Multi-scale Analysis of Bacterial Growth Under Stress Treatments | Protocol (Translated to Spanish)\nAnálisis multiescala del crecimiento bacteriano bajo tratamientos de estrés\nEste protocolo permite una descripción del crecimiento bacteriano en condiciones de estrés en los niveles de población de una sola célula y célula.\nEl análisis de la capacidad bacteriana para crecer y sobrevivir en condiciones de estrés es esencial para una amplia gama de estudios de microbiología. Es relevante caracterizar la respuesta de las células bacterianas a tratamientos que inducen el estrés, como la exposición a antibióticos u otros compuestos antimicrobianos, irradiación, pH no fisiológico, temperatura o concentración de sal. Diferentes tratamientos de estrés pueden perturbar diferentes procesos celulares, incluyendo la división celular, replicación del ADN, síntesis de proteínas, integridad de la membrana, o regulación del ciclo celular. Estos efectos se asocian generalmente con fenotipos específicos a escala celular. Por lo tanto, comprender el alcance y la causalidad de las deficiencias de crecimiento o viabilidad inducidas por el estrés requiere un análisis cuidadoso de varios parámetros, tanto a nivel de una sola célula como a nivel de población. La estrategia experimental presentada aquí combina el monitoreo tradicional de la densidad óptica y los ensayos de chapado con técnicas de análisis de una sola célula, como la citometría de flujo y la imagen por microscopía en tiempo real en células vivas. Este marco multiescala permite una descripción del impacto de las condiciones de estrés en el destino de una población bacteriana.\nEl propósito general de este protocolo es analizar el comportamiento de las células bacterianas expuestas a tratamientos de estrés en la población y a nivel de una sola célula. Tradicionalmente, el crecimiento bacteriano y la viabilidad se abordan a nivel de población mediante el monitoreo de densidad óptica (OD600nm),que es un proxy de síntesis de masa celular bacteriana, o mediante ensayos de chapado para determinar la concentración de células viables en el cultivo (unidad formadora de colonias por mililitro, CFU/ml). En condiciones normales de crecimiento (sin tensión), las mediciones de OD600nm y CFU/ml están estrictamente correlacionadas porque el tiempo de duplicación bacteriana depende directamente del aumento de la masa celular1,2. Sin embargo, esta correlación a menudo se interrumpe en condiciones que afectan la síntesis de masa celular3, división celular4, o que desencadenan la lisis celular. Un ejemplo simple es proporcionado por tratamientos de estrés que inhiben la división celular, que resultan en la formación de células bacterianas filamentosas5,6. Las células filamentosas se alargan normalmente porque la síntesis de masa celular no se ve afectada, pero son incapaces de dividirse en células viables. En consecuencia, la densidad óptica de cultivo aumentará con el tiempo a un ritmo normal, pero no la concentración de células viables determinadapor mediante ensayos de chapado (CFU/ml). En este caso, como en muchos otros, las mediciones de densidad óptica y chapado son informativas, pero no proporcionan una comprensión completa del efecto observado inducido por el estrés. Estos ensayos de conjunto deben combinarse con técnicas de análisis de una sola célula para permitir una caracterización en profundidad de las deficiencias de crecimiento inducidas por el estrés.\nAquí, se describe un procedimiento que combina cuatro enfoques experimentales complementarios: (1) ensayos de chapado tradicionales y monitoreo de densidad óptica básica para monitorear la viabilidad celular y la síntesis de masa celular, respectivamente; (2) citometría de flujo para evaluar el tamaño de la célula y los parámetros de contenido de ADN en un gran número de células; (3) imágenes instantáneas de microscopía para analizar la morfología celular; y (4) imágenes de una sola célula de lapso de tiempo en cámaras microfluídicas para el examen de la dinámica temporal del destino celular. Este marco multiescala permite interpretar los efectos globales sobre el crecimiento celular y la viabilidad a la luz del comportamiento de las células individuales. Este procedimiento se puede aplicar para descifrar la respuesta de diversas especies bacterianas a prácticamente cualquier estrés de interés, incluido el crecimiento en condiciones particulares (es decir, medio de crecimiento, pH, temperatura, concentración de sal) o exposición a antibióticos u otros compuestos antimicrobianos.\n1. Cultivo celular, inducción del estrés y procedimiento de muestreo\nNOTA: Utilice cristalería de cultivo estéril, puntas de pipeta y medio de crecimiento filtrados a 0,22 m para evitar partículas de fondo. Aquí, los cultivos celulares se cultivan en medio definido rico en autofluorescencia baja (ver Tabla de Materiales)7,8.\nRayar la cepa bacteriana de interés de una culata de glicerol congelado en una placa de agarosa Deria-Broth (LB) (con antibiótico selectivo si es necesario) e incubar a 37oC durante la noche (17 h).\nNOTA: El ejemplo de experimento presentado aquí utiliza Escherichia coli MG1655 hupA-mCherry. Esta cepa produce la subunidad fluorescentemente etiquetada de la proteína asociada a los nucleoides de HU, permitiendo así la visualización por microscopía ligera del cromosoma en células vivas9.\nInocular 5 ml de medio con una sola colonia y crecer a 37oC con agitación a 140 rotación por minuto (rpm) durante la noche (17 h). Se deben utilizar frascos (50 ml) o tubos de ensayo de gran diámetro (2 cm) para garantizar una aireación satisfactoria del cultivo agitado.\nA la mañana siguiente medir la densidad óptica a 600 nm (OD600nm) y diluir el cultivo en un tubo de ensayo que contiene medio fresco a un OD600nm de 0.01. El volumen total del cultivo debe ajustarse en función del número de puntos de tiempo que se analizarán durante el experimento.\nCargue una muestra de 200 l del cultivo en una microplaca (0,2 ml por pozo de volumen de trabajo con un fondo transparente claro) y colóquela en un lector de placas automatizado (consulte Tabla de materiales)para la monitorización de600 nm de OD durante la incubación a 37 oC.\nIncubar el tubo de ensayo inoculado a 37 oC con agitación (140 rpm) a OD600 nm a 0,2, correspondiente a la fase exponencial completa en medio rico.\nNOTA: Es fundamental cultivar las células durante al menos 4 a 5 generaciones antes de lograr un crecimiento exponencial adecuado. El inóculo inicial utilizado en el paso 1.3 (OD600nm a 0,01) debe adaptarse en el caso de crecimiento en un medio más pobre (es decir, cuando la fase exponencial se alcanza por debajo de la DO 0,2), o si se desean más generaciones (por ejemplo, para estudios fisiológicos específicos o para tratamientos de estrés extendido).\nAOD 600nm a 0,2, tome las siguientes muestras de cultivo correspondientes al punto de tiempo t0 (células de crecimiento exponencial antes de la inducción de tensión): (1) Una muestra de 150 ml que se cargará inmediatamente en el aparato microfluídico para la toma de imágenes de microscopía de lapso de tiempo (ver sección 2); (2) Una muestra de 200 ml para el ensayo de dilución y chapado (ver sección 3); (3) Una muestra de 250 l que se va a poner en hielo para el análisis de citometría de flujo (sección 4); (4) Una muestra de 10 l que se depositará inmediatamente en una diapositiva montada en agarosa para obtener imágenes instantáneas de microscopía (ver sección 5).\nExponga el cultivo celular que queda en el tubo de ensayo al tratamiento de tensión específico que desea investigar e incubar a 37 oC con agitación (140 rpm).\nNOTA: El cultivo en el lector automatizado de placas para la monitorización de OD600nm también debe someterse al tratamiento de tensión.\nEn los momentos pertinentes después del tratamiento de tensión (t1, t2, t3, etc.), tome las siguientes muestras celulares del cultivo estresado: (1) Muestra de 200 L para el ensayo de dilución y chapado (ver sección 2); (2) Una muestra de 250 l para poner en hielo para el análisis de citometría de flujo (sección 3); (4) Una muestra de 10 l que se depositará inmediatamente en una diapositiva montada en agarosa para obtener imágenes instantáneas de microscopía (ver sección 4).\nNOTA: Cada tratamiento que induce el estrés tiene una eficiencia que depende de la dosis y el tiempo. Por lo tanto, podría ser necesario realizar pruebas preliminares para determinar la dosis y la duración del tratamiento que se utilizará para obtener resultados óptimos. Esto se puede hacer mediante la realización de monitoreo de OD utilizando un lector de placas automatizado (potencialmente asociado con ensayos de chapado) de un cultivo celular tratado con una gama de dosis y tiempos de exposición. En el experimento presentado aquí, el cultivo celular fue tratado con el antibiótico inhibidor de la división celular cephalexin (Ceph.) a 5 g/ml de concentración final durante 60 min. La cefalexina fue luego lavada peletizando las células en un tubo de 15 ml utilizando centrifugación (475 g, 5 min), retirando el sobrenadante, reemplazando el pellet celular en un volumen igual de medio fresco mediante pipeteo suave, y transfiriendo a un tubo limpio. Las células lavadas se incubaron a 37 oC con agitación (140 rpm) para permitir la recuperación. La muestra se tomó a t60 (60 min después de la adición de cefalexina correspondiente a la muestra 'cephalexin-60min-treated'), t120 (60 min después del lavado) y t180 (120 min después del lavado).\n2. Ensayo de chapado\nNOTA: El ensayo de chapado permite medir la concentración de células capaces de generar una CFU en las muestras de cultivo. Este procedimiento revela la velocidad a la que una célula se divide en dos células viables y permite detectar detenciones por división celular (por ejemplo, aumento del tiempo de generación bacteriana de la lisis celular).\nPreparar diluciones seriales de hasta 10-7 de los 200 ml de muestra de cultivo en medio fresco. Placa 100 l de la dilución adecuada en placas de agarosa LB no selectivas para obtener entre 3 y 300 colonias después de la incubación durante la noche a 37 oC.\nNOTA: La dilución en serie en medio fresco debe realizarse rápidamente para limitar las divisiones bacterianas. Alternativamente, los investigadores podrían considerar el uso de una solución salina sin una fuente de carbono para prevenir las divisiones celulares durante el proceso de dilución.\nAl día siguiente, cuente el número de colonias para determinar la concentración de células viables (CFU/ml) en cada muestra de cultivo. Trazar la CFU/ml en función del tiempo para cultivos celulares no tratados y tratados.\n3. Citometría de flujo\nNOTA: En la siguiente sección se describe la preparación de muestras de células para el análisis de citometría de flujo. Esta técnica de análisis revela la distribución del tamaño celular y el contenido de ADN para un gran número de células. Cuando sea posible, se recomienda procesar las muestras de citometría de flujo inmediatamente. Alternativamente, las muestras se pueden mantener en hielo (hasta 6 h) y analizarse simultáneamente al final del día, una vez que se han realizado imágenes de chapado y microscopía.\nDiluir los 250 l de la muestra de cultivo para obtener 250 ml a una concentración de 15.000 células/L (correspondiente a un ODde 600 nm a 0,06) en un medio fresco a 4 oC.\nNOTA: La incubación en hielo limitará el crecimiento y la modificación morfológica de las células. Alternativamente, el usuario podría considerar realizar la fijación de las células en 75% etanol, como se recomienda normalmente para la citometría de flujo10.\nPara la tinción de ADN, mezcle la muestra bacteriana con una solución de 10 g/ml de colorante fluorescente de ADN (relación 1:1) e incubar en la oscuridad durante 15 minutos antes de analizar la muestra.\nPase la muestra al citómetro de flujo con un caudal de 120.000 celdas/min. Adquiera la luz de fluorescencia de colorante fluorescente de ADN (FL-1) dispersada hacia adelante y de lado (SSC), así como la señal de fluorescencia de colorante fluorescente de ADN (FL-1) con los ajustes adecuados.\nTrazar los histogramas de densidad de células FSC y FL-1 para representar la distribución del tamaño de la célula y el contenido de ADN en la población celular.\n4. Imágenes por microscopía instantánea\nNOTA: En la siguiente parte se describe la preparación de diapositivas de microscopía y la adquisición de imágenes para el análisis de instantáneas de población. Este procedimiento proporcionará información sobre la morfología de las células (longitud celular, anchura, forma) y la organización intracelular del ADN nucleoide.\nPrecalentar la cámara del microscopio termostatizado a 37 oC para estabilizar la temperatura antes de iniciar las observaciones. Esta cámara permite la modulación de la temperatura de la óptica del microscopio y la etapa de la muestra durante los experimentos de lapso de tiempo.\nPrepare las correderas montadas en agarosa como se describe en Lesterlin y Dubarry7.\nRetire la película de plástico de la parte inferior del marco azul (consulte Tabla de materiales), dejando la película de plástico ahuecada en el otro lado. Pegue el marco azul en una diapositiva de cristal del microscopio.\nPipeta de 150 ol de solución media de agarosa derretida del 1% y verter dentro del compartimento azul del bastidor. Cubrir rápidamente con un cubreobjetos limpio para eliminar el exceso de líquido y esperar unos minutos a que la almohadilla de agarosa se solidifique a temperatura ambiente.\nCuando la muestra de celda esté lista, retire el cubreobjetos y la película de plástico del marco azul. Vierta 10 ml de muestra de celda en la almohadilla de agarosa e incline el deslizamiento de vidrio suavemente para extender la gota. Cuando todo el líquido se haya adsorbido, pegue un cubreobjetos limpio en el marco azul para sellar la muestra. La corredera de microscopía ya está lista para la microscopía.\nColoque la diapositiva en la etapa del microscopio y realice la adquisición de la imagen utilizando luz transmitida (con un objetivo de contraste de fase) y con excitación de fuente de luz en las longitudes de onda adecuadas (560 nm para mCherry).\nSeleccione campos de visión que contengan celdas aisladas para facilitar la detección automatizada de celdas durante el análisis de imágenes. Asegúrese de que se utilizan al menos 300 celdas para permitir un análisis estadístico sólido de la población celular.\n5. Imágenes microfluídicas de microscopía de lapso de tiempo\nNOTA: La siguiente parte explica la preparación de las placas microfluídicas (ver Tabla de Materiales),carga celular, programa de microfluídicos y adquisición de imágenes de lapso de tiempo. Este procedimiento de diagnóstico por imágenes revela el comportamiento de las células individuales en tiempo real.\nRetire la solución de conservación de la placa microfluídica y sustitúyala por un medio fresco precalentado a 37oC, como se describe en la guía del usuario del software microfluídico.\nSelle la placa microfluídica al sistema múltiple y haga clic en el botón Priming.\nColoque la placa microfluídica con el sistema múltiple en la etapa del microscopio y precaliente a 37 oC durante 2 h antes de iniciar la adquisición de la microscopía.\nNOTA: Este paso de precalentamiento es fundamental para evitar la dilatación de la cámara microfluídica, lo que alteraría el enfoque del microscopio durante el experimento de lapso de tiempo y comprometería la adquisición de imágenes.\nCierre la placa microfluídica. Sustituya el medio del pozo 8 por el de 150 ml de la muestra de cultivo y sustituya el medio del pozo 1 al 5 por el medio deseado con o sin el reactivo que induzca el estrés.\nSelle la placa microfluídica y colóquela en la etapa del microscopio.\nEn el software microfluídico (consulte Tabla de materiales)ejecute el procedimiento de carga de celdas. Compruebe que la carga de las células es satisfactoria mirando bajo el microscopio a la luz transmitida. Ejecute el procedimiento de carga de celdas por segunda vez si la densidad de celdas en la cámara es insuficiente.\nRealizar enfoque cuidadosamente en el modo de luz transmitida y seleccionar varios campos de visión que muestran bacterias aisladas. Es importante seleccionar campos que no están superpoblados para poder monitorear el crecimiento de células aisladas a lo largo del tiempo (se recomienda n.o 10 a 20 celdas por 100 m2). Esto también facilitará la detección de celdas durante el análisis de imágenes.\nEn el software microfluídico, haga clic en el botón Crear un protocolo. Programe la inyección del medio de crecimiento para equivalentes de tiempo de generación de 1 x 2 para permitir que las células se adapten (opcional). A continuación, programe la inyección del medio inductor de tensión durante 10 min a 2 psi, seguido de la inyección a 1 psi durante la duración deseada del tratamiento de estrés. Si tiene la intención de analizar la recuperación de las células después del estrés, programe la inyección de medio de crecimiento fresco para la duración deseada.\nNOTA: En el experimento presentado aquí, la cefalexina se inyectó durante 10 min a 2 psi, seguido de 50 min a 1 psi. Luego, se inyectó un nuevo medio de crecimiento a 2 psi durante 10 min, seguido de 3 h a 1 psi.\nRealice imágenes por microscopía en modo time-lapse con 1 fotograma cada 10 min utilizando contraste de fase en la luz transmitida y una fuente de luz de excitación de 560 nm para la señal mCherry si es necesario.\nNOTA: Es importante iniciar la adquisición microscópica de imágenes al mismo tiempo que el inicio del protocolo de inyección microfluídica.\nNOTA: En esta sección se describen brevemente los pasos clave para procesar y analizar imágenes de microscopía de instantáneas y de lapso de tiempo. La apertura y visualización de imágenes de microscopía se realiza con el código abierto ImageJ/Fiji (https://fiji.sc/)11. El análisis cuantitativo de imágenes se realiza utilizando el software de código abierto ImageJ/Fiji junto con el plugin gratuito MicrobeJ12 (https://microbej.com). Este protocolo utiliza la versión MicrobeJ 5.13I.\nAbra el software Fiji y el plugin MicrobeJ.\nPara el análisis de instantáneas, suelte todas las imágenes correspondientes a una diapositiva de microscopio (una muestra) en la barra de carga de MicrobeJ para concatenar imágenes y guardar el archivo de pilas de imágenes obtenido. Para los datos de lapso de tiempo, simplemente coloque la pila de imágenes en la barra de carga de MicrobeJ.\nEjecutar la detección automatizada de los contornos de las células en función de la segmentación de la imagen de contraste de fase y, si es relevante, de los nucleoides en función de la segmentación de la señal de fluorescencia de ADN manchado. Compruebe visualmente la precisión de la detección de celdas y utilice la herramienta de edición MicrobeJ para la corrección si es necesario. Guarde el archivo de resultados obtenido.\nNOTA: Los ajustes utilizados para la detección de células de E. coli se indican en la Tabla de materiales (consulte la columna Comentarios/Descripción de MicrobeJ). Para otras especies bacterianas (especialmente para bacterias que no son de forma de varilla), el usuario debe refinar la configuración antes de la detección (ver tutorial de MicrobeJ). Para las imágenes de lapso de tiempo, es posible que se prefiera ejecutar una detección semiautomática de las celdas mediante la herramienta de edición MicrobeJ para permitir centrarse en el destino de las celdas individuales (consulte el tutorial de MicrobeJ).\nHaga clic en el icono ResultJ para completar el análisis y obtener la ventana ResultJ. Desde ese punto se pueden generar muchos tipos diferentes de gráficos de salida. Trazar los histogramas normalizados de la forma/longitud de la celda y el número medio de nucleoides por celda.\nEl procedimiento descrito se utilizó para analizar el comportamiento de las células de Escherichia coli K12 durante la exposición transitoria a la cefalexina, un antibiótico que inhibe específicamente la división celular (Figura 1A)13. La cepa hupA-mCherry E. coli que produce la proteína HU etiquetada fluorescentemente asociada con el ADN cromosómico se utilizó para investigar la dinámica del cromosoma a lo largo de este tratamiento8,9. Las células hupA-mCherry E. coli que crecen exponencialmente se analizaron antes (t0) y 60 minutos después de la incubación con cefalexina (t60). Luego, se lavó el antibiótico y se analizó la recuperación de la población celular después de 1 h (t120) y 2 h (t180)(Figura 1B).\nFigura 1: Procedimiento para el análisis de la respuesta bacteriana a los tratamientos de estrés. (A) Esquema del método. (B) Dibujos animados que ilustran la morfología celular durante el crecimiento normal en medio rico y durante la exposición transitoria a la cefalexina (Ceph.), desde la adición a (t0) y después del lavado de cefalexina de (t60)a (t180). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nLa evolución paralela de la OD y la CFU/ml es un primer indicador que ayuda a entender el efecto de los tratamientos de estrés. Estos dos parámetros están estrictamente correlacionados durante el crecimiento no perturbado, pero a menudo están desacoplados y evolucionan independientemente bajo estrés. Cultivos celulares que crecen en presencia de cefalexina mostraron oD similar600nm aumenta como los cultivos sin tensión (Figura 2A), mostrando que el fármaco no afectó la síntesis de masa celular. Sin embargo, la concentración de células viables no aumentó cuando la cefalexina estaba presente debido a la inhibición estricta de la división celular(Figura 2B). Las células comenzaron a dividirse de nuevo cuando se extirpó la cefalexina y finalmente alcanzaron una concentración equivalente al cultivo sin tensión en (t180). Estos resultados reflejan el efecto bacteriostático de la cefalexina, que induce una inhibición totalmente reversible de la división celular. Diferentes tensiones darán lugar a diferentes desacoplamientos de las curvas OD y CFU/ml, dependiendo del efecto inducido (por ejemplo, modificación de la morfología celular como filamentación o abultamiento, muerte celular con o sin lisis). En la Figura 2Cse presenta una lista no exhaustiva de posibles resultados indicativos de diferentes efectos inducidos por el estrés.\nFigura 2: Monitoreo del crecimiento bacteriano de células no tratadas y tratadas con cefalexina a nivel de población. (A) Monitorización de la densidad óptica (OD600nm/mL). (B) Concentración de células viables (CFU/ml) dentro de cultivos no tratados y tratados con cefalexina-60min. Las barras de error indican la desviación estándar para un triplicado experimental. (C) Esquemas de posibles resultados y efectos de tensión asociados. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nEl análisis de una sola célula es esencial para interpretar con precisión la respuesta al estrés observada a nivel de población. La citometría de flujo permite el examen del tamaño celular y el contenido de ADN de varios miles de células14,15 (Figura 3). La exposición a la cefalexina provocó el aumento paralelo del tamaño celular y el contenido de ADN (t60). Cuando se eliminó la cefalexina, el tamaño de las células de población y el contenido de ADN disminuyeron gradualmente para llegar a ser similares a la población no testada en t180. Estos resultados muestran que la cefalexina no inhibió la replicación del ADN y provocó la formación de células filamentosas que contenían varios equivalentes cromosómicos. Estos filamentos se dividieron en células con tamaño celular normal y contenido de ADN cuando el fármaco fue lavado. Los resultados de la citometría de flujo serían muy diferentes para las tensiones que inhiben la síntesis de ADN, que conducen a la formación de células filamentosas que contienen sólo un cromosoma no replicante. En ese caso, el tamaño de las células aumentaría de manera similar, pero no se asociaría con el aumento del contenido de ADN.\nFigura 3: Análisis representativo de citometría de flujo de células no tratadas y tratadas con cefalexina-60min. (A) Histogramas de distribución de tamaño de celda (FSC-H). (B) histogramas de contenido de ADN (FL1-SYTO9). n 120.000 células analizadas. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nSe utilizaron imágenes de microscopía instantánea para examinar la morfología celular y la organización intracelular del ADN mostrado por la localización de HU-mCherry(Figura 4A). La cefalexina provocó la formación de células largas con ancho celular normal y sin septo de división. Estos filamentos lisos contenían estructuras de ADN regularmente espaciadas llamadas nucleoides, lo que confirma que la cefalexina no afectaba a la replicación y segregación cromosómicas. El análisis cuantitativo de imágenes confirmó en gran medida el tamaño celular y el aumento del contenido de ADN observado anteriormente con citometría de flujo(Figura 4B,C). Los resultados serían muy diferentes para las tensiones que inducen daño al ADN, que conducen a la formación de células filamentosas en las que la replicación continúa, pero la segregación se ve afectada. En ese caso, el tamaño celular y el contenido de ADN aumentarían de manera similar, pero las células albergarían una sola masa no estructurada de ADN. Las imágenes instantáneas también podrían revelar otro tipo de formas celulares aberrantes o la presencia de celdas mini, anucleadas o lysed (células fantasma).\nFigura 4: Análisis de instantáneas de microscopía de células no tratadas y tratadas con cefalexina-60min. (A) Imágenes representativas de microscopía que muestran el contraste de fase (gris) y la señal HU-mCherry (rojo). (B) Histogramas de distribución de longitud de celda. Barra de escala: 5 m. (C) Histogramas del número de nucleoides por célula. Se analizaron entre 800 y 2.000 células para cada muestra. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nLa microscopía de lapso de tiempo asociada con el aparato microfluídico16 ayudó a determinar los fenotipos observados anteriormente y proporciona información adicional sobre el desarrollo y la causalidad de la deficiencia de crecimiento. Las imágenes de lapso de tiempo(Figura 5A y Película 1) confirmaron que el alargamiento celular (síntesis de masa celular) y la replicación y segregación cromosómicas no se inhibiron por la exposición a la cefalexina. Además, reveló el proceso de recuperación cuando se eliminó la cefalexina. El análisis del linaje celular filamentoso mostró que la división celular se reinicia 20 minutos después de lavar el fármaco(Figura 5B). Las células divididas resultantes eran viables, porque a su vez se dividieron, lo que finalmente llevó a la formación de 33 células que exhiben tamaño normal y contenido de ADN. Esto permitió calcular un tiempo de generación total de 31 min durante los 180 min del experimento, que es similar al tiempo de generación calculado para la población no estresada a partir de mediciones de CFU/ml (33 min).\nFigura 5: Análisis de lapso de tiempo de microscopía de células tratadas con cefalexina-60min. (A) Imágenes representativas de microscopía que muestran el contraste de fase (gris) y la señal HU-mCherry (rojo). La celda filamentosa monitoreada está indicada por el contorno blanco, y las celdas divididas por diferentes colores. Barra de escala a 5 m. (B) Representación esquemática del linaje de celdas filamentosas correspondiente al panel (A) y a la película 1. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nPelícula 1: Película microfluídica de E. coli HU-mCherry tratada con cefalexina. Cephalexin se inyectó después de 60 min, seguido de la inyección de medio RDM fresco durante 3 h. Tiempo indicado en amarillo (1 fotograma cada 10 min). Barra de escala a 5 m. Por favor, haga clic aquí para ver este video (Haga clic con el botón derecho para descargar).\nEs esencial prestar atención al estado de crecimiento de las células durante el procedimiento. Crecer las células durante varias generaciones antes de alcanzar una fase exponencial completa. Para el éxito de este método, es importante que todas las muestras de células se recopilen simultáneamente, y es mejor analizar solo un cultivo tratado y un cultivo no tratado al mismo tiempo. Las muestras celulares para imágenes por microscopía deben mantenerse a la temperatura experimental durante todo el procedimiento. Entonces es esencial precalentar la cámara del microscopio y la cámara microfluídica antes del comienzo del experimento. Si las muestras celulares de citometría de flujo no se pueden analizar fácilmente, se pueden mantener en hielo hasta 6 h. La incubación en hielo limitará el crecimiento y la modificación morfológica de las células. Alternativamente, el usuario podría considerar el uso de la fijación de las células en etanol 75%, que generalmente se recomienda para la citometría de flujo10. Si el protocolo requiere lavar el inductor de tensión desde el medio, las células centrífugas y pipetas con mucho cuidado para evitar dañar las células aberrantes potenciales.\nTanto la citometría de flujo como el análisis de instantáneas dan acceso al tamaño de la célula y a los parámetros de contenido de ADN, con instantáneas que proporcionan una observación adicional de la morfología celular. Se puede realizar la tinción de ADN con DAPI10 (4',6-diamidino-2-phenylindole) u otros colorantes de ADN estables si no hay fusión fluorescente disponible para observar los nucleoides en el organismo de interés. Si no se puede realizar el análisis de citometría de flujo, es importante crear una imagen y analizar un gran número de células mediante microscopía.\nLas imágenes por microscopía también se pueden realizar utilizando cepas que transportan fusiones fluorescentes a proteínas implicadas en vías específicas de interés. Esto ayudaría a revelar el efecto del estrés en una variedad de procesos celulares como replicación, transcripción, síntesis de la pared celular, o división celular. El método puede aplicarse a una serie de especies bacterianas, el único requisito es que el aparato microfluídico debe ser compatible con la morfología de las células. Las placas microfluídicas estándar son convenientes para bacterias en forma de varilla con un ancho de célula entre 0,7 y 4,5 m. Sin embargo, los cocci, los ovococci u otras cepas bacterianas con formas peculiares deben ser probados. Alternativamente, si no se pueden realizar experimentos microfluídicos debido a la falta de disponibilidad del equipo o cepas bacterianas incompatibles, la toma de imágenes de lapso de tiempo se puede realizar en diapositivas montadas en agarosa para una duración máxima de 2h.\nLa ventaja general de este análisis multiescala es proporcionar una visión global del efecto de la inducción de estrés en varios aspectos de la capacidad de crecimiento bacteriano (es decir, síntesis de masa, viabilidad celular, morfología celular, integridad de la membrana, contenido de ADN) y la forma en que estos evolucionan con el tiempo en una población bacteriana que crece bajo condiciones de estrés. También permite analizar la restauración del crecimiento normal a nivel de una sola célula y a nivel de población. El enfoque es aplicable a una amplia gama de especies bacterianas y a prácticamente cualquier tipo de tratamiento contra el estrés, como la exposición a antibióticos u otros compuestos antimicrobianos, análisis de la influencia de la interacción con otros organismos en múltiples especies poblaciones, o el efecto de la mutación genética.\nLos autores no declararon intereses competidores.\nLos autores agradecen a F. Cornet por proporcionar la cepa hupA-mCherry, A. Dedieu por asistencia técnica con citometría, y A. Ducret por su ayuda con MicrobeJ. Financiación: C. Lesterlin reconoce las instituciones Inserm y CNRS, así como el programa ATIP-Avenir, la Fundación Schlumberger para la Educación y la Investigación (FSER 2019), la financiación de la ANR para el programa de investigación PlasMed (ANR-18-CE35-0008), así como FINOVI para la financiación de J. Cayron; Cáncer La Ligue contre le para la financiación del equipo del citómetro de flujo. Contribuciones del autor: C.L. y J.C. diseñaron el procedimiento y escribieron el documento; J.C. realizó los experimentos y analizó los datos.


