (2%) (SUHONEN; BOUWSTRA; URTTI, 1999). A qualidade, a quantidade e a cristalinidade dos lipídeos do estrato córneo determinam a perfeição da barreira da pele (CEVC, 2004). A camada córnea constitui a principal barreira para a passagem de solutos (ABRAHAM et al., 1995) e, juntamente com a matriz lipídica, possui\ngrande importância nos estudos de permeabilidade da pele. O limite entre a epiderme e a derme não é regular, apresentando saliências e reentrâncias das duas camadas, que imbricam e se ajustam entre si.\nii. derme: uma porção conjuntiva de origem mesodérmica, é formada por uma rede de fibras colágenas, elásticas, reticulina e da substância fundamental, que dá suporte aos vasos sanguíneos, linfáticos e às células nervosas. Os apêndices cutâneos (os folículos pilosos, as glândulas sebáceas e as glândulas sudoríparas) originam-se na derme e estendem-se até a superfície da pele. Na derme estão presentes também os fibroblastos (células responsáveis pela produção da substância fundamental e pelas fibras) e as células de defesa. O transporte de solutos nesta área é rápido, podendo atingir a circulação sistêmica, através dos vasos sanguíneos. A camada mais profunda é formada por muitas estruturas com características elásticas (denso estroma fibroelástico de tecido conjuntivo), grandes quantidades de vasos sangüíneos (redes vasculares) e fibras nervosas.\nproteção mecânica, de conservação da temperatura corporal e de reserva de calorias. Não possui um papel na penetração cutânea porque se situa abaixo do sistema vascular, que está localizado na derme (SINGH & SINGH, 1999).\nComo anteriormente mencionado, a epiderme é composta de cinco camadas de tipos de células: estrato córneo (EC), estrato lúcido, estrato granuloso, estrato espinoso e estrato basal.\nA epiderme pode ser dividida em duas partes principais:\n• Estrato germinativo, que é a parte mais interna, onde são produzidos os\ncorneócitos (células queratinizadas), que se proliferam, sofrem alterações e dão origem às células mortas do estrato córneo. À medida que essas células migram do estrato germinativo para a superfície da pele seu conteúdo de água vai diminuindo, tornando-se uma camada seca;\n• Estrato córneo, também chamado “camada de descamação”, pois as\nsuas células queratinizadas vão se destacando do epitélio, sendo substituídas por outras. É uma camada constituída de células mortas ou em vias de degenerescência, muito ricas em queratina. É a camada mais externa da pele e de grande importância para os estudos de penetração cutânea, constituindo a principal barreira para a passagem de fármacos (ABRAHAM et al., 1994). O estrato córneo apresenta uma\nestrutura bifásica de lipídeo-proteína e tem aproximadamente 10 a 20\nµm de espessura (PIROT et al., 1997). A parte protéica dessa camada\né formada por queratina, a qual é composta de células anucleadas (corneócitos) dispersas em uma matriz lipídica (parte lipídica). Esta matriz é constituída por lipídios como as ceramidas (18%), triglicérides (25%) ácidos graxos livres (19%) e esteróis (14%) (SZNITOWSKA et al., 2002), os quais formam uma matriz contínua ao redor dos\nestrato córneo é normalmente responsável pela função de “barreira da pele” limitando a difusão percutânea de fármacos através dela.\n1.6.1. Estrato Córneo: Uma Barreira Biológica à Permeabilidade de Fármacos\nNo desenvolvimento de formulações tópicas e transdérmicas é importante que se conheça a estrutura da pele e o modo como as substâncias podem penetrá-la. De maneira geral, a absorção de fármacos através da pele ocorre passivamente. A absorção trans-epidérmica envolve a difusão do fármaco através do EC e camadas de células da epiderme viável até as camadas superiores da derme, atingindo a micro-circulação (SCHEUPLEIN; BLANK, 1971).