Producing Gene Deletions in Escherichia coli by P1 Transduction with Excisable Antibiotic Resistance Cassettes | Protocol (Translated to Spanish)\nAquí presentamos un protocolo para el uso de preexistentes antibiótico resistencia-cassette borrado construcciones como base para la fabricación de mutantes de deleción en otras cepas de e. coli . Tales mutaciones de la canceladura pueden ser movilizados e inserta en el correspondiente locus de una cepa receptora mediante transducción de bacteriófago P1.\nUna primera aproximación al estudio de la función de un gen desconocido en bacterias es crear un knock-out de este gen. Aquí, describimos un protocolo robusto y rápido para la transferencia de mutaciones de la canceladura de genes de una cepa de Escherichia coli a otra mediante la transducción generalizada con el bacteriófago P1. Este método requiere que la mutación sea seleccionable (p. ej., basado en interrupciones del gen mediante inserciones de cassette antibiótico). Tales cintas antibióticas pueden movilizar de una cepa donante e introducen en una cepa receptora de interés rápidamente y generan fácilmente un mutante de canceladura del gene. El cassette de antibiótico puede diseñarse incluir flippase sitios de reconocimiento que permiten la supresión de la cinta por un recombinase específico para producir un knock-out limpiado con sólo una secuencia de ~ 100-base-par-larga cicatriz en el genoma. Demostrar el Protocolo por la anulación del factor conjunto implicado en la biogénesis autotransporter la codificación del gene de tamA y probar el efecto de esta eliminatoria en la biogénesis y la función de dos autotransporter trímero adhesinas. Aunque la canceladura del gene por transducción P1 tiene sus limitaciones, la facilidad y rapidez de su aplicación hacen una alternativa atractiva a otros métodos de canceladura del gene.\nUna primera aproximación común para estudiar la función de un gen es realizar mutagénesis de knock-out y observar el fenotipo resultante. Esto también se llama genética reversa. La bacteria e. coli ha sido el caballo de batalla de la biología molecular durante los últimos años 70 o así, debido a la facilidad de su cultivo y su receptividad a la manipulación genética1. Varios métodos han sido desarrollados para producir deleciones del gen en e. coli, incluyendo marcador cambio mutagénesis2,3 y, más recientemente, recombineering usando la λ rojo o ET Rac sistemas4,5 , 6.\nEn un sistema ampliamente utilizado, secuencias de codificación de genes individuales se sustituyen por una cinta de resistencia a los antibióticos que más adelante puede ser suprimida del cromosoma5,7. Las secuencias de codificación son sustituidas, por ejemplo por una cinta de resistencia kanamicina (Kan), que es flanqueada por los sitios de destino (FRT) flippase (FLP) reconocimiento a ambos lados. Los sitios FRT son reconocidos por el recombinase FLP, que media específica recombinación entre los sitios FRT conduce a la supresión de la cassette de Kan. De esta manera, se logra un borrado completo de la secuencia de codificación de un gen determinado, dejando sólo una secuencia mínima cicatriz de aproximadamente 100 pares de bases (PB) (figura 1).\nA poco más de una década atrás, se desarrolló la llamada colección de Keio. Se trata de una biblioteca bacteriana basada en un estándar de laboratorio cepa K12 de e. coli , donde casi todos los genes no esenciales fueron borrados individualmente por λ recombinación rojo7,8. Los clones dentro de cada colección tienen una secuencia de codificación substituida con una cinta de resistencia los Kan. La colección de Keio ha demostrado para ser una herramienta útil para muchas aplicaciones9. Un tal uso es la producción de mutantes de deleción en otras cepas de e. coli . El cassette de Kan de un clon de eliminación dada puede ser movilizado por transducción generalmente de bacteriófagos, como P110,11,12,13,14. Un stock de fagos preparado a partir de tal tensión puede utilizarse para infectar a un recipiente e. coli cepa de interés, donde en una frecuencia baja pero confiable el Kan región que contiene el cassette puede ser incorporado en el genoma receptor por recombinación homóloga (Figura 2). Transductants pueden ser seleccionados para el crecimiento en el medio que contiene Kan. Después de esto, si se desea el retiro de la cinta de resistencia a los antibióticos, el recombinase FLP se puede suministrar a la cepa transductant en trans. Después de curar el plásmido que contiene el FLP, que lleva un marcador de resistencia a ampicilina (Amp), clones de Kan y sensible a Amp son evaluados para, y la supresión correcta de la secuencia de codificación de tipo salvaje y el cassette de Kan son verificados por PCR de Colonia.\nAquí, se presenta un protocolo detallado, describiendo cada uno de los pasos en la producción de un knock-out cepa de e. coli , basado en la estrategia que se ha señalado anteriormente. Por ejemplo, se demostró una canceladura del gene del tamA . tamA codifica una proteína de β-barril de membrana externa que es una parte del transporte y montaje módulo (TAM), que participa en la biogénesis de ciertas proteínas autotransporter y pili15,16,17. Esta cepa knock-out entonces fue utilizada para examinar el efecto de la supresión de tamA en la biogénesis de dos autotransporter trímero adhesinas (TAAs), la adhesina de Yersinia YadA y la inmunoglobulina (Ig) de la e. coli -vinculante EibD TAA 18,19.\n1. las cepas y plásmidos\nUso de la e. coli cepas BW251135, JW4179 (BW25113 tamA::kan)7, BL21(DE3)20y BL21ΔABCF21. Para más información ver la Tabla de materiales .\nUtilice el fago P1vir para la transducción general. Almacenar el phage como un líquido con unas gotas de cloroformo (ver paso 2.2). Para obtener más información, vea Tabla de materiales.\nUtilice el siguiente plásmidos en este protocolo: pCP2022, pIBA2-YadA23y pEibD1024. Plásmidos de control, utilizar IBA2 pASK y pET22b (véase Tabla de materiales).\nPropagar las bacterias en un medio25 de lisogenia caldo (LB) con vigoroso (180 – 200 rpm) a 37 ° C o 30 ° C en el caso de las cepas que contienen pCP20 y BL21ΔABCF.\nRealizar plásmido curado a 43 ° C.\nDe un medio sólido, suplemento LB con agar al 1% (p/v).\nPara top agar, suplemento LB con 0,7% de agar y 10 mM de CaCl2 y autoclave el medio. Medio SOC de uso para la recuperación después de la electroporación26.\nUtilizar las siguientes concentraciones de antibióticos: 100 μg/mL de Amp y 25 μg/mL para el Kan.\n2. preparación de un lisado de fagos\nInfección de la cepa donante\nCrecer la cepa donante JW4197 en 5 mL de medio LB suplementada con 10 mM de CaCl2 y opcionalmente con Kan (25 μg/mL) a una densidad óptica a 600 nm (OD600) de ~ 1.0. Mide el valor de OD600 usando un espectrofotómetro.\nHacer una serie de diluciones de un stock de fagos P1 existente en el medio LB: recomienda diluciones son entre 10-3 a 10-7.\nMezcla 200 μL de la suspensión bacteriana y 100 μL de una dilución de phage dado en un tubo de centrífuga de 15 mL o equivalente. Preparar tantos tubos como diluciones de fago. Incubar los tubos durante 20 min a 37 ° C sin agitación.\nAñadir 3 mL de agar superior fundida (~ 50 ° C) suplementado con 10 mM de CaCl2 en los tubos, homogeneizar el contenido con un vórtex los tubos poco y vierta la mezcla en placas LB precalentadas para hacer capas incluso.\nIncubar las placas durante la noche a 37 ° C.\nPreparación de lisado\nAl día siguiente elegir un plato con un semi-confluente crecimiento de placas de fagos. En un plato semi confluente, aproximadamente la mitad la superficie de la placa es evidente (figura 3).\nRaspar la capa de agar superior de dicha placa con un asa de inoculación o una herramienta similar y colocar el agar superior en un tubo de centrífuga. Añadir 1-2 mL de LB y una gota de cloroformo y agitar el tubo vigorosamente durante ~ 1 min agregar el cloroformo en una campana de humos.\nCentrifugar el tubo durante 15 min a 4.000 x g o más rápido para que sedimenten las células bacterianas y agar.\nPasar el sobrenadante a un tubo de microcentrífuga fresco, evitando transportar cualquier residuo de la pastilla. Añadir 2 gotas de cloroformo y almacenar el lisado a 4 – 10 ° C. Añadir cloroformo en una campana de humos. No congele el phage lisado, esto resultará en una reducción significativa del número de partículas infecciosas.\nDeterminar el título del lisado\nCrecer BW25113 en LB suplementado con 10 mM de CaCl2 a 37 ° C hasta que el cultivo alcanza un OD600 de ~ 1.0.\nPreparar una serie de diluciones de los fagos lisado en LB (p. ej., 10-6-10-9).\nNota: Tenga cuidado al pipetear la muestra desde la parte superior del lisado para evitar transferencia de cloroformo a las diluciones.\nAl día siguiente cuenta el número de placas (regiones claras en la placa bacteriana) para cada placa y calcular el título del lisado mediante la fórmula siguiente:\nEjemplo: En las placas de las diluciones 10-710-8y 10-9, hay 231, 27 y 2 placas, respectivamente. 100 μL de cada dilución se utilizó para la infección, y porque el título se expresa como placa formando unidades (pfu) / mL, el factor de la galjanoplastia es 10. Estos números se introducen en la fórmula:\nAsí, el título es aproximadamente 2 x 1010 infecciosas fagos partículas/mL.\n3. P1 transducción\nPreparación de las células del receptoras\nCrecer la cepa receptora BL21ΔABCF en LB complementado a una densidad óptica a 600 nm (OD600) de ~ 1.0. Use un espectrofotómetro para medir el valor de OD600 .\nCalcular el volumen del lisado de fagos para alcanzar una multiplicidad de valor de infección (MOI) de 0,5. Para calcular el MOI, estimar el número de bacterias basado en OD600 de la cultura. Asume que un valor de600 OD de 1.0 corresponde a ~ 109 UFC/mL. Calcular el volumen requerido basado en el conocido título del lisado.\nEjemplo (basado en la concentración calculada en el ejemplo después paso 2.3.6):\nAñadir CaCl2 a la cultura receptora cepa a 10 mM y mezclar. Tomar 1 mL del cultivo para la transducción.\nRealizar la transducción de señales\nAñadir el volumen adecuado de lisado de fagos a 1 mL de la cultura receptora (incluyendo CaCl2 a 10 mM) calculado en el paso 3.1.2 y mezclar suavemente.\nNota: Tenga cuidado al pipetear la muestra desde la parte superior del lisado para evitar transferencia de cloroformo a la mezcla.\nEstáticamente, incubar la mezcla por 20 min a 37 ° C.\nDetener la infección mediante la adición de citrato de sodio, pH 5.5, a 100 mM.\nCentrifugue las bacterias (5.000 x g durante 2 min) Quite el sobrenadante y resuspender en 1 mL de LB fresco suplementado con citrato de sodio 100 mM, pH 5,5.\nLavan las células dos veces más que en el paso 3.2.4 para la eliminación de calcio y phages gratis.\nResuspender las bacterias en 1 mL de LB fresco suplementado con citrato de sodio 100 mM, pH 5,5. Incubar las bacterias a 30 ° C por 1 h con agitación (> 100 rpm).\nRecoger las bacterias por centrifugación (5.000 x g durante 2 min) y resuspender en ~ 100 μL de LB con citrato de sodio 100 mM, pH 5,5.\nTrasmitir las bacterias en una placa LB suplementado con Kan en 25 μg/mL y citrato de sodio 10 mM, pH 5,5 y crecer las bacterias a 30 ° C hasta que las colonias (~ 24 h).\nSelección de las transductants\nUna vez que las colonias han crecido en la placa de selección, les restreak LB + Kan solo colonias y crecen a 30 ° C hasta que las colonias solo aparecen.\n4. suprimir el cassette de Kan\nLa transformación con el plásmido de recombinación\nRealizar el espectro de tensión de BL21ΔABCF Kan-resistente.\nCrece la tensión de una sola Colonia en fresco LB (5 mL) complementado con Kan (25 μg/mL) a 30 ° C hasta que el OD600 ~0.5 – 0,7.\nDe aquí en adelante, llevar a cabo los siguientes pasos a 4 ° C o en hielo. Centrifugue las bacterias (5.000 x g por 10 min) y eliminar el sobrenadante.\nLavar el precipitado con agua destilada helada de células dos veces repitiendo el paso anterior de centrifugación y, finalmente, Resuspender el precipitado de células en 100 μl de helada glicerol al 10%.\nEnfriar cubetas de electroporación de 1 mm en el hielo.\nAñadir 1 pg de ADN (pCP20) plásmido a la suspensión de células, mezclar suavemente la suspensión y transferir a una cubeta de electroporación refrescado.\nEstablecer la electroporator a 1,8 kV y electroporate las células.\nRescatar las células transformadas agregando 1 mL de medio SOC y creciendo por 1 h a 30 ° C.\nPlaca de 100 μl de las células en LB + Amp placas y crecen las células en 30 ° C durante la noche.\nInducción de la recombinación\nColonias solo Pick LB + amplificador de la placa e inoculan fresco LB omitiendo todos los antibióticos.\nCrecen las células a la temperatura no permisiva (43 ° C) durante la noche para inducir la expresión de recombinase FLP.\nHacer diluciones seriadas y 50 μl de una dilución de6 5-10 10 en placas no selectivo de la placa y crecer durante la noche a 30 ° C.\n5. verificación de la canceladura del Gene\nVerificación de la pérdida del plásmido y recombinación exitosa\nRacha solo las colonias de las placas de preparado en el paso 4.3.1 en Kan, LB, LB + Amp y las placas LB sin antibióticos, en este orden. Para ayudar en las rayas, utilice una rejilla de Colonia (véase la archivo adicional 1). Crecen las placas a 30 ° C hasta que las colonias (~ 24 h).\nRecoger 10-20 clones que han crecido en la placa no selectivo pero no crecen en medios selectivos para mayor verificación.\nVerificación adicional de colony PCR\nRealizar una colonia PCR con cebadores que flanquean el tamA secuencia de codificación (véase Tabla de materiales).\nPreparar una mezcla PCR master. La cantidad de mezcla necesitada depende del número de colonias a ser probado (ver ejemplo en tabla 1). Mezclar los reactivos en el hielo, añadir la polimerasa de la última.\nHomogeneizar la mezcla PCR master y dispensar 20 μl en tubos de una tira PCR. Recoger una pequeña cantidad de cada colonia para ser proyectada utilizando una pipeta estéril y añadir a un tubo. No olvide incluir la cepa receptora original para la comparación. Opcionalmente, también incluyen la cepa donante.\nEjecutar una reacción de PCR (ver tabla 2 para el programa utilizado).\nPreparar un gel de agarosa al 1%.\nPara un gel de 50 mL, medir de 0.5 g de agarosa y añadir 50 mL de buffer TAE (40 mM Tris, ácido acético al 20 mM y 1 mM EDTA, pH 8.0). Calienta la mezcla en el microondas hasta que se disuelva la agarosa todos.\nUna vez que la agarosa se disuelva, enfriar la solución a aproximadamente 50 ° C y luego añadir 5 μL de ADN tinción colorante. Mezcle bien la solución y verterla en una bandeja de gel en una cámara de fundición. Introduzca una o más filas de peines bien hay pozos suficientes para todas las muestras, así como marcadores de tamaño molecular. Permita que el gel para 30 minutos.\nUna vez finalizado el plazo de la polimerización en cadena, añadir 4 μL de 6 x tinte carga de ADN a cada muestra. Colocar el gel en la cámara de electroforesis y añadir Tampón TAE hasta que los pozos están cubiertos.\nAplicar 10-15 μl de cada reacción de PCR a un pozo en el gel. También añadir 5 μl del marcador de tamaño molecular. A continuación, ejecute el gel durante 30 minutos a 75 V.\nUna vez finalizado el plazo, el gel utilizando a un sensor de luz azul de la imagen.\nNota: La expresión de proteínas de la prueba (YadA y EibD) ha sido descrito en detalle en otra parte23,24. Este es un breve resumen de los pasos principales.\nTransformar BL21ΔABCF ΔtamA with la plásmidos necesaria (YadA pIBA2 y pEibD10 y la plásmidos de control correspondiente) y seleccione transformantes en LB + Amp.\nPara la expresión de la proteína, inocular 100 mL de medio LB + Amp con 1 mL de un cultivo durante la noche de bacterias transformadas y crecer a 30 ° C hasta la fase de registro medio, momento en el que, inducir la producción de proteína con cualquiera de los dos anhydrotetracycline (a 100 ng/mL) o thiogalactoside de isopropilo (a 0,5 mM).\nDespués de 2 h de la inducción a 30 ° C, medir la turbidez de los cultivos y recolectar un número de células correspondientes a 50 mL en OD600 = 1.0 por centrifugación de los cultivos durante 15 min a 4.000 x g. Lavar el sedimento 1 x con 10 mM HEPES, pH 7,4 y luego o bien almacenarlo a-20 ° C o proceso adicional como en el paso 6.2.\nExtracción de la membrana externa\nNota: La extracción de la membrana externa se realiza como se describe en detalle por León et al. 27. a continuación se resumen los pasos principales.\nResuspender el precipitado de células en 1 mL de 10 mM HEPES, pH 7,4, complementado con 10 mM MgCl2 MnCl2, lisozima (0,1 mg/mL) y una pizca de ADNasa I.\nLyse las células (e.g., usando un batidor de grano).\nCentrifugar las células poco (2 min a 15.600 x g) para eliminar restos celulares y trasladar el sobrenadante a un tubo nuevo.\nCentrifugar las células durante 30 min a 16.000 x g, después de lo cual, Resuspender el pellet en 400 μL de 1% N-lauroil sarcosina en 10 mM HEPES, pH 7,4.\nIncubar las células con agitación durante 30 min a temperatura ambiente, después de lo cual, centrifugar por 30 min como el anterior.\nLave el translúcido pellet 1 x con 200 μL de 10 mM HEPES, pH 7,4, resuspender en 30 μL de 10 mM HEPES y añade 10 μL de tampón de SDS-PAGE 4.\nNota: Realizar los análisis de SDS-PAGE y actividad para YadA y EibD descrito28. A continuación se resumen los pasos principales.\nCalentar las muestras a 50 ° C durante 5 minutos antes de cargar en un gel de poliacrilamida, para evitar la desnaturalización de las proteínas.\nDespués de la separación en SDS-PAGE, transferir las proteínas a una membrana (PVDF) de difluoruro de polivinilideno.\nDespués de la transferencia, bloquear la membrana con 2% de polvo de leche desnatada en PBS.\nYadA-colágeno lejos-de western blot\nDespués de los bloqueos, añadir colágeno bovino tipo que diluido en solución amortiguadora de bloqueo a una concentración de 10 μg/mL e incubar la membrana para 1 h.\nLavar la membrana 2 x con PBS + 0.05% Tween20 (PBS-T).\nAñadir el anticuerpo primario (monoclonal anti colágeno COL-1) a la membrana, 1:2,000 diluido en solución amortiguadora de bloqueo.\nDespués de incubar la membrana durante 1 hora, lavar 2 x como se menciona en el paso 6.3.2.2 y luego añadir el anticuerpo secundario [cabra anti-ratón IgG conjugado-rábano peroxidasa (HRP)], diluido 1: 10,000 en solución amortiguadora de bloqueo.\nIncubar la membrana durante 1 hora, luego lavar x 2 con PBS-T. Añadir un sustrato quimioluminiscente mejorado a la membrana según las instrucciones del fabricante y detectar la banda usando una cámara CCD.\nIgG por EibD ensayo obligatorio\nDespués de los bloqueos, añadir un anticuerpo secundario (cabra anti-conejo HRP), diluido 1:2,000 en solución amortiguadora de bloqueo.\nIncubar la membrana durante 1 hora, luego lavar x 2 con PBS. Realizar la detección quimioluminiscente como se menciona en el paso 6.3.2.5.\nGeneración de un tamA Knock-out de BL21ΔABCF:\nLa estrategia mencionada anteriormente se ha utilizado para producir una cepa derivada de BL21(DE3), una cepa de laboratorio estándar utilizada para la producción de la proteína, que es optimizada para producción de proteínas de membrana externa y llamada BL21ΔABCF21. Esta cepa carece de cuatro genes que codifican para proteínas de membrana externa abundante y, en consecuencia, es capaz de producir proteínas de membrana externa más heterologously expresados que la cepa de tipo salvaje. Para probar si el TAM participa en la biogénesis TAA, el gene de tamA fue suprimido en este fondo.