FORO DEL GETAFE C.F. (GETAFEWEB) - Henok Goitom (Sin equipo). FICHADO. - Fichajes\nHenok Goitom (Sin equipo). FICHADO.\n#1 · 22/Mar/2016, 13:40 · Editado por Xataf\nHenok Goitom “GOITOM” se incorpora a la disciplina del Getafe C.F.,SAD, realizando hoy mismo la sesión de entrenamientos con sus nuevos compañeros. El delantero sueco estará en la entidad azulona hasta final de temporada.\nFutbolista contrastado y conocedor de la liga española, ya que militó en equipos como el Ciudad de Murcia, Real Murcia, Real Valladolid y U.D. Almería. Su paso por el fútbol español dejo una cifra de 45 goles. En su último equipo el AIK de Estocolmo, equipo de la primera división sueca, logró una cifra de 39 goles, marcando 18 en la última temporada en Allsvensakan.\nLe damos la bienvenida a nuestro nuevo futbolista.\n#2 · 22/Mar/2016, 13:41\n¡¡¡Sorpresón!!!... Esperemos que sea para bien...\n#3 · 22/Mar/2016, 13:43 · Editado por Xataf\nGoitom ficha por el Getafe hasta el final de la temporada.\nEl delantero sueco, de 31 años, se encontraba sin equipo. Debutó en la Primera española con el Murcia. Jugó también en el Valladolid y el Almería.\n22 de marzo de 201613:14h CET\nGoitom ha fichado por el Getafe. | Carlos Barba.\nHenok Goitom es nuevo jugador del Getafe y vestirá la camiseta azulona hasta el final de la presente temporada. El delantero sueco se ejercitó ya este martes con sus nuevos compañeros tras firmar su contrato. Goitom se encontraba sin equipo, lo que permite al Getafe incorporarle a pesar de que el mercado de fichajes no está ahora abierto. El futbolista tiene 31 años y una larga trayectoria en la Liga española donde jugó tanto en Segunda como en Primera División. En la máxima categoría debutó con el Murcia y cerró su etapa en el Almería antes de volver al AEK Solna sueco, donde ha jugado las tres últimas temporadas.\nGoitom es un delantero muy fuerte y de gran envergadura que llegó a ser internacional con Suecia, pero decidió después jugar con la selección de Eritrea. La falta del gol del conjunto de Fran Escribá (dos tantos en los últimos nueve partidos), ha llevado al presidente Ángel Torres a hacer este esfuerzo a ocho jornadas del final del campeonato. Desde ahora será competencia de Álvaro Vázquez y Stefan Scepovic, que han marcado cuatro goles cada uno en lo que va de temporada. Goitom entrenó ya el martes a las órdenes de Fran Escribá y podría debutar el 1 de abril ante el Rayo Vallecano.\n#4 · 22/Mar/2016, 14:19\nLa verdad es que es un fichaje inesperado. Me parece bien que Torres se mueva y busque soluciones.\n#5 · 22/Mar/2016, 14:27\nCuando jugó aquí en España, siempre me pareció un pufazo, pero también digo una cosa: no tiene que currárselo demasiado para hacerlo mejor que nuestros dos delanteros actuales.\nBienvenido y ojalá sirva para lograr la permanencia.\n#6 · 22/Mar/2016, 15:03\nBienvenido y muchisima suerta, ya que la suya es la nuestra. Tal y como están los 2 delanteros que han estado, no creo que le cueste mucho ganarles el puesto.\n#7 · 22/Mar/2016, 15:05\n#8 · 22/Mar/2016, 15:37\nPor mucha pasta que se tenga ahora no se puede fichar salvo que sea un jugador libre.\nmejor si es un jugador que ya conozca la liga española, aunque a priori no me gusta porque no me gustaba cuando jugaba en España y me parece que es meterle más m***** a los jugadores que ya están. no sé si están pensando ya en la próxima temporada.\ndicho esto ojalá tenga la mayor suerte del mundo\n#9 · 22/Mar/2016, 15:49\n#10 · 22/Mar/2016, 16:03\nMe habría hecho más ilusión que ficharan a Michelon o a Pachón, pero bueno, a ver que tal.\n#11 · 22/Mar/2016, 16:34\nNo sé si esta web está equivocada o no..., pero al parecer no ha jugado desde el 19-agosto-2015.\n( http://www.resultados-futbol.com/jugador/H-Goitom-211921 )\nO sea..., que sobrado de forma física tampoco creo que esté...\nPero menos es nada..., y tampoco nos podemos permitir otra cosa.\nAdemás..., opino lo mismo que la mayoría... Necesita muy poquito para mejorar lo que ya tenemos.\nPersonalmente me la trae al pairo si su presencia o su pronta titularidad crea roces en el vestuario.\nAquel jugador que se sienta "ofendido" si Goitom llega y besa el santo de la titularidad..., más le vale hacérselo mirar un poquito..., pues con su enfado estará demostrando estar apoltronado.\nUn ejemplo... Wanderson fue fichado, como todos sabeis, para jugar en el filial. A día de hoy, es de los jugadores que más destaca en el primer equipo. Y eso además de que muchos fines de semana le toca jugar en ambos equipos a la vez....\nSólo por eso..., que un "jugador del filial" llegue a currar el doble y a rendir el doble que otro "jugador del primer equipo"..., es motivo más que de sobra para que dicho jugador "del primer equipo" se le caiga la cara de vergüenza.\nAsí que quien se enfade por quedar otra vez de manifiesto su poca calidad..., que agache la cabeza y trabaje más.\nNo sé cuánto va a poder ayudar Goitom al Getafe, después de llevar tanto tiempo sin tocar el balón. Tampoco tengo yo muy claro que, precisamente por eso, llegue a ser titular... Más bien creo que como mucho arrancará el partido desde el banquillo para salir quizás en las segundas partes...\nLo único que puedo hacer es desearle toda la suerte del mundo. Pues toda esa suerte, y mucha más, es la que necesita el equipo para salir del bache.\n#12 · 22/Mar/2016, 17:35\nEstaría bueno que los delanteros que tenemos se mosqueasen con la llegada de Goitom, después del rendimiento tan bajo que están dando.\nDe todos modos, al menos en este caso, no creo que se lo tomen a mal, en todo caso como motivo para ponerse las pilas.\nIgualmente digo que no tengo ni idea de qué tal saldrá este parche, pero ahora mismo entre esto y que Torres no haga nada de nada, prefiero que se intente algo. A ver si sale bien lo de Goitom...\n#13 · 22/Mar/2016, 18:30 · Editado por GambitGetafe\nViendo la ficha de Goitom en Tranfermarkt ha sido indiscutible en su equipo en la liga sueca, su último partido fue el 31 de octubre (final de la temporada). Esperemos que el olfato no lo haya perdido, pese a la diferencia de nivel entre una competición y otra.\nNo tenemos nada de gol, los 2 delanteros que teníamos hasta hoy han hecho una temporada decepcionante. Toda ayuda es buena, venga de Suecia, de Qatar o de la Conchinchina.\n#14 · 22/Mar/2016, 18:52\nEs un PAQUETE pero de los gordos ahora bien los nuestros han demostrado ser peor que eso y lo de los delanteros muchas veces es inexplicable y meten goles aunque sean malisimos, para lo que hace Alvaro que es fallar goles cantados y la inoperancia de stefan lo mismo este a poco que haga es el mejor delantero de la temporada.\n#15 · 22/Mar/2016, 20:33\nTodos nuestros rivales reforzaron sus plantillas en el mercado invernal, algunos con incorporaciones de gran nivel. Nosotros nos reforzamos con Goitom, para que juegue en abril. Guardo un recuerdo mediocre de su paso por nuestro fútbol, confió más en los jugadores que tenemos.\n#16 · 22/Mar/2016, 20:50\nTampoco esperemos que haga milagros. En Primera División ha jugado 111 partidos y ha metido 15 goles.\n#17 · 22/Mar/2016, 21:47\n#18 · 22/Mar/2016, 22:54\nLa verdad que este fichaje por lo menos amí me quedado un tal que puesssss muy bien no me dice nada, piensas en su paso anterior por la Liga y dices joder que pufo hemos fichado, luego miras los delanteros que tenemos y dices joder a menos que meta 5 goles en lo que queda de liga ya será mejor que Álvaro y Stefan xD, En definitiva que Bienvenido! y su nos ayuda a salvarnos lo renovaba otra temporada y mandaba a la mierda a los otros 2.\n#19 · 22/Mar/2016, 22:59\nYo creo que se ficha a Goitom más que para que sea titular y nos meta él los goles, para poder jugador con dos delanteros y no quedarnos sin delantero en el banquillo ante una posible expulsión.\nDespués del partido contra el Betis opinaré sobre Goitom.\n#20 · 23/Mar/2016, 00:26