\nA pele constitui uma barreira à penetração de fármacos, devido à estrutura da epiderme. Para que um fármaco seja absorvido através da pele, deve romper a barreira imposta pelo estrato córneo e também às camadas subseqüentes da epiderme para atingir a derme, podendo eventualmente passar para a corrente sanguínea e ter uma ação sistêmica.\nSegundo Ansel et al. (1999) e Cleary (1982), a permeação de solutos através\nde um fármaco através do estrato córneo pode ocorrer por difusão passiva através de três mecanismos sugeridos:\npermeação transcelular (através das células): os solutos passam diretamente através das células córneas e da matriz lipídica intercelular;\npermeação intercelular (entre as células): os solutos difundem-se ao redor das células córneas de uma maneira tortuosa, permanecendo constantemente dentro da matriz lipídica (ABRAHAM et al., 1995);\npermeação transfolicular (através dos folículos pilosos) e pelos ductos sudoríparos. Várias investigações têm estabelecido que a rota transfolicular é bastante significativa como via de penetração para muitos compostos (GUPCHUP; ZATZ, 1997). É uma rota paralela na qual o soluto pode ser absorvido através dos folículos pilosos, glândulas sebáceas e sudoríparas (MOSER et al., 2001; KITSON & THEWALT, 2000; ANSEL et al., 2000).\nFigura 16: Representação esquemática dos mecanismos de penetração de substâncias através da pele humana (adaptado de BARRY, 2002).\nPara um fármaco ser absorvido por difusão passiva através da pele, é necessário ter adequada lipofilicidade e também um peso molecular relativamente baixo (BROWN, 2006). É muito difícil a permeação de moléculas com tamanho superior a 200-350 Daltons na pele intacta (CEVC et al., 1996), podendo-se dizer\nque o tamanho máximo a ser considerado é de 400 Da. A maioria de pequenas moléculas solúveis em água, não eletrólitos, difundem até a circulação sistêmica até mil vezes mais rápido quando a camada córnea está ausente. Assim, para maximizar o fluxo de substâncias, tentamos reduzir este obstáculo, embora algumas vezes a via folicular possa ser importante (BARRY, 2001).\nDo ponto de vista da penetração, a pele age como uma barreira mecânica nano-porosa, perfurada por um grande número de canais ou caminhos quase semi-circulares. A maioria das publicações estima que esses “poros” hidrofílicos possuam um diâmetro médio que varia entre 0,4 a 36,0 nm. Como a maioria das moléculas passíveis de permear atravessa a pele por esses “microcanais” intercelulares, muitas técnicas têm sido propostas para melhorar esse percurso e transpor a arquitetura molecular representada pelos corneócitos e pelas múltiplas camadas de lipídeos intercelulares (BARRY, 2001).\nAlguns fatores devem ser considerados no estudo da penetração cutânea de fármacos segundo ALENCASTRE (2001) e ANSEL et al. (1999):\nA concentração do fármaco: de modo geral, a quantidade absorvida por via percutânea por unidade de área de superfície por intervalo de tempo aumenta na medida em que a concentração do fármaco aumenta;\nUma quantidade maior do fármaco é absorvida pela via percutânea quando a substância é aplicada em uma grande área;\nA hidrossolubilidade do fármaco determina a concentração apresentada no local de absorção, e o coeficiente de partição tem forte influência na velocidade de transporte através dos locais de absorção;\nA absorção parece ser aumentada por veículos que se espalham facilmente sobre a superfície da pele, misturam-se rapidamente com o sebo, colocando a substância ativa em contato com as células do tecido;\nOs veículos oleosos e/ou os curativos oclusivos agem como barreira à umidade, impedindo a passagem do suor da pele, o que geralmente resulta em aumento da hidratação cutânea;\nO tempo e a intensidade de fricção na aplicação tópica têm influência sobre a quantidade absorvida: quanto maior o período e a intensidade, maior a absorção;\nO local de aplicação pode ter um efeito sobre o grau de absorção;\nGeralmente, quanto maior o período de contato com a pele, maior será a absorção. Entretanto, alterações da hidratação ou a saturação da pele com a substância ativa podem impedir o aumento significativo da absorção com o tempo;\nDoses múltiplas de aplicação podem aumentar a biodisponibilidade da substância ativa.