\nUn lisado P1 fue preparada de la cepa de colección de Keio JW4179, donde el gene de tamA (anteriormente llamado yftM) la secuencia de codificación se sustituye por una cinta de resistencia de Kan. Entonces, un experimento de transducción de señales se realizó con BL21ΔABCF como la cepa receptora. Se obtuvieron varias colonias resistentes a Kan, después de los cuales dos fueron elegidos para la supresión de la cassette de Kan. El plásmido pCP20, codificación del recombinase FLP, fue introducido en estos clones y, posteriormente, curada por crecimiento a 43 º C en ausencia de una selección de antibióticos. Un número de clones fueron defendido por sensibilidad al amplificador (que es un marcador de pCP20) y Kan, y se obtuvieron varios clones sensibles a ambos. Estos clones fueron verificados por Colonia PCR utilizando cebadores que flanquean el tamA secuencia de codificación y encontraron que el gen tamA había eliminado con éxito (figura 4).\nPapel de TamA en la biogénesis de la TAA:\nTamA ha demostrado para estar implicado en la biogénesis de algunos clásicos autotransporters16 y la inversa autotransporter intimin15. Para probar si TamA es importante para la biogénesis de TAAs, BL21ΔABCF ΔtamA se transformó con los plásmidos que codifican dos proteínas de la prueba, la adhesina de Yersinia YadA y la e. coli Ig-proteína EibD. Estas proteínas se conocen bien en e. coli y se han utilizado como modelos para la biogénesis de la TAA en anteriores estudios23,28.\nDespués de inducir la producción de proteínas, las fracciones de la membrana externa de las culturas de expresión fueron aisladas y analizadas por SDS-PAGE. Las muestras no fueron hervidas para demostrar trimerization de las proteínas. Los trimers ejecutan en tamaños superiores a 100 kDa, mientras que los monómeros esperaba tamaños de 45 kDa (YadA) y 51 kDa (EibD). Se observó ninguna diferencia importante entre los niveles de expresión en BL21ΔABCF y BL21ΔABCF ΔtamA, aunque YadA parece producirse a niveles algo más bajos en la cepa Δ detamA (figura 5A). Sin embargo, lo opuesto parece ser el caso de EibD.\nPara examinar si la falta de TamA podría influir en el correcto plegamiento o transporte de las proteínas, se ha probado su capacidad para unirse a ligandos. Para YadA, esto fue logrado por un colágeno lejos-de western blot (figura 5B). YadA, en ambas cepas, destino colágeno a un nivel similar, demostrando que las proteínas correctamente plegadas y funcional. Del mismo modo, las actividades de la Unión de IgG de EibD en las dos cepas correlacionan con el nivel de expresión (figura 4). Estos resultados demuestran que la supresión de tamA no tiene un efecto significativo sobre la biogénesis TAA, no al menos para estos dos modelo TAAs.\nFigura 1: generación de knock-outs con los casetes antibióticos. Para la producción de los genes knock-outs, un gen de interés (Gene B en este ejemplo) se sustituye por una cinta de resistencia Kan flanqueada por sitios FRT. El casete de la FRT-Kan, a su vez, está flanqueado por corto (~ 50 bp) se extiende de secuencia homóloga a las regiones de aguas arriba y aguas abajo del Gene B. La secuencia de codificación del Gene B se intercambia para el cassette de la FRT-Kan por λ rojo recombinación. Una vez que esto se logra, puede eliminarse el cassette de Kan sí mismo introduciendo el recombinase FLP, que se median una recombinación específica del sitio entre los sitios FRT. Esto accisas el cassette de Kan, dejando un mínimo (~ 100 bp) secuencia en el locus B la cicatriz. Para más detalles, véase Baba et al. 7. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 2: canceladura del Gene por transducción P1. El donante del protector (beige) lleva un cassette de Kan que ha sustituido el gen de interés (amarillo) en el cromosoma (azul). El donante está infectado con el bacteriófago P1. El fago se multiplica en la cepa donante, produciendo una gran cantidad de progenie. La mayoría son tipo salvaje (genoma rojo), pero una fracción son transductoras phages que han incorporado una parte de lo donantes cepa cromosoma en lugar de fago ADN (genoma azul). Una proporción de estos contiene el cassette de Kan (genoma amarillo). Finalmente, la célula huésped infectada descompone mediante lisis y libera los phages en el medio. Estos se utilizan para preparar un lisado. En el experimento de transducción de señales, la cepa receptora (azul claro) está infectada con el lisado preparado a partir de la cepa donante. En una minoría de casos, el destinatario está infectado por un fago transductoras llevar el casete de Kan (mostrado aquí). Si las regiones adyacentes a la cinta de Kan sufren recombinación homóloga, el cassette de Kan se incorpora en el cromosoma receptor reemplazando el alelo endógeno, lo que resulta en clones Kan-resistentes que pueden ser seleccionadas para. La adición del recombinase FLP en un plásmido curable accisas el cassette de Kan, dejando sólo una cicatriz corta secuencia (que se muestra aquí en amarillo), que vuelve el clon al fenotipo sensible a Kan. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 3: ejemplos de placas después de una infección P1. (A) este panel muestra una placa con las placas individuales. (B) este panel muestra una placa semi-confluente. (C) este panel muestra una placa demasiado infectada, donde casi todas las bacterias han sido sometidas a lisis por fagos. Algunas colonias resistentes han crecido fuera de la capa de agar superior. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 4: Eliminación de la tamA secuencia de codificación. El alelo de la canceladura de tamA::kan fue introducido en la cepa BL21ΔABCF por transducción de P1. Después de la supresión de la cassette de Kan, una secuencia de cicatriz (~ 100 bp) es todo lo que queda en el lugar geométrico de tamA . Esto fue verificado por PCR utilizando cebadores que flanquean el sitio de eliminación. En BL21ΔABCF y su cepa parental, BL21(DE3), la PCR da un producto de la longitud de la tamA (el tamaño esperado es 1,7 pares de kilobases) de la secuencia de codificación. En BL21ΔABCF, donde el cassette de Kan ha sido suprimido, el producto corresponde a la secuencia esperada de la cicatriz (145 bp). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 5: Expresión de TAAs por una cepa de eliminación tamA . (A) este panel muestra el SDS-PAGE de membranas externas de las células que expresan el TAAs (YadA o EibD) y controles del vector (pIBA2 y pET22). Las cepas son BL21ΔABCF y su derivado cepa carente de TamA (ΔtamA). (B) este panel muestra un colágeno lejos-inmunoblot de YadA muestras. Las muestras de YadA y pIBA2 controles de panel A fueron transferidos a una membrana PVDF y se incubaron con colágeno de tipo I. Luego probó con un anticuerpo anti-colágeno y detectados por ECL. (C) este panel muestra un ensayo de unión de anticuerpo para EibD muestras. El EibD muestras y pET22 controles de panel A fueron transferidos a una membrana PVDF e incubados con un anticuerpo secundario conjugado con HRP y entonces detectados por ECL. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nReactivo de mezcla de x 1 mezcla de x 7\nAgua grado PCR 17 ΜL ΜL DE 119\n10 x buffer de la polimerasa 2 ΜL 14 ΜL\nmezcla de desoxirribonucleótidos de 10 mM 0.4 ΜL ΜL DE 2,8\nPrimer avance de 100 μm 0.2 ΜL 1,4 ΜL\nPrimer revés de 100 μm 0.2 ΜL 1,4 ΜL\nTaq ADN polimerasa 0.2 ΜL 1,4 ΜL\nTotal 20 ΜL 140 ΜL\nTabla 1: Colonia PCR master mix. La cantidad de mezcla depende del número de colonias que se proyectarán. Además, preparar una reacción de control (tensión receptora original). Por ejemplo, si cinco clones de detección, seis reacciones son necesarias, incluyendo el control. Merece la pena preparar una reacción adicional para asegurarse de que hay bastante mezcla PCR para todas las muestras (repetido pipeteo amplifica pequeños errores de pipeteo). En este ejemplo, preparar una mezcla de 7 x (5 colonias, 1 control y 1 reacción extra).\nPaso Temperatura Tiempo Notas\n4. 70 ° C 2 min 1 min/kb para ser amplificados, redondear\nRegresar 2 24 veces\n6. 12 ° C Para siempre espera final\nTabla 2: Colonia PCR programa.\nArchivo complementario 1: un ejemplo de red Colonia. Haga clic aquí para descargar este archivo.\nTransducción de P1 es un método rápido, robusto y fiable para la generación de canceladuras del gene de e. coli. Esto se demuestra aquí por transducción de un mutante de eliminación de tamA de una cepa de Keio donante a un beneficiario derivado BL21. Las principales etapas en el proceso de transducción de señales son la producción de la transducción de lisado, la transducción de sí mismo, la supresión de los cassettes de resistencia de Kan y la verificación del knock-out por PCR. En total, el proceso toma aproximadamente una semana y no requiere que ningún método de biología molecular para ser utilizado, aparte de la final de la PCR para la verificación. Por lo tanto, P1 transducción puede competir en tiempo con λ y esfuerzo gastado recombinación rojo y es mucho más rápido que la mutagénesis de cambio marcador tradicional.\nEl protocolo presentado es muy robusto y permite la modificación de muchos de los pasos. Sin embargo, hay algunos parámetros críticos. Para las infecciones de P1, es necesario añadir los iones del calcio al medio. El calcio es necesario para la adsorción del fago a la bacteria, y si no añade suficiente calcio al medio reducirá significativamente la eficiencia de la infección. Algunas bacterias de cepas como BL21ΔABCF tienden a agregado en presencia de CaCl221. En tales casos, la bacteria se puede cultivar sin CaCl2, que puede ser agregado a la suspensión poco antes de la infección. Sin embargo, para las cepas más convencionales, 10 mM CaCl2 pueden incluirse en el medio de crecimiento desde el principio.\nPor el contrario, es importante eliminar el calcio libre desde el medio después de la transducción. El citrato es un quelante de iones calcio, y porque éstos son necesarios para la adsorción de P1 a las células del huésped, quitando el calcio libre desde el medio además previene infecciones. Si el calcio no se elimina, los phages infectará otras células a través de la cultura, en el mejor reduciendo la eficiencia de la transducción y lisis en el peor de los casos la cultura entera, incluyendo las transductants.\nOtro paso fundamental es cultivar las bacterias con el plásmido pCP20. pCP20 es un plásmido replicación condicional que no se reproduce a temperaturas de 37 ° C o más; así, para establecer el plásmido en las células, las incubaciones con este plásmido deben ser realizado a 30 ° C (o menos), una temperatura permisiva para la replicación del pCP20. Para curar la pCP20, se utiliza una temperatura alta (43 ° C). Algunas cepas no crecen bien a esta temperatura; en tales casos, 37 ° C debería ser suficiente, aunque el curado del plásmido será algo menos eficiente a esta temperatura.\nCuando las bacterias para probar la sensibilidad a antibióticos de la galjanoplastia, el orden de rayar la placa es importante. El protocolo requiere clones que se trata primero el antibiótico que contiene las placas y finalmente en medio no selectivo. De esta manera, el investigador puede estar seguro de que cualquier falta de crecimiento en medios selectivos será debido a la sensibilidad antibiótica y en lugar de a una potencial falta de material transferido en las placas. Siguiendo el protocolo, no hay crecimiento en la LB + Kan placa valida la supresión de los cassettes de resistencia Kan; no hay crecimiento en la LB + Amp placa valida la pérdida de la pCP20 de plásmidos recombinación; las cepas crecen en la placa LB (que no creció en el mismo experimento veteado en las placas de selección) contendrá el positivo recombinantes.\nLa mayoría de los otros pasos permite un margen considerable. En el protocolo presentado, BL21ΔABCF es cultivadas a 30 ° C, como esta variedad no crece bien a 37 ° C. Sin embargo, las cepas de e. coli sin defectos de crecimiento pueden ser cultivadas a 37 ° C (excepto cuando se transforma con pCP20).\nEl número de bacterias que se utilizan para las infecciones puede variar hasta cierto punto. La relación entre el OD600 y un recuento de viable es aproximadamente lineal entre un valor de600 de OD de 0.1 y 1.0, donde la primera corresponde a aproximadamente 108 UFC/mL y el último a ~ 109 UFC/mL. Sin embargo, esta relación puede variar en cierta medida dependiendo de la cepa en cuestión, el medio de crecimiento y otros factores. Se recomienda que se establezca la relación entre el OD600 y la cuenta viable para cada laboratorio y tensión, particularmente para el cálculo de valores MOI. El número de bacterias en experimentos de infección no es particularmente crítico y 109 UFC/mL representa la fase estacionaria temprana, que es un compromiso razonable entre la densidad celular y la proporción de células viables en la cultura. Si un menor número de bacterias viables se utiliza para la transducción de señales, el número de fagos simplemente debe ajustarse en consecuencia. El Ministerio del interior también se puede variar hasta cierto punto. El protocolo exige un valor MOI de 0,5, aunque cualquier cosa entre 0.1 y 0.5 debe resultar en una buena eficiencia. En una MOI de 0.5, la proporción de phages a las bacterias es 1:2 (es decir, la mitad el número de fagos en comparación con el número de bacterias). En el ejemplo en el protocolo, el OD600 de la cultura es 1.0, y 1 mL del cultivo se utiliza para la transducción; así, el número de fagos necesaria es de 5 x 108. Un valor MOI de 0.5 da un alto nivel de infección, pero reduce el número de bacterias que están doblemente infectadas, que reduciría la eficiencia de la transducción de señales como los phages (infecciosos) de tipo salvaje superan los phages transductoras. Una infección doble con un fago transductoras y un fago infecciosa conduciría a la célula lysis, eliminando así este transductant de la piscina de los sobrevivientes. Por lo tanto, no debe sobrepasarse una MOI de 0.5.\nEl protocolo también permite algunos atajos. En el lugar de preparación de lisados de las placas, algunos autores abogan por preparación de lisados de fago en medio líquido29. Esto puede ahorrar tiempo, no es necesario un paso de incubación durante la noche. Del mismo modo, valorar el lisado de fagos puede no ser necesario. Como se señaló anteriormente, el Ministerio del interior no es muy crítica y razonable eficacia puede lograrse simplemente si se asume que un título de 1010 pfu/mL para un estándar de lisado.\nA pesar de la facilidad de la técnica, P1 transducción no es universalmente aplicable, y varias condiciones deben cumplirse para que pueda ser útil. En primer lugar, una variedad de donantes con un alelo knock-out seleccionable debe estar disponible. Esto se logra generalmente mediante el uso de una canceladura en un casete de resistencia a los antibióticos ha sustituido el gen de interés. La colección de Keio es particularmente útil en este sentido, ya que ofrece una biblioteca lista para usar de antibiótico gen cassette-basado knock-outs que cubre casi todos los genes no esenciales en e. coli K12. Esta colección es particularmente útil para noquear a conservado genes encontrados cepas de e. coli la mayoría (es decir, los componentes del genoma del núcleo de e. coli ). Para genes menos comunes, tales como factores de virulencia de patógenos Escherichia coli cepas o vía metabólica rara genes, la mutación deba ser creado de novo. En tales casos, transducción P1 no puede ser el método de elección. Además de genes esenciales, genes que se requieren para infección P1, como galU, mutaciones que conducen a P1 resistencia30, son pobres blancos para una canceladura por transducción de P1. Otra nota al utilizar la colección de Keio, en concreto, es que algunas tensiones llevan una duplicación del gen específica, donde una única copia fue interrumpida por el Kan resistencia cassette8. En tales casos, el gen de interés puede ser esencial; investigadores recomiendan revisar anotaciones actualizadas para tales genes8. Sin embargo, teniendo en cuenta estas restricciones, transducción P1 permite la eliminación de la mayoría de los genes en cepas de e. coli de laboratorio. Por ejemplo, las diferencias entre BW25113 y BL21(DE3) son pequeñas y afectan sólo un puñado de genes de codificación de la proteína31.\nEn segundo lugar, es importante destacar que la cepa receptora debe ser capaz de una recombinación homóloga para la transducción de señales trabajar. Una cepa que carece el recombinase que Reca puede, por lo tanto, no serán modificados por este método. Esto excluye las cepas estándar de clonación, DH5α HB101, TOP10, y XL-1 azul. RecA puede mediar recombinaciones entre tramos idénticos tan cortos como 8 bp; sin embargo, una región más larga de la alta semejanza aumentará la probabilidad de recombinación significativamente32,33. Otro problema, particularmente con la clínica de e. coli las cepas, es que largas cadenas de O-antígeno pueden enmascarar los receptores P1, que se encuentra en el oligosacárido núcleo de lipopolisacárido34. Además de estos requisitos para la cepa receptora, la cepa P1 utilizada para transducción de señales debe ser un mutante de vir ; Esta mutación es necesaria para una infección lítica completo35.\nUna tercera ADVERTENCIA de transducción de señales es que el gene para ser noqueado debe residir en una región con alta similitud en las regiones que flanquean entre donante y receptoras cepas P1. Si hay una falta de synteny entre las cepas, puede fallar bien el reemplazo blanco del gene de la codificación de la secuencia con el cassette de Kan, debido a las diferencias en el contenido de las regiones flanqueantes. Por lo tanto, antes de embarcarse en la canceladura del gene mediada por P1, los investigadores deben revisar las secuencias de las cepas donantes y receptores para asegurarse de que las secuencias que flanquean son homólogas. Por supuesto, esto sólo es posible si las cepas han sido secuenciadas. En el caso de las cepas con una secuencia desconocida, transducción P1 puede fallar o causar otros problemas, como una conversión del gene en las regiones que flanquean. P1 puede transducir aproximadamente 90 pares de kilobases de ADN; Si hay diferencias en el contenido de genes en las regiones alrededor del gene de la blanco (e.g., pequeñas deleciones o inserciones), es probable que estas se revertirán a la secuencia de donantes. Esto podría tener consecuencias en el fenotipo de la cepa receptora. Por lo tanto, siempre que sea posible, las secuencias de donante y receptor en el gen de interés se deben siempre comparar antes de transducción P1.\nEn conclusión, la transducción de P1 es una manera rápida de transferir un gen específico knock-out a un número de cepas, una vez que se ha generado la mutación inicial de knock-out. Aunque la técnica tiene sus limitaciones, la facilidad y rapidez de su aplicación hacen una alternativa atractiva a otros métodos de canceladura del gene. P1 sólo infecta e. coli, que normalmente limita su uso a esta especie. Sin embargo, algunas variantes de P1 se han desarrollado un más amplio rango de hospederos y puede infectar a otras especies dentro de la familia Enterobacteriaceaee incluso algunos otros γ-proteobacterial, aunque en reducida eficiencia36, 37. incluso la transducción de ADN clonado de e. coli a Myxococcus xanthus, un δ-proteobacterium, ha sido reportado38. En experimentos futuros, estas variantes podrían ser aumentadas con la mutación de vir para ampliar la gama de receptores cepas utilizadas en la canceladura del gene antibiótico basado en cassette por transducción general.\nSe obtuvieron cepas de colección de Keio del proyecto nacional de BioResource (NIG, Japón): e. coli. Agradecemos a Dirk Linke (Departamento de ciencias biológicas, Universidad de Oslo) por su continuo apoyo. Este trabajo fue financiado por el Consejo de investigación de Noruega joven investigador subsidio 249793 (Jack C. Leo).