Detectan restos de cannabis en pipas halladas en el jardín de Shakespeare - Vida Actual - Últimas noticias de Uruguay y el Mundo actualizadas - Diario EL PAIS Uruguay\nBy EL PAIS Científicos sudafricanos han detectado restos de cannabis en pipas de tabaco encontradas en el jardín de la casa donde vivió el dramaturgo británico William Shakespeare (1564-1616), en Stratford-upon-Avon (centro de Inglaterra).\nEn el pueblo natal del autor están a la espera de que lleguen los visitantes.\nEn un artículo publicado en el diario británico "The Independent", Thackeray señala que en el siglo XVII se consumían diversas clases de tabaco en Inglaterra, incluida la hoja traída desde Norteamérica, con nicotina, y el obtenido de la hoja de coca procedente de Perú.\nPara el autor de la investigación, Shakespeare podría haber "conocido los efectos nocivos de la cocaína" y "posiblemente prefería el cannabis como hierba por sus propiedades para estimular la mente".\nEl investigador sugiere la posibilidad de que "el escenario en el que Shakespeare representaba sus obras en la Inglaterra isabelina" estuviera "repleto de una bruma de humo" de alguna de las clases de tabaco que se consumían en aquella época.\nMedicamentos de cannabis uruguayos quieren dar el salto\nBy EL PAIS La empresa Medicplast proyecta exportar Epifractán a países de la región\nMás de la mitad de los interesados en el cannabis medicinal jamás probó un porro\nBy EL PAIS Los consumidores de cannabis medicinal y los de la marihuana para fines recreativos parecen salidos de dos mundos distintos. Así lo señala un estudio del grupo de investigación Monitor Cannabis: más de la mitad (57%) de los interesados en el cannabis medicinal jamás probó un porro.\nBy Mariana Malek Para aquellos dolores de la edad, un poco de cannabis. Cada vez más ancianos en Estados Unidos acuden a la planta para tratar sus dolencias haciendo crecer una tendencia impulsada por su legalización en varios estados.\nSube la venta y el stock de cannabis en farmacias\nBy EL PAIS Mejora del sistema termina con colas afuera de los locales.\nVivienda estudia medidas para cocinero del brownie\nBy EL PAIS Subsecretario dijo que espera que estudiante “no lo haga más”.