\n1.7. Estudos in vitro e in vivo de liberação e permeação cutânea\nA absorção de fármacos através da pele pode ser avaliada utilizando-se metodologias in vitro e in vivo. Os estudos in vitro de liberação e permeação\ncutânea, são muito explorados e têm muita importância na otimização da escolha mais adequada de uma formulação farmacotécnica a serem empregadas em uma investigação de liberação dérmica.\nOs modelos experimentais in vitro apresentam vantagens em relação aos in vivo, por serem mais simples e rápidos. Para avaliar a permeação e a retenção de\ncompostos de células de difusão, onde uma membrana (pele inteira ou estrato córneo) separa as fases doadora e receptora.\nAlguns fatores devem ser considerados nos estudos in vitro: a preparação da\npele, a escolha da fase receptora e do sistema de agitação adequado, e a manutenção da temperatura fisiológica. A pele humana é preferível nos estudos de absorção e metabolismo de fármacos. Entretanto, seu uso é limitado devido à dificuldade de aquisição e variabilidade das amostras de pele. Desta maneira, faz-se necessário o uso de pele de animais para estudos repetitivos ou mecanísticos que requerem grandes quantidades de pele (BARRY, 1983; LEVEQUE et al., 2003,\nPERSHING; CORLETT; JORGENSEN, 1993).\nSCHMOOK et al. (2001) realizaram um estudo comparativo entre (i) pele\nhumana, (ii) um equivalente de pele humana viva (Graftskin TM LSETM), (iii) epiderme humana reconstituída (SkinethicTM HRE), (iv) pele de rato, e (v) pele de porco, para estudos in vitro de absorção percutânea. A pele humana é o modelo ideal para esses\nestudos, contudo não é acessível para a maioria dos pesquisadores. A princípio, modelos reconstituídos de pele poderiam ser uma alternativa promissora, no entanto, esses autores mostraram que produtos comercializados de derme e epiderme reconstituída têm as propriedades “barreira” mais fracas, quando comparada com pele humana fresca ou congelada. Ao final dos estudos observou-se que a pele de porco foi a que obteve menor disparidade comparada com a pele humana, demonstrando assim, uma opção para estudos em desenvolvimentos de formulações de uso tópico e transdérmico, quando não se tem pele humana disponível.\n1.8. Promotores de absorção cutânea\nOs promotores de absorção são substâncias químicas que se utiliza como excipientes, incorporando-os aos sistemas transdérmicos e tópicos com a finalidade de que estes ajam como alternadores da permeabilidade cutânea de maneira reversível e segura (WALTERS, 1989). Podem permear ou interagir com constituintes do estrato córneo diminuindo, assim, a resistência da pele à difusão do fármaco (WALTERS, 1989; BARRY, 1987) ou, ainda, podem aumentar o fluxo do fármaco devido o incremento da atividade termodinâmica deste na formulação.\nquantidades de fármaco, inclusive os polares, o que não seria possível em outras condições (MARTINS, 2002)\nA literatura tem demonstrado que os promotores de absorção cutânea podem alterar a composição e/ou a organização lipídica e/ou protéica inter e intracelular do estrato córneo, diminuindo reversivelmente a sua função barreira e/ou aumentando o coeficiente de partilha (MATSUDA, ARIMA, 1999).\nA ação dos promotores para promover a permeação de fármacos através da pele é acarretar alteração reversível da bicamada lipídica e, assim, da sua função barreira. Deve interagir nas cabeças polares lipídicas da membrana da bicamada e nas cadeias hidrofóbicas. Tais interações resultam no aumento da fluidez da membrana (SUHONEN et al., 1999).