Las caravanas salen del párking del Gurugú hasta septiembre - Noticias Castellón - El Periódico Mediterráneo\ncolaboración de tres concejalías\nLas caravanas salen del párking del Gurugú hasta septiembre\nLa ordenanza para regular el asunto, sin plazo por la extensa normativa estatal. El Ayuntamiento anuncia a los dueños que solo los turismos pueden aparcar allí\nEn el descampado frente a la playa del Gurugú, y hasta el 15 de septiembre, ya solo está permitido que estacionen los turismos. - FERNANDO GIMENO\nEl párking del Planetario es el único lugar donde ahora hay caravanas. - FERNANDO GIMENO\nLas autocaravanas ya se han convertido en Castellón, hasta septiembre, en un tipo de especie protegida que solo tiene un lugar para estacionar: el párking habilitado junto al Planetario. De hecho, este fin de semana ya no ha habido ninguna en la explanada que, frente a la conocida playa del Gurugú, ha estado prácticamente llena durante los meses de otoño, invierno y primavera.\nNo en vano, ayer este espacio ya estuvo repleto de turismos para que sus ocupantes disfrutaran de esta playa castellonense. Para ello, en las últimas semanas en el recinto se han instalado señales y se ha comunicado a los propietarios de las autocaravanas que debían abandonar el párking, señalan fuentes del Ayuntamiento.\nLa medida se ha llevado a cabo gracias a la colaboración de tres concejalías: la de Turismo, impulsora de la medida; la de Ordenación Urbana, que ha instalado las señales; y la de Seguridad Ciudadana, que ha informado a los dueños de las autocaravanas.\nreservado // De esta manera, tan solo se permite que estos vehículos estacionen en la explanada del Gurugú del 15 de septiembre al 1 de junio, mientras durante los meses estivales se reserva el lugar para los turismos. Así, en la segunda quincena de septiembre las autocaravanas podrán volver a utilizar el recinto del Gurugú. Y es que la intención de los dirigentes municipales es que este nicho de turismo sea una fuente de ingresos para el sector servicios castellonense fuera de la temporada de verano, con lo que se avance hacia la desestacionalización.\nAunque no es el primer verano en que se aplica la medida de restringir el aparcamiento, sí es el que más se ha dejado notar, debido al espectacular «efecto llamada» que entre los usuarios de autocaravanas han tenido las instalaciones castellonenses, señalan las fuentes. Y ahora han abandonado el lugar sin problemas, dado el carácter tranquilo de los turistas, muchos de ellos mayores procedentes de países europeos.\nAsí las cosas, tan solo las casi 40 plazas del párking junto al Planetario han quedado reservadas para las autocaravanas. Respecto a estas, las fuentes municipales resaltan que siguen valorando la posibilidad de implantar algún tipo de pago por utilizar las instalaciones. Pero, de momento, esto no se puede llevar a cabo al no haber aprobado una ordenanza que regule este asunto concreto.\nY, para ello, falta un tiempo debido a la extensa normativa estatal, «leyes superiores que se tienen que tener en cuenta», señalan desde el Ayuntamiento. Por el momento, un funcionario del Planetario sigue recopilando datos de los ocupantes para disponer de información estadística e informa a los usuarios de las actividades que ofrece la ciudad.\nPor Cruda Realidad\t10:09 - 18.06.2018\n¡Tres concejalías para “ordenar y señalizar” una zona de estacionamiento! Todo un ejemplo de sostenibilidad en la utilización de los limitados recursos humanos, materiales y pecuniarios del Ayuntamiento......En cuanto al desmadre normativo en el que está inmerso nuestro Ayuntamiento, que recordemos carece de la preceptiva “Ordenanza de Circulación”, ahora resultará que la culpa la tiene la “extensa normativa”. Menuda “jeta” tienen algunos......, mucha “jeta”, pocas ganas de trabajar y menos de reconocer los errores de bulto cometidos años atrás. La normativa es la que es y si uno no se digna ni siquiera a consultarla, se hace el ridículo. Como ha sucedido con las nuevas señales de los vados. La señal R-308e “estacionamiento prohibido en vado” es una señal de reglamentación reglada y su delimitación, ya se en espacio y/o tiempo, también lo está. Dicha delimitación se realiza mediante las señales de indicación denominadas “paneles complementarios”, que se colocan debajo de las señal o señales a las que complementan. Las artísticas señales de “vado” de la nueva ordenanza no sirven de nada, como tampoco resulta muy operativo el colocar una linea amarilla en el vado, ya que esa marca vial prohíbe la PARADA de todos los vehículos, incluso de los que utilicen el vado.....En resumen, todo un alarde de ignorancia.......,¿sostenible y accesible?


Mar del Plata 2019: Vendrá la muerte y tendrá tus ojos, de José Luis Torres Leiva | Leedor.com\nInicio Leedor Mar del Plata 2019: Vendrá la muerte y tendrá tus ojos, de...\nDos poemas emergen claros en el relato del nuevo film del chileno José Luis Torres Leiva (El viento que sabe que vuelvo a casa, Verano) en competencia latinoamericana en este Festival de Mar del Plata. Uno, el del título, del escritor Cesare Pavese “Vendrá la muerte y tendrá tus ojos/esta muerte que nos acompaña desde el alba a la noche, insomne,/sorda, como un viejo remordimiento/o un absurdo defecto.” Marcando el sentido trágico y estético del film el poema tiene más que ver con un desengaño amoroso. El segundo poema, Hijas del viento, de Alejandra Pizarnik: Han venido/a incendiar la edad del sueño./Un adiós es tu vida./Pero tú te abrazas\ncomo la serpiente loca de movimiento/que sólo se halla a sí misma/porque no hay nadie./Tú lloras debajo de tu llanto.\nA partir de esto, podrá el espectador imaginar lo grave del asunto: una pareja de mujeres, en un primer momento parecen madre e hija, por la diferencia de edad pero también por un parecido físico que parece más buscado que casual. Leiva despliega enorme cantidad de planos detalles, angulaciones en picado, dejando que la cámara respire sobre los personajes.\nUna de ellas (la más joven) está muriendo, son sus últimos días y su decisión sobre no hacer otro tratamiento sobrevuela todo el film; la otra mujer que, ademas, es enfermera la cuida y sostiene. En medio de la historia central, aparecen otras dos historias enmarcadas: la de una niña del bosque que es albergada por una mujer durante una noche y la de un hombre que tiene sexo con otro hombre en el bosque. El cuidado, el amor y el deseo son los temas que trata este film con cuidadosa imagen y diseño sonoro, y que basa su amorosidad en la duración larga de los planos, a veces en exceso.\nComo en el amor todo es empezar, Rafaela Carrá dará una cuota de felicidad entre tanto drama.\nViernes 15 14:00 Cinema – Los Gallegos Shopping 2\nViernes 15 22:30 Cinema – Los Gallegos Shopping 2\nDomingo 17 11 hs Cinema – Los Gallegos Shopping 2\nArtículo anteriorMar del Plata 2019: Vitalina Varela, de Pedro Costa\nArtículo siguienteCrítica de “El placer”, dirigida por Jorge Eiro


WIGOS Learning Portal: Reunión virtual (Webinar) en Español / Temas de interés\nReunión virtual (Webinar) en Español / Temas de interés\n◄ Estación manual y automática en un mismo lugar\nby Luis Filipe NUNES - Thursday, 28 January 2021, 1:45 PM\nEstimada comunidad de WIGOS:\nComo parte de las actividades de formación del WIGOS, nos gustaría organizar pronto una reunión virtual (Webinar) en Español.\nTal reunión tendría una duración aproximada de una hora y sería una oportunidad para discutir varios temas relacionados con el WIGOS y responder a preguntas de los participantes.\nPor eso nos gustaría saber qué temas le interesan más.\nEl programe sería discutir inicialmente uno o dos temas previamente acordados y luego responder a las preguntas de los participantes.\nHáganos saber si está interesado en participar en tal Webinar y si tiene alguna preferencia con respecto al programa.\nEl equipo de WIGOS\nRe: Reunión virtual (Webinar) en Español / Temas de interés\nby Janette Calderón Suenzen - Thursday, 28 January 2021, 2:10 PM\nQue buena noticia, claro además me gustaría discutir el tema de control de calidad que se aplica a las variables esenciales de temperatura, presión, humedad y viento, en la plataforma WIGOS https://wdqms.wmo.int/\nby Ernesto Marchesoni - Thursday, 28 January 2021, 2:47 PM\nHola a todos, espero estén bien!\nComparto la inquietud de conocer en que se basa del control de calidad de las variables esenciales, presentada por Janette.\nTambién nos gustaría conocer como están manejando los Centros Mundiales los nuevos WIGOS ID y sus correspondientes viejos WMO ID. Hemos realizado cambios en OSCAR pero no logramos verlos reflejados en WDQMS.\nby Clara Oria - Friday, 29 January 2021, 3:59 PM\nBuen día con tod@s:\nComparto el tema de interés sobre comprender como se lleva a cabo el proceso de control de calidad, en esa dirección también seria importante entender como funciona el flujo desde que inscribimos una estación en OSCAR, hasta que se visualiza en el WDQMS.\nIn reply to Clara Oria\nby Luis Filipe NUNES - Thursday, 11 February 2021, 6:27 PM\nLas sugerencias serán tomadas en cuenta y próximamente propondremos una fecha y temas para la organización de un webinar en español. Buscamos expertos de habla hispana con experiencia en los temas y disponibles para contribuir.\nCualquier otra sugerencia y comentario son bienvenidos.


UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS E.A.P. DE CIENCIAS BIOLÓGICAS\nDeterminación de biotoxina marina veneno paralizante\nde molusco en Aulacomya ater “choro común” y\nArgopecten purpuratus “concha de abanico”\nprovenientes del litoral central peruano\nJulio Manuel Reyes Chavez\nÍNDICE Pagina RESUMEN i ABSTRACT ii ABREVIATURAS III LISTA DE TABLAS IV LISTA DE FIGURAS V I. INTRODUCCIÓN 1\n2.1. Origen de las biotoxinas Marinas 3\n2.2. Veneno Paralizante de Moluscos (VPM) 4\n2.3. Estructura y propiedades químicas de VPM 6\n2.4. Metabolismo de VPM en moluscos bivalvos 6\n2.5. Toxicología 8\n2.5.1. Mecanismos de acción 8\n2.5.2. Toxicidad en modelos animales 9\n2.5.3. Toxicidad en seres humanos 11\n2.5.4. Síntomas y tratamiento 12\n2.6. Determinación de Veneno Paralizante de Moluscos 14\n2.6.1. Bioensayos 14\n2.6.2. Ensayos in vitro. 15\n2.6.3. Análisis Químico 17\n2.6.3.1. Cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) 17\n2.6.3.2. Espectrometría de masas 18\n2.7. Distribución mundial y situación actual en el Perú 19\nIII. HIPÓTESIS Y OBJETIVOS 26\n3.2. OBJETIVOS GENERALES 26\n3.2.1. OBJETIVOS ESPECÍFICOS 26\nIV. MATERIAL Y MÉTODOS 27\n4.1. Lugar de muestreo 27 4.2. Materiales 28 4.2.1. Material Biológico 28 4.2.1.1. Moluscos bivalvos 28 4.2.1.2. Ratones Swiss 28 4.2.1.3. Estandar de Saxitoxina 28\n4.2.2. Datos sobre Fitoplancton Potencialmente Tóxico 28\n4.3. Metodología . 29\n4.3.1. Muestreo de moluscos bivalvos 29\n4.4. Determinación de Veneno Paralizante de Moluscos 30\n4.4.1. Preparación de la curva patrón y cálculo del Factor de Conversión 30\n4.4.2. Preparación de la muestra 31\n4.4.3. Extracción de la toxina 31\n4.4.4. Bioensayo en el ratón 31\n4.4.5. Cálculo de la toxicidad de VPM 31\n4.5. Diseño y Análisis estadístico de los resultados 32\n5.1. Estandarización del Bioensayo 33\n5.2. Muestras ensayadas 34\n5.3. Datos sobre Fitoplancton Potencialmente Tóxico 34\nVI. DISCUSIÓN 54\nVIII. RECOMENDACIONES 59\nLa Biotoxina Marina Veneno Paralizante de Moluscos (VPM) causa el síndrome denominado envenenamiento por consumo de mariscos, y se origina cuando este último se alimenta de especies de dinoflagelados y cianobacterias que producen dichas toxinas durante las Floraciones Algales Nocivas (FAN). El Servicio Nacional de Sanidad Pesquera (SANIPES), es la entidad encargada de monitorear la presencia de esta toxina en productos hidrobiológicos y de esta manera garantiza la calidad sanitaria en el cultivo, extracción y comercialización principalmente de mariscos de exportación. El objetivo de la presente investigación fue determinar la presencia de la biotoxina VPM en Aulacomya ater (choro común) y Argopecten purpuratus (concha de abanico) comercializados en el terminal Pesquero de Ventanilla y el Desembarcadero Pesquero Artesanal de Ancón. Durante 21 semanas (octubre 2008 – marzo 2009) se proceso muestras de moluscos para la detección de VPM mediante, el método normalizado de la Asociación Oficial de Químicos Analistas (AOAC 959.08.2005) conocido como el método del bioensayo en ratón. De las 79 muestras analizadas, 37 eran concha de abanico y 42 choro común (Aulocomya ater), este ultimo presentó niveles detectables de VPM en tres ocasiones. Siendo la concentración máxima\ndetectada de 48 µg Saxitoxina equivalente/100 g que está por debajo del límite legal\nque en nuestro país es de 80 µg Saxitoxina equivalente/100 g de carne. En Argopecten purpuratus no se detecto la presencia de toxinas VPM o estas se encontraban por debajo del límite de cuantificación del bioensayo que en nuestro caso\nfue de 37 µg STX/100 g-1. En conclusión se puede afirmar que existe un riesgo\nostensible para la salud del consumidor debido a la presencia de las toxinas VPM en muestras de moluscos comercializados en el mercado local.\nPalabras clave: Saxitoxina, Aulocomya ater, Argopecten purpuratus, bioensayo en ratón, biotoxinas marina\nThe Marine Biotoxin Paralytic Shellfish Poison (PSP) causes syndrome called, poisoning seafood consumption, and is caused when the latter feeds of dinoflagellates and cyanobacteria species that produce these toxins during the Harmful Algal Blooms (HABs). SANIPES (Servicio Nacional de Sanidad Pesquera), is in charge of monitoring the presence of this toxin in seafood products guaranteeing sanitary quality in the culture, harvesting and marketing of seafood export mainly. The aim of this research was to determine the presence of PSP in Aulacomya ater (common mussel) and Argopecten purpuratus (scallop) marketed in the “Terminal Pesquero de Ventanilla” and “Desembarcadero Pesquero Artesanal de Ancón”. For 21 weeks (October 2008 - March 2009) were processed shellfish samples for the detection of PSP by the standard of the Association of Official Analytical Chemists (AOAC 959.08.2005) known as the mouse bioassay method. Of the 79 samples tested, 37 were scallops and 42 common mussel, the latter showed detectable levels of VPM three times. The maximum concentration detected was 48 ug eq. Saxitoxin /100 g which is below the legal limit, which in our country is 80 ug eq. Saxitoxin/100 g of meat. In Argopecten purpuratus was not possible to detect PSP or these were below the quantification limit of the bioassay which in our case was 37 ug eq. STX/100 g. In conclusion, we can say that there is an ostensible risk to consumer health due to the presence of toxins PSP in shellfish samples sold in the local market.\nKeywords: Saxitoxin, Aulocomya ater, Argopecten purpuratus, mouse bioassay, marine biotoxins.\nANZFA Autoridad Alimentaria de Nueva Zelanda y Australia\nCE Concejo Europeo\nCEFAS The Centre for Enviroment, Fisheries and Aquaculture Sciences UK\nCERPER Certificaciones del Perú S.A\nCRLMB Laboratorio Comunitario de Referencia de Biotoxinas Marinas de la\nDL50 Dosis letal 50\ndcneoSTX Decarbamoil neosaxitoxina\ndcSTX Decarbamoil saxitoxina\nEN Envenenamiento Neurotóxico\nFAN Floraciones Algales Nocivas\nFC Factor de Conversión\nFD Factor de Dilución\nFTP Fitoplancton potencialmente tóxico\nISP Instituto de Salud Pública de Chile\nITP Instituto Tecnológico Pesquero del Perú\nSANIPES Servicio Nacional de Sanidad Pesquera\nSM Solución Madre\nStx eq Saxitoxina equivalente\nTm Tiempo de muerte\nUPRSIG Unidad De Percepción Remota y Sistemas De Información Geográfica\nURC Unidad Ratón Corregidas\nUV-LV Ultravioleta-Luz Visible\nVAM Veneno Amnésico de Moluscos\nVCP Veneno Ciguatérico de Pescado\nVDM Veneno Diarreico de Moluscos\nTabla 1. Toxinas marinas síntomas y microalgas relacionadas. 03\nTabla 2. Estructura de Toxinas VPM. 07\nTabla 3. Toxicidad aguda de la STX en ratones. 09\nTabla 4. Toxicidad relativa de VPM en ratón. 10\nTabla 5. Síntomas clínicos causados por VPM. 13\nTabla 6. Principales especies microalgales asociada a eventos tóxicos en el 24\nCono Sur Americano. Tabla 7. Eventos VPM en el Perú 2004-2009. 25\nTabla 8. Cálculo del Factor de Conversión (FC) 1era sesión de trabajo. 36\nTabla 9. Cálculo del FC dilución estándar 0,416 µg/mL. 37\nTabla 10. Cálculo del FC dilución estándar 0,400 µg/mL. 37\nTabla 11. Cálculo del FC dilución estándar 0,384 µg/mL. 38\nTabla12. Cálculo del FC 1era sesión de trabajo (repetición). 39\nTabla 13. Cálculo del FC dilución estándar 0,416 µg/mL (repetición). 40\nTabla 14. Cálculo del FC dilución estándar 0,400 µg/mL (repetición). 40\nTabla 15. Cálculo del FC dilución estándar 0,384 µg/mL (repetición). 41\nTabla 16. 1er Cálculo parcial del FC. 42\nTabla 17. 2do Cálculo parcial del FC. 42\nTabla 18. Cálculo del FC final y límite de cuantificación. 42\nTabla 19. Toxinas VPM en Argopecten purpuratus (concha de abanico). 43\nTabla 20. Toxinas VPM en Aulacomya ater (choro común). 44\nTabla 21. Fitoplancton potencialmente tóxico, en la zona de extracción 46\nde Ancón. Tabla 22. Fitoplancton potencialmente tóxico en la zona de extracción de 47\nTabla 23. Fitoplancton potencialmente tóxico en la zona de extracción de. 49 Samanco.\nFigura 1. Concentraciones de microalgas que causan toxicidad en 05 Moluscos.\nFigura 2. Transporte de muestras al laboratorio. 29\nFigura. 3. Presencia de toxinas VPM en Aulacomya ater comercializados 45 en la localidad de Ancón.\nFigura 4. Fitoplancton potencialmente tóxico relacionado a toxinas 51\nVPM en Ancón.\nFigura 5. Fitoplancton potencialmente tóxico relacionado a toxinas 52\nVPM en Huacho.\nFigura 6. Fitoplancton potencialmente tóxico relacionado a toxinas 53\nDentro de las biotoxinas marinas conocidas hasta la fecha, el Veneno Paralizante de Moluscos (VPM) que es el causante del síndrome de envenenamiento paralizante por consumo de moluscos, es el más peligroso. Estas toxinas son producidas por diversas especies de dinoflagelados del género Alexandrium y especies como Pyrodinium bahamense var. compresum y Gymnodinium catenatum, así como por algunas\ncianobacterias como Anabaena circinalis, Aphanizomenon flos-aquae,\nCylindrospermopsis raciborskii y Lyngbya wollei (Hernández y Gárate, 2006).\nDe las miles de especies de microalgas marinas conocidas, aproximadamente 300 pueden ocasionar las llamadas floraciones algales conocidas como “marea rojas”, pero solo entre 70 y 80 especies pueden tener la capacidad de producir toxinas, en este caso estas floraciones son conocidas como Floraciones Algales Nocivas o FAN (Hallegraeff et al., 2003).\nAmérica del Sur registra floraciones algales relacionadas a casos de Veneno Paralizante de Moluscos en Argentina, Brasil, Chile, Uruguay y Venezuela. En todos estos países se han registrado casos fatales por consumo de moluscos con concentraciones elevadas de esta toxina, siendo un problema de salud pública en toda la región (FAO, 2005).\nEn nuestro país, la alimentación en base al consumo de moluscos bivalvos es muy importante, algunos son más accesibles a los sectores económicos de escasos recursos, como es el caso del “choro” (Aulacomya ater). Un tanto diferente es la situación de la “concha de abanico” (Argopecten purpuratus) que debe su mayor importancia al ser exportada en gran cantidad, puesto que tiene un excelente mercado en los países de la Unión Europea, por estos motivos el estudio de las VPM en estas dos especies es de suma importancia (Quiñones, 2007).\nLa falta de información entre los profesionales de la salud sobre esta problemática es preocupante; no se tienen registros médicos de este tipo de intoxicaciones en humanos, probablemente debido a que se desconoce el cuadro clínico y no se diagnostican los casos, pasando de manera desapercibida como otro padecimiento; pues los síntomas de vómitos y nauseas son comunes a otras enfermedades de transmisión alimentaria (ETA) y los síntomas graves como parálisis e hipotensión pueden ser confundidos por envenenamiento causado por pesticida (Hernández y Gárate, 2006).\nLos métodos de detección no son muy difundidos y solo son desarrollados por unos cuantos laboratorios privados y uno estatal, el del Instituto Tecnológico Pesquero del Perú (ITP). El método oficial que se utiliza en la actualidad es el bioensayo en ratón de la “Asociación Oficial de Químicos Analistas” (AOAC 959.08.2005). Por otro lado, el Instituto del Mar de Perú (IMARPE) realiza investigaciones en cuanto a Floraciones Algales Nocivas (FAN) pero se limita al estudio biológico de las especies microalgales y no a las toxinas que éstas producen ni al recurso (Sánchez et al., 2008).\nEl estudio de las biotoxinas marinas tiene un impacto desde el punto de vista de la prevención, puesto que un episodio tóxico importante traería a nuestro país no solo pérdidas económicas sino también podría causar pérdidas humanas como ha ocurrido en países vecinos (Garcia et al., 2005). Si tenemos presente que Perú ya registró presencia de toxinas VPM en nuestro litoral, el cual ocasionó el cierre de algunas áreas de cultivo durante los últimos años, además que la vigilancia de los moluscos que se comercializan en el mercado interno es casi nula (SANIPES, 2010a). Este contexto nos lleva a plantear este trabajo que pretende determinar la presencia del veneno paralizante de moluscos (VPM) en Aulacomya ater (choro) y Argopecten purpuratus (concha de abanico) expendidos en mercados formales e informales del Departamento de Lima entre los meses de octubre 2008 a marzo 2009.\nII. MARCO TEÓRICO. 2.1. Origen de las biotoxinas marinas\nLas algas planctónicas microscópicas son de suma importancia para los moluscos bivalvos que se alimentan por filtración, así como para las larvas de crustáceos y peces con escamas de importancia comercial, siendo la base de la red trófica. De las 5000 especies de microalgas marinas existentes, aproximadamente 300 pueden ocasionar las denominadas “mareas rojas”, pero no todas son sospechosas de tener la capacidad de producir toxinas; en este caso estas floraciones son conocidas como Floraciones Algales Nocivas o FAN (Tabla 1) (Moestrup et al., 2008).