Los 5 vídeos virales más graciosos de bebés | Ser Padres\n5º puesto: Los gemelos charlatanes\nEste par tienen muchas cosas que decirse y acompañan la conversación con gestos. Puede que ni tú ni yo estemos al día en el lenguaje ‘dadada’, pero claramente hablan de temas serios (nada de juegos de bebés). Un quinto puesto bien merecido.\n4º puesto: Bebé comiendo limón\nLa reacción de este pequeño al comer limón por primera vez ha hecho sonreír a mamás y papás de todo el mundo. Y es que ¡no es para menos!\n3º puesto: Bebé que se despierta solo para bailar su canción favorita\nLos bebés pueden pasar de un sueño profundo a estar preparados para cuatro días seguidos de fiesta. Así lo demuestra este niño, que hace que su hermana se divierta como nunca al despertarse de repente y ponerse a bailar al ritmo del Gangnam Style. ¡Vamos bebé!\n2º puesto: Bebé escapista a lo prison break\nNada puede interponerse entre un bebé y su libertad. El que a simple vista parece un bebé de 6 meses demuestra que es capaz de llevar a cabo un elaborado plan para escapar de su cuna.\n1º puesto: Bebé cantando un blues\nY el primer puesto se lo lleva Luca, un niño que tiene más soul que cualquier cantante de Nueva Orleans. Nos deja con la boca abierta a todos con este solo que acompaña con la armónica. Un pequeño artista que demuestra que no existe tal cosa como música para bebés: es un arte universal y cualquier estilo es bueno, independientemente de la edad.


Debajo del Puente | Salamanca Móvil\nShhh… Es un secreto… Debajo del puente… se miente. Hay muchos puentes pero sólo en uno se cuentan las mejores historias. Por debajo del puente no pasa mucha gente, sólo aquellos que cuentan historias, cuentos, poemas que traban la lengua, chascarrillos y cantan canciones al ritmo del agua. Piedra a piedra, historia a historia nos dejaremos llevar por la corriente de las palabras, de las hojas al pasar, del olor de la tinta. Shhh… es un secreto… Debajo del puente…se siente.\nDisfruta de esta programación en:\nTags:cuentacuentos, entretenimiento, infantil, Salamanca


Rosana: «Estoy dispuesta a disparar canciones y derribar desesperanzas» | EBFNoticias | Elblogoferoz.com\nACN PRESS/ Silvia Curbelo.-Rosana aterriza en Lanzarote dispuesta a “disparar canciones y derribar desesperanzas”, después de seis años sin ofrecer un concierto en su tierra. Vuelve con ‘Buenos días, mundo’, una gira que rescata también éxitos como ‘A fuego lento’, ‘Magia’ o ‘Llegaremos a tiempo’. Pero también llega dispuesta a dejar las cosas claras.\nEstá «molesta» con la campaña que, a su juicio, se ha llevado a cabo el Cabildo insular porque “soy incapaz de decir a la gente cómo tiene vestir como para pedir a la ciudadanía en mi nombre que actúe de una determinada forma.” “Me preocupa el petróleo en Lanzarote, como el volcán en El Hierro y el fuego en el resto de las islas” reitera la cantante, “porque lo que me interesa por encima de todo es la gente, y en ella encuentro la inspiración para componer mis canciones”.\n“El nuevo disco tiene un sonido más eléctrico y visceral, similar al que siempre ha caracterizado a los conciertos. Pero la esencia es la misma, solo que antes decía ‘mejor vivir sin miedo’ y ahora digo ‘buenos días, mundo”, explica Rosana, quien reconoce así que la alternativa a la canción de autor es el sonido más electrico y rockero.\nSu concierto del viernes está patrocinado por una empresa de coches de alquiler, lo que para la profesional no es n ningún inconveniente a la hora de defender las energías limpias. «Hay que tener en cuenta que están intentando que las energías limpias formen parte de sus nuevos vehículos”, recalca. Rosana además quiere acallar las críticas por su adhesión al movimiento en contra de las plataformas petrolíferas. «Como ciudadana canaria y conejera estoy en contra del petróleo y a favor de la vida, pero no soy una persona política. Una cosa es el concierto y otra la manifestación, aunque puntualmente se unan en el tiempo”, asegura.\nNo sabe por qué ha tenido que esperar más de un lustro para volver a dar un concierto “en casa” aunque cree que quizás se deba a una preferencia por traer “a cantantes de más envergadura”. Ésta será su primera actuación de pago en la Isla: “La entrada es simbólica y sirve para cubrir los gastos de un concierto de este tipo”, asegura la artista.\nA pesar de ello, Rosana espera que haya lleno total. Su deseo es que la gente vuelva a decirle al cierre que “se va con ganas de comerse el mundo”.\nRosana tiene mucho trabajo, dentro y fuera de España, porque ante la crisis de la industria discográfica todos los artistas apuestan por la carretera. La cantautora cree que “estamos en un momento de cambio”. “En este país se ha fomentado la música gratis mientras en otros lugares la gente tiene claro que un músico tiene el mismo derecho que cualquier otro profesional a vivir de su trabajo”.\n“Lo más fácil”, continúa la cantante, “es echarle la culpa a los músicos”. “Yo invitaba a mi familia y a mis amigos a venir conmigo cualquier día, 24 horas: a una ‘promo’, a componer, grabar videos o ir a una sesión de fotos… ¡A ver si eres capaz de mantener el ritmo y valorar la profesión!», consideró.\nA pesar de esa “mala costumbre” del ‘todo gratis’ Rosana confía en que “cuando el ser humano tenga información de lo que la música es, la pondrá en su lugar”. ¿Y qué es la música? “Es como el aire. Solamente notas que te hace falta cuando te tapan la nariz y la boca”, explica Rosana por si alguien no tenía claro eso de ‘qué es la música’.\nComponer mientras está recorriendo el mundo le parece impensable: “Quedarse en pelotas en un papel en blanco no es algo fácil, por todo lo que sangras y por cómo te vacías en cada palabra que escribes, por eso cuando compongo, sólo compongo, y cuando estoy de gira, sólo estoy de gira”. Lo que puede garantizar es que sus nuevos trabajos, como los anteriores, estarán empapados de algún modo con Lanzarote, “porque uno es el resultado del sitio donde nació”.