\nEmbora muitos promotores de absorção químicos tenham sido desenvolvidos para pele humana ou animal, nenhum deles se mostrou ideal. Algumas das propriedades desejáveis para promotores de absorção são (BARRY, 1983):\nDevem ser não-tóxicos, não-irritantes e hipoalergênicos;\nDevem agir rapidamente e que a atividade e a duração do efeito sejam previsíveis e reprodutíveis;\nNão devem ser farmacologicamente ativos para o organismo, ou seja, não devem se ligar a sítios receptores;\nDevem atuar unidirecionalmente, ou seja, devem permitir a entrada dos agentes terapêuticos no organismo enquanto previnem a perda de substâncias endógenas;\nQuando removidos da pele as propriedades de barreira devem ser restituídas rápida e completamente;\nDevem ser apropriados para formulação em diversas preparações tópicas e, portanto, devem ser compatíveis com os excipientes e os fármacos;\nDevem ser cosmeticamente aceitáveis.\nEconomicamente acessível e com boas propriedades solventes (HADGRAFT, 1999; SINHA, KAUR, 2000).\nDescarregar agora (PDF - 73 páginas - 1.55MB)\ntemas relacionados : D-Limoneno ácido 5-aminolevulínico Estudos de sistemas nanocarreadores para o ácido 5-aminolevulínico (5-ALA) e seu... Estudo de sistemas nanocarreadores para o ácido 5-aminolevulínico com aplicação na terapia fotodinâmica\nOutline : O ácido 5-aminolevulínico (5-ALA) Óleos essenciais e terpenos como promotores de absorção cutânea\nAnálise dos fatores que influenciam a escolha do transporte em processos de comp...\nO objetivo principal deste trabalho é apresentar como a logística está contida dentro de um processo de compra de material, apresentando a importância do gerenciamento e escolha de\nO objetivo da pesquisa, estruturada a partir desse referencial, foi o seguinte: conhecer os fatores que influenciam as decisões de estrutura de capital nas MPEs, mais\nBiocompatibilidade do ácido 5-aminolevulínico nanoveiculado e sua eficácia em me...\nPara isso, os ensaios foram conduzidos em três etapas/capítulos: (i) ensaio de cinética de incorporação de pró-fármaco em células 4T1, avaliação dos mecanismos anti-\nEstudo da estrutura das argamassas de revestimento e sua influência nas propried...\nPaes (2004) no estudo do transporte de água em argamassas no estado fresco concluiu que a porosimetria por intrusão de mercúrio e por dessorção de vapor são técnicas\nA terapia fotodinâmica com ácido 5-aminolevulínico como modalidade de tratamento...\nLimites de aplicabilidade da determinação do ácido D-aminolevulínico urinário co...\nEstabilidade de emulsões de d-limoneno em quitosana modificada.\nInfluência do ácido oléico como promotor de absorção cutânea para o ácido 5-amin...\nLuz intensa pulsada e ácido 5 aminolevulínico no tratamento de queratoses actíni...\nNíveis de chumbo e atividade da desidratase do ácido d-aminolevulínico (d-ALAD)...\nEstudo de sistemas nanocarreadores para o ácido 5-aminolevulínico com aplicação...\nPromoção da Absorção Cutânea de Fármacos


notas bedéfilas: Desenhos autografados (7): Franco\nDesenhos autografados (7): Franco\nPorque hoje é Domingo, fica mais um desenho autografado desta vez da autoria de Filipe Teixeira, realizado em Novembro de 2006, aquando do 17º FIBDA. A personagem, Franco, caracteriza-se por ser “um tipo com uns cinquenta anos de ar bastante sereno habituado a uma rotina intensa” e é investigador da PJ, tendo surgido pela primeira vez na mini-série “C.A.O.S.” publicada pela KingpinComics. Confesso gostar bastante deste desenho e da história da personagem e imaginar o potencial que teria como actor principal numa bd policial com acção em Portugal. O tempo de elaboração deste desenho a marcador preto foi demorado e daí o agradecimento do autor no autógrafo, mas perante o resultado final bem posso dizer que valeu bem o tempo de espera!\nMarcadores desenhos autografados, Filipe Teixeira