\nTABLA 1. Toxinas marinas, síntomas y microalgas relacionadas\nLas floraciones algales nocivas aparecen de manera espontánea, ni el momento en que aparece una floración, ni la densidad de la población es predecible; puesto que influyen, sobre el fenómeno circunstancias climáticas e hidrográficas. Una FAN comienza como una pequeña población de dinoflagelados tóxicos en fase vegetativa o como quiste (hipnozigote) en el sedimento de fondo. Ciertas condiciones climáticas y medioambientales, como por ejemplo cambios en la salinidad, un aumento de la temperatura del agua, de los nutrientes y de la radiación solar fomenta la germinación de los quistes, que ingresan en un estado vegetativo, en el que se reproducen rápidamente. Una vez desencadenada la floración, se ingresa en una fase de crecimiento exponencial de la población. El mayor porcentaje de células tóxicas se registra generalmente en la mitad de esta fase de crecimiento exponencial; luego ocurre una disminución de nutrientes del agua y dióxido de carbono limitando el crecimiento de la población. Se ingresa a una fase estacionaria y el agua adquiere el color rojo, que se conoce como marea roja. Las condiciones ambientales desfavorables ocasionan la destrucción de la población, los dinoflagelados forman quistes de resistencia que se sedimentan en el fondo hasta la próxima floración (Mons et al., 1998).\nLos principales grupos de toxinas marinas o venenos microalgales descritos hasta la fecha y que afectan directamente al hombre son: el Veneno Paralizante de Moluscos (VPM), Toxinas Lipofílicas de Molusco (VDM), Veneno Amnésico de Molusco (VAM), Ciguatera o Veneno Ciguatérico de Pescado (VCP), Veneno neurotóxico (NP) y Microcystinas, producidas por algas verdes–azuladas (cianobacterias) en aguas salobres y lacustres (Yasumoto y Murata, 1993).\n2.2. Veneno paralizante de moluscos (VPM)\nLa razón por la cual ciertas microalgas se tornan tóxicas no están resueltas del todo; en el caso de las toxinas VPM se ha propuesto una relación entre la presencia de\nbacterias y la toxicidad de algunos dinoflagelados, como en el caso de Alexandrium catenella, comúnmente responsable de la presencia de toxina VPM (Uribe y Espejo, 2003). Estas afirmaciones originan discrepancias con otras investigaciones sobre este mismo punto (Martins et al., 2003). En general la concentración celular necesaria de microalgas tóxicas para que los moluscos que se alimentan de ellas, sobrepasen los niveles peligrosos de toxina no está determinada. Dependiendo de la especie; algunas microalgas producen toxinas tan potentes, que pueden resultar dañinas aunque no alcancen concentraciones celulares elevadas que coloreen el agua (Figura 1) (Reguera, 2002).\nFigura 1. Concentraciones de microalgas que causan toxicidad en moluscos. VAM: Veneno amnésico de molusco; VPM: Veneno paralizante de moluscos; VDM: Veneno diarreico de moluscos. (Reguera, 2002)\nEn el mundo, las toxinas VPM son responsables de al menos 2000 casos de intoxicación paralitica por mariscos por año, con una mortalidad del 15 % (Hallegraeff et al., 2003). En los últimos 20 años se ha registrado un aumento de las intoxicaciones causadas por toxinas VPM. Sin embargo, aun no se sabe si el aumento en la frecuencia, intensidad y distribución geográfica es la consecuencia de los progresos en\nmariscos o a un real incremento de las VPM, relacionados a FAN, causadas por la eutrofización y cambios climatológicos (Hallegraeff et al., 2003).\n2.3 Estructura y propiedades químicas de toxinas VPM\nEl grupo de toxinas que conforman las VPM están básicamente constituidas por un núcleo tetrahidropurínico. Todas ellas son análogas a la Saxitoxina (STX), la primera toxina tipificada y la más estudiada. Se han descrito más de 26 derivados de la STX (FAO, 2005). Estructuralmente, en función de los radicales, se pueden establecer 4 grupos (Tabla 2). Asi: toxinas carbamato (Carbamoil Toxinas), toxinas N-sulfocarbamatos (N-sulfocarbamoil Toxinas), toxinas decarbamatos (Decarbamoil\nToxinas) y toxinas deoxidecarbamatos (Carbamoil-N-hidroxi Toxina). (Lagos, 2002).\nLa actividad tóxica de la Saxitoxina reside en el grupo cetona hidratada o dihidroxi del anillo heterocíclico de cinco miembros, actividad que desaparece cuando estos grupos se transforman en monohidroxi por reducción catalítica con hidrógeno. Este grupo hidroxilo activo permite preparar distintos derivados de la STX. Las toxinas VPM son termoestables en pH ácido (salvo los componentes N-sulfo-carbamatos), pero inestables en condiciones alcalinas, oxidándose fácilmente (Mons et al., 1998). Los diferentes grupos de toxinas VPM responden de manera diferente, bajando su potencia o incrementándola al someterlas a temperaturas de 90 °C a 130 °C y pH de 3 a 7. Lo cual indica que un tratamiento térmico para su eliminación no siempre será eficaz y por ende no es acertado (Indrasena et al., 2000).\n2.4. Metabolismo de las toxinas VPM en moluscos bivalvos\nCiertas especies de moluscos bivalvos son capaces de efectuar cambios en la molécula de la toxina, por ejemplo, la decarbamoilización enzimática que ocurre en Protothaca staminea; otro caso, es el molusco Mesodema mactroides, donde se estudió la biotransformación de la Gonyalautoxina (GTX) y/o neo-STX, de poca toxicidad, en la molécula de STX de mayor toxicidad aumentando la toxicidad total en\nel bioensayo en ratón (Mons et al., 1998). En algunas especies las biotransformaciones casi no ocurren como en el caso de Mya arenaria y Mitylus edulis (Bricelj y Shumway, 1998).\nTabla 2. Estructura de Toxinas VPM (Hernández y Gárate, 2006)\nGrupo de Toxina R1 R2 R3 Carbamatos (R4: OCO-NH2 ) STX H H H NEO OH H H GTX1 OH OSO3 H GTX2 H OSO3 H GTX3 H H SO3 GTX4 OH H SO3 N-Sulfocarbamatos (R4: OCONH-SO3-) B1 H H H B2 OH H H C3 OH OSO3 H C1 H OSO3 H C2 H H SO3 C4 OH H SO3 Decarbamatos (R4: OH) dcSTX H H H dcNEO OH H H dcGTX1 OH OSO3 H dcGTX2 H OSO3 H dcGTX3 H H SO3 dcGTX4 OH H SO3 Deoxidecarbamatos (R4 :H) doSTX H H H doGTX2 H OSO3 H doGTX3 H H SO3 STX : Saxitoxina NEO : Neo-Saxitoxina GTX : Gonyautoxina Dc : Decarbamatos Do : Deoxidecarbamatos SO3 : Trioxido de Azufre. R : Radical\nEn cuanto a la eliminación de las toxinas VPM. Los bivalvos se clasifican según la cinética de la eliminación de las toxinas, en dos grandes grupos: los que eliminan las toxinas lentamente (por ejemplo Argopecten purputatus, Saxidomus giganteus, Spisula solidissima, Placopecten magellanicus, Patinopecten yessoensis) y los que lo hacen rápida y moderadamente como por ejemplo los géneros Aulacomya y Mitylus. En algunos moluscos se puede explicar la cinética de eliminación de las toxinas, siguiendo el modelo bifásico de dos compartimentos, es decir; durante la acumulación, la toxicidad de las vísceras es generalmente entre dos y cinco veces mayor que la de los demás tejidos; siendo los menos tóxicos los el pie y el músculo aductor. Sin embargo, la eliminación de toxinas de las vísceras ocurre más rápidamente que los demás tejidos blandos (musculo, pie, manto, etc.) causando, una disminución uniforme de su contribución a la carga de toxinas total. Esto ocurre porque los órganos digestivos concentran las toxinas en primera instancia, al alimentarse el molusco por filtración, de la misma forma los órganos digestivos pierden la toxicidad acumulada por efecto de la depuración al seguir alimentándose (FAO, 2005).\n2.5.1. Mecanismos de Acción\nLas toxinas VPM alteran específicamente el transporte del ion sodio, pues son capaces de unirse fuertemente al canal de sodio dependiente del voltaje, que es una proteína de membrana, implicada en la propagación del potencial de acción, que está presente en casi todas las células de los mamíferos y también en invertebrados como algunos moluscos bivalvos (Hernández y Gárate, 2006).\nLa mayoría de los moluscos bivalvos son relativamente insensibles a las toxinas VPM. Esto se debe a que muchos de ellos cuentan con nervios y músculos operados principalmente por canales de calcio activados por voltaje, en tanto que las STX y análogos bloquean solo los canales de sodio con mucha afinidad. Esto permite a los\nmariscos continuar alimentándose y convertirse en muy tóxicos. El molusco bivalvo Mytilus edulis, por ejemplo, puede acumular más de 80 μg STX en menos de una hora debido a su gran tolerancia y a que no deja de alimentarse de algas tóxicas (Mons et al., 1998).\nLos canales de sodio dependientes de voltaje tienen un papel muy importante en la generación del potencial de acción, si suficientes canales se abren cuando hay un cambio del potencial de membrana, un pequeño flujo de iones sodio se mueven hacia dentro de la célula (a favor de su gradiente electroquímico) despolarizando la célula. Estos canales participan en la fase ascendente del potencial de acción, permiten la despolarización de la neurona y de los miocitos. La STX y varias otras toxinas VPM bloquean el canal de sodio dependiente del voltaje, disminuyendo o anulando la propagación del potencial de acción, pero sin afectar el canal de potasio, dependiente de voltaje, directamente. El tiempo promedio de bloqueo del canal de sodio depende de la velocidad de disociación y no de la concentración de toxinas, (Mons et al., 1998). 2.5.2. Toxicidad en modelos animales\nEl ratón es relativamente sensible a las toxinas VPM y es el modelo animal en cual se han realizado el mayor numero de estudios sobre el tema; comparado con otras especies animales, como mamíferos y aves la sensibilidad es variada. (Tabla 3).\nTabla 3. Valores de dosis letal 50 (DL50) por vía oral en especies animales para\nSaxitoxina (Mons et al., 1998)\nEspecie animal DL50 en μg/kg de peso corporal\nMus musculus (Ratón laboratorio). 260-263\nRattus norvegicus (Rata laboratorio). 277-800\nFelis catus (Gato común). 254-280\nOryctolagus cuniculus (Conejo). 181-200\nCanis lupus familiaris (Perro). 180-200\nCavia porcellus (Cobayo). 128-135\nSe ha estudiado la acción biológica de al menos el 50 por ciento de los análogos naturales y se han establecido la potencia relativa de estos análogos en ratones (Tabla 4).\nLos análogos estudiados muestran que los mecanismos celulares de acción son básicamente los mismos. Algunas toxinas de las VPM como las del grupo de las N-sulfocarbamoil son menos tóxicas que otras; pero en condiciones ácidas fácilmente se convierten en compuestos del grupo carbamoil y en algunos casos la toxicidad aumenta hasta 40 veces, la conversión ocurre en jugos gástricos artificiales de ratón y de rata con un pH de 1,1; pero no en el jugo gástrico natural tamponado a un pH de 2,2 (Mons et al., 1998).\nTabla 4. Toxicidad relativa de Saxitoxina y sus análogos (Mons et al., 1998)\nToxina Toxicidad Relativa\nSTX 1 NeoSTX 0,5 – 1,1 GNTX2/3 a 0,39/1,09 – 0,48/0,76 GNTX1/4 a 0,8/0,33 – 0,9/0,9 DcSTX 0,43 dcneoSTX 0,43 B1 0,07 – 0,17 B2 0,07 – 0,09 C1 a C4 <0,01 – 0,14 dcGNTX1 a dcGNTX4 0,18 – 0,45\nEn la intoxicación con VPM, los efectos en el sistema respiratorio son la causa de la muerte. Esta ocurre por asfixia debido a una parálisis progresiva de los músculos respiratorios (Halstead et al 1984). En experimentos con animales (gatos y conejos) una dosis entre 1 y 2 μg STX/kg de peso por vía intravenosa, reduce la frecuencia respiratoria, lo que se refleja como una disminución en amplitud y velocidad. Un aumento de la dosis a 4 o 5 μg STX/kg de peso resulta en dificultades respiratorias serias. La muerte se previene mediante respiración artificial. Si la dosis no es excesiva puede ocurrir que la respiración se restablezca espontáneamente. En los experimentos con animales (gatos y conejos) sólo se observó parálisis periférica por efectos directos en los músculos del sistema respiratorio (Andrinolo et al 1999). No se observa inhibición del centro respiratorio del sistema nervioso y los potenciales de acción se envían a los músculos del centro de las costillas y del diafragma. Sin embargo, otros investigadores como Acres y Gray (1978) sugieren una influencia central y no se puede descartar que haya efectos centrales en las neuronas respiratorias. A menudo, la parestesia y la sensación de liviandad están relacionadas con un efecto central, aunque también pueden ser ocasionados por efectos periféricos en el sistema nervioso (Mons et al., 1998).\n2.5.3. Toxicidad en seres humanos\nLa concentración causante de las intoxicaciones por VPM en los seres humanos varía considerablemente. Esto se debe principalmente a diferencias de sensibilidad individuales y a oscilaciones del método de determinación. Se observaron síntomas leves con una ingesta oral entre 144 y 1 660 microgramos equivalente de Saxitoxina por persona (μg eq STX/p) e intoxicaciones fatales por ingerir entre 456 y 12 400 μg eq de STX/p, calculado a partir de los restos de mejillones tóxicos y considerando que estos valores pueden presentar grandes variaciones. En algunos casos, la ingesta oral de 300 μg de toxinas PSP por persona causó la muerte, mientras que en otros casos\nse observó la ausencia de síntomas tóxicos luego de una dosis oral de 320 μg de toxinas por persona (Mons et al., 1998).