México participa con éxito en Feria Internacional de Turismo de Madrid - IMPACTO MX\nMaduro rechaza ultimátum de Unión Europea; Enviado de EEUU se reúne con comité de Guaidó (videos)\nLa participación del gobierno de México en la Feria Internacional de Turismo de Madrid FITUR-2019, resultó exitosa y se llevó a cabo en un marco de austeridad con uso eficiente de los recursos públicos, destacó la Secretaría de Turismo (Sectur).\nEl titular de la Sectur, Miguel Torruco Marqués, informó que esto permitió alcanzar un acuerdo con España para desarrollar y fortalecer la cooperación entre ambos países en materia turística.\nSubrayó que el gobierno de México, ha adoptado una visión republicana a favor de la austeridad, que busca la transparencia y la optimización en la aplicación de los recursos públicos, de ahí el nuevo esquema de participación del país en FITUR, una de las ferias más importantes.\nManifestó que está muy contento con la participación que tuvo México y toda la delegación integrada por los gobiernos estatales asistentes y tour operadores en la FITUR, y agradeció los patrocinios con los que contó el gobierno para tener una importante presencia en este evento de relevancia internacional.\nAl hacer un balance sobre la participación de México en la feria de Madrid, Torruco Marqués resaltó que, en el nuevo modelo turístico que impulsa la Sectur, uno de los principales objetivos es incrementarla derrama económica por turistas internacionales.\n“En la Secretaría de Turismo estamos trabajando para hacer de México un destino especial, diferente, que lo posicione por encima de sus competidores en las preferencias de los más de mil 300 millones de turistas que viajan cada año por el mundo”, reiteró.\nLa dependencia informó en un comunicado que la agenda de su titular inició el lunes 21 de enero con su participación en el corte de listón inaugural de la “Semana de Campeche en España”, junto con la embajadora de México en España, Roberta Lajous, y el gobernador de Campeche, Alejandro Moreno Cárdenas, en la Casa de México en España.\nLa embajadora Lajous afirmó: “hoy nos vestimos de gala, por primera vez se va a recibir en esta casa a un estado de la República para que muestre lo mejor de su arte, su historia, su gastronomía y sus artesanías. Pero, sobre todo, por la posibilidad de vincularse con distintos sectores de la sociedad española y hacer una promoción integral del estado de Campeche”.\nEl martes 22 de enero, Miguel Torruco participó en la “22ª Conferencia Iberoamericana de Ministros y Empresarios de Turismo”, que se realizó en el marco de la Feria Internacional de Turismo (FITUR), en su carácter de presidente de la Comisión Interamericana de Turismo de la Organización de Estados Americanos (OEA) y secretario de Turismo del gobierno de México.\nDestacó la importancia de que los Ministerios de Turismo y de Medio Ambiente de Iberoamérica trabajen en estrecha coordinación para realizar acciones comunes que permitan enfrentar este fenómeno natural, pues afecta a la actividad turística e impacta de manera adversa a la economía de esos centros turísticos y, con ello, la vida de sus habitantes, de la fauna, flora y de los ecosistemas existentes en los litorales.\nEn el mismo foro, el secretario de Turismo dijo que México es un país enormemente atractivo para las inversiones, a través de incentivos y apoyos, además de que cuenta con un ambiente económico sólido, es ya la catorceava economía del mundo y treceavo con mayor cantidad de reservas internacionales.\nEl miércoles 22 de enero el titular de la Sectur inauguró el Pabellón de México en la FITUR, donde subrayó que ha iniciado una nueva etapa en la promoción turística del país, a través del trabajo y la colaboración conjunta entre el gobierno y la iniciativa privada, con el apoyo de las embajadas y consulados a nivel internacional, para seguir posicionando a México como un destino de clase mundial.\nEl jueves 24 de enero, durante una comida ofrecida al gobierno de México por Grupo Milenio y Unidad Editorial, Miguel Torruco explicó que l nuevo modelo turístico que impulsa la Secretaría de Turismo.\nComo parte de su agenda de trabajo en la capital ibérica, también sostuvo entrevistas con medios de comunicación españoles; asistió a una reunión de trabajo con gobernadores y secretarios de turismo asistentes a FITUR; tuvo un encuentro con empresarios hoteleros españoles y participó en la presentación del Tianguis en Acapulco-2019, en el recinto ferial.\nSe reunió con el secretario general de la Organización Mundial de Turismo (OMT), Zurab Plololikashvili; tuvo un encuentro con el presidente del Banco Sabadell, Josep Oliu y firmó unMemorándum de Entendimiento con el Ministerio de Comercio y Turismo de España, a cargo de María Reyes Maroto.\nLa dependencia federal mencionó que este acuerdo de cooperación será ratificado por los Presidentes de ambos países, durante la visita que el mandatario español, Pedro Sánchez, realizará próximamente a México.


Cursos en Ciencias de la Gestión en línea en Estados Trinidad y Tobago Online, Trinidad y Tobago\nÚnete gratis Curso en Ciencias de la Gestión en línea en Estados Trinidad y Tobago Online, Trinidad y Tobago\nVer Estudios de cursos en Ciencias de la Gestión en línea en Estados Trinidad y Tobago Online la Trinidad y Tobago 2017\nSi deseas continuar tu desarrollo personal con una multitud de opciones de estudio en línea o presenciales, los cursos de Derecho son para ti. Temas específicos de estudio incluyen Propiedad Intelectual, Derecho Comercial y Teoría de la regulación.Al otro lado del Atlántico, la discusión acerca de los cursos en línea y su potencial para reestructurar la educación superior se ha estado librando desde hace algún tiempo. Los cursos están estructurados en conferencias semanales en línea, la comunicación con el tutor y otros estudiantes se lleva a cabo en un entorno virtual de aprendizaje. Los cursos en línea están diseñados para encajar alrededor de su calendario, se accede al curso, siempre que sea adecuado para usted.Trinidad y Tobago, oficialmente la República de Trinidad y Tobago, es un país insular en el extremo norte de América del Sur, situada frente a la costa del noreste de Venezuela y al sur de Grenada en el sistema educativo Antilles.The Menores en Trinidad y Tobago refleja el sistema educativo británico. El país es el más industrializado y una de las más prósperas en el Caribe.Solicita información sobre Estudios de cursos en Ciencias de la Gestión en línea en Estados Trinidad y Tobago Online Trinidad y Tobago 2017\nCursos en Ciencias de la Gestión en línea en Estados Trinidad y Tobago Online, Trinidad y Tobago. ¿Está buscando a iniciar su carrera en Negocios, TI, gestión de recursos humanos, marketing, finanzas o THM? Quizás esté interesado en conseguir un mejor trabajo o un salario más alto. No importa cuál sea su origen es, el programa de ABE es lo suficientemente flexible como para adaptarse a sus necesidades cambiantes.\nLink to and share "Cursos en Ciencias de la Gestión en línea en Estados Trinidad y Tobago Online, Trinidad y Tobago"


La primera guerra ciberespacial\nTema: La primera guerra ciberespacial Lun 23 Ene 2012 - 22:15\nWashington inició esta semana una cacería policial de los sitios de internet que a su juicio fomentan la piratería mundial. La resistencia, encarnada en el grupo de hackers Anonymous, ha respondido atacando las web de autoridades y gremios de la industria norteamericana. Una conflagración de desenlace imprevisible ha comenzado en el ciberespacio.\nLos policías se presentaron, el jueves, en las casas de Kim Schmitz, Fin Batato, Mathias Ortmann y Bram van der Kolk, en Nueva Zelandia. Los cuatro son administradores de la página web Megaupload, hasta ese día uno de los mayores portales de intercambio de archivos en el mundo. La orden de detención había llegado desde una corte federal del Distrito Este de Virginia. El gobierno de los Estados Unidos los acusaba de ser parte de una “megaconspiración” para vulnerar los derechos de autor y lavar dinero a escala masiva. Otras tres personas fueron denunciadas. El mayor operativo contra la piratería en la red en la historia de los Estados Unidos había comenzado.\nEl fundador del sitio, Kim ‘Dotcom’ Schmitz, podría enfrentar 50 años de prisión. Las páginas de la empresa que dirige, Megauploud, Megavideo, Megapix, Megalive y Megabox, se encuentran hoy sin acceso. El Departamento de Justicia norteamericano los acusa de ‘piratería masiva’ y señala que los sitios cancelados generaron para sus operadores 175 millones de dólares en actividades delictivas y causaron 500 millones de dólares en daños a los titulares de obras protegidas.\nLa decisión provocó la reacción inmediata de Anonymous, la red de hackers que fomenta el libre intercambio de materiales en la red: tomó represalias contra el gobierno norteamericano y sitios de grandes corporaciones. Sus primeras acciones de guerra fueron ‘tirarse abajo’ las páginas web del Departamento de Justicia norteamericano, la de la compañía discográfica Universal, la de la Motion Picture Association of America y la de la Industry Association of América. Horas más tarde ‘torpedearon’ con éxito las páginas de Warner Music, el FBI y la Oficina de Copyrigth de EEUU. “Si quieren guerra, la tendrán”, es su eslogan hace tiempo, y esta semana lo demostraron. Hasta el jueves en la noche varias de esas páginas no habían podido funcionar.\nDicen que en este ciberataque, denominado por Anonymous como ‘Operación Represalia’ según una cuenta suya, participaron al menos 5 mil personas. Sería “el mayor ataque jamás perpetrado por Anonymous”. En las redes se difundió como frase más ingeniosa de la noticia, la siguiente: FBI cierra Megaupload, Anonymous cierra el FBI.\nUn día antes de la intervención contra Megaupload, tuvo lugar la gran protesta-apagón en el ciberespacio de decenas de páginas contra la ley SOPA. Las autoridades norteamericanas buscan con la norma tener la posibilidad de bloquear sitios que publiquen obras protegidas por derechos de autor. En la práctica eso significa que podrían inhabilitar portales en EEUU y otros países, incautar servidores y cancelar páginas que tuvieran vínculos a estos sitios. Los críticos la señalan como perjudicial para la libertad de expresión y contraria a la libertad en internet. En la protesta del miércoles en la red, Wikipedia puso en su sitio “Imagine un mundo sin conocimiento libre”. Augura su desaparición si leyes como SOPA y otras prosperan, y anunció que dará pelea.\nPor su parte, Mark Zuckerberg, creador de Facebook, la red social más famosa del mundo, ha dicho: “Internet es la herramienta más poderosa que tenemos para crear un mundo más abierto y conectado. No podemos permitir que leyes mal pensadas se interpongan en el camino de desarrollo de la red. Facebook se opone a SOPA y PIPA (otra ley similar) y a cualquier otra norma que intente perjudicar la internet”. Otros grandes del ciberespacio como Google o Youtube se oponen y han advertido que podrían paralizar sus servicios en protesta.\nEn medio de todo, la ley SOPA perdió el jueves el apoyo de 18 legisladores en el Congreso norteamericano y el propio presidente Barak Obama ha anunciado que se opondrá a toda iniciativa que limite la libertad en internet. Sin embargo, la intervención contra Megaupload hace dudar a muchos sitios web acerca de si en verdad la ley no avanzará. Muchos dejan entrever que puede ser relativamente fácil para las autoridades del país más poderoso del mundo tipificar delitos vinculados a la piratería para castigar a quienes permiten la libre descarga de materiales. Quizá la guerra tenga nuevos capítulos.


Muere joven motociclista al chocar contra unas piedras y una malla borreguera – Yucatan Ahora\nHome / Policía / Muere joven motociclista al chocar contra unas piedras y una malla borreguera\nMuere joven motociclista al chocar contra unas piedras y una malla borreguera\nPublicado\tenero 27, 2020, 1:07 pm\nMÉRIDA, 27 de enero de 2020.- Un joven motociclista falleció de manera trágica la mañana de ayer domingo, al perder el control e impactarse contra un montículo de piedras y una malla borreguera, en la comisaría meridana de Cholul.\nAunque durante las diligencias para el levantamiento del cuerpo no se presentó nadie a identificarlo, entre sus pertenencias se encontró una credencial de elector a nombre de Juan Daniel S.B., de 22 años y con domicilio en Cholul.\nEl trágico accidente ocurrió aproximadamente a las 7 de la mañana del domingo en la calle 25 entre 28 y 30 de Cholul, donde el joven manejaba una motocicleta Italika y, por razones que se desconocen, perdió el control.\nEl muchacho se proyectó contra un montículo de piedras y una malla borreguera. Su muerte fue instantánea.\nParamédicos de la SSP confirmaron el fallecimiento.\nLo encuentran ahorcado en la cárcel\nChoca con otra moto, deja a una mujer fracturada y huye para no pagar\nPresentan ante el juez a ladrones de cerveza en Kanasín\nSe incendia freidora de churros en Liverpool de Plaza La Isla\nPitbull escapa de su casa y mata al schnauzer del vecino en Ciudad Caucel