Región de Cuyo Argentina - Atractivos turisticos, provincias y ciudades\nRegión Cuyo de Argentina\nVisitar las bodegas y videños, parques nacionales, valles, lagunas. Fiesta de la vendimia.\nREGION DE CUYO ARGENTINA\nCuyo que significa país de los desiertos, en lengua indígena es la región de las altas cumbres, los volcanes nevados y las vastas travesías que se extienden desde los Andes y las serranías precordilleranas hasta la llanura esteparia.\nEn la región de Cuyo, se celebra la Fiesta Nacional de la Vendimia en la ciudad de Mendoza, a principios de marzo, y carnavales en La Rioja.\nTambien son muy interesantes visitas a bodegas.


La aprobación de Bachelet está en 24 %, la más baja hasta ahora | Dossier33\nLa aprobación de Bachelet está en 24 %, la más baja hasta ahora\nLa aprobación de la gestión de la presidenta de Chile, Michelle Bachelet, disminuyó dos puntos el pasado agosto y quedó en un 24 %, la más baja de sus dos mandatos, según una encuesta difundida hoy por la consultora Adimark.\nDe acuerdo con los datos del sondeo, el rechazo a la gobernante subió dos puntos respecto del mes de julio y alcanzó el 72 %, con lo que marca un nuevo máximo registrado en 9 años de mediciones.\nCon estos niveles de aprobación, Bachelet supera el mínimo registrado por el expresidente Sebastián Piñera en su momento de menos popularidad, tras el inicio de las movilizaciones estudiantiles en abril de 2011, cuando tuvo un apoyo del 26 %.\nSegún Adimark, los hechos políticos que marcaron agosto fueron la caravana de camioneros de la región de La Araucanía hacia Santiago para protestar por la violencia que se vive en el sur del país y el cese del intendente de esa región, Francisco Huenchumilla.\n“Todo ello ocurrió en medio de un adverso conflicto con la delincuencia y un aumento del precio del dólar”, precisó la consultora.\nLa encuesta muestra también que la evaluación del Gobierno volvió a romper registros negativos en la serie histórica con una aprobación del 18 % y un rechazo del 79 %, cuatro puntos más que en julio.\nEl canciller, Heraldo Muñoz, es el ministro mejor evaluado del gabinete con un respaldo del 80 %, mientras que en el otro extremo se encuentran los titulares de Educación, Adriana Delpiano, y Transportes, Andrés Gómez-Lobo, con un 30 % cada uno.\nLas coaliciones políticas también mantienen una evaluación negativa. La Nueva Mayoría, el bloque de centroizquierda que apoya al Gobierno, tuvo un rechazo del 74 %, y la Alianza, de derechas, alcanzó una desaprobación del 75 %.\nLa encuesta se realizó del 7 al 28 de agosto mediante 1.033 entrevistas telefónicas a ciudadanos mayores de edad de todo el país, con un margen de error del 3 % y un nivel de confianza del 95 %. EFE