\nSegún la “Autoridad Alimentaria de Nueva Zelanda y Australia” (ANZFA), en los seres humanos entre 120 y 180 μg de STX/p de toxinas VPM pueden ocasionar síntomas leves, entre 400 y 1060 μg de STX/p pueden ocasionar síntomas más severo y en algunos casos causar muerte; pero dosis entre 2000 y 10000 μg STX/persona muy probablemente sean fatales en la mayoría de los casos (FAO, 2005). La tasa de mortalidad por VPM es muy variable. En brotes recientes en América del Norte y Europa Occidental, con más de 200 personas afectadas, no se registró ninguna muerte. Sin embargo, la tasa de mortalidad de brotes similares en Asia Sudoriental y en América Latina es del 2 al 14 por ciento debido a que las intoxicaciones ocurrieron a menudo en áreas rurales, donde los habitantes y médicos locales nunca habían observado este tipo de envenenamiento (Mons et al., 1998).\n2.5.4. Síntomas y tratamiento\nLos síntomas del VPM inician aproximadamente de 30 minutos a 3,3 horas de consumir el molusco contaminado. Los primeros síntomas que se presentan son: hormigueo en dedos de manos y pies, dolor de cabeza y mareo; adormecimiento de lengua y labios, esta sensación se esparce a la cara y cuello. Estos efectos son claramente debidos a la absorción local de las toxinas VPM a través de la membrana de la mucosa oral. Algunas veces puede ocurrir náusea y vómito en etapas tempranas. En los casos de envenenamiento moderado, la parestesia progresa hacia los brazos y las piernas, acompañadas de debilidad motora. Una sensación de flotar y ligereza son frecuentes también (Tabla 5). La base de este disturbio no es clara, pero es probablemente atribuido a alguna interferencia con señales propioceptivas aferentes como la conducción de impulsos en nervios sensoriales con mecanismos centrales. Manifestaciones cerebelosas como ataxia, incoordinación motora y dismetría son frecuentes. Los reflejos pueden estar ausentes o normales y la mayoría de los\npacientes están calmados y conscientes. Otros efectos del sistema nervioso autónomo que pueden ocurrir son salivación excesiva, taquicardia y diaforesis (Hernández y Gárate, 2006), (Mons et al., 1998).\nTabla 5. Síntomas clínicos causados por el veneno paralizante de moluscos (Hernández y Gárate, 2006)\nIntoxicación leve Intoxicación moderada Intoxicación severa\nNiveles de STX* 80-120 µg. 120-180 µg. 300 – 1200 µg.\nNáusea y vómito Insuficiencia respiratoria. Pupilas dilatadas no reactivas\nDebilidad muscular Parálisis músculos faciales. Distonía profunda\nParestesia en labios Reflejo nauseoso ausente. Parálisis respiratoria\n2.6. Determinación de Veneno Paralizante de Moluscos (VPM). 2.6.1. Bioensayos\nPara la detección de las VPM podemos encontrar dos tipos de bioensayos los llamados ensayos in vivo, como el bioensayo en ratón y los ensayos in vitro como los ensayos en corte de hipocampo, ensayos con células nerviosas e inmunoensayos enzimáticos (FAO, 2005 ).\nEl método del bioensayo en ratón, es el ensayo in vivo más usado en los programas de control alrededor del mundo; fue desarrollado por Sommer y Meyer en 1937 (Gibbard y Naubert, 1948). Posteriormente la Asociación de Químicos Analíticos Oficiales (AOAC) lo refinó y normalizó para contar con un método rápido y confiable para medir el contenido de toxinas VPM totales (AOAC, 2000). El procedimiento consiste en inyectar 1 mL de extracto ácido del marisco a ratones de 20 gramos y registrar el tiempo transcurrido hasta la muerte del animal. Si se trata de extractos muy\ntóxicos, sediluyen de forma de asegurar que la muerte ocurra en un período de entre\ncinco y 15 minutos.\nLa toxicidad de la muestra se expresa en unidades ratón (UR) y se calcula según las\ncurvas de respuesta a las dosis obtenidas con estándares de STX. Una unidad ratón es equivalente a 0,18 μg de STX aproximadamente con variaciones aceptables de hasta el 20% y se define como la cantidad de toxina inyectada por vía intraperitoneal que causa la muerte de un ratón de 20 g en 15 minutos (FAO, 2005).\nAlgunas sustancias pueden causar interferencia en la determinación de la concentración como, por ejemplo, un elevado contenido de sal en la muestra, produce interferencias al inhibir los efectos tóxicos; mientras que la presencia de altas concentraciones de zinc en los extractos, puede producir la muerte en ratones con síntomas muy similares a los producidos por la toxina; pero en tiempo de muerte (Tm) por encima de los 15 minutos. (Fernandez et al., 2002).\nLas dificultades prácticas que presenta este método son: se necesita contar con una colonia de ratones de entre 19 y 22 g de peso; el límite de detección del ensayo varía según la cepa; la relación entre el tiempo de muerte y la concentración de toxinas no es lineal; la determinación exacta del tiempo hasta la muerte es muy trabajosa y conlleva el sacrificio de un gran número de animales.\nA pesar de las dificultades mencionadas, el bioensayo en ratón se utiliza para cuantificar la presencia de toxinas VPM en diversas especies de moluscos, crustáceos y equinodermos, siendo el método oficial en la mayoría de los países que cuentan con reglamentación para toxinas VPM en estos productos marinos. Anualmente se desarrollan ensayos interlaboratorios con el fin de garantizar la calidad de los bioensayos como los que realiza el Laboratorio Comunitario de Referencia de Biotoxinas Marinas (CRLMB) de la Unión Europea y el Instituto de Salud Pública de Chile (ISP) en ambos casos los resultados de los participantes se comparan con el valor de referencia, se calcula la media y la desviación estándar descartándose los resultados anómalos es decir aquellos que superen 3 veces la desviación estándar. Se consideran concordantes aquellos que estén dentro de este rango, de manera que se puede evaluar si el laboratorio participante obtiene resultados confiables (Delgado, 2009; AESAN, 2010).\n2.6.2. Ensayos in vitro\nPara la detección de las toxinas VPM podemos encontrar dos tipos de ensayos in vitro, los ensayos funcionales (ensayos en corte de hipocampo y ensayos en células nerviosas) y los no funcionales (Inmunoensayos enzimáticos) (FAO, 2005).\nPara los ensayos en corte de hipocampo se utilizan preparaciones in vitro de cortes de hipocampo de rata como una forma de detectar, rápida y específicamente, la presencia de toxinas de algas marinas, como la saxitoxina (STX), en tejido de\nespecíficas de cada toxina siendo útiles para detectar y analizar las biotoxinas marinas en tejido de mariscos contaminados. En los ensayos en células nerviosas se, estudia el mecanismo mediante el cual las toxinas VPM alteran el funcionamiento celular. Las toxinas se unen a los canales de sodio de las membranas de las células nerviosas, alterando la despolarización normal. La toxicidad es proporcional a la cantidad de toxina unida radiomarcada en una preparación de cerebro de rata. Otros ensayos utilizan células de neuroblastoma de ratón con adición de ouabaina con veratridina, que aumenta la entrada del ión sodio, estas células se hinchan y se lisan; la STX, al bloquear los canales de sodio, inhibe la actividad de estos dos compuestos. La fracción de células no afectadas por la ouabaina y la veratridina es directamente proporcional a la concentración de STX y de sus análogos (FAO, 2005). El principal problema para la aplicación de ensayos in vitro funcionales en los programas de control sanitario es la escasa disponibilidad comercial de toxinas puras y de materiales contaminados de concentración certificada, lo que dificulta los procesos de validación de los ensayos y su posterior implementación en los laboratorios de control (Fernandez et al., 2002).\nEl principal inconveniente para adoptar los ensayos in vitro no funcionales como los ensayos inmunológicos en el control sanitario de las biotoxinas es la falta de respuesta de algunas toxinas, el desconocimiento de las reacciones cruzadas y la dificultad de obtener una correlación satisfactoria entre la reacción inmunológica y la toxicidad real de las muestras; la ventaja de estos ensayos esta, en su fácil aplicación, por ejemplo en la forma de bastoncillos (sticks), hacen que puedan estos ser fácilmente utilizados para hacer análisis cualitativos o semicuantitativos en el campo, sin necesidad de trasladar las muestras al laboratorio (Fernandez et al., 2002).\nEn la actualidad existen sistemas de detección para toxinas VPM, llamados también Kits de detección, comercialmente disponibles como por ejemplo el «Rida-screen Saxitoxin» (R-BiopharmGmbH, Darmstadt, Alemania) y el Jellett rapid testing kit for\nPSP (Jellet Biotek). El primero, el kit de RIDA-screen Saxitoxin es un ELISA directo\ncompetitivo. El límite de detección del ensayo para la saxitoxina es de 2 µg kg-1. La\nreactividad cruzada es buena para STX, GTX2 y GTX3 siendo muy pobre en el caso de neo STX, GTX1, GTX4 y toxinas decarbamoiladas, de manera que en el caso de que estas toxinas estén presentes en las muestras se produce una subestimación de la toxicidad. En el otro sistema el “Jellett rapid testing kit for PSP” para la detección de VPM está basado en técnicas de inmunocromatografía de flujo lateral y contiene una mezcla de anticuerpos, producidos a partir de diferentes análogos. Está diseñado en un formato muy sencillo y fácil de usar, para ser utilizado como método de screening, proporcionando una indicación cualitativa (positivo/negativo) a la presencia de toxinas VPM. La STX, GTX 2-3, GTX5 y dc STX son detectables en concentraciones por debajo del límite regulatorio de 80 μg STX eq. /100g. En el caso de Neo- STX, GTX1 y GTX4, su sensibilidad es muy pobre. Debido a las diferentes afinidades de la mezcla de anticuerpos hacia los análogos individuales y dependiendo del perfil tóxico, el límite de detección es variable, por esta razón el CEFAS (The Centre for Environment, Fisheries and Aquaculture Sciences, UK) dejó de utilizarlas de manera oficial para sus programas de monitoreo durante el 2007 (CEFAS, 2007).\n2.6.3 Análisis Químicos\n2.6.3.1 Cromatografía liquida de alta eficiencia (HPLC)\nLa cromatografía líquida de alta eficiencia HPLC (del inglés High performance liquid chromatographic) es la técnica de determinación para VPM más utilizada, además del bioensayo en ratón. Las STX y sus análogos no tienen cromóforos y por tanto no puede ser detectado con detectores de luz visible, luz ultra violeta (UV-LV) o un detector de fluorescencia (FLD); es necesario convertirlas por un proceso llamado derivatización en una molécula que pueda serlo. Existen 2 metodologías, ambas convierten a un producto fluorescente a las toxinas (derivatización) pudiendo ser\nPre-Columna o Post-Pre-Columna, dependiendo si se derivatiza antes o después de la corrida cromatográfica. Para el cálculo final de cantidad de toxina contenida en la muestra cada análogo se multiplica por un factor de Toxicidad relativa con respecto a la STX, esto hace comparable este resultado con el calculado por el bioensayo en ratón. En la actualidad existen dos métodos oficiales, el CEN 14526 (método pre-columna) y el CEN 14194 (método post columna), cada uno con sus ventajas y desventajas; pero en ambos casos estos tienen mayor sensibilidad (10 a 80 ug/Kg) que el bioensayo en ratón (alrededor de 300 ug/Kg). El inconveniente es que se debe contar con cada uno de los estándares correspondientes a los análogos de la STX además de necesitar un personal especializado. A pesar de los descrito anteriormente, en la actualidad se considera al bioensayo en ratón como método de referencia y los métodos por HPLC como alternativos (EFSA, 2009).\n2.6.3.2 Espectrometría de masas\nLa cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) acoplada a detector de masas más conocida como LC-MS, ha sido usada para la determinación de las toxinas del grupo de la saxitoxina, sin embargo el ancho de los picos y la baja intensidad Iónica de las moléculas de los análogos de las saxitoxina, conlleva a límites de detección relativamente altos y una limitada reproducibilidad, la cual restringe el uso de esta técnica como rutina. Usando los métodos de extracción y limpieza de la muestra de la AOAC, el límite de detección para la saxitoxina está alrededor de los 100 ug STX 2HCl/ Kg. Últimamente se han realizado modificaciones en la preparación del extracto y en la preconcentración de la muestra, resultando limites de detección muchos más bajos (STX: 23-42 ug STX 2HCl/Kg). En conclusión, su ventaja está en la especificidad, la información individual de los perfiles completos para el grupo de la saxitoxinas en la muestra ensayada; además de que no se necesita derivatizar la muestra, con lo cual los perfiles de los análogos no se modifican. La desventaja esta en que, la técnica es costosa y solo se puede cuantificar algunos grupos, puesto que\nno todos los estándares se encuentran disponibles de manera comercial, falta aun validar la técnica y al igual que las técnicas del HPLC, el cálculo de la toxicidad se realiza con factores de equivalencia, para poder ser comparable al bioensayo en ratón (EFSA, 2009).