“Dejás de ser quien sos”: la temible cárcel a la que fue enviado Navalny - LA NACION\nEl líder opositor ruso será trasladado a una cárcel conocida por el trato abusivo que reciben sus internos\n2 de marzo de 2021 17:02\nUn oficial del servicio penitenciario ruso camina cerca de la entrada del penal N2, adonde fue transferido NavalnyDIMITAR DILKOFF - AFP\nMOSCÚ.- El líder opositor ruso Alexei Navalny cumplirá su pena de prisión en una colonia penitenciaria tristemente célebre por sus medidas disciplinarias, consideradas extremas incluso para los estándares rusos. El Kremlin decidió trasladarlo a una cárcel conocida por el trato abusivo que reciben los internos a pesar de las crecientes críticas por su sentencia, así como por el intento de asesinato por envenenamiento a mediados de año pasado.\nNavalny volvió a Rusia en enero a pesar de las amenazas del gobierno de arrestarlo, tras pasar meses internado en Berlín para recuperarse del envenenamiento sufrido en un aeropuerto ruso, tras lo cual empezó a sentirse mal en pleno vuelo. Fue detenido no bien volvió a pisar su país y luego sometido a un juicio amañado, por haber violado los términos de su libertad condicional por su estadía en Alemania. Lo sentenciaron a dos años de prisión.\nREPORTEROS SIN FRONTERAS DEMANDA AL PRÍNCIPE SAUDITA POR EL ASESINATO DE KHASHOGGI\nEl acceso a la colonia penal IK2 DIMITAR DILKOFF - AFP\nTras ser desoídos sus reclamos en favor de Navalny, la Unión Europea (UE) sancionó el lunes a cuatro altos funcionarios rusos considerados responsables de su persecución, en el estreno de una nueva ley que le permite al bloque europeo sancionar a los violadores de los derechos humanos en cualquier lugar del mundo.\nLos funcionarios sancionados son el procurador general Igor Krasnov, el jefe de la Comisión Investigadora, Alexander Bastrykin, el jefe de la Guardia Nacional, Victor V. Zolotov, y el director del servicio penitenciario ruso, Alexander Kalashnikov. La UE ya había sancionado a seis rusos y a un centro de investigaciones científicas del Estado por su participación en el envenenamiento de Navalny.\nLas cúpulas de una iglesia ortodoxa que está dentro del penalDIMITAR DILKOFF - AFP\nRusia enfrentó también el lunes una nueva ronda de críticas ante la difusión de un informe de Naciones Unidas que concluye que Navalny fue envenenado con el agente nervioso de grado militar Novichok.\n“Creemos que envenenar a Navalny con Novichok puede haber tenido la intención deliberada de enviar la advertencia clara y siniestra de que ese sería el destino de todos los que critiquen y se opongan al gobierno”, dijeron en un comunicado dos investigadores de la ONU, la especialista en ejecuciones extrajudiciales Agnès Callamard y la experta en libertad de expresión Irene Khan.\nEn su comunicado, las expertas dicen que el gobierno ruso recibió una copia del informe hace dos meses, pero el tiempo para que respondiera expiró sin que hayan brindado ninguna explicación sobre el hecho. El servicio penitenciario ruso no reveló oficialmente el paradero de Navalny, según la práctica habitual de Rusia se mantener incomunicados a los detenidos durante los traslados y primeras semanas en su nuevo centro de detención.\nDe todos modos, los informes de noticias de los medios estatales rusos ofrecen un atisbo de las probables condiciones de encarcelamiento. El lugar sería la Colonia Penal N°2, más conocida por sus iniciales IK2, situada en la región Vladimir, en Rusia Occidental, al este de Moscú.\nUna vista general de la colonia penitenciaria N2DIMITAR DILKOFF - AFP\nO sea que Navalny no cumpliría su sentencia en las prisiones más duras del país, ubicadas en Siberia o el Ártico. Pero la colonia IK2 es conocida por la imposición de una disciplina draconiana y por el uso discrecional e intensivo de dos instalaciones de castigo separadas, donde los internos no tienen permitido verse ni interactuar.\nEl lugar es una de las típicas prisiones tipo colonia que evolucionaron, muy poco, a partir de los campos de trabajos forzados del Gulag de la década de 1930. Los presos viven de manera colectiva en “brigadas” de varias decenas, en barracas de dos pisos rodeadas de muros y alambre de púas.\nUna de las entradas de la cárcelDIMITAR DILKOFF - AFP\nSi bien la prisión es vigilada por guardias penitenciarios, quienes mantienen la disciplina dentro de cada brigada son los propios prisioneros, ya sea en connivencia con los guardias -grupos llamados “activistas”-, o como líderes de pandillas delictivas en el interior de la comunidad penitenciaria, en este caso llamados “ladrones bajo la ley”.\nSegún expresidiarios de esa colonia penal, la IK2 está bajo el control de un grupo “activista” -presos y guardias-, un arreglo que permitirá que los directores del establecimiento tengan control permanente de la vida de Navalny. En la jerga penitenciaria rusa, las cárceles controladas por “activistas” son llamadas “zonas rojas”.\nDimitri Dyomushkin, un político nacionalista que estuvo preso en la colonia, describe las condiciones de vida en la unidad separada de castigo, donde Navalny podría terminar por cualquier minucia, como tener manchado el uniforme carcelario. “Es psicológicamente devastador”, dice Dyomushkin.\nLos edificios cercanos de la colonia penal, separados de la prisión por un extenso prado nevado DIMITAR DILKOFF - AFP\nEN CUARENTENA: GORBACHOV, EL HOMBRE QUE TERMINÓ CON LA GUERRA FRÍA, CUMPLIÓ 90 AÑOS\nLos internos, por ejemplo, deben afeitarse todas las mañanas, pero no pueden hacerlo ellos mismos porque no tienen permitido tener navajas en sus manos. Así que son los “activistas” los que afeitan a los miembros de la brigada, y los cortes y sangrados no son infrecuentes, recuerda Dyomushkin.\nEn la unidad de castigo, los presos pasan horas parados con las manos esposadas a la espalda y mirando al piso, ya que tienen prohibido hacer contacto visual con los guardias, dijo Dyomushkin en una entrevista con la radio Eco de Moscú. Tampoco hay divisiones entre los inodoros, y los internos son obligados a hacer sus necesidades en presencia de un activista.\n“Tienen mil maneras de presionar a Navalny”, dijo Dyomushkin en referencia a la estadía del líder opositor en la IK2. En esas condiciones, dice, “dejás de ser quien sos”.


Corrientes: trasladaron a los Esteros del Iberá ejemplares de una especie extinta hace 50 años - El Territorio Misiones\nMiércoles 15 de julio de 2020 | 09:20hs.\nLa Fundación Rewilding Argentina trasladó desde Córdoba hacia Corrientes a cuatro ejemplares de pecarí de collar. Esta especie, extinta en la provincia hace 50 años, conformará un nuevo grupo poblacional de animales reintroducidos en los Esteros del Iberá.\nSe trata de un par de machos y dos hembras de pecarí que, según informó la ONG, tras cumplir con la cuarentena en una reserva cercana a la capital de Corrientes, el lunes pasaron a un corral de presuelta en el Iberá.\nEl pecarí de collar o morito es un mamífero sociable que vive en grupos de hasta 30 ejemplares y estaba extinto en Corrientes hace 50 años. Por eso, a través de un programa de reintroducción, volvió al Iberá en núcleos poblacionales dispersos por diferentes áreas.\nEste lunes los cuatro animales llegaron a la reserva Yerbalito, en el norte del Gran Parque Iberá, donde ya habían liberado a aves como muitúes y guacamayos.\nLa Fundación Rewilding Argentina trabaja desde el año 2015 en el regreso del pecarí de collar a su hábitat natural, con el objetivo de recuperar su rol ecológico.\nLos animales, provenientes de Río Cuarto, ingresaron al Centro de Conservación Aguará, a través de una articulación con la Estación Biológica de Corrientes, los gobiernos de las provincias de Corrientes y Córdoba y Arcadia Charitable Fund.\n“La restauración de los ecosistemas no puede detenerse por la pandemia, porque las amenazas tampoco lo han hecho”, destacó Talía Zamboni, coordinadora de Rewilding en Proyecto Iberá.\nAhora, los ejemplares de pecarí permanecerán un mes en un gran corral que incluye porciones de bosque y pastizal, donde se les dará alimento pero también podrán comer frutos y raíces autóctonas que encuentren en el lugar.\nUna vez liberadas, las parejas serán monitoreadas por cámaras trampas para seguir su estado físico, los lugares que usen y el nacimiento de crías en el futuro.\n“Varios testimonios indican que la presencia del pecarí de collar (Pecari tajacu) era frecuente en los bosques de la provincia de Corrientes, como lo señalan los escritos del explorador francés D'Orbigny hacia 1820”, explicó la ONG a través de un comunicado. "Luego la especie desapareció, principalmente por la cacería y los desmontes”, agregó.\nAdemás del grupo de Yerbalito, hay cuatro núcleos habitacionales de pecaríes instalados en las reservas Rincón del Socorro e Isla San Alonso y en los portales San Nicolás y Carambola del Parque Iberá, en donde se registraron numerosos nacimientos, según explicaron.


Patricia Mothes: ‘Yo me siento humilde entre los volcanes’ - El Comercio\nEs estadounidense y llegó al país para estudiar los volcanes en 1987 gracias a una beca de la Fundación Interamericana sobre geomorfología. Foto: Galo Paguay / EL COMERCIO\nNo parece una buena idea, antes de entrevistar a la vulcanóloga estadounidense Patricia Mothes, ver la película ‘El pico de Dante’ (1997). Un experto advierte del peligro que corre un pueblo por el volcán que aparentemente estaba muerto. Pero sus superiores y los políticos no querían que se dijera nada porque traería graves daños económicos. Y ocurrió lo que debe ocurrir en un film de acción de Hollywood: la devastación y el coraje del héroe para salvar a la familia de quien será su nuevo amor.\n“Hicimos una presentación -recuerda Mothes- de esta película durante la temporada del Tungurahua. En el 2006, pese a que no fue algo catastrófico, fue como un cuento: en Baños la gente salía en pijamas, se colgaba de las ventanas de los hoteles con las sábanas hechas una cadena.\n¿No había ningún sistema de evacuación y protección?\nFue raro porque tuvieron simulacros y evacuaciones en el 2006, pero en realidad,todo quedó para el último. Y como la autoridad salió de la ciudad, los mandos medios no tomaron la decisión arriesgada de evacuar la ciudad hasta el último momento, cuando ya era algo bien grave. Afortunadamente no llegaron los fuegos piroclásticos incandescentes. Fue muy interesante ser parte de esto. Estuvimos ahí desde 1999 hasta el 2018. Viviendo en un sitio en el campo puedes conocer a la gente muy de cerca, sus actitudes y hacer amistades con todos los estratos.\nEn esa misma película se prioriza la decisión política de no generar pánico…\nLas autoridades anteriormente quisieron opacar un poco la información técnica que sale de los esfuerzos de monitoreo y nuestro diagnóstico porque ellos mismos no creyeron en principio, y siempre estuvieron preocupados por las consecuencias económicas y el tipo de pánico que se pede generar. Pero la verdad es que hemos visto que la población quiere saber. Siente que tiene derecho a saber y cuando empieza a mermar la información debido a que las estaciones no funcionan o hay cortes de luz, comienza a preocuparse.\nPero el Instituto Geofísico de la Politécnica informa mucho…\nEs necesario tener una fluidez de información. En el IG hacemos cualquier cantidad de boletines diarios sobre cuál es el estado, en este caso, del volcán Sangay. Nosotros tratamos de avisar los fenómenos; lo que no sabemos es qué suerte tiene esta información, si está llegando a la población. Porque una cosa es por Twitter o Facebook, pero ¿cuántos campesinos, ganaderos, amas de casa, en las diferentes comunidades, están mirando esta información? Se regaba por radios comunitarias, que llegan al corazón de la gente y que aprovecha esta información para mover su ganado, cubrir la comida, sacar la última cosecha o no lavar la ropa ara este día. Cosas así, prácticas.\nInteresante esta relación…\nAh sí, porque en la casa de Tungurahua estuvimos involucrados con ellos todos los días. Ayudaban mucho en atender el monitoreo con los instrumentos en el campo. Hicimos bastantes amistades. No hay que subestimar la importancia de tener muchas amistades cuando unos está haciendo un trabajo de monitoreo de un volcán activo de día y de noche porque es con base en el trabajo de los vigías que podemos evacuar las zonas bajo mayores amenazas. Y sería lo ideal que se distribuya la información de manera adecuada por radioemisoras comunitarias, locales, provinciales.\n¿Y usted qué aprendió de la gente de las montañas de aquí?\nA mí personalmente me fascina hablar y escuchar a la gente local, porque sé que ellos tienen el oído, están sintiendo y escuchando el volcán. Es su lugar y es gente que mayormente tiene una visión más pura porque no está ahí con su iPhone o Netflix. Estoy hablando de gente que trabaja en el campo, que vive con la radio en el cinturón y el azadón en la mano. Mientras ordeñan el ganado escuchan las noticias en su ‘radiecito’ para saber qué pasa. Nos entrevistaban en las radios dos o tres veces por día y estaban enterados.\nLas montañas apasionan, pero las vemos con un paisaje o como objeto de deseo para coronarlas. Usted prefirió entender sus vidas.\nDesde muy temprano, yo crecí explorando cavernas. Tenemos muchas cavernas en la propiedad (en EE.UU.), una de ellas es la séptima más grande de todo el país: 64 km de longitud. De joven ,con mi padre y un grupo de científicos, las exploraba y estudiaba para entender por qué la caverna es de una manera por el tipo de roca y a dónde van esos pasajes. Cuando vine aquí, todavía jovencita (se ríe), ya tuve muchos estudios, pero no tanto en volcanes, pero comencé a estudiar los lahares del Cotopaxi. Ahí empecé a saber que no me fascina subir a las nieves ni estar ahí a las tres de la mañana. Puedo llegar al tope del Tungurahua, pero no me provoca goce. Prefiero estar tratando de entender cómo funciona o por qué dejó de funcionar un volcán. Eso, combinado con la conversación de la gente, nos descubre su poder eruptivo y cómo ha sido su influencia.\nUsted, que las entiende desde la ciencia, ¿cómo ve que muchos la consideren como una divinidad?\nYo escucho, no. ¿Quién no se siente agradecido cuando se llega a la cumbre de una montaña, de un volcán con su cuerpo y el oxígeno adecuado y que tiene todavía la resistencia? Por ejemplo, como Marco Cruz, con 75 años sigue escalando. Nos ayuda a despejarnos de las calamidades que hay alrededor de la pandemia. Arriba es más puro. No tengo ningún problema. Todo el mundo puede creer en lo que quiera. En Hawaii, la gente ofrenda café, arroz, un mango, a Pele, la diosa de los volcanes. Para mí está muy bien; por lo menos muestra reverencia. Uno siente que hay un poder más grande que uno. Yo me siento humilde entre los volcanes porque podemos tener los datos sísmicos, geodésicos, satelitales, pero no tenemos toda la información. Entonces debemos tener humildad y reconocer los límites de nuestros conocimientos.\nEs estadounidense y llegó al país para estudiar los volcanes en 1987 gracias a una beca de la Fundación Interamericana sobre geomorfología. Participa en la sección de vulcanología del Instituto Geofísico de la Politécnica, donde también es profesora.\nEtiquetas: Ecuador • El LADO B • Estados Unidos • Patricia Mothes • vulcanóloga