Setor de Endemias de Ibiporã cria blog sobre a dengue\nIbiporã 25/11/2015 15h25\nObjetivo do “Ibiporã contra a Dengue” é informar população sobre a situação da doença e formas de controlar a proliferação do Aedes aegypti\nO combate à dengue é um compromisso de todos. Com o objetivo de informar a população sobre a situação da doença e formas de controlar a proliferação do Aedes aegypti , mosquito vetor além dengue, da febre chikungunya e Zika, a Administração Municipal, por meio do Setor de Endemias da Secretaria de Saúde, criou o blog “Ibiporã Contra a Dengue” (ibiporacontradengue.blogspot.com.br/). “Hoje a maioria da população está conectada à internet e o blog é uma ferramenta útil e acessível para se comunicar e difundir informação. A ideia é fazer pelo menos duas postagens por semana com informações sobre a doença, atualizar os casos no município e orientar os munícipes sobre como se proteger da dengue”, explica o criador do blog, o responsável pelo setor de endemias, Luiz Augusto Loredo.\nUm dos posts do blog, por exemplo, alerta para o alto índice de infestação do mosquito por toda a cidade. O último Levantamento Rápido de Infestação do Aedes aegypti (LIRAa), realizado entre 9 e 13 de novembro, aponta um índice de infestação de 5,4%. Ou seja, dos 23.723 imóveis existentes na cidade, há focos de dengue em 1.280. O índice de infestação preconizado pela Organização Mundial da Saúde (OMS) é de, no máximo, 1,0%. “O mais grave é que o levantamento apontou que 70% dos focos existentes estão no lixo e em recicláveis espalhados nas casas e empresas, nas ruas, terrenos baldios, nas margens das estradas. Se não ocorrer uma prevenção eficaz corrermos o risco de enfrentar uma nova epidemia em 2016, visto que, sob a influência do fenômeno “El Niño”, a previsão é de um verão ainda mais quente e chuvoso, condições ideais para a reprodução do mosquito”, alerta Loredo.\nSegundo o setor de Epidemiologia, até sexta-feira (20) Ibiporã contabilizava 1.826 notificações e 734 casos confirmados da doença, com uma morte ocorrida em abril. Todos os casos são autóctones, ou seja, contraídos no próprio município.\nDe acordo com o chefe do setor de Endemias, o governo municipal realiza ações contínuas de prevenção e combate à dengue, as quais estão sendo intensificadas devido ao tradicional aumento de casos nesta época do ano. “Os agentes de endemias estão fazendo o trabalho de remoção dos criadouros em 100% do território, além mutirões de limpeza, bloqueio de transmissão viral em residências com notificações, aplicação de inseticida, ações educativas em empresas, igrejas e escolas, capacitação de servidores, teste rápido, colocação de armadilhas, conhecidas como ovitrampas, em vários bairros, para evitar a proliferação de novos vetores da doença e planejamento de ações conjuntas com cidades da Região Metropolitana, como Cambé e Londrina”, pontua Loredo.\nAlém disso, acrescenta Loredo, a secretaria de Saúde já solicitou ao Departamento de Gestão de Pessoas a realização de um processo seletivo para contratação temporária de 15 agentes de endemias que atuarão no combate e erradicação do Aedes aegypti. Atualmente, 28 profissionais fazem o trabalho de campo. Também serão intensificadas as fiscalizações para autuar os munícipes que mantiverem criadouros que favoreçam a proliferação da dengue. “A aplicação da multa é feita somente após o morador receber uma orientação, com prazo para readequar as irregularidades. Quando isso não ocorre, é feita uma advertência formal e dado um novo prazo, que descumprido gera a multa, que pode variar de R$500 a R$5 mil, segundo o Código Sanitário do Paraná”, explica ele.\nContudo, de nada adianta o poder público se esforçar para combater o mosquito, se a população não exercer de fato a cidadania, cuidando do seu espaço e do entorno de sua casa. “Os dados do LIRAa apontam que se o lixo produzido pela população fosse descartado adequadamente, nosso índice de infestação poderia diminuir em 70%. Ou seja, uma epidemia de dengue pode ser evitada se as pessoas realmente se preocuparem com o destino do lixo que produzem”, expõe Loredo.