\n2.7. Distribución mundial y situación actual en el Perú\nHasta 1970, sólo se tenía conocimiento de floraciones en Europa, América del Norte y Japón. Veinte años más tarde se registran a lo largo de todo el hemisferio sur, en Sudáfrica, Australia, India, Tailandia, Brunei Darussalam, Sabah (Malasia), las Filipinas y en Papua Nueva Guinea (Hallegraeff et al., 2003).\nEn Italia durante la década de los noventa, se registraron mareas rojas de manera recurrente, pero a pesar de la presencia de especies de microalgas potencialmente tóxicas, como Alexandrium spp, no se registró intoxicación de VPM en humanos. En los últimos años se ha detectado la presencia de toxinas VPM relacionadas a Alexandrium minitum y Alexandrium catenella con concentraciones superiores a 80 µg eq de STX/100g hasta 2510 µg eq de STX/100g; siendo con Portugal los países europeos con mayor concentraciones de toxinas VPM, puesto que es este ultimo donde se han registrado la mayor concentración que fue de 9145 µg eq de STX/100g en 1993 (FAO, 2005).\nEspaña, principal exportador de moluscos bivalvos a toda Europa, es donde se han desarrollado los mayores esfuerzos y estudios científicos, específicamente en la región de Galicia, donde se han reportado diversos incidentes de VPM. En 1976 moluscos procedentes de España causaron intoxicación alimentaria en Alemania, Francia, Suiza e Italia con un total de 120 personas afectadas aunque sin casos fatales. En el año 2002 ocurrieron eventos tóxicos asociados a toxinas VPM que resultaron en la prohibición de extraer bivalvos en la UE. En ciertas zonas de cultivo los niveles de\ntoxinas llegaron hasta 1170 µg eq de STX/100g; siendo relacionadas a la presencia de Alexandrium minitum, Alexandrium catenella y Gymnodinium catenatum (FAO, 2005) El continente Africano también reporta la presencia de toxinas VPM. Sudáfrica registro 17 casos a principios de los años 80, de intoxicación humana por VPM; siendo dos de ellos fatales, esto ocurrió por el consumo de Chloromytilus meridionales, con una concentración de 8400 µg eq de STX/100g (FAO, 2005). En noviembre de 1994, en Marruecos se detectó la presencia de VPM; se reportaron concentraciones de aproximadamente 6000 µg eq de STX/100g de carne en Mytilus galloprovincialis esto fue relacionado a la presencia de Gymnodinium catenatum (Taleb et al., 2003).\nEl 15 de junio de 1793 en la costa oeste de los Estados Unidos, cerca de Canadá, se registró el primer caso de intoxicación humana por consumo de mariscos, y es descrito por el capitán George Vancouver en "A Voyage of Discovery to the North Pacific Ocean, and Round the World" publicado en 1798. En Junio de 1990, se presentó un evento que alcanzó concentraciones de 244000 y 4280 μg eq de STX/g en mariscos crudos y cocidos, respectivamente; siendo las concentraciones más altas que se hayan registrado para esta parte del continente americano. Entre 1980 y 1995 la FDA documento 106 incidentes con 538 casos humanos, 32 de los cuales fueron fatales (FAO, 2005). Desde 1972, casi todos los años se producen brotes de VPM en Maine, New Hampshire y Massachussets, ya que una vez que una floración masiva introduce los quistes de Alexandrium, estos permanecen en el agua. Siendo los más importantes los cinco brotes de VPM producidos entre mayo y junio de 1994, con 12 personas afectadas, cuatro de las cuales fueron sometidas a respiración artificial, y una de ellas murió. La mayoría había ingerido moluscos de las especies Mytilus edulis o Mytilus californianus (FAO, 2005).\nEn Sudamérica (Tabla 6), al sur de Chile y Argentina, las toxinas VPM se han asociado a floraciones de A. catenella en el Canal Beagle, y a floraciones de A. tamarense en las costas del Atlántico sur, hasta Uruguay. En 1980, en la Península de Valdés se registró la primera floración tóxica de A. tamarense. Luego de este episodio se reportó la muerte de dos miembros de la tripulación de un barco por ingerir mejillones contaminados (Compagnon et al., 1998).\nChile presenta numerosos episodios de intoxicación por VPM, por ejemplo en las regiones X, XI y XII entre 1972 y 2002 se registraron 412 casos de VPM, 30 de los cuales fueron fatales al ingerir Aulacomya ater y Mytilus chilensis con toxinas VPM en niveles de 2600 y 99000 UR/100 g. Uno de los últimos eventos ocurrió en marzo de 2002 con una muerte y al menos diez casos de intoxicación por consumo de mariscos provenientes de la región de Chiloé. Los registros más altos de VPM en los mariscos coinciden con los periodos en que se registraron las mayores abundancias de Alexandrium catenella, estos corresponden a los años 1998, 2000 y 2002. El nivel máximo de toxicidad detectado en Chiloé ocurrió en el 2002 y fue de 29524 μg STX eq./100 g que es el segundo más alto en el historial de VPM en Chile, pues el más alto fue registrado en Estero Critalco en el año 1998 con 99000 μg STX eq./100 g (FAO, 2005 ; Rivera, 2009).\nEn nuestro país, el estudio de las toxinas VPM al igual que las toxinas marinas en general es muy incipiente, no se tienen registros de casos de intoxicación humana con toxinas VPM y existen pocos registros de zonas con presencia de VPM .Según SANIPES desde el 2007 hasta el 2010, se han registrado pocos eventos VPM. De los datos publicados se tienen 9 eventos importantes los cuales señalan concentraciones de hasta 151 µg STX eq. /100 g en una ocasión en la bahía de Samanco - Ancash, mientras que, en los eventos restantes alrededor de 80 µg STX eq./100; los departamentos involucrados son Ica, Lima, Ancash, La Libertad y Piura. En el departamento de Lima, exactamente en el Callao y en Ancón se produjeron en total\ndos eventos, cabe mencionar que la información obtenida no esta completamente documentada pues no se encontró, en los documentos revisados, las concentraciones de las toxinas VPM, suponiendo en este caso valores por debajo del límite reglamentario para el consumo humano. (Flores , 2009; Woolcott , 2009; SANIPES, 2010a) (Tabla 7).\nEn cuanto al estudio de microalgas tóxicas, el Instituto del Mar del Perú (IMARPE) desde hace ya varios años viene realizando monitoreos en nuestro litoral, uno de estos últimos se llevó a cabo en Chincha y Pisco en el 2005 como parte de un proyecto piloto, registrando especies como Pseudo-nitzschia, Dinophysis caudata, D. acuminata, D. tripos y D. rotundata y en forma ocasional Alexandrium (Sánchez et al., 2008).\nSe tienen registros de mareas rojas en algunas zonas de nuestro país como el caso de Lambayeque, en el cual en enero del 2004 hasta abril del 2007 ocurrieron diversos eventos de mareas rojas, pero ninguna de ellas fue producida por microalgas tóxicas, salvo la del 06 de mayo 2004 producida por Alexandrium peruvianum cuya toxigenicidad se discute puesto que se necesitan estudios de los perfiles químicos de las toxinas que produce esta microalga para poder ser concluyentes (Bances , 2009). El SANIPES dentro de su “Programa de Monitoreo de Fitoplancton Tóxico” en coordinación con IMARPE, lleva a cabo el monitoreo de diversas zonas de nuestro litoral, además de parámetros microbiológicos. También, se llevan a cabo análisis de biotoxinas marinas (como las VPM) en el recurso que se quiera extraer, dentro de este ámbito se llevó a cabo hasta marzo del 2008 un estudio en la bahía de Ancón registrando la presencia de géneros de algas nocivas como Alexandrium y Gymnodinium de las que muchas de sus especies son causantes de biotoxinas VPM pero no se detectó la presencia de VPM en los mariscos analizados en ese momento (SANIPES, 2010a). Estos géneros de dinoflagelados potencialmente tóxicos fueron anteriormente reportados para nuestras costas por el IMARPE en los años noventa (Zevallos y Cadernas, 2005). Un hecho importante ocurrió en Playón-Ica en el 2008,\ndonde se registró la concentración de fitoplancton potencialmente tóxico más alta hasta la fecha, se reportó Gymnodinium sp. en una concentración de 2´352´000 N° Cel/L motivo por el cual se cerró la zona. La autoridad sanitaria analizó los moluscos extraídos en las semanas contiguas pero ninguna muestra dio presencia de VPM y el cierre se mantuvo por cerca de un mes originando grandes pérdidas económicas (SANIPES, 2008). En cuanto a la normativa que regula los niveles de toxina VPM en moluscos bivalvos para el consumo humano, muchos países han adoptado normativas que considera las toxinas como un grupo, con límites establecidos en 400 UR/100 g (unidades ratón por gramo) o 80 μg eq de STX/100 g (microgramos equivalentes de Saxitoxinas por 100 gramos). Casi toda la reglamentación hace referencia a los mariscos o moluscos bivalvos en general (FAO, 2005).\nLos países en desarrollo, exportan principalmente moluscos bivalvos a la Unión Europea (UE), por tanto adoptan sus normas de acuerdo a sus exigencias. El caso de nuestro país no es diferente y hemos adoptado los límites y métodos de detección que exige la UE (SANIPES, 2009; SANIPES, 2010b).\nEl reglamento CE N° 853/2004 establece el límite de las toxinas VPM para moluscos bivalvos en 80 μg eq de STX/100 g de carne ó 800 μg de STX2HCl/Kg. El método de análisis oficial es el bioensayo en ratón de la AOAC, al que puede asociarse un método químico de detección, si fuera necesario. El reglamento CE N° 2074/2005 indica que en caso de discrepancia sobre los resultados, el método de referencia deberá ser el bioensayo en ratón.\nTabla 6. Principales especies microalgales asociadas a eventos tóxicos en el Cono Sur Americano (Reguera, 2002)\nTOXINA ESPECIE DISTRIBUCION COMENTARIO\nVPM (Veneno Paralizante de\nAlexandrium catenella (regiones X-XII) Sur de Chile canal de Beagle. Principal agente de episodios de VPM en Chile. Víctimas humanas Alexandrium tamarense\nArgentina (Mar del plata y Patagonia) y Uruguay. Principal agente de VPM en Argentina y Uruguay. Víctimas humanas. Alexandrium fraterculus Sur de Brasil, estuario de la plata Sospechoso de causar episodios en Uruguay. Toxicidad no demostrada. Gymnodinium catenatum Sur de Brasil y Uruguay, norte de Argentina Episodios moderados de VPM en Uruguay y Argentina Toxinas Lipofílicas (Veneno diarreico de moluscos)\nDinophysis acuta Fiordos chileno\nPrincipal agente de Toxinas Lipofílicas\nen Chile. Dinophysis acuminata Todo el Cono Sur\nAsociado a Toxinas Lipofílicas en Uruguay, Brasil y norte de Argentina Dinophysis caudata Sur de Brasil, Uruguay\nAsociado a Toxinas Lipofílicas en Brasil y Uruguay ASP (Toxina Amnésica) Pseudo-nitzschia australis Chile, norte de Argentina Episodios de ASP en Chile y asociado a ASP en Argentina P. pseudodelicatissima Todo el Cono Sur\nToxinas detectadas en cultivos de cepas\nTabla 7. Eventos de veneno paralizante de moluscos en el Perú 2004-2009 (Woolcott, 2009; Flores, 2009; SANIPES, 2010a).\nAño Molusco Género/Especie\nrelacionada Estación / Lugar µg STX eq./100 g\n2004 Argopecten purpuratus --- Atenas – ICA (CERPER) --- 2007\n(junio) Argopecten purpuratus\nGymnodinium sp. Lima-Callao (SANIPES) 100\n2007 Ensis sp. --- Ancón – Lima\n2008 Donax sp. --- Morrope -\n(18-Abril) Argopecten purpuratus\nGymnodinium sp. Ancash - Bahía Samanco 82 2009\n(21-Abril) Argopecten purpuratus\nGymnodinium sp. Ancash - Bahía Samanco 90 2009\n(23-Abril) Argopecten purpuratus\nGymnodinium sp. Ancash - Bahía Samanco 151\nIII.- HIPÓTESIS Y OBJETIVOS 3.1 HIPÓTESIS\nMoluscos bivalvos como Aulacomya ater y Argopecten purpuratus provenientes del litoral central peruano, pueden contener veneno paralizante de moluscos (VPM) en niveles detectables por bioensayos en ratón.\nDeterminar la presencia de veneno paralizante de moluscos (VPM) en Aulacomya ater (choro) y Argopecten purpuratus (concha de abanico) del litoral peruano y centros de abastos del departamento de Lima.\n- Estandarizar el método biológico del bioensayo en ratón AOAC - 2005 (cepa Swiss) para la determinación de Veneno Paralizante de Mariscos (VPM). - Detectar y cuantificar los niveles de contaminación de VPM en Aulacomya ater\ny Argopecten purpuratus expendidos en el Terminal Pesquero del Callao. - Detectar y cuantificar los niveles de contaminación por VPM en Aulacomya ater\ny Argopecten purpuratus en el Desembarcadero Pesquero Artesanal de Ancón (mercado informal), entre los meses de octubre del 2008 a marzo del 2009. - Relacionar la existencia en el litoral peruano de toxinas VPM con la presencia\nde fitoplancton tóxico, para las áreas monitoreadas por el programa de control de moluscos bivalvos del Servicio Nacional de Sanidad Pesquera (SANIPES), durante los años 2008 y 2009.\nIV.- MATERIAL Y MÉTODOS 4.1. Lugar de muestreo\nLos especímenes fueron adquiridos en dos puntos de muestreo, el Terminal Pesquero de Ventanilla y el Desembarcadero Pesquero Artesanal de Ancón.\nLa elección se hizo en base a dos criterios básicos, la ubicación y el origen de la extracción de los moluscos que se expendían. El Terminal Pesquero de Ventanilla es un mercado mayorista que recibe especies hidrobiológicas que incluyen a moluscos que provienen de casi todo el litoral norte de nuestro país; y desde aquí se distribuyen a otros mercados minoristas de Lima y Callao. Se encuentra ubicado en el distrito de Ventanilla a la altura del Km 5,2 carretera a Ventanilla.