El chico de las gafas de sol: El hombre perfecto (II)\nEscrito por Eloy en 11:49\nNo.me.pises.que.llevo.chanclas. 27 de diciembre de 2011, 9:29\nqué gran entrada!!! pero existe el hombre perfecto??? :)\nun abrazo! y felices fiestas!!!!!!!!!!\nSusan Lenox 29 de diciembre de 2011, 23:00\nUmmm...para mi estaría entre Gary Cooper,Jeremy\nIrons y Jon Hamm, es que tengo tan mal gusto.\nAlejandro Macías 20 de enero de 2012, 18:07\nJajajaja... en respuesta a tu post en mi blog... me temo que el clima de aquel verano fue tan poco agradable que se aburrieron mucho, tuvieron tiempo para todo ;) aunque tu teoría debe ser tenida en cuenta, voy a estudiarla :)\nNo.me.pises.que.llevo.chanclas. 20 de enero de 2012, 18:11\nTe recomiendo Charada a la de YA!!! :)\nme ha encantado tú frase de Hannibal :)


Avanza una obra importante para evitar inundaciones en el noroeste – Diario El Ciudadano y la Región\nAvanza una obra importante para evitar inundaciones en el noroeste\nLos trabajos hídricos, que presentan un avance del 72%, protegerán a más de 192 hectáreas del barrio 7 de Septiembre y Hostal del Sol. “Estas obras de protección tienen como objetivo disminuir el riesgo hídrico2, aseguró el ministro de Infraestructura y Transporte, José Garibay\nEl Ministerio de Infraestructura y Transporte de la provincia de Santa Fe avanza en la ejecución de las obras hídricas del Emisario 32 “7 de Septiembre” en Rosario.\nEl Emisario 32 mejorará la calidad de vida de más de 25.000 vecinos. Las obras secundarias impactarán de manera directa en el barrio 7 de Septiembre y parte de Hostal del Sol. Además, se mejorará el sector comprendido entre calle Schweitzer, Avenida de Circunvalación y Arroyo Ludueña.\nEl gobierno de la provincia de Santa Fe financia obras hídricas de jerarquía para proteger estratégicamente a barrios de la ciudad de Rosario.\nLa provincia ya lleva invertidos $ 175.000.000 en la construcción de los emisarios 27, 28 y 32, en un trabajo integral junto al municipio.