\nA secretária de Saúde, Leilaine Furlaneto, reforça a necessidade da mobilização popular no combate à dengue. "Infelizmente, apenas as ações realizadas pelos agentes de endemias não são suficientes para combater a dengue. A população precisa colaborar. Após uma chuva, o morador deve tirar apenas 10 minutos para fiscalizar o seu quintal e eliminar os recipientes que acumulam água. Mesmo uma tampa de refrigerante esquecida pode se tornar um criadouro. Já em relação ao lixo, não adianta o morador querer se livrar do seu lixo jogando-o no terreno vizinho porque o mosquito tem uma autonomia de voo de 150 a 200 metros e pode contaminá-lo com a dengue”, alerta Leilaine.\nProteja-se contra a dengue:\n- Inspecione seu quintal e elimine água parada;\n- Vista roupas que protejam o corpo;\n- Aplique inseticida de uso doméstico dentro de casa, atrás dos móveis e em cantos escuros. (Fonte: Blog “Ibiporã contra a dengue”)


São Paulo 1 x 2 Corinthians - A freguesia continua\n820 visualizações 4 comentários Comunicar erro\n' O torcedor que compareceu ao Morumbi na tarde deste domingo finalmente viu um clássico com gols e bastante movimentação. O Corinthians saiu atrás logo no início do primeiro tempo, correu atrás do prejuízo e deixou o gramado comemorando a importante vitória sobre o São Paulo, por 2 a 1, pela 16ª rodada do Campeonato Paulista. Além disso, o Timão manteve o tabu de seis meses sem perder para o Tricolor na casa do adversário.\nJá classificado para as quartas de final do Paulistão, o São Paulo continua na liderança isolada, com 35 pontos, mas perdeu a chance de se desgarrar da Ponte Preta, que tem um ponto a menos. Já o Corinthians ficou ainda mais perto da classificação, subindo para a quarta colocação, com 29. O time alvinegro poderá carimbar o passaporte na próxima rodada.\nGol relâmpago e pintura de Danilo\nEnquanto muitos torcedores ainda entravam no Morumbi, o São Paulo abriu o placar, aos quatro minutos. Osvaldo desceu com velocidade pela direita e cruzou rasteiro. A bola encontrou Jadson, que tirou de Fábio Santos no domínio e bateu rasteiro, na saída de Cássio. Os jogadores do Corinthians ficaram reclamando de falta em cima do lateral Alessandro no lance que originou o gol tricolor.\nAtrás do marcador, o Timão passou a ter mais posse de bola e teve uma boa oportunidade com Emerson Sheik. O camisa 11 disparou em velocidade e arriscou de fora da área, pegando fraco e mandando nas mãos de Rogério Ceni. Romarinho pedia livre de marcação e reclamou com o companheiro. Paulinho cobrou falta com força e exigiu boa defesa do camisa 1 tricolor em dois tempos. Os alvinegros eram melhores, enquanto o São Paulo procurava jogar no contra-ataque.\nE foi em um lance assim que quase marcou o segundo. Jadson surpreendeu a defesa corintiana com um grande passe para Osvaldo. O atacante pegou de primeira e isolou a bola. A resposta veio logo depois. Emerson Sheik invadiu a área e passou rasteiro para Guerrero, que foi travado por Rogério Ceni na hora da finalização. Aos 26, Ganso deu grande passe para Jadson, que tentou devolver para o camisa 8. Paulinho, porém, chegou na frente e evitou a finalização do meia.\nApós receber passe de Osvaldo, Luis Fabiano bateu de primeira e exigiu boa defesa de Cássio. Paulo André aliviou o perigo para longe. Quando parecia que o primeiro tempo terminaria com a vitória parcial do São Paulo, o Corinthians conseguiu o empate aos 41 minutos. Danilo recebeu na esquerda, cortou Paulo Miranda e acertou um lindo chute no ângulo de Rogério Ceni, que nem pulou.\nTimão aproveita falha\nAssim como no primeiro tempo, o São Paulo voltou do intervalo pressionando e criou uma boa oportunidade aos dois minutos. Osvaldo recebeu dentro da área e bateu cruzado, fraco, facilitando a defesa de Cássio. O Tricolor tinha mais posse de bola e esboçava uma certa pressão, mas não conseguia chegar com perigo ao gol adversário. Já o Corinthians encontrava muita dificuldade para sair jogando e praticamente não passava do meio-campo.