\nEl Desembarcadero Pesquero Artesanal de Ancón está situado a 43 Km. al norte de Lima, en el distrito de Ancón, y los moluscos que se expenden son extraídos de la misma zona por pescadores artesanales, siendo el consumo de estos mariscos básicamente por la población local. Las zonas de extracción del recurso son Isla Farito (11°46'50.81"S, 77°11'52.04"O), Islote Cocharcas (11°47'9.00"S, 77°12'6.10"O) e Islote la Ofrenda (11°46'54.10"S, 77°11'51.93"O).\nLos bioensayos y la preparación de las muestras se llevaron a cabo en dos sedes, el Laboratorio de Ecología Microbiana, Facultad de Ciencias Biológicas - Universidad Nacional Mayor de San Marcos y en los laboratorios del Servicio de Control de Calidad de la Universidad Cayetano Heredia.\n4.2.1. Material Biológico 4.2.1.1 Moluscos bivalvos\nSe muestrearon 2 especies de moluscos bivalvos, Aulacomya ater (choro común) y Argopecten purpuratus (concha de abanico). Cabe señalar que las muestras en estudio para concha de abanico no llegaban a la talla comercial que es, mayor a 65 mm de longitud, lo mismo sucedía para el choro común cuya talla comercial, es de 7,5 a 9,5 cm como señala IMARPE.\n4.2.1.2 Ratones Swiss\nPara la realización del Bioensayo se utilizó la cepa de ratón Swiss procedente del bioterio de la Universidad Peruana Cayetano Heredia (UPCH), los especímenes utilizados fueron ratones machos de 4 semanas aproximadamente con peso entre 18 y 21 g.\n4.2.1.3 Estandar de Saxitoxina\nPara la preparación de la curva patrón y cálculo del Factor de Conversión (FC) se utilizó la Saxitoxina producida por Food y Drug Administration (FDA) la cual tiene una concentración de 100 µg/mL. Con esta se preparó una solución patrón de trabajo a una concentración de 1µg/mL.\n4.2.2. Datos sobre Fitoplancton Potencialmente Tóxico\nSe consideraron los reportes semanales y quincenales del monitoreo del fitoplancton potencialmente tóxico (FPT) que emite el Servicio Nacional de Sanidad Pesquera (SANIPES) a través del Programa de Control Sanitario del Medio Ambiente Acuícola , se evaluaron los reportes de los años 2008 y 2009. Se realizó una base de datos utilizando el programa Microsoft Office Excel 2007. La información se organizó según\nel polígono de procedencia (áreas de bancos naturales delimitadas por varias estaciones de muestreo), se realizaron tablas y gráficas con las especies de fitoplancton potencialmente tóxico y número de células por litro reportado para cada polígono estudiado, se consideró la estación que tenía el mayor reporte de fitoplancton semanal o quincenal, de cada polígono. Se escogieron 4 estaciones a lo largo de nuestro litoral para el análisis de los reportes de FPT las cuales fueron en primer lugar Ancón, por ser el principal punto de muestreo del presento estudio y las otras tres fueron Huacho, Samanco y Paracas por tener datos de manera continua entre el 2008 y 2009.\n4.3.1 Muestreo de moluscos bivalvos\nEl muestreo se realizó una vez por semana desde el mes de octubre del 2008 a Marzo del 2009, en los lugares establecidos, de la siguiente manera: 12 individuos de cada especie, en cada lugar de muestreo, haciendo un total de 48 individuos de cada especie. El transporte se realizó, inmediatamente después de cada muestreo, hasta el laboratorio en cadena de frio (5 °C aproximadamente) (Figura 2). Las muestras se rotularon con una etiqueta consignando: especie, lugar de muestreo, fecha, hora.\n4.4. Determinación de Veneno Paralizante de Moluscos\nSe siguió la metodología de AOAC para la determinación del Veneno Paralizante de Moluscos ( Paralytic Shellfish Poison. Biological method. Final action, Official Method of analysis 959.08 del año 2000).\n4.4.1. Preparación de la curva patrón y cálculo del Factor de Conversión (FC) Se prepararon alícuotas de 10:10, 10:15, 10:20, 10:25 y 10:30 (Saxitoxina: agua) a partir de la solución patrón de trabajo de 1 µg /mL., se inoculó por vía intraperitoneal dosis de 1 mL de las diferentes diluciones hasta que se determinó aquella dilución que tuviera una mediana en los Tiempo de muerte (Tm), entre 5 y 7 min. El pH de las diluciones se ajustó a 3. Adicionalmente, se ensayó diluciones que se diferenciaron en 1 mL de agua destilada de la dilución que proporcionó un Tm entre 5 y 7 min, obteniéndose 3 diluciones, inoculándose con estas 1 grupo de 10 ratones, con cada una de las diluciones anteriormente mencionadas. La dosis de 1 mL fue inyectada á cada uno de los 3 ratones y se determinó el Tm, que se define como, el tiempo transcurrido desde la finalización de la inoculación hasta la última respiración del ratón. El ensayo se repitió dos días después, utilizando las diluciones anteriormente preparadas, incluyendo las que difieren en ± 1 mL de agua destilada. Una semana después se repitió el ensayo por completo. Se calculó la mediana de Tm para cada grupo de 10 ratones utilizados con cada dilución. Si todos los grupos de 10 ratones inoculados con cualquier dilución daban medianas de Tm <5 o >7 min, se descartaban los resultados de esta dilución en los cálculos posteriores. A partir de la mediana del Tm de cada grupo de 10 ratones para cada una de las diluciones seleccionadas, se determinó el valor de la Unidad Ratón (UR) utilizando la tabla de Sommer (Anexo 3 y\n4). Se dividió los µg de STX mL -1 calculados por las UR mL -1 para obtener el FC, que\nexpresa los µg equivalentes de STX para una UR. Se calculó el promedio de los valores FC considerando a este el FC final (Anexo 1).\n4.4.2. Preparación de la muestra\nLas muestras congeladas, fueron descongeladas bajo chorro de agua evitando sumergir, realizándose una limpieza de la parte externa de la valva con un cepillo para sacar las algas u otros elementos adheridos. La parte blanda se separó de la valva, para ello se corto el músculo aductor con una tijera; se extrajo aproximadamente 500 gramos de músculo y gónada y se homogeneizó en una licuadora convencional (Anexo 2).\n4.4.3 Extracción de la toxina\nSe pesaron 100 g del homogenizado en un vaso de precipitado (previamente tarado), se añadió 100 mL de HCl 0,1 N agitando constantemente. El pH se ajustó a 3. Luego en plancha calefactora se llevó a ebullición (100 ± 1°C) durante 5 min. Después se enfrió en baño de agua y se transfirió el homogenizado a una probeta graduada enrazando hasta 200 mL con HCl 0,1 N. El pH se volvió a ajustar a 3 y se centrifugó durante 5 minutos a 3000 RPM. Se recuperó el sobrenadante para continuar con el bioensayo (Anexo 2).\n4.4.4 Bioensayo en el ratón\nSe inoculó por vía intraperitoneal un grupo 3 ratones por cada bioensayo, cada ratón fue inoculado con 1 mL de extracto ácido. Se anotó el tiempo de inicio de la inoculación y se observó el comportamiento de los ratones para estimar el Tm, este se determinó por el último movimiento respiratorio (boqueada) del ratón (Anexo 2).\n4.4.5 Cálculo de la toxicidad\nSe determinó el Tm de cada uno de los ratones utilizados en el ensayo, incluyendo, los supervivientes. Se procedió a calcular las UR correspondientes utilizando la Tabla de Sommer (Anexo 3). Se Consideró que el Tm de los ratones supervivientes en cada\nensayo (Tm > 60 min) equivalía a 0.875 unidades de ratón (UR). Se corrigió las UR obtenidas para cada ratón multiplicando la corrección del peso de ese ratón obtenido en la Tabla de corrección de peso (Anexo 4). Después, se calculó la mediana de las UR corregidas (URC).\nLas URC se convirtieron en toxinas equivalentes, expresada como µg STX eq. /100 g-1\nde carne mediante la fórmula:\nµg STX eq. 100 g\n=URC x FC x FD x 200.\n− µg STX eq.100 g -1 Microgramos de Saxitoxina equivalente en 100\n− URC: UR corregidas.\n− FC: Factor de conversión.\n− FD: Factor de dilución.\n4.5 Diseño y Análisis estadísticos de los resultados.\nSiendo el alcance de la presente tesis de investigación de carácter descriptivo, los datos obtenidos fueron sometidos a estadísticos descriptivos simples, utilizando el software Microsoft Excel 2007, se calcularon medidas de tendencia central y valores porcentuales (Wayne, 1996).\nV. RESULTADOS 5.1 Estandarización del Bioensayo\nLa estandarización del bioensayo en ratón para la cepa de ratón Swiss y el cálculo del límite de cuantificación, se realizó según el procedimiento establecido en el mismo método AOAC 959.08 del año 2000, para toxinas VPM. En el desarrollo de la estandarización se encontró en primera instancia que la dilución de la solución madre que dio Tm entre 5 y 7 minutos, fue la 10/15 lo cual equivale a 0,4µg/mL de STX , las otras que quedaron fuera del rango de trabajo no fueron consideradas como indica el método (Tabla 8).\nDe las 3 diluciones de la solución patrón, 2 dieron tiempos de muerte entre 5 y 7 min, 10/14 y 10/15 que corresponden a 0,416 µg/mL y 0,4µg/mL de STX respectivamente (Tabla 9 y Tabla 10), la dilución 10/16 dio un tiempo de muerte menor a 5 minutos por lo cual se descartó en el cálculo final (Tabla 11).\nTodos los pasos anteriormente mencionados se repitieron una vez más, dando como resultado tiempos de muerte similares a los anteriores (Tabla 12). En esta repetición se obtuvieron 3 FC parciales que correspondían a las diluciones 10/14,10/15 y 10/16; pues estas diluciones dieron tiempos de muerte entre 5 y 7 min (Tabla 13, Tabla 14 y Tabla 15). Como paso final se promediaron cinco resultados, los dos del primer bioensayo y los tres de la repetición (Tabla 16 y 17). Obteniéndose un FC promedio de 0,2148 que es el FC final para el bioensayo. Para efectos prácticos se considera al FC con solo 3 dígitos es decir 0,215. El valor del FC se utilizó para calcular el límite de cuantificación que resultó ser de 37,6 µg STX /100g, para este cálculo se considera el valor de UR de 0,875 que corresponde a un tiempo de muerte mayor o igual a 60 minutos de un ratón de 20 g de peso y se multiplica por 200 (volumen total en la extracción) (Tabla 18).\nUn semestre de experiencia como docente Constancia de habilidad Profesional (Colegiatura) Campo Clínico en HRL 77 Ciencias Clínicas Auxiliar a Tiempo Parcial MH425 Nefrología\nPLAZAS PARA CONCURSO DE DOCENTES PARA CONTRATOS 2018-I - 2018-II SEDE LAMBAYEQUE Resolución N° 440-2018-R FACULTAD DE ENFERMERÍA N° DE PLAZA DPTO.. ACADÉMICO CATEGORÍA CÓDIGO\nUniversidad de los Andes. Facultad de Ciencias. Departamento de Ciencias Biológi...\nLos pára mos son sis temas montanos típi cos de los Andes del norte que ocurren a pa rti r de los 3800 msnm. Estos ecosistemas apa recieron en\nFACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA DE FORMACIÓN PROFESIONAL DE CIENCIAS BIO...\nÍndices, Riesgo Entomológico y tipos de recipientes positivos durante el tratamiento focal repetitivo .... Viviendas positivas y repetitivas durante el tratamiento focal\nFigura 2: Electroforesis de los productos de amplificación obtenidos con el protocolo optimizado de PCR convencional para genotipificar el alelo normal del gen DMPK\nEn este trabajo utilizamos el método SWGA para enriquecer ADN de Plasmodium falciparum con parasitemias submicroscópicas a partir de muestras de sangre seca\nUniversidad de los Andes Facultad de Ciencias Departamento de Ciencias Biológica...\nEl objetivo de este estudio es conocer aspectos del sistema reproductivo de la flor de Inírida, sus mecanismos de polinización y el efecto de diferentes variables en su éxito\nUbicación geográfica de los cuadrantes en donde se llevó a cabo la recolecta (puntos amarillos) en el remanente de bosque mesófilo de montaña de la Reserva Ecológica La\nUNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS ESCUELA...\nPresentación del material en el aula virtual Video: Triquinelosis https://www.youtube.co m/watch?v=bgfXSc9N R_8 Revisión documental Cuestionario Tarea Participación oral\nLa optimización de los protocolos de criopreservación permiten obtener tasas de motilidad y fecundación similares a los obtenidos con semen fresco (Medina et al., 2005),\nUNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA Facultad de Ciencias Exactas Departamento de Ci...\nRatbi I y colaboradores en el año 2007 detectaron cuatro grandes reordenamientos en pacientes CBAVD, hombres infértiles portadores de una mutación leve: dos deleciones parciales\nUNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA...\na) Comprende los mecanismos por el cual se da la transferencia genética horizontal. b) Reconoce las estrategias de adaptabilidad de los organismos a la transferencia genética\nSndrome de envenenamiento paralizante por consumo de moluscos\nMAESTRÍA EN CIENCIAS BIOLÓGICAS FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS BENEMÉRITA UNIVE...\nNORMA PARA LOS MOLUSCOS BIVALVOS VIVOS Y LOS MOLUSCOS BIVALVOS CRUDOS CODEX STAN\nDeterminación de biotoxina marina veneno paralizante de molusco en Aulacomya ate...