DESCUBRIENDO LUGARES INCREIBLES: EL OLVIDO DE UN TESORO\nLAS RUINAS DEL CONVENTO FRANCISCANO\nEl convento de San Antonio de Padua de Garrovillas de Alconetar, Cáceres, se encuentra situado en las cercanías de la villa, en lo alto de una loma desde donde se divisa toda la localidad. Fue fundado en 1476 durante el reinado de los Reyes Católicos, Isabel I de Castilla y Fernando II de Aragón.\nLa Bula fundacional es del 16 de Marzo de de 1476 y fue otorgada por el Papa Alejandro VI a petición de los Condes de Alba de Liste.\nLo que hoy podemos contemplar son los restos del esplendor que tuvo ya que se encuentra en estado de abandono y ruina, eso si, unas bonitas e interesantes ruinas.\nAl exterior podemos observar el escudo de armas de la casa de Alba de Liste con la figura bajo este de Don Enrique Enriquez con una soga al cuello. La leyenda cuenta que allá por el año 1476, en la batalla por la corona de Castilla en Toro, Zamora, entre los partidarios de Juana la Beltraneja y su tía Isabel la Católica fue apresado el Conde de Alba de Liste Don Enrique Enriquez, esposo de Doña María Teresa de Guzmán, oriunda de Garrovillas. Esta rogó a San Antonio de Padua para la liberación de su marido y como pago ofreció construir un convento bajo esta advocación.\nEsta figura del Conde de Alba de Liste no dejará de repetirse en distintos escudos del edificio.\nEste edificio en origen Franciscano de reducidas dimensiones fue creciendo y ampliando promovido por los Condes de Alba de Aliste y los propios frailes. En la actualidad conserva algunos elementos góticos primitivos.\nNada más traspasar la puerta de entrada nos damos cuenta que se trata de un edificio de características monumentales. Al levantar la mirada nos asombramos de la magnífica bóveda de crucería renacentista que se sostiene a duras penas por el abandono progresivo del convento.\nLa iglesia es de nave única y tiene el ábside poligonal cubierto todo con esas preciosas bóvedas de crucería, a los pies destaca el coro y la otra puerta de acceso que es visible solo desde el exterior ya que está tapiado el acceso interior supongo para evitar un posible derrumbe.\nSon muchos los detalles en los que detenernos, todo está finamente labrado con figuras vegetales, ángeles, y otros motivos.\nEn los dos lados de la nave vemos los enterramientos de los primeros Condes de Alba de Liste, Enrique Enríquez de Mendoza y María de Guzmán y Figueroa, son enterramientos muy ornamentados de estilo barroco. Como podemos observar en las fotos los actos vandálicos y desidia por parte de sus propietarios y la administración han conseguido que tengan este lamentable estado.\nMuchos son los detalles que tiene esta iglesia, no solo la nave, también posee una excepcional sacristía, de una pequeña nave cubierta con una cúpula renacentista apoyada sobre pilastras cuadradas de pizarra y ladrillo. Las paredes están decoradas con pinturas al fresco y de tonos dorados. Esta sacristía fue sufragada por los donativos de los habitantes del pueblo. Como el resto del edificio el estado de abandono de esta capilla es alarmante.\nEn el año 1540 se reforma la iglesia y se construyen la capilla mayor y los sepulcros. No paran de sucederse reformas y ampliaciones incluyendo al claustro.\nPor una puerta lateral desde la iglesia accedemos al Claustro del Convento, su estado ruinoso se acentúa aquí, es de estilo sobrio renacentista y dos alturas. El piso inferior posee arcos de medio punto sostenidos por pilares cuadrados de granito con molduras decorativas y con bóvedas de arista, en este caso tres arcadas por lado. La galería superior a su vez está sustentada por columnas toscanas siendo seis por cada lado y sin arcos sino dinteles. Estas columnas sostienen la cornisa, adornada con triglifos y metopas lisas.\nEn el claustro estuvieron las Capillas del Cristo de las Injurias y la Capilla de la Vera Cruz, ambas realizadas en estilo renacentista. Además todas las paredes y muros del claustro bajo estuvieron decoradas con importantes pinturas al fresco de las que hoy en día poco podemos disfrutar.\nEl porqué de su abandono se debe a la desamortización de Mendizabal, una vez en manos ajenas a los monjes se convirtió primero en fábrica de tejidos, herrería, esquiladero de ovejas y después en almacén, también el expolio por parte de los vecinos han contribuido al estado ruinoso en el que se encuentra.\nTambién se cuenta que los vecinos quemaron retablos, picaron suelos y destruyeron paredes buscando el posible tesoro de los frailes. Las tierras se subastaron y algunas dependencias se vendieron. El estado de ruina del inmueble es importante sin que a día de hoy se hayan tomado medidas para solventarlo, cubierto de pintadas, paredes y techos a punto de desplomarse y a merced del expolio y vandalismo.\nCompletamente irreconocibles están el refrectorio, la sala capitular, cocinas y resto de dependencias de este magnífico convento, solo podemos intuir como eran ya que los escombros y la maleza abundan en este lugar. Los techos ya no existen, las pinturas están desaparecidas, paredes y decoraciones por el suelo, así está toda esta parte.\nA cada paso que damos nos encontramos con más dificultades para seguir, pensamos que en breve alguna parte caerá y bien pudiera causar una desgracia.\nCon buen criterio nos disponemos a abandonar el convento que se encuentra supuestamente cerrado al público ya que la puerta está abierta y no existe cartel ni candado que impida el paso este inmueble está catalogado por la Junta de Extremadura como Bien de Interés Cultural "B.I.C." con categoría de monumento y a su vez se encuentra en la Lista Roja del Patrimonio de Hispania Nostra.\nEsperamos que las administraciones tomen carta en el asunto, pero no para cerrarlo y tapiarlo sino para consolidar la ruina y asegurarlo para que se pueda visitar con seguridad para el visitante.\nDejamos el Convento de San Antonio de Padua ( 39°42'39.5"N 6°33'25.9"W ) y continuamos hacia la población de Garrovillas de Alconetar y su espectacular Plaza porticada.\nOTRAS ENTRADAS EN MI BLOG\nPublicado por zniebla en 4:59\nEtiquetas: #beautiful, #cute, #Extremadura, #fashion, #follow, #followme, #happy, #instagood, #like4like, #love, #photooftheday, #tbt\nUbicación: Unnamed Road, 10940 Garrovillas de Alconétar, Cáceres, España


Nos encontramos ante el tipo de juego que tan sólo puede amarse u odiarse, siempre dependiendo del criterio y los gustos de los jugadores. Entonces, ¿Por qué esta ambiguedad?. Hay muchos que dicen que no se trata de un juego, sino más bien de una película interactiva en la que se le deja una mínima parte del control al propio jugador. Sin embargo, en mi opinión, ésta es una obra interesante de jugar, ya sea por la particularidad de su estilo de juego o por la trama. No hacen falta demasiados ingredientes para sumergir al jugador en una buena historia de detectives.\n¿Quién será el asesino del Origami?


Bebé murió luego de ser olvidada por su mamá en el carro por 9 horas | Alerta Paisa\n15 Sep 2021 08:52 AM\nBebé murió luego de ser olvidada por su mamá en el carro por 9 horas\nEntre las 8:30 a.m. y las 5:30 p.m la bebé permaneció encerrada en el vehículo.\nUn terrible accidente que involucra a una bebé de apenas un año de nacida se registró en las últimas horas en Texas (EE.UU.).\nUna pequeña bebé fue hallada muerta al inferior de un vehículo, luego de que su propia mamá la dejara olvidada en el carro por más de nueve horas.\nLea también: Mujer comía hamburguesa y le salió un dedo humano al cuarto mordisco\nBebé de un año muere encerrada dentro de un carro\nDe acuerdo al informe oficial, la mamá de la pequeña olvidó dejarla en la guardería y de ahí que permaneciera por tanto tiempo dentro del vehículo.\nEl sheriff del condado de Harris, Thomas Gilliland, dijo que la mamá mientras iba rumbo a su casa se distrajo y no se percató que la bebé seguía en el carro.\nSolo se dio cuenta de la situación cuando volvió a tomar su vehículo para ir hasta la escuela de sus otros dos hijos para retirarla.\nLea además: Por salvar a su nieto, abuela perdió trágicamente la vida.\n"La mujer dejó a sus otros dos hijos, una niña de cinco años y un niño de tres, pero que trajo a la de un año de regreso con la intención de dejarla más tarde después de que ella hiciera sus recados", dijo el alguacil a People.\nSe percató de la muerte de la bebé de manera insólita\nY es que, tras el paso de las horas, la mamá fue a la guardería a recoger a sus pequeños en un carro distinto. Una vez preguntó por la bebé los cuidadores le respondieron que la niña no se encontraba en el establecimiento.\nLuego de insistir en que sí la había dejado en la guardería, la madre junto al supervisor de la guardería volvió a su casa. Allí fue hallada la bebé muerta en el asiento trasero del carro que estaba en el estacionamiento de la vivienda.\nEl informe de la policía indica que la bebé pudo haber estado encerrada en el vehículo por casi nueve horas, desde las 8:30 a.m. y hasta las 5:30 p.m.\nMás noticias: Murieron 14 miembros de una familia por caída de un rayo\nPese a que de momento no se han determinado las causas de la muerte, todo parece indicar que las altas temperaturas pudieron haber contribuido a la muerte de la criatura.


El otro ataque a Gaza - Por: Mariano Ali* @aliperiodista\nEl otro ataque a Gaza\nPor: Mariano Ali* | Jueves, 12/08/2010 10:39 AM | Versión para imprimir\nLos medios de “comunicación” legitiman el poder económico y político establecido. Esta máxima, no tan novedosa para muchos persigue varios objetivos de dominación y domesticación de la sociedad actual.\nRecientemente el gobierno sionista de Israel, como parte de su política genocida contra PALESTINA, atacó a una flotilla de barcos que se proponía llevar ayuda humanitaria al sitiado pueblo de Gaza; una vez más, la mayoría de los “medios de comunicación” obviaron este suceso; o, en el peor de los casos, lo manipularon tratando de justificar este ataque en el cual murieron varios de los activistas y se secuestró a un periodista de Telesur.\nMás allá de este lamentable hecho; queda en evidencia otra vez la complicidad de los medios de “comunicación”; los cuales, funcionan más como agencia de propaganda del sionismo e invierten los roles señalando al gobierno de Israel como las víctimas y a los palestinos como terroristas.\nEstas acciones de la lógica mediática internacional no son aisladas; son, en esencia, otro ejemplo de cómo opera la derecha internacional; la cual, hace uso de los elementos de la superestructura para legitimar sus acciones. No en vano Kissinger (de origen judío) ejecutó como política de Estado de los EE.UU., que a Allende se le debían crear frentes de conspiración desde los medios chilenos y agencias extranjeras; esto lo cito, por si algún sesudo analista, quiere inscribir la manipulación de lo que ocurre en Gaza, como un simple error de orientación editorial planteado por quienes manosean el periodismo en estos tiempos.


Mantenimiento preventivo y correctivo. Reemplazo de componentes eléctricos, mecánicos e instrumentos. Trabajo en CCM y en tableros de campo. Mantenimiento programado de motores a e...\nBuscamos de manera urgente un electromecánico,. Sus funciones serán. Tareas de neumática, hidráulica y soldadura para mantenimientos preventivos y correctivos. Las Condiciones que ofrecemos...\nDescripción. Se necesita un Técnico mecánico o electromecánico para empresa metalúrgica, con amplia experiencia en manejo de Centros de mecanizado, matriceria, automatización, máquina de...\nLos candidatos deberan contar con experiencia no menor a 5 años en el puesto. Conocimientos idoneos en mantenimiento preventivo, correctivo y predictivo de maquinaria industrial. P...\nImportante compañía dedicada al procesamiento y comercialización de materiales metálicos se encuentra en la búsqueda de un Técnico Mecánico o Electromecánico para ocupar el puesto de...\nResponsable de acciones de medio ambiente y mantenimiento de ISO 9000 y 14001. Requisitos. Ingeniería (Mecánica, Electromecanico, Industrial,, Mecatrónico, eléctrico o equivalente...\nTécnico de Operación y Mantenimiento de Gasoducto\nNivel Terciario o Secundario con especialización técnica en Mecánica. Electromecánico. Conocimientos... Experiencia. Deberá contar con experiencia en tareas de mantenimiento mecánico. electromecánico y o...