Medidor de Flujo Másico DFM\t(Fabricante: Aalborg)\nMedidor térmico de flujo másico programable con procesamiento de señal digital.\n♦ Hasta 256 unidades (opción RS-485)\n♦ Almacena datos de calibración de hasta 10 gases diferentes\n♦ Admite hasta 10 unidades de medida, incluyendo las definidas por el usuario\n♦ El totalizador programable de 12 dígitos indica el volumen total del gas\n♦ Alarma de presión límite para caudales con altas y bajas presiones de gas con salida relé\n♦ Alarma de temperatura límite para altas y bajas temperaturas del gas con salida relé\n♦ Teclado con cuatro botones y pantalla LCD con retroiluminación de 128x64\n♦ Salidas digitales (RS-232 o RS-485) y analógicas simultáneamente.\n♦ Factores de conversión interna para un máximo de 32 gases\n♦ Ajuste de cero automático\nEl acceso a todas las opciones que ofrece el controlador de flujo másico DFM se realiza a través de las cuatro teclas del panel de control y la pantalla LCD. El interfaz digital opera a través de RS485 (RS-232 opcional disponible) y proporciona acceso a los datos internos incluyendo flujo, temperatura, lectura de presión, auto cero, totalizador y programación de alarmas, tabla de gases, factores de conversión y selección de unidades, compensación de respuesta dinámica y tabla de ajustes de linealización.\nEl interfaz analógico proporciona salidas de flujo, presión y temperatura de 0-5Vdc, 0-10Vdc ó 4-20mA (seleccionable por jumper)\nEl controlador de flujo másico dispone de sensor de ajuste de cero automático que puede activarse localmente a través del teclado o de forma remota a través del interfaz digital.\nLa opción de auto cero requiere que no haya flujo circulando por el medidor durante todo el proceso de cero. Se toman todas la medidas necesarias para empezar, parar o guardar el valor de auto cero vía comandos digitales.\nEl volumen total del gas es calculado integrando el caudal normal de gas en relación al tiempo. Tanto el menú del teclado como los comandos del interfaz digital permiten:\nAsignar acciones a un volumen total preestablecido\nComenzar/Detener el flujo\nLas condiciones del totalizador obtienen valor "verdadero" cuando las lecturas del totalizador y de los volúmenes de "Detener al total" son iguales.\nPueden preprogramarse alarmas límites para caudales de gas altos y bajos a través del teclado de control o del interfaz digital. Las condiciones de alarma obtienen el valor "verdadero" cuando la lectura del caudal es igual o superior/inferior al valor establecido para los niveles de alarma de caudal alto o bajo. La alarma puede asignarse con un intervalo de demora preestablecido (0-3600 seg) para activar el contacto (independientes para la alarma de alto o bajo flujo).\nALARMA DE PRESIÓN\nEl límite de alarma para presiones altas o bajas puede preprogramarse a través del teclado de control o del interfaz digital. Las condiciones de alarma de presión obtienen el valor "verdadero" cuando la lectura de presión es igual o superior a los valores correspondientes a los programados para alarma de alta presión; o iguales o inferiores a los valores correspondientes a los programados para la alarma de baja presión. La alarma puede asignarse para activar el contacto próximo (separado para la alarma de alto o bajo presión).\nLos límites de alarma para temperaturas altas o bajas pueden preprogramarse a través del teclado o del interfaz digital. Las condiciones de alarma de temperatura obtienen el valor "verdadero" cuando la lectura de temperatura es igual o superior al valor establecido para la alarma de alta temperatura; o inferior al valor establecido para la alarma de baja temperatura. La alarma puede asignarse para activar el contacto próximo (separado para alarma de alta y baja temperatura)\nLa selección de puntos de flujo, el caudal de gas medido y los datos asociados al totalizador son directamente escalados en unidades de ingeniería a través del teclado del panel frontal o del interfaz digital.\nLas unidades de medida disponibles son: %F.S., L/min, L/h, mL/min, mL/h, SCFH, SCFM, LbPH, LbPM, definido por el usuario EU.\nEl medidor de flujo másico DFM es capaz de almacenar datos de calibración de hasta 10 gases. Esto permite que un único DFM ea calibrado para múltiples gases a la vez que se mantiene la precisión para cada gas.\nFactores de conversión de hasta 32 gases están almacenados en el medidor DFM. Además, admite factores de conversión definidos por el usuario. Los factores de conversión pueden aplicarse a cualquiera de las diez calibraciones de gas a través de los comandos del interfaz digital.\nSe suministran dos kits de relés de conexión de salida para permitir la interacción con el equipamiento del usuario. Éstos son programables a través del interfaz digital de tal manera que los relés pueden establecerse para encenderse cuando sucede un evento específico (por ejemplo, cuando un límite de alarma es excedido o cuando el totalizador alcanza un determinado valor).\n1 x 10-9 cm3 estándar/seg de helio máximo hasta las condiciones ambientales


Cómo utilizar etiquetas para organizar archivos y carpetas en macOS\nInicio/Tutoriales/Cómo utilizar etiquetas para organizar archivos y carpetas en macOS\nJosé Alfocea17 abril, 2018\nCuando contamos con un número considerable de archivos y carpetas en nuestro ordenador, es más necesario que nunca mantenerlo todo bien organizado con el fin de encontrar rápidamente aquello que buscamos cuando lo buscamos. Pues bien, en macOS, las etiquetas nos ofrecen una forma alternativa de organizar nuestros archivos y carpetas, ya que pueden facilitar la localización de los elementos en el Finder.\nEtiquetar elementos en macOS\nEtiquetar un archivo en el Finder es tan sencillo como hacer clic derecho (o Ctrl-clic) sobre el archivo en cuestión (una foto, un vídeo, un documento, una carpeta) y seleccionar una de las etiquetas de colores que nos aparecen en el menú desplegable, tal y como podéis ver en la imagen inferior a estas líneas.\nSi lo que deseas es crear una nueva etiqueta, basta con seleccionar «Etiquetas…» en dicho menú desplegable, escribir el nombre que desea dar a esa etiqueta, y pulsar Enter. Automáticamente se generará una nueva etiqueta lista para que la puedas volver a aplicar desde el menú desplegable.\nCómo personalizar etiquetas y buscar elementos etiquetados\nPero también puedes personalizar las etiquetas que aparecen en el menú desplegable. Para ello selecciona la opción «Preferencias …» desde la barra de menú cuando te encuentras en el Finder, selecciona la pestaña Etiquetas y arrastra tus etiquetas favoritas al área en la parte inferior del panel.\nTambién puedes crear nuevas etiquetas y eliminar las que no uses con los botones + y -; o pulsa sobre una etiqueta con el botón derecho para cambiarle el nombre y/o su color, esto puedes hacerlo tanto desde este panel como directamente desde la barra lateral del Finder. Asimismo, marca las casillas de verificación que aparecen junto a ellas para seleccionar cuáles aparecen en la barra lateral del Finder, pues es estando ahí dónde les podrás sacar el máximo partido. Por ejemplo, selecciona una etiqueta en la barra lateral del Finder, y todos los archivos y carpetas a los que hayas asignado dicha etiqueta aparecerán en la ventana del Finder, sin importar su ubicación concreta dentro de tu Mac.\nCómo etiquetar archivos abiertos en los que estás trabajando\nPor último, no olvides que en muchas aplicaciones de macOS puedes etiquetar el archivo en el que estás trabajando de forma rápida y sencilla. Simplemente pulsa en la flecha que ves junto al nombre del documento en la barra de título, haga clic en el campo Etiquetas e introduce una nueva etiqueta o bien selecciona una de la lista desplegable.\nUtilizando las etiquetas en macOS mantendrás todos tus archivos y carpetas bien organizados, a la mano en cualquier momento y sin importar dónde los guardaste en tu Mac.