Adolescentes salvaron a otro que era abusado: Redujeron al sujeto a palazos\nAdolescentes salvaron a otro que era abusado: Redujeron al sujeto a "palazos"\n13 de febrero de 2019 - 11:53\nEn la localidad bonaerense de Tristán Suárez tuvo lugar una admirable y ejemplar muestra de valentía por parte dos menores de edad, quienes rescataron a un niño cuando era abusado sexualmente por su padrastro. Los adolescentes advirtieron la macabra escena, y como el agresor llevaba consigo un cuchillo, con el cual amenazaba a su víctima, ellos redujeron y detuvieron al violador con palos. Uno de los héroes ya había defendido a su madre de las garras de su papá cuando apenas tenía 5 años, publicó Crónica. En el barrio San Andrés, de la localidad bonaerense de Tristán Suárez, los vecinos suelen acudir a un campo de considerables dimensiones para llevar a cabo diferentes actividades de esparcimiento. En el caso de Marcos, de 13 años, concurre al lugar para andar a caballo, y en su última visita al predio lo hizo con la compañía de Uriel, de 15. A lo lejos ambos divisaron a un hombre, conocido en la zona como "Peteke", quien estaba pescando junto a tres niños. Entonces, el menor de los adolescentes le dijo al otro: "Vamos a pedirle la caña", pero cuando llegaron al arroyo el adulto y los pequeños ya no estaban. No obstante, "a los pocos metros mi hijo vio cómo este tipo violaba a su hijastro, de 9 años", señaló, Celeste, mamá de Marcos, apodado "El Bola".\nJustamente este al ver que el abusador portaba un cuchillo, del tipo tramontina, le recomendó a su amigo que "vamos a buscar palos y a avisarle al dueño del campo para que llame a la policía", según el relato de su progenitora. En ese instante, el agresor advirtió sus presencias y entonces decidió darse a la fuga, pero los chicos lograron reducirlo con sus palos y llevarlo hasta la entrada del establecimiento para facilitar el accionar policial. Finalmente, "Peteke" fue apresado y trasladado a la comisaría de Tristán Suárez, mientras su hijastro fue alojado en el Hospital de Ezeiza, producto de las lesiones padecidas en el ataque sexual. A pocas horas de semejante reacción heroica de su hijo, Celeste reconoció que "tengo una mezcla de sensaciones, como orgullo, pero a la vez pena por el chico abusado y horror por lo que mi hijo tuvo que ver. Lo felicité porque él arriesgó su vida para defender a otro, siendo muy pequeñito". No obstante, a la mujer no la sorprende este accionar valiente de Marcos, a pesar de su corta edad y su diminuta fisonomía física, puesto que "cuando tenía 5 años, su papá me estaba moliendo a golpes, dejándome inconsciente y él tomó un secador y lo espantó. Después corrió y llamó a la policía". A "El Bola" le encanta jugar al fútbol, se destaca en el club El Rayo, y a pesar de las dificultades económicas que debe sobrellevar junto a su madre, ninguna carencia, incluso de un plato de comida, le impide brindarse por el otro cuando este lo necesita, como ese niño de 9 años brutalmente abusado por su padrastro.


Pekín,17/10/2014(El Pueblo en Línea)- Según informes de medios extranjeros del día 14, astrónomos de la Agencia Espacial Europea utilizaron el Telescopio Espacial para tomar los imágenes de la " muerte" de las estrellas. Su color es muy esplendoroso y con la forma de mariposa.\nEl código de la nebulosa "mariposa" tomada por los astrónomos es NGC 6302, a unos 3,800 años luz de la Vía Láctea. Esta nebulosa es producto de la evolución de un análogo solar, que en su centro tiene un disco de gas. En su centra hay dos estrellas que orbitan entre sí.\nLas estrellas de la nebulosa "mariposa" al morir arrojan una gran cantidad de gas caliente, En comparación con el centro, los polos liberan más gas formándose una estructura bipolar muy simétrica, como las alas de mariposa.\nCada estrella experimentará un proceso de nacimiento, crecimiento, maduración, envejecimiento y muerte. En la edad media, se convierten en gigantes rojas. En la época de recesión y envejecimiento, se pueden convertir en una enana blanca, una estrella de neutrones o un agujero negro dependido de la calidad.


LA FAMA FATAL: De museos\nSi en un viaje se admite como algo perfectamente natural esa peculiar actividad que consiste en visitar museos (acaso porque así se busque una comprensión mejor del lugar que visitamos, más allá de la vivencia superficial que es posible tener en un medio extraño, o nomás por inercia, porque parece que es lo indicado), hacerlo en el terruño, en cambio, no sólo resulta excéntrico, sino que uno hasta llega a tener dicha actividad como cosa impensable, y si se la plantea en serio (cosa improbable) la acomete con no poco recelo y con la precaución de quien se pregunta si estará invirtiendo correctamente su tiempo ocioso. Hablo por mí, desde luego, que como buen ideático tiendo a meter freno antes de haber empezado a acelerar... Y malamente, como hubo ocasión de comprobar la semana pasada, cuando a falta de viaje y sin más opción que turistear por la ciudad, decidimos visitar las exposiciones de José Clemente Orozco en el Cabañas y la de Gabriel Figueroa en el Museo de Arte de Zapopan.\nYo había venido enterándome de que la primera ha sido objeto de varios reparos: desde la inauguración, odiosa porque sólo pudieron entrar quienes tuvieron invitación (esos pésimos moditos que tienen los políticos para volver aún más repelente el acceso a la cultura), pasando por lo mucho que se tardó en concretarla, lo que se echa de menos en ella y hasta la falta de indicaciones que permitan transitarla en orden. Pero lo cierto es que nada de eso importó, ya estando ahí. El encuentro con semejante artista es, sencillamente, imperdible. Y quizás hasta sea mejor abstenerse por completo de un recorrido prescrito, para dejarse conducir más bien por los hallazgos que a cada quien le están deparados. El Orozco caricaturista, por ejemplo, es sensacional, lo mismo que el melancólico intérprete de la miseria prostibularia en la serie La casa del llanto, o que el acucioso artífice de las composiciones monumentales. Y no hay rincón que no proponga una ocasión para el asombro.\nLa exposición armada en torno a la figura de Figueroa promueve, por su parte, el razonamiento de lo que a muchos nos resulta entrañable. Habrá sido, sí, la mera visión de un hombre tras la lente, pero resulta que esa visión (y la sobrenatural potestad que detentaba sobre luces y sombras) nos ha modelado por más que no siempre hayamos estado al tanto de ello, de manera que ir a descubrirlo ahí es verdaderamente emocionante. Además, puesto que la curaduría está orientada por una estimable ponderación del contexto histórico, de la visita puede obtenerse también una sostenida reflexión que quizás se resuma en esta pregunta: ¿qué le ha pasado a México? Hay una foto en la que posan, sentados a la mesa de un restorán y muy sonrientes, el propio Figueroa, el Indio Fernández y ¡Orozco! (bueno, Orozco no parece que sonría). Y es fascinante fantasear con lo que pudieron haber estado platicando —y lo que tendrían que decirse hoy.\nTotal: hay que animarse a ir a estos museos. Se siente raro, pero se siente muy bien.\nPublicado en la columna «La menor importancia», en Mural, el jueves 8 de abril de 2010.


ᐅ Disfraz De Semaforo ⇒ comprar aquí baratos\nDisfraz De Semaforo\nBienvenidos a nuestra página web! En esta página encontrará los mejores productos en la categoría de Disfraz De Semaforo para hombres, mujeres y niños se enumeran a continuación. Los disfraces son adecuados para Halloween, así como para el carnaval. Queremos ofrecerle el mejor asesoramiento de compra posible con nuestra guía de compras. Más allá de eso, nuestro objetivo es ofrecerle una experiencia de compra óptima.\n1 Disfraz De Semaforo\n1.1 Disfraz De Semaforo económico para halloween y carnaval\n1.2.2 Vídeos divertidos sobre el Disfraz De Semaforo\nDisfraz De Semaforo económico para halloween y carnaval\nEl Disfraz De Semaforo no siempre está disponible para todos los grupos de edad ni género. A continuación hemos enumerado los mejores productos de la categoría de disfraces, si los hay. Están separados en disfraces para hombre, para mujer e infantiles (para niña y niño). Al seleccionar el Disfraz De Semaforo, hemos tratado de combinar un precio económico con unos acabados de calidad.\nCarnaval Disfraz semáforo 3-4 años*\nLinda Ropa para Mascotas Ropa De Perro Gato Ropa para Perros Perro Ropa Niño Perro Ropa Niña Semáforos De Punto De Dos Patas De Ropa FENGMING (Color : Negro, Tamaño : L)*\n1 color: negro, 6 tamaños: X, S, M, L, Xl, Xxl, adecuado para mascotas grandes, medianas y pequeñas.\nSemáforos en forma de patrón de punto, personalidad, diversión.\nEl diseño del cuello redondo está más en línea con la curva del cuello de la mascota, es cómodo y no pica la piel.\nLas tapetas delanteras y traseras no tienen un diseño desigual, lo que puede proteger al animal de la espalda y no afectar el inodoro delantero.\nEl Disfraz De Semaforo resulta una idea perfecta para mujer en carnavales. Este disfraz se aparta claramente de las muchas ideas estándares y aburridas habituales en las fiestas de máscaras. Acompañado de un maquillaje adecuado, llama la atención en cualquier celebración. Además, se recomienda comprar los accesorios apropiados para el Disfraz De Semaforo. Así o así: ¡con esta vestimenta serás la envidia de cualquier mujer!\nY también los hombres pueden divertirse de lo lindo con el Disfraz De Semaforo. Junto con algo de confeti y los caramelos, con la cabalgata de carnaval está garantizada la diversión. Los hombres particularmente pueden cantar unas chirigotas o la canción “Carnaval, carnaval” bien alto. Estos divertidos cánticos de carnaval y las bonitas tradiciones abundan no solo en Colonia/Cádiz, sino en cualquier ciudad de España. Por eso el Disfraz De Semaforo atemporal se adapta a cualquier fiesta y es sinónimo de diversión, sea donde sea.\nNo solo los adultos pueden pasárselo en grande con este divertido Disfraz De Semaforo, sino también los niños. Su compra sale además doblemente rentable. Los disfraces infantiles pueden llevarlos a fiestas de cumpleaños y a fiestas escolares, igual que en carnavales. Gracias a la viva fantasía de los niños y las niñas, el Disfraz De Semaforo adquiere un valor auténtico. Con un poco de maquillaje adecuado y los accesorios apropiados (p. ej. careta, gorra u otro juego), se completa el conjunto a la perfección. El disfraz infantil económico es, en cualquier caso, garantía de juego y diversión.\nSi deseas adquirir un Disfraz De Semaforo, debes tener en cuenta antes algunas cuestiones. Hemos resumido los criterios más importantes en un pequeño asesor de compra para ayudarte en la toma de decisiones. A continuación encontrarás una práctica lista de comprobación con la que seguro que vas a encontrar el Disfraz De Semaforo perfecto.\nTalla: Comprueba antes de nada cuál es la talla o las medidas del Disfraz De Semaforo que vas a pedir.\nCalidad: ¿El Disfraz De Semaforo tiene unos buenos acabados y es de buena calidad?\nValoración de clientes: ¿Qué dicen otros clientes sobre el Disfraz De Semaforo elegido?\nFabricante: ¿Existen ya fabricantes conocidos o de renombre para el Disfraz De Semaforo?\nInforme de pruebas: ¿Existe un Informe de pruebas (como los que realiza la OCU, p. ej.) sobre el Disfraz De Semaforo?\nTeniendo en cuenta la lista de comprobación anterior, puedes averiguar cuáles son los productos adecuados de esta categoría. Finalmente, deberías realizar una comparación y una valoración para encontrar el mejor Disfraz De Semaforo para ti. Antes de hacer el pedido deberías, además, buscar en línea los Informes de pruebas realizados por la OCU. 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En los fórums de halloween y carnaval también se encuentran muchas ideas y consejos para bebés. El maquillaje se convierte en un juego infantil y con el Disfraz De Semaforo está garantizada la diversión.\nVídeos divertidos sobre el Disfraz De Semaforo\nLos vídeos sobre el Disfraz De Semaforo son perfectos para ambientarse para las próximas fiestas de halloween y carnaval. Además, también puedes inspirarte y coger ideas de accesorios apropiados para el disfraz. Lo mismo si quieres completar el Disfraz De Semaforo con un peinado y maquillaje, los vídeos son de gran ayuda. En YouTube hay igualmente muchas y muy divertidas imágenes dentro de esta categoría de productos, ¡échales un vistazo buscando los términos correspondientes!\nEn esta página hemos reunido mucha información práctica y divertida sobre el Disfraz De Semaforo. Esperamos que te sirva de ayuda a la hora de encargar o adquirir en la tienda en línea. Si tienes en cuenta el asesor de compra descrito anteriormente, encontrarás un buen producto seguro. El resultado es que con el Disfraz De Semaforo serás el centro de atención en cualquier fiesta de disfraces o halloween, ¡sin duda!\nLo importante de este disfraz es su disponibilidad ilimitada. Para hombre, mujer, niño, niña o bebé: se puede comprar para todos los grupos de edad. No recomendamos en absoluto meterse en alquileres de disfraces. Y tampoco es recomendable comprar usados esta clase de productos, por distintas razones. Un último consejo: portales en línea consolidados, como maskworld.com o kostüme.com, cuentan con un impresionante surtido de productos y ofrecen muchas ofertas económicas. Por lo tanto, vale la pena buscar un poco antes para encontrar un buen Disfraz De Semaforo.