Música, asados y amistad: una vida llena de Dios. - Opus Dei\nNació en Córdoba, pero vivió casi toda su vida en Buenos Aires. Su papá, Carlos Daniel, es médico, y su mamá, Rosi, psicopedagoga. Tiene tres hermanas Lucía (33), Candela (20) y Samira (15), y un hermano, Ignacio (28). Heredó la pasión de su papá y se recibió de médico en el año 2014. Ese mismo año, viajó a Roma para estudiar Teología e iniciar un camino que tiene como próximo destino su ordenación sacerdotal.\nNo se considera nostálgico, pero extraña de su vida en Argentina “la gran tradición del asado de los jueves” en el centro Arboleda. El ritual tenía dos etapas: “Jugar al fútbol (si se podía), y después, lo que era fijo: el asado con amigos. Éramos felices ahí”. Y es que Martín asocia la amistad con el compartir la vida, tanto las alegrías como los problemas. “Vas incorporando otras biografías a tu vida y eso le da muchísimo contenido y riqueza a la tuya también”. De hecho, al preguntarle sobre qué haría cuando visite Argentina, responde que después de su primera Misa en el país, celebraría con amigos: “Haría una gira gastronómica con asaditos para ir disfrutando con los distintos grupos que hace tanto no veo”. Entre música y amistad, compartir las vivencias romanas y acercarlos a su amigo Jesús, que invita siempre a ir para adelante y jugarse por los demás.\nMás información sobre la ordenación de 29 sacerdotes del Opus Dei el próximo sábado 5 de septiembre en la basílica de San Eugenio de Roma.


GESTIÓN EN SALUD PÚBLICA: La nueva Mesa de AP del ICOMEM continuará trabajando para mejorar las condiciones de los médicos del primer nivel - OMC Y Colegios - Elmedicointeractivo.com\nLa nueva Mesa de AP del ICOMEM continuará trabajando para mejorar las condiciones de los médicos del primer nivel - OMC Y Colegios - Elmedicointeractivo.com\nLa nueva Mesa de AP del ICOMEM continuará trabajando para mejorar las condiciones de los médicos del primer nivel\nEntre los objetivos de este órgano asesor de la Junta Directiva colegial, que se acaba de constituir, están la mejora de la prescripción inducida y la adecuación de los cupos de pacientes\nLa nueva Mesa de Atención Primaria del Colegio de Médicos de Madrid se acaba de constituir de forma oficial tras las elecciones celebradas el pasado 10 de marzo. Este órgano asesor de la Junta Directiva del ICOMEM, formado por 58 representantes elegidos democráticamente, tiene entre sus prioridades continuar trabajando para mejorar las condiciones profesionales de los médicos de Atención Primaria. “Queremos que el paciente reciba una asistencia sanitaria de máxima calidad y para ello, es necesario aumentar los recursos profesionales y adecuar su organización y eficiencia”, ha explicado el Dr. Ignacio Sevilla, vocal de Primaria del ICOMEM y presidente de la Mesa de AP.\nLa anterior Mesa de Atención Primaria, constituida por 65 representantes, trabajó en el período comprendido entre el mes de abril de 2013 y el mes de diciembre de 2016. Una de sus primeras iniciativas fue manifestar su rechazo al Plan de Medidas de Garantía de Sostenibilidad del Sistema Sanitario Público de la Comunidad de Madrid, que finalmente fue suspendido.\nEn los encuentros mantenidos se ha puesto asimismo encima de la mesa la denuncia sobre los recortes en AP y SUMMA. Para los representantes de la Mesa de AP, la reducción del presupuesto para suplentes y la amortización de plazas han tenido como consecuencia “una grave merma de la calidad asistencial, así como de la seguridad del paciente y de la salud de los profesionales implicados”. En esta línea, también han destacado que se han paralizado proyectos de investigación por falta de medios.\nLa Mesa de AP también ha mostrado su preocupación por el desgaste profesional y las agresiones. Respecto al primer tema, se aprobó la puesta en marcha de un estudio que está en marcha en estos momentos. En cuanto a las agresiones, se revisó el protocolo sobre situaciones conflictivas para su buen conocimiento, actualización y puesta en marcha en AP.\nDurante estos últimos cuatro años este órgano ha exigido en cada reunión mantenida con la Consejería de Sanidad la necesidad de cumplir la sentencia sobre directores de centro. Y además se ha emitido una carta sobre el Decreto de Estructuras, se ha solicitado la activación de la carrera profesional y se ha discutido sobre el Anteproyecto de Ley sobre ITs.


Nicaragua: El papel de la mujer en la defensa del territorio y de las formas comunales de vida comunitaria entre campesinos, afrodescendientes y comunidades originarias\nNIU 05.Feb.20 Campo\nDefender sus tierras y el medioambiente les ha costado la vida a muchas mujeres alrededor del mundo, especialmente en América Latina. El 2017 fue un año letal para activistas de 22 países, según denunciaba el año pasado la organización británica Global Witness que reportó que al menos 207 líderes indígenas, activistas y ecologistas murieron por proteger sus hogares y comunidades de la minería, la agricultura a gran escala y otros negocios que ponen en peligro sus medios de vida y su modo de vida. A pesar de ello, siguen luchando. En Nicaragua, tres mujeres han defendido la Tierra. Dolene Miller, Elba Rivera y Francisca Ramírez, se han puesto al frente en la defensa de los territorios de campesinos, afrodescendientes e indígenas. Estas son sus historias:\nNiú 05.Ago.18 Análisis y Noticias


Choques en Intersección | West Palm Beach Abogado de Accidente de Moto\nChoques en Intersección\nRepresentando a Víctimas de Accidentes de Motocicleta en Florida del Sur\nA menudo, los motociclistas resultan lesionados en intersecciones cuando los conductores no respetan las reglas de tránsito y golpean a un motociclista que cruza. En Frankl Kominsky, sabemos cuánto daño puede causar un automovilista cuando provoca un accidente. Nuestros abogados de accidentes de motocicleta han ayudado a muchos residentes de Florida del Sur a recibir una compensación después de sufrir lesiones en un choque en intersección. Ofrecemos una representación jurídica agresiva y dinámica para ayudarle a señalar responsables a aquéllos que lo lesionaron.\nLos Choques en Intersección Pueden Causar Lesiones Graves\nLas intersecciones son sitios comunes de accidentes. En 2014, la Oficina de Análisis de Políticas y Gobierno de la Legislatura de Florida presentaron un reporte sobre las cámaras de luz infrarroja en cruces de calles. Se reveló un incremento del 12 por ciento de choques en intersecciones el primer año de haber sido instaladas las cámaras infrarrojas en estos lugares.\nCuando una motocicleta se ve involucrada en un choque, su conductor puede sufrir lesiones devastadoras. El impacto de la colisión puede lanzar a las personas fuera del vehículo hacia el tráfico o contra una estructura. Fracturas de huesos, lesiones cerebrales, y daño en la espina dorsal, no son resultados raros en este tipo de accidentes.\nUn motociclista puede dar los pasos para reducir el riesgo de daños. Por ejemplo, puede usar un casco para protegerse contra lesiones en la cabeza y usar equipo con reflejantes para estar visible a otros automovilistas. Sin embargo, cuando sucede un accidente, la víctima de un choque de motocicleta puede levantar una demanda por lesiones contra el conductor que haya provocado la colisión en una intersección.\nReclame Una Indemnización A Través de una Demanda por Negligencia\nSi el chofer de un automóvil o camión actúa negligentemente, provocando un accidente, puede ser señalado responsable por sus lesiones. La mayoría de choques en intersecciones son el resultado de la negligencia. Si usted puede demostrar que la conducta negligente del conductor causó sus lesiones, potencialmente podría recibir una compensación por daños.\nUsted puede probar la negligencia al demostrar que el demandado tenía la obligación de tomar unas precauciones, que el demandado violó esa obligación, que usted sufrió lesiones como resultado, y que surgieron daños cuantificables del accidente. Todos los choferes en Florida tienen la obligación de tomar unas precauciones razonables para evitar riesgos previsibles o daños a otros. Cuando sucede un choque en una intersección, usualmente se debe a que el conductor no tomó precauciones. A esto se le llama violación de la obligación de diligencia. Por ejemplo, un chofer podría violar la obligación de diligencia si se pasa un semáforo en rojo. Usted debe señalar la acción u omisión en llevar a cabo una acción que constituyó una violación a esa obligación. Después debe demostrar que esa violación está causalmente ligada a sus lesiones. En otras palabras, deben ser un resultado previsible de la falla del demandado en tomar un nivel apropiado de precauciones.\nSi usted puede demostrar los elementos de negligencia, podría recibir una indemnización para recuperar gastos por daños relacionados con el accidente. Sin embargo, en algunos casos, sus propias acciones podrían haber contribuido a provocar el choque. Esto puede afectar en la cantidad que pudiera recuperar finalmente en su caso.\nUn choque en una intersección podría ser el resultado de negligencia tanto del conductor como del motociclista. En Florida, una víctima puede recibir una compensación por daños aún si fue más negligente que el demandado. Este estado acata una regla de culpa comparativa pura, lo que significa que una víctima puede obtener una indemnización por daños mientras no sea completamente responsable del choque. La compensación se verá limitada al porcentaje de culpa del demandado. Es decir, si se considera que el demandado es un 60 por ciento responsable del accidente, usted solamente podrá recibir un 60 por ciento como compensación total por sus daños por parte del demandado.\nLa indemnización podría extenderse al reembolso de gastos médicos y de hospital, cualquier pérdida de ingresos, daño en propiedad, y dolor y sufrimiento, entre otros tipos de gastos surgidos del choque. Usted sólo tiene cuatro años a partir de cuando ocurrieron sus lesiones para presentar una demanda por negligencia en Florida. Un abogado experto puede ayudarle a proteger sus derechos a tiempo.\nAbogados de Choques de Motocicleta Sirviendo en Boynton Beach\nLos dedicados abogados de choques de motocicleta de Frankl Kominsky están comprometidos a ayudar a víctimas en Boynton Beach y comunidades circunvecinas a reclamar la indemnización que merecen. Nuestros abogados ofrecen una representación agresiva y dinámica para auxiliarle a levantar una demanda contra la parte que haya provocado sus daños. Si usted resultó lesionado en un choque en intersección, llámenos hoy mismo al (855) 800-8000, o bien, contáctenos en línea para recibir una consulta gratuita y sin compromiso. Damos servicio a clientes en Delray Beach, Boca Raton, y Lake Worth, entre otras ciudades en todo Florida. Nuestro personal habla con fluidez español y criollo.\nChoques de Costado\nChoques por Dar Vuelta a la Izquierda\nAccidentes por Cambiar de Carril Sin Precaución


Haciendo las obras de Jesús: Libro 1: Convirtiéndose en un discípulo que ama no Apple Books\n«...El que en mí cree, las obras que yo hago, él las hará también; y aun mayores hará…» Juan 14:12 (Reina Valera 1960).\nEsta es la promesa de Jesús, pero ¿es verdad? ¿Podemos realmente hacer las mismas obras que Jesús hizo? La respuesta es un resonante ¡SÍ! Personas en todo el mundo están viviendo la realidad de esta promesa, y ¡USTED también puede comenzar a ser parte de este ministerio de amor y poder que Jesús prometió y vivió diariamente!\nEn esta aventura decisiva, usted comenzará a aprender:\n- Maneras prácticas de demostrar a diario el amor de Jesucristo.\n- A traer la realidad de Cristo a su vida diaria.\n- A caminar en el Espíritu a cada momento.\n- ¡A ser completamente transformado en la persona que Dios ha planeado usted sea!\nSe trata de que todos nosotros nos convirtamos en una iglesia que demuestre la realidad de Cristo a un mundo que perece y que quiere ver pruebas.\nMais livros de Alan Drake\nA Dispersão de Babel e Por Que a Sua Igreja precisa Dela!