\nAos 11 minutos, Alexandre Pato ajeitou de cabeça para Paulinho e Rogério Ceni, na tentativa de tirar com o pé, furou. A bola, porém, ficou perto de seu corpo e conseguiu fazer a defesa antes que o volante completasse. A partida caiu um pouco de rendimento e a partida ficou bastante truncada no meio-campo. Aos 28, a bola foi mal afastada pela zaga corintiana e sobrou para Jadson, que pegou de primeira para fora.\nO Timão virou aos 32 minutos em um lance polêmico. Rafael Tolói recuou mal para Rogério Ceni, que acabou derrubando Alexandre Pato na tentativa de tirar. Os jogadores do São Paulo ficaram pedindo falta em cima do goleiro, dizendo que o atacante entrou de sola, mas o árbitro marcou pênalti. Pato bateu bem e apenas deslocou o camisa 1 adversário.\nNos minutos finais, o São Paulo partiu com tudo para cima do Corinthians, que procurava se defender e explorar bem os contra-ataques. Aos 46, Thiago Carleto soltou a bomba em cobrança de falta e Cássio defendeu com segurança. Logo depois, Jadson cruzou na cabeça de Wallyson, que desviou para boa intervenção do camisa 1.\nOs dois times voltam a campo apenas no próximo domingo, pela 17ª rodada do Paulistão. O São Paulo enfrenta o Botafogo, às 18h30, no Estádio Santa Cruz, enquanto o Corinthians recebe o São Bernardo, às 16 horas, no Pacaembú. Durante a semana, ambos terão pela frente jogos válidos pela Copa Libertadores.\n4º. 31/03/2013 às 22h43 por @ton1982\n"Além disso, o Timão manteve o tabu de seis meses sem perder para o Tricolor na casa do adversário." Seis meses? São seis anos, filhote!\n3º. 31/03/2013 às 19h26 por @samu.zlsp\nÁrbitro covarde, o SPFW não tem categoria e só conseguia parar o Corinthians na base do pontapé. Cisne deveria ter sido expulso.\n2º. 31/03/2013 às 19h13 por @edu.sp\nPATO x CISNE\nDeu no que deu... Só faltou peito ao árbitro pra expulsar o BAMBI.\n1º. 31/03/2013 às 18h08 por @maisloucoporti\nChupa bambi, fregays...


Técnico em informática é preso por crime de pedofilia praticado na internet :: Notícias de MT | Olhar Direto\nTécnico em informática é preso por crime de pedofilia praticado na internet\n10 Jun 2021 - 10:13\nUm técnico em informática foi preso na manhã desta quinta-feira (10), na cidade de Rondonópolis (216 km de Cuiabá), pelo crime de pedofilia praticado na internet. A ação foi feita em continuidade aos trabalhos da operação Luz na Infância 8, da Polícia Civil de Mato Grosso, por meio da Delegacia Especializada de Repressão a Crimes Informáticos (DRCI).\nSuspeito de matar ex-namorada a facadas é preso em rodoviária tentando ir para o Maranhão\nO suspeito de 22 anos foi autuado em flagrante pelo crime de adquirir, possuir ou armazenar, por qualquer meio, fotografia, vídeo ou outra forma de registro que contenha cena de sexo explícito ou pornográfica envolvendo criança ou adolescente, previsto no artigo 241-B, do Estatuto da Criança e do Adolescente (ECA).\nEm Mato Grosso, foram cumpridos na quarta-feira (09), quatro mandados de busca e apreensão domiciliar, sendo três na cidade de Rondonópolis e um em Nova Lacerda. Na ocasião, foram apreendidos equipamentos eletrônicos para verificação, não sendo identificado de imediato material de conteúdo pornográfico relacionado a exploração infanto-juvenil por meio da internet.\nCom base nos indícios, os policiais civis coordenados pelo delegado Fernando Fleury diligenciaram rapidamente e realizaram a prisão do suspeito que se trata de um jovem, técnico informática. Nos equipamentos apreendidos com o suspeito havia inúmeras imagens, fotografias, vídeos de crianças e adolescentes e arquivos relacionados à pedofilia.\nCidades - 17:38Mudança em regras de demarcação abre territórios indígenas ao interesse privado, dizem lideranças de MT