el verdadero amor existe, se llama libro: She is one the boys de E.M. Molleja\nFrancisco Vogt 6 de diciembre de 2014, 07:45\nHola! Tu blog me parece muy interesante. Específicamente, este libro no me llama mucho la atención. Me voy a quedar por aquí por si necesito algún libro.\nTe aviso que ya te sigo y espero que te pases por mi blog y hagas lo mismo! :D\nOdii Alcazar 11 de diciembre de 2014, 21:43\nGracias por el elogio :) por cierto ya te sigo me gusta mucho esa portada con el chico de cabello castaño y saco azul leyendo, ademas que tus reseñas son increíbles y me tentaste a leer Javier el principio del fin


Consejo de Participación Ciudadana compareció a Fiscalización – Radio Colosal\nConsejo de Participación Ciudadana compareció a Fiscalización\nLa labor del organismo de control tuvo observaciones por parte de los legisladores.\nLos cuestionamientos al Consejo de Participación Ciudadana y Control Social (Cpccs) durante la comparecencia a la Comisión de Fiscalización fueron desde su falta de independencia hasta el hecho de que se haya quedado en la designación de autoridades y no hizo un seguimiento a su gestión.\nLa presidenta del organismo, Raquel González, acompañada por el resto de consejeros, explicó el mecanismo del concurso para designar Contralor del Estado, en el que resultó ganador Carlos Pólit, hoy fuera del país y a quien se le inicio un proceso de juicio político por el caso Odebrecht.\nGonzález hizo una larga exposición sobre el proceso y aseguró que en la etapa de impugnaciones no se presentaron argumentos sobre hechos puntuales de corrupción y que, en el caso específico de Pólit, la impugnación presentada fue de un contratista que había sido descalificado de un concurso de licitación, pero que había sido archivada al no estar motivada.\nTras su intervención vinieron las observaciones de los legisladores de oposición y del oficialismo.\nHomero Castanier (CREO-SUMA) aseguró que el Cpccs es un organismo al que le falta credibilidad e independencia de funciones al estar integrada, dijo, por afines al oficialismo.\nRaúl Tello (Movimiento Libre) preguntó dónde estuvo la falla para que un Contralor esté ahora involucrado en un aparente acto de corrupción.\nTambién sugirió que en las designaciones que realiza el Consejo se debería aplicar la prueba de confianza (polígrafo), similar al que se recurre dentro de la Policía Nacional.\nInquietudes del oficialismo\nPara la asambleísta Silvia Salgado (PAIS) el problema no pasa por la integración del Consejo o la forma de realizar los concursos sino porque el organismo no asume todas las competencias que tiene por mandato legal. “Desde que se elige a la autoridad se acaba la participación ciudadana, el control social; no hay seguimiento (a la labor) de estas autoridades”, dijo.\nAgregó que lo fundamental es que el Consejo debe enlazar el mecanismo de designación con la rendición de cuentas por parte de esos funcionarios ganadores de concursos.\nMaría José Carrión (PAIS), presidenta de la Comisión de Fiscalización, sostuvo que probablemente se cumplió con todo el proceso de designación de Contralor, dentro del marco establecido, pero que falta ajustar los mecanismos de coordinación interinstitucional entre todas las entidades que tienen que ver con la lucha contra la corrupción.\nGonzález respondió un par de cuestionamientos, pero no en su totalidad ya que la comparecencia se suspendió ya que en esos instantes se instalaba el Pleno de la Asamblea, y por normativa en ese caso no puede sesionar una Comisión.\nEl Cpccs será convocado para una segunda intervención en la Comisión de Fiscalización. (HCR)\nComparecencia de Jorge Glas\nHoy está prevista la comparecencia del vicepresidente, Jorge Glas, hasta la Comisión de Fiscalización, donde le espera la legisladora Jeannine Cruz (CREO-SUMA), quien se inscribió para hacerle 19 preguntas sobre los casos Odebrecht y Caminosca.\nLas dos primeras están relacionadas con el Decreto Ejecutivo No. 015 del 4 de junio de 2013 y se cuestiona sobre ¿cuáles fueron los mecanismos establecidos por usted para controlar y evaluar el seguimiento de proyectos estratégicos como Toachi Pilatón, Poliducto Pascuales Cuenca, Manduriacu, Refinería del Pacífico, entre otros?\nLa tercera pregunta se refiere a la declaración en la que dijo: “Vino Marcelo Odebrecht a reunirse conmigo, me hizo una insinuación perversa. Le boté de mi oficina casi a patadas.” Ahí le pide que ¿señale cuál fue la insinuación?, ¿quién sirvió de enlace para la reunión?, ¿quiénes estuvieron presentes?\nOtro de los cuestionamientos tiene que ver con el pago de $7 millones a Odebrecht por la entrega anticipada de la hidroeléctrica San Francisco. (Diario El Universo)\nPrevious article Miembros de la Policía Judicial son hallados culpables por la revuelta del 30-S\nNext article 60.560 refugiados hay en Ecuador


análisis literario: la vida es sueñ...\nby Kevin Fàbregues B...\n444 Reyes Guerrero Marco Antonio.Reporte del libro: La vida es sueño, Calderón De La Barca.Dentro de este reporte de lectura, daré mi punto de vista respecto a la obra literario de CalderónDe La Barca; se darán datos del libro, autor y se incluirán algunos fragmentos de este.La obra de la vida es sueño fue escrita en 1635 por el escritor Pedro Calderón de la Barca, nacidoen Madrid en el año de 1600; un gran representante de la época del siglo de oro ocurrida enEspaña alrededor de los años 1492-1681. Este autor, fue el que sello esta época tras su muerte.Los personajes de la obra son:Segismundo, él aparece al principio de la obra y aparece como encerrado en una cárcel porsupuestos crímenes que él no había hecho. En un principio parecía un hombre salvaje, peroconforme avanza la historia la perspectiva cambia. Por ejemplo, en el pedazo que dice “Primerotirano dueño, que los ofendas ni agraveis, será mi vida despojo destos lazos miserables, pues enellos ¡vive Dios! tengo que despedazarme con las manos, con los dientes, entre aquestas peñas,antes que su desdicha consienta y que llore sus ultrajes” (Calderón De La Barca,1635,pag 12).Rosaura es la mujer principal de la obra, ella se une a Segismundo para evitar algunascircunstancias.Basilio es el rey de Polonia, padre de Segismundo,a él le importa su pueblo pero la política no essu fuerte; y le te Segismundo por lo que le predijo el oráculo, pero al final recapacita y reconocesus errores.Clotaldo es el lacayo de Segismundo y le ha enseñado a él todo lo que sabe, es un anciano quesabe sobre romances e historias de amor. 2.\nAstolfo es el duque de Moscovia. Esta dispuesto a casarse con Estrella aunque su amor verdaderoes Rosaura.Estrella es muy hermosa y muy amable, aunque acepte casarse con Astolfo sólo para mantener eltrono.Clarín es el compañero de Rosaura, es el cómico de la obra, el que le da el toque de humor a lascosas.De lo que principalmente habla esta obra, es sobre mostrar de una manera muy entretenida yhaciéndonos ver que nuestras acciones se nos van a regresar, que nosotros somos los querecibiremos los frutos de nuestra propia cosecha, los diferentes estilos de ver la vida, y quenosotros mismos somos responsables de nosotros mismos.El planteamiento de la obra se lleva a cabo una parte en la primera jornada en donde Rosauradisfrazada de hombre, conoce a Segismundo, entrando al lugar donde él vivía. Se da un dialogoen el que se conoces más entre ellos y se dan a conocer la situación de cada personaje.”“ROSAURA: Inmóvil bulto soy de fuego y hielo.CLARÍN: ¿Cadenita hay que suena? Mátenme, si no es galeote en pena. Bien mi temor lo dice. Dentro SEGISMUNDOSEGISMUNDO:¡Ay, mísero de mí, y ay infelice!ROSAURA: ¡Qué triste vos escucho! Con nuevas penas y tormentos lucho.CLARÍN: Yo con nuevos temores...” 3.\n(Calderón De La Barca,1635, pág. 7)La otra parte del planteamiento ocurre en la segunda jornada, donde Segismundo es llevadomientras dormía al palacio y comienza a hablar con los criados y con su padre. Llevar aSegismundo fue solamente una prueba para saber si es realmente tan malo como se dice; ese es elmotivo por el cual le dicen que es un sueño.El nudo se desarrolla en la segunda jornada, iniciando de la escena V, a partir de esta escenaSegismundo empieza a verse altanero con los criados, aventando a uno de estos por la ventana ade más se ve envuelto en unas cuantas revueltas; razón por la cual, el rey Basilio lo duerme denuevo y lo manda a la torre. En esta parte de la obra, Astolfo descubre que Rosaura se estabahaciendo pasar por Astrea, y en una discusión su relación se ve terminada.El clímax podría empieza más o menos a partir de la última escena de la segunda jornada endonde Segismundo despierta de nuevo en la torre después de haber visitado el palacio.Esta partes es muy importante ya que aquí se da aparición el famoso diálogo de Segismundo consus célebres palabras, “¿Qué es la vida? Un frenesí. ¿Qué es la vida? Una ilusión, una sombra,una ficción, y el mayor bien es pequeño; que toda la vida es sueño, y los sueños, sueños son”.(Calderón De La Barca, 1635, página 58).El desenlace se llevara a cabo también en esta parte de la obra, en donde Segismundo, habiendoganado, se impone ante el rey, sabiendo que este había tratado de matarlo. El rey al notar sunueva actitud, le deja el trono a Segismundo, convirtiéndose este en rey. 4.\nEn lo Personal, me pareció un libro bueno, pero se me hizo muy difícil comprender algunasoraciones, por el tipo de palabras que utilizaban. Es una obra dramática escrita en verso, rima ymétrica, pero no tiene ritmo.El haberla leído me hizo comprender mejor el cómo está estructurada una obra dramática,hablando física y textualmente. En cuanto a la estructura física, me refiero a que he identificadoque la obra se divide en jornadas, y que estas jornadas se dividen en escenas, y que pueden sermanejadas, cuantas sean necesarias para la comprensión de la trama principal de la obra.De La Barca P. (1658). La vida es sueño. Porrúa: México.http://es.wikipedia.orghttp://html.rincondelvago.comhttp://www.rjgeib.com Recommended\nanálisis literario: la vida es sueño (Pedro Calderon de la barca)\nKevin Fàbregues Barceló\nLey sopa,ley,cierre de megaupload\nJesús Vázquez, MBA, MSc IT PM, PMP