5 MEJORES Historietas de Educación - historietas.net\nHistorietas > Historietas de Educación\nLas historitas de educación van más allá de las lecturas educativas convencionales, son una nueva forma de impartir y adquirir conocimientos de manera más didáctica y pedagógica, donde un niño o adolescente puede alimentarse de información sin que el proceso de aprendizaje sea pesado ni agobiador.\nY por suerte, contrario a lo que puede llegar a pensar, existe en internet una gran cantidad de historietas de educación infantil, ambientales, financieras y en definitiva, una amplia gama de historietas destinadas a la pedagogía.\nTambién las historietas de educación ambiental han tomado gran relevancia en los últimos años, las cuales más que una forma de entretenimiento, hacen un llamado a la conciencia y a la conservación de nuestro entorno.\nDichas historietas ambientales se pueden encontrar en distintas formas, ya sean estas mudas, o con pequeños diálogos que hacen fluir una trama simple, pero con un poderoso mensaje.\n5 MEJORES Historietas de Educación\nPor otra parte, tenemos las historietas en educación inicial, las cuales son un perfecto complemento pedagógico cuando se tiene como objetivo enseñar las cosas básicas a los más pequeños.\nEstas ayudan increíblemente a que los niños puedan adquirir de forma amena conocimientos básicos, como los relacionados con las matemáticas y el lenguaje.\nManejar las finanzas adecuadamente es algo que cuesta más de lo que se puede llegar a pensar. Además, esta tarea se dificulta más cuando se carece de los conocimientos básicos de la educación financiera.\nPor lo tanto, es ideal inculcar en los niños el interés por las finanzas, y esto se puede lograr gracias a la disponibilidad de historietas de educación financiera.\nEnseñar esto en nuestros días se ha vuelto una necesidad apremiante, pero por suerte contamos con los medios para hacer llegar la información. Una forma de fomentar el deporte en los jóvenes es por medio de historietas de educación física.\nY estas usualmente no representan una fuente de información muy educativa, pero si ayuda bastante al entendimiento de ciertas maniobras para los más pequeños.\nNo obstante, lo ya mencionado no es lo único que necesita conocer un niño, por lo que de igual forma se recomienda la lectura de historietas de educación infantil.\nY es que la correcta educación de un niño es el seguro de un futuro próspero para una nación, y que mejor que hacerlo hoy en día que por medio de los cómics e historietas educativas, siendo estos una herramienta eficiente para para fomentar el aprendizaje.


Un jurado joven y profesional eligirá los premios de Cinema Jove - Cultur Plaza\nVALÈNCIA. El Festival Internacional de València, Cinema Jove, ha seleccionado al jurado que determinará el palmarés de su 34º edición. Ocho profesionales jóvenes que decidirán los premios de las Secciones Oficiales de Largometrajes y Cortometrajes.\nEl director del Festival, Carlos Madrid, ha destacado que “es un grupo de gente joven, en concordancia con el fundamento del Festival, que además son grandes profesionales en sus respectivos ámbitos”. Aunque su nexo común es la cinematografía, todos ellos tienen trayectorias profesionales diferentes; así lo corrobora Carlos Madrid: “Hemos buscado un jurado internacional que tuviera trayectorias profesionales diferentes para que el debate sea más amplio y enriquecido”.\nEl jurado de Sección Oficial de Largometrajes de Cinema Jove está compuesto este año por cinco miembros internacionales: el director de teatro y actor, Francesco Carril, la escritora, directora y actriz israelí, Hadas Ben Arroya, el autor, director de teatro y cortometrajista Nicolás Pacheco, la productora Loes Komen y la diseñadora y directora de arte Rūta Kiškytė.\nFrancesco Carril colabora desde 2008 con el Odin Teatret. En 2009 forma parte de la segunda promoción de la Joven Compañía Nacional de Teatro Clásico. Ha colaborado con Vicente Fuentes como asistente en el Taller de Verso del Festival Internacional de Teatro Clásico de Almagro y como actor ha protagonizado los largometrajes Los ilusos y La reconquista, dirigidos por Jonás Trueba.\nLa escritora, directora y actriz israelí Hadas Ben Aroya filmó su primer cortometraje, Sex Doll, en 2013, con el que ganó el premio al Mejor corto en el Festival de Cine de Shanghai. Su primera película, People That Are Not Me, se estrenó en el Festival Internacional de Cine de Locarno y ganó el Gran Premio del Festival de Cine de Mar del Plata. Participó en Berlinale Talents 2017. Nymphie, su segundo largometraje, se desarrolló en el laboratorio de guionistas de Sundance 2017.\nNicolás Pacheco es autor, director de teatro y cortometrajista. Ha recibido el Premio RTVA a la Mejor Creación Andaluza. Jaulas, su primer largometraje, fue estrenado en el Festival Internacional de Cine de Valladolid y en el Festival de Cine Europeo de Sevilla. Por este trabajo ha recibido 13 nominaciones y cuatro galardones de los Premios del Cine Andaluz. Ha publicado un libro de prosa poética titulado Para que me imagines.\nLoes Komen es fundadora de Room for Film junto a la productora Eva Verweij. When Grey is a Colour, su trabajo de graduación en la Netherlands Filmacademy, dirigida por Marit Weerheijm, ganó el Student Oscar en 2017, el premio CILECT, fue seleccionada en Camerimage y ganó dos premios principales del jurado en TIFF Kids. Loes fue nominada para el premio anual de postgrado de Film Producers Netherlands y es profesora invitada en la Netherlands Filmacademy de Ámsterdam. Asistió al Berlinale Talents 2019, al Rotterdam Lab en IFFR 2018 y fue Talent on Route en el HFM de 2018.\nRūta Kiškytė es una comunicadora visual, diseñadora de producción y directora de arte lituana. Ha trabajado como diseñadora de producción para series de televisión y anuncios con directores como Harald Zwart, Brian Lee Hughes, Joakim Reveman, Greg Bray, Jallo Faber o Antonio Paladino. Trabaja como directora de arte independiente para clientes que incluyen New! creative agency, House of Makers, May agency, Drama Burger. Recibió una beca del Consejo de Cultura de Lituania para completar el proyecto fotográfico documental Converted Interiors en 2019.\nJurado Cortometrajes Sección Oficial\nLa Sección Oficial de Cortometrajes contará con tres miembros para deliberar el palmarés:\nMaría Manero es una realizadora independiente licenciada en Bellas Artes por la Universidad del País Vasco, especializada en audiovisuales y animación. Ha realizado proyectos variados como mapping, teatro animado, documentales o clips musicales. Estudia el Máster en Animación Stop Motion de la University of the West of England. Seguidamente cursó el Máster en Animación de la UPV, donde desarrolla el proyecto Patchwork gracias a la Beca de Fundación CAN.\nEl ámbito de la animación está representado en la animadora y dibujante polaca Renata Gąsiorowska. Ha realizado cuatro cortometrajes, algunos videos musicales animados y varios cómics cortos publicados en todo el mundo. Su corto Pussy fue premiada en festivales como el AFI Fest, el Festival Internacional de Cortometrajes de Clermont-Ferrand, Interfilm Berlin y el Filmfest Dresden. Actualmente está terminando su última película.\nPor último, el productor audiovisual, gestor y programador cultural y miembro de la European Film Academy, José Manuel Zamora García. En 1999, crea ABYCINE - Festival Internacional de Cine de Albacete, que dirige hasta la actualidad. Funda en 2001 la Filmoteca de Albacete. En 2016 pone en marcha ABYCINE Lanza –Mercado Audiovisual Independiente. Ha colaborado junto a la Academia de Cine de España en el ciclo Cine Indie Español. Como productor de cortometrajes, ha impulsado El legado (2004), In memoriam (2006), o Juegos de agua (2009). Participa como jurado de numerosos certámenes audiovisuales.\nentregados este viernes\nLos Premios València de la Diputació incluyen una biografía de Enric Valor\nEs la edición con más libros de la historia de estos premios, ya que incluye diez nuevas publicaciones


El eurovisivo Salvador Sobral acerca su viaje "París, Lisboa" a Badajoz - ABC.es - Noticias Agencias\nEl eurovisivo Salvador Sobral acerca su viaje "París, Lisboa" a Badajoz\n07-01-2020 / 16:20 h EFE\nEl cantante portugués Salvador Sobral, con fama internacional desde que ganó el Festival de Eurovisión en 2017, actuará este viernes en Badajoz para presentar su segundo disco, "París, Lisboa", inspirado en un viaje "sin inicio ni final" que transcurre entre las dos ciudades que más importancia han tenido en el proceso de construcción de su nuevo trabajo.\nSu primer disco grabado en estudio desde que ganara el "Festival de Eurovisión" es además un homenaje al clásico de Wim Wenders "Paris, Texas" de 1984, cuyo argumento y realización impactaron al autor luso, según un comunicado del Teatro López de Ayala de Badajoz.\nLa producción corre a cargo de Joel Silva, que ha ayudado "a hacer distinta cada una de las canciones, cristalizando los registros realizados en el estudio de una forma orgánica".\nEl disco contiene doce canciones en varios idiomas, aunque con predominio del portugués, y con una nómina de autores que van desde Jenna Thiam a Joel Silva o Luísa Sobral, entre otros, y que incluye revisiones de un tema del brasileño Lupicínio Rodrigues o de una canción de Francisca Cortesão y Afonso Cabral.\nSobral saltó a la fama internacional tras ganar el "Festival de Eurovisión" en 2017 con la puntuación más alta de su historia, y gracias a una canción que "desafiaba" los patrones del concurso.\nEl triunfo de "Amar pelos dois" fue, en palabras del propio Sobral, el triunfo "de la música con sentimientos".\nLa carrera del también compositor portugués comenzó tras algunos viajes iniciáticos y cuatro años de formación en España, en el Taller de Músics de Barcelona, durante los que su personalidad musical se fue nutriendo de diversas influencias.\nDe vuelta a Portugal y después de actuar "junto a los artistas más importantes de la escena jazz", puso en marcha la grabación de su primer disco "Excuse Me" (2016).


Solidaridad con las Trabajadoras y Trabajadores del diario El Atlántico – mdphoy.com\nSolidaridad con las Trabajadoras y Trabajadores del diario El Atlántico\ndiciembre 2, 2013 11:40 pm por Redacción\nEl viernes 29 de noviembre las y los trabajadores del diario El Atlántico de Mar del Plata fueron notificados que la empresa dejaría de formar parte del Grupo Crónica y que la marca sería gerenciada durante un año, con opción de compra, por el empresario Néstor Otero. En ese mismo momento les anunciaron que sólo 5 de ellos seguirían dentro de El Atlántico y que el resto (32 trabajadores) continuaría sus tareas para el portal de noticias www.cronicadelacosta.com. Sin embargo, las y los trabajadores son conscientes que no es viable hacer una página web sustentable para 32 personas. Por otro lado, los cinco trabajadores que continuarían dentro del diario, en el día de ayer se anoticiaron que las condiciones laborales no respetan los acuerdos obtenidos hasta antes de la venta de la empresa y que de no aceptar las condiciones quedarían en la calle.\nMar del Plata es una de las ciudades con mayores niveles de desocupación y la pérdida de 40 puestos de trabajo no debería ser un tema menor para la sociedad, mucho menos para los funcionarios de gobierno y los sindicatos involucrados en el conflicto. Sobre todo cuando se trata de trabajadores de la comunicación que socialmente tienen la tarea de poner en palabras los acontecimientos que suceden en nuestra ciudad.\nSi las condiciones de trabajo de nuestros compañeros de la prensa son precarias, la comunicación que se produzca será de la misma calidad. O sea que, defender el trabajo es defender el derecho a una comunicación implicada en los problemas sociales, enfocada en la ética periodística y arraigada a los mejores valores de la democracia.\nDesde el Frente Popular Darío Santillán (Corriente Nacional) y el Movimiento 15 de Enero hacemos expresa nuestra total solidaridad con los trabajadores y dejamos de manifiesto nuestro apoyo para defender los puestos de trabajo.