Ayuda para adquisición de vivienda libre usada - Gobierno Vasco\nFacilitar la adquisición de viviendas libres usadas con destino a residencia habitual y permanente.\n¿QUÉ ES VIVIENDA LIBRE UDASA?\nBajo este nombre denominamos:\nAquellas viviendas libres (no de protección oficial) que tengan como transmitente a persona distinta de su promotor o que, aun siéndolo, tenga lugar una vez terminada la edificación y tras su utilización ininterrumpida por plazo de dos años por su propietario, por titulares de derechos reales de goce o disfrute o por arrendatarios sin opción de compra, siempre que, además, el adquirente sea persona distinta de la que utilizó la vivienda durante el referido plazo.\nNo se consideran viviendas libres usadas las transmitidas por una Administración pública o institucional, o las Sociedades Públicas y sociedades mercantiles participadas mayoritariamente por cualquiera de las anteriores.\nPero, además, estas viviendas han de cumplir determinadas condiciones respecto a precio, valor de tasación, tamaño, etc.\nFolleto informativo: Ayudas financieras para la adquisición de vivienda libre usada (PDF, 535 KB)\nLas ayudas consisten en una subvención a fondo perdido. La cuantía de la subvención se calculará sobre el valor de tasación, salvo que el precio de venta sea menor, en cuyo caso se calculará según éste, siendo los porcentajes los siguientes:\nCon carácter general, el 5 %.\nPara viviendas situadas en ARIs o de unidades convivenciales cuyos integrantes tengan una edad inferior a 35 años, el 6 %.\nEn el caso de unidades convivenciales de 5 ò más miembros, el 6%, más 600 euros por cada hijo a partir del tercero, incluido éste\nEn todo caso, dicha cuantía no podrá exceder de los siguientes topes máximos en función de los ingresos ponderados:\nTope viviendas en ARI o para menores de 35 años\nTope en unidades convivenciales de 5 o más miembros\nHasta 21.000 EUR\nDesde 21.001 hasta\nEn el caso de que los solicitantes reúnan las condiciones necesarias para ser beneficiarios simultáneamente de varios de estos porcentajes, se les aplicará únicamente el más beneficioso.\nEl pago se efectuará a través de alguna de las Entidades Financieras que hayan suscrito convenio financiero con la Administración de la CAPV, debiendo presentarte ante cualquiera de estos establecimientos en ese mismo plazo de tres meses desde la notificación de la resolución.\nNormativa reguladora ORDEN de 6 de octubre de 2010, del Consejero de Vivienda, Obras Públicas y Transportes, de medidas financieras para la compra de vivienda.\nORDEN de 14 septiembre de 2011, del Consejero de Vivienda, Obras Públicas y Transportes, de modificación de los límites de ingresos anuales ponderados exigibles para el acceso a la vivienda de protección oficial.\nPlanificación Territorial, Vivienda y Transportes > Viceconsejería de Vivienda\nPlanificación Territorial, Vivienda y Transportes > Delegación Territorial - Alava\nPlanificación Territorial, Vivienda y Transportes > Delegación Territorial - Bizkaia\nPlanificación Territorial, Vivienda y Transportes > Delegación Territorial - Gipuzkoa\nSi la solicitud la firma un/a representante\nDocumento que acredite la representación\nLibro de familia de los compradores\nFotocopia del Libro de Familia, si existen hijos menores de edad.\nEstado civil de los compradores\nSolteros: Certificado de Fe de vida y estado\nViudos: fotocopia del libro de familia\nParejas de Hecho: Certificación de inscripción en el Registro de Parejas de Hecho de la Comunidad Autónoma del País Vasco.\n- Si usted da su consentimiento a la Administración para que consulte estos datos, no es necesario que aporte este documento. Deberá marcar el consentimiento en la solicitud\nSeparados o divorciados: copia de la sentencia y del convenio regulador.\nCasados: Certificado de matrimonio.\nEn su caso, titulo acreditativos de familia numerosa.\nCertificado actual de empadronamiento de las y los solicitantes que vayan a ser titulares, con indicación de la fecha de antigüedad (día/mes/año).\nAcreditación de que algún solicitante que vaya a ser titular es miembro de colectividades vascas residentes en el extranjero.\nEn el caso de personas extranjeras\nPara las personas extranjeras comunitarias, certificado de inscripción en el Registro Central de Extranjeros en el que conste su nº de identidad de extranjero (NIE)\nPermiso de residencia en vigor de larga duración.\nCertificación acreditativa de la condición y carácter de la discapacidad de movilidad reducida expedida por el organismo correspondiente.\nCopia de la Declaración del I.R.P.F. de las personas adquirientes\nSi se perciben prestaciones no contributivas, certificado de las mismas (pensiones, rentas exentas, dietas exceptuadas de gravamen)\nEn el caso de no tener obligación de declarar:\n- Certificado de la Hacienda Foral acreditativo de la no obligatoriedad de presentarla\nEn su caso, justificación documental de la totalidad de los ingresos brutos percibidos por todos los conceptos:\nCertificado municipal de que la vivienda no se halla fuera de ordenación.\nContrato de compraventa + cláusula obligatoria\nInforme de tasación de la vivienda, emitido por los servicios de tasación de las Entidades Financieras o por Entidades especializadas creadas para este objeto de conformidad con lo señalado en el Real Decreto 685/1982 de 17 de marzo de desarrollo de la Ley 2/1981 de 25 de marzo de regulación del mercado hipotecario.\nEn caso de disponer actualmente de vivienda:\nSi la superficie útil total de la vivienda resulta inferior a una ratio de 15 metros cuadrados útiles por persona:\n- escritura de propiedad de la vivienda en la que conste la superficie útil.\nSi la vivienda no reúne condiciones de accesibilidad, y uno/a de los/as titular/es son personas de 70 años o más\n- Escritura que acredite la titularidad de la vivienda y certificado técnico\nSi la vivienda constituía el domicilio conyugal o de pareja de hecho y ha sido transmitido como consecuencia del proceso de separación o divorcio, habiendo obtenido cada parte un máximo de 75.000 euros, una vez descontado el importe pendiente de abono de las cargas hipotecarias existentes.\n- Copia de escritura de transmisión de la vivienda.\nSi la vivienda ha sido designada judicialmente como domicilio familiar del otro cónyuge o pareja.\n- Fotocopia de la resolución judicial y del convenio regulador.\nFormulario para otras fuentes de financiación\nEn el caso de estar percibiendo otras fuentes de financiación, deberá aportar este formulario junto con la documentación de justificación de la ayuda.\nOtras fuentes de financiacion (pdf , 967.68 KB)


442 | FIFA, Messi y el insulto a la justicia\nSELECCIóN | 05-05-2017 12:20\nCuando parecía que el Capitán de la Selección se iba a perder el resto de las Eliminatorias, desde Zurich llegó una noticia que generó polémicas.\nLa FIFA dio marcha atrás y le perdonó a Lionel Messi una sanción que, en un principio, lo dejaba fuera del resto de las Eliminatorias Sudamericanas y ponía en serios riesgos la clasificación de la Selección al Mundial de Rusia. Esta mañana llegaron las buenas noticias a la Argentina y aunque esto pueda sonar satisfactorio para los intereses de nuestro equipo de fútbol, hay una clara muestra de injusticia .\nLa entidad madre del fútbol mundial se amparó en que no hubo pruebas suficientes para sancionarlo de oficio, ya que el árbitro brasileño Sandro Ricci no elaboró ningún informe sobre los insultos de Messi a su asistente. Ahí está el primer error: el silencio del juez de línea.\nSin embargo, luego de la aparición de un video en el que se ve claramente a Messi repartir insultos al línea Marcelo Vangasse, la FIFA confirmó la sanción de cuatro fechas al capitán argentino y la ausencia en el partido ante Bolivia, en La Paz. Allí comenzaron los pedidos de clemencia de todo tipo y la presión a Zurich para que Messi sea perdonado. Hasta se comparó esta situación con suspensión a Maradona en el Mundial de Estados Unidos por dóping. ¿A Messi le "cortaron las piernas"?\nEl tema fue tapa de diarios de todo el mundo, la AFA contrató abogados de primera línea para preparar una apelación en la que sostenía que Messi había "insultado al aire" y que no había motivos para una sanción de oficio.\n¿Qué dirán las federaciones de Uruguay o Chile? Luis Suárez fue suspendido por cuatro meses luego de morder a Chiellini en Brasil 2014. Gonzalo Jara recibió tres fechas durante la Copa América 2015 por meterle un dedo en la cola a Edinson Cavani. Ambos casos no fueron informados, pero la FIFA impartió justicia "de oficio".\nNo hay dudas que el Comité de apelaciones de la FIFA era consciente de que el inculpado era nada menos que el mejor jugador del mundo y que las consecuencias de una dura sanción podían poner en riesgo su participación en Rusia 2018. ¿Mundial sin Messi? No es una buena noticia para la FIFA y sus sponsors.\nQuedan varias preguntas por hacerse: si era cualquier otro jugador de la Selección, ¿hubiera pasado lo mismo? ¿Y si era de una selección de menor renombre? ¿Y si la Argentina ya estaba clasificada a Rusia, lo habrían perdonado? Otra vez la polémica y las contradicciones de los dirigentes que, dicen, quieren un fútbol más justo.\nSelección A Messi


La Liga Municipal de Voley pone 6° | Diario Resumen - El Diario de Pilar\nEsta mañana desde las 10 y en el Instituto Almafuerte se disputará una nueva fecha del certamen organizado por la Dirección General de Deportes.\nHoy la Liga Municipal de Voley volverá a presentarse en el gimnasio del Instituto Almafuerte de Pilar, para la disputa de la 6° fecha de uno de los siete certámenes organizados por la Dirección General de Deportes.\nLa actividad, que tendrá entrada libre y gratuita, se abrirá a las 10 con encuentros amistosos de mini vóley, protagonizados por los chicos de las sedes Astolfi, Zelaya y Pilar de la Escuela Municipal de Voley y del club Sinergia.\nLuego llegará el tiempo de los juegos por los puntos y los que abrirán el fuego serán los conjuntos de la categoría Sub 19, que así cerrarán su torneo Apertura. Desde las 12 y por la rama masculina se medirán la Escuela Municipal de Voley de Pilar y el club Presidente Derqui, mientras que a partir de las 13 lo harán la sede Del Viso del espacio dependiente de la Dirección General de Deportes y el club Sinergia. En la rama femenina se repetirán los emparejamientos pero se invertirán los horarios de comienzo de ambos pleitos.\nMás tarde llegará el turno de los encuentros de la categoría Sub 17. Entre los hombres se llevarán a cabo los partidos Sinergia-Escuela Municipal de Voley de Del Viso (a las 14), el clásico derquino entre Unión y Presidente Derqui (15) y el cierre correrá por cuenta de las sedes Pilar y Villa Astolfi de la Escuela Municipal de Voley.\nLa acción femenina de esta categoría arrancará a las 14 con Escuela Municipal de Voley Pilar-Escuela Municipal de Voley de Astolfi, continuará desde las 15 con el choque Escuela Municipal de Voley de Del Viso-Sinergia y se completará a las 16 con Presidente Derqui-Unión de Derqui.


LOS CANDIDATOS PEDANEOS EN EL BIERZO. | El Eco del Bierzo\nLOS CANDIDATOS PEDANEOS EN EL BIERZO.\nPublicado por Xabier Lago Mestre el 05 febrero, 2019 0 Comentarios\nLOS CANDIDATOS PEDANEOS.\nEn el mes de mayo tendremos elecciones autonómicas y locales. Los partidos políticos ya están en la carrera de buscar sus candidatos a los ayuntamientos bercianos. Pero no podemos pasar por alto que en nuestra región periférica contamos con las pedanías. Así pues habrá que elegir también a los alcaldes pedáneos y a las juntas vecinales.\nLa mayor parte de nuestras localidades rurales tuvieron su origen en la Edad Media. Desde esta época se administraron mediante concejos-concellos. Estos gobiernos locales tuvieron difíciles relaciones con los poderosos señoríos, laicos y monásticos. Más tarde los municipios liberales, del siglo XIX, jerarquizaron las relaciones entre los ayuntamientos y resto de localidades. Hubo que esperar a la Ley municipal de 1924 para reconocer a las entidades locales menores su plena capacidad jurídica.\nEl reconocimiento jurídico de nuestras pedanías bercianas implica que tienen derecho a ser elegidas mediante sufragio directo de sus vecinos. Este sistema de elección directa ha sido reclamado para nuestro Consejo Comarcal de El Bierzo pero las Cortes de Castilla y León no han concedido esta legítima demanda.\nLas futuras elecciones locales hacen necesaria la búsqueda de los candidatos pedáneos. Recordemos que en El Bierzo tenemos un total de 289 entes locales menores. Pero la progresiva despoblación rural amenaza el número de localidades y de candidatos. Por eso animamos a los vecinos afectados a que presenten sus candidatos. Estos son fundamentales para la existencia de las localidades bercianas.\nLos alcaldes pedáneos y sus juntas vecinales son más necesarios que nunca. Defienden a sus localidades ante el resto de administraciones locales, comarcal, provincial y autónomica. Los políticos rurales son los más cercanos a su vecindario, ayudan y escuchan a una población envejecida y aislada. Son todo un ejemplo de altruísmo y voluntarismo.\nLos miembros de las juntas vecinales son los defensores del amplio patrimonio comunal (montes, prados, caminos, locales, etc). Les animamos a mantener el simbolismo pedáneo con sus pendones y fiestas tradicionales. Es importante reforzar la visibilidad pedánea mediante la señalización de las localidades y la cartelería de los bienes comunales. Insistimos de nuevo en la necesidad de reclamar la creación en los ayuntamientos de los Consejos de pedanías. De esta forma se reforzaría la presencia de los pedáneos y se evitaría la discrecionalidad de los alcaldes.\nLa reforma local estatal del año 2013 atacó directamente a los entes locales menores con la imposición de nuevas obligaciones legales (cuentas electrónicas, amenazas de disolución, pérdida carácter administrativo…). Esperemos que en un futuro se pueda eliminar esta legislación antipedánea. En este sentido, Portugal aprobó una Ley de 2018 sobre nuevas competencias para las freguesías. Pero más grave es la despoblación acelerada del medio rural berciano. Esto exige la unión de las pedanías más pequeñas.\nRematamos a recordar a importancia do goberno das xuntas veciñais no mantemento da nosa lingua galega. Existe un dereito consuetudinario que convén manter. Son as ordenanzas concellís sobre a explotación dos bens comunais. E a nosa toponimia tradicional forma parte do patrimonio lingüístico pedáneo que hai que defender fronte ás imposicioes foráneas.\nO Bierzo, febreiro de 2019\nAnterior: El CB Bembibre PDM obtuvo una valiosa victoria frente a un presumible rival directo\nSiguiente: El Gobierno acuerda con la Generalitat seguir negociando la mesa de partidos a pesar de la polémica sobre el relator (www.eldiario.es)