Miracleman, escrito por ya sabéis quien – Un Tebeo Con Otro Nombre\nAutor PedroPublicado el 18 octubre, 2013 Categorías Opinion\n4 opiniones en “Miracleman, escrito por ya sabéis quien”\n18 octubre, 2013 a las 11:53 pm\nYo lo compraré en cuanto salga. A ver si Panini no toma nota y no se sube demasiado a la parra. Ya falta menos…\n19 octubre, 2013 a las 1:26 am\nPero entonces van a sacarlo desde el principio en grapa? Y con 7 portadas diferentes en el primer numero? Anda y que les den, yo me esperaba un recopilatorio.\nEn fin, a ver que hace aqui Panini pero si no me saca un tomaco como Dios manda paso. Mira que me gasto un pastizal en comics pero que se vayan a exprimir a su pu….. que yo tirare de Internet.\n19 octubre, 2013 a las 9:52 am\nPues yo, o sacan un recopilatorio de P.M. y cuyo precio no sea proporcional al que están cascando en E.E.U.U. por las grapas…. o seguiré con ese pequeño tesoro que tengo en la estantería de cuando Planeta publicó Eclipse (si no digo que tengo la edición en castellano reviento… jeje).\n21 octubre, 2013 a las 11:42 am\nYo si sale en grapa aquí lo recompraría.\nSi sale en tomo, compraré lo de Gaiman que no salió aquí.\nPara leer comic la grapa es mucho mejor que el tomo.\nAnterior Entrada anterior: The Boys. The End.\nSiguiente Entrada siguiente: Se hunde el edtbarco


[Hilo oficial] Xiaomi Mi Box en Tecnología › Electrónica de consumo (19/26)\nrokero_loko 25 mar 2019 18:43\nTe refieres a la opción HDMI Self Adaptation no?\nSi es así, nunca funcionó, de hecho en esta actualización de la Mi Box 3, han quitado la opción del menú.\nJCarlos2 26 mar 2019 10:56 *\nEditado 3 veces. Última: 26/03/2019 - 11:01:05 por JCarlos2.\n* 26 mar 2019 10:56\nAnoche me paso una cosa curiosa,me encendio a la primera,las 2 ultimas veces a la segunda,pero empezo a ir con trompicones y tuve que reiniciar,eso no me habia pasado desde la actualizacion,le he vuelto a poner HDMI-CEC\npara que no me vuelva a pasar,asi que mi impresion es que primero se tiene que despertar para ir bien,si no....,aun no esta del todo bien,deberian mejorar esto.\nibero18 26 mar 2019 14:04\nsi justo esa. ¿entonces no funciona? pues vaya cagada\nBop 26 mar 2019 14:29\nYo sigo teniendo problemas con el mi box y mi tv Philips 65pus6162/12.... Menuda mier** de TV la verdad.\nAntes tenia una Samsung full hd y la verdad es que funcionaba genial el aparato con Kodi, fue cambiar a esta TV que es 4K y HDR y dioooos, fatal la reproducción, judder en la imagen, lenta, etc...\nHe llegado a la conclusión y firmeza de que es la TV y no el xiaomi mi box. Probado con diferentes resoluciones, Hz y configuraciones en Kodi y nada, no hay manera de solucionarlo.\nAlguien tiene este modelo o alguna gama similar 4K?\nrokero_loko 26 mar 2019 14:34\nSi, tampoco funcionaba en la Mi Box 3. Para el modelo S, como comenté antes, están facilitando el enlace en reddit del programa Beta, para recibir el update con el auto frame.\nDe todas formas, según estoy leyendo, parece que en el modelo S xiaomi tiene pensado eliminar ( de hecho no se si tenía ya) el pass trought de DTS HD, DTS X, Dolby True HD y Atmos, en cambio con el Mi Box 3, después del update sigue funcionando.\nYo me compré el modelo S pensando que iría a mejor, y lo vendí a los 3 días, así que imagínate.\nGXY 26 mar 2019 14:49\nopciones para streaming de deportes sin usar acestream?\nno es que acestream vaya mal, pero ultimamente esta fallando mucho en "momentos puntuales" y queria probar alguna alternativa. tengo un par de listas en wiseplay pero la mayoria de enlaces no funcionan o la calidad del video es penosa (pero penosa penosa. un juego de atari 2600 a 80x40 se ve mejor)\nibero18 26 mar 2019 14:51\nalgún addon de kodi pero lo mejor es acestream y usar link de páginas externas, a mi no me han fallado en 6 años.\nGXY 26 mar 2019 14:57\na acestream ultimamente lo estan atacando mucho. aunque claro, dependera de donde se saquen los enlaces, claro.\nurilic 26 mar 2019 15:51\nGXY escribió: opciones para streaming de deportes sin usar acestream?\nte he escrito x privado\nkechua 26 mar 2019 18:04\nAlguien con un ZIP con los addons actualizados ?\njosete2k 27 mar 2019 09:27\nJCarlos2 escribió: Anoche me paso una cosa curiosa,me encendio a la primera,las 2 ultimas veces a la segunda,pero empezo a ir con trompicones y tuve que reiniciar,eso no me habia pasado desde la actualizacion,le he vuelto a poner HDMI-CEC\nEso me pasaba el otro día con la S y caí en que había desactivado CEC para poner una peli en el proyector el día anterior...\nFue activarlo de nuevo y ya no lo hace... ¿Se sabe por qué sucede? Iba a tromoicones todo, menú, YouTube, kodi, tanto reproduciendo como desplazándose...\nJCarlos2 27 mar 2019 11:19\nSi,yo tambien lo he activado otra vez,ahora va bien,lo quite a ver si iba bien,y los primeros dias no hubo problemas,pero volvio otra vez,asi que a volver activar HDMI-CEC.\nLO que si estoy notando algun fallo en el sonido de videos de Youtube,al principio pense que podia ser algun video mal grabado,pero ya son unos cuantos,hay una leve distorsion algo molesta,no se si es por la actualizacion,o por problemas en la App.\nvalla34 27 mar 2019 11:24\nYo tengo la Mi Box 3 y lo que suelo hacer regularmente es limpiar la caché del AceStream (en el menú hay una opción Clear Caché) porque creo que la app no lo borra de forma automática. Y así suele ir bastante bien.\nibero18 27 mar 2019 23:00\n¿alguna manera de desactivar el salvapantallas ? Con la app de skytv al cabo de 5 minutos de estar viendo algo me salta, he visto que en opciones se puede alargar a 2 horas pero sin rastro de opción para desactivarlo.\njosete2k 28 mar 2019 00:16\nBueno, al final creo que he resuelto mis problemas (o eso espero) de trompicones y despertares...\nHe desactivado el HDMI CEC por hardware y lo he dejado activado en la mibox...\nPor ahora esto es una delicia, no tengo CEC eso sí.\nfbetes 29 mar 2019 11:51\njosete2k escribió: Bueno, al final creo que he resuelto mis problemas (o eso espero) de trompicones y despertares...\nLo de desactivar el HDMI CEC por hardware, ¿cómo se hace y para qué? ¿es para que encienda a la primera? De hecho nunca supe para qué era el CEC, me imagino que es para encender el Mi Box con el propio mando del TV. El caso es que mi TV es bastante antiguo (Panasonic de plasma, de más de 10 años, el cual no cambio ni harto de vino) y me imagino que no es compatible con el Mi Box. ¿Debería activar el HDMI CEC por menú aún con mi vetusto TV?\nY otra pregunta, el adaptador de HDMI de Amazon, ¿para qué lo has comprado? Yo problema de trompicones (toco madera) no he tenido nunca.\nDespués de la ultima actualización de la semana pasada me ha mejorado el problema del despertar, pero hay ocasiones que sigo teniendo que darle 5 ó 6 veces. Antes de la actualización a veces tenía que darle 20, 30 veces...\nPor cierto, no he restaurado de fábrica después de la actualización. Me da una pereza tremenda.\njosete2k 29 mar 2019 12:22\nEl HDMI-CEC es un estándar desde el HDMI 1.0 que permite la bidireccionalidad y el control de dispositivos por la conexión HDMI.\nSi lo activas puedes usar el mando de la tv para controlar la mibox e interactuar entre tv y dispositivo.\nPor ejemplo yo cuando despertaba la mibox la tv se encendía sola y autoconmutaba al canal hdmi con la box y lo memo al apagar la tv, que la box se apaga sola.\nEl adaptador que he puesto lleva cortados internamente los pines de CEC con lo que al tv no le va a llegar nunca la señal CEC del aparato.\nLo compré en su día porque tengo un chromecast que por defecto lleva CEC encendido sí o sí y me provocaba conflictos con el CEC de la raspberry provocando en esta última trompicones y ralentizaciones (aunque creo que estas no tienen nada que ver con las de la mibox).\nCon hdmi CEC activado la mibox tarda en despertar y si lo desactivo me ralentiza el sistema...\nAsí que me dio por probar. Y mano de santo.\nYo quito por lo general todas las pantallas de sugerencias de canales pero al tiempo la de presentado por Google Play me vuelve a aparecer.\nAntes no me pasaba y lleva desde un tiempo apareciendo la dichosa fila.\nfbetes 29 mar 2019 12:53\njosete2k escribió: Por cierto, una duda:\nMe está pasando exactamente igual que tú desde la última actualización.\n_TRiKi_ 30 mar 2019 09:43 *\nEditado 1 vez. Última: 30/03/2019 - 09:44:26 por _TRiKi_.\n* 30 mar 2019 09:43\nomega_rugal escribió: Acabo de recibir una Mi Box S y me estoy volviendo LOCO con el tema del sonido 5.1. Ayer me acosté a las 2:30 de la madrugada sin resolverlo...\nLa actualización a Oreo se cepilló la opción del passthrough siempre encendido por spdif/óptico/toslink\nEn este hilo de reddit cuentan cómo solucionarlo -seguirá sin funcionar el 5.1 en Netflix y Amazon porque su dolby es DD+ (a menos que tu deco soporte DD+). Se rumorea que todos estos problemas vienen de que Xiaomi pasa de pagar la licencia del DD+, de modo que la box no hace el downmix de DD+ a DD y por tanto nos quedamos sin 5.1 en DD en las apps de Netflix y Amazon.\nhttps://www.reddit.com/r/AndroidTV/comm ... ac3_spdif/\nHay que hacerlo vía ADB desde el ordenador. Aquí te lo dejo en español:\n1- Activamos las opciones de desarrollador si no lo hemos hecho ya.\n2- Activamos la depuración USB (así nos permitirá mandar comandos ADB vía WiFi sin tener que conectar la Mi Box por USB al ordenador). Obviamente la Mi Box y el ordenador tendrán que estar conectados a la misma red WiFi.\n3- Ahora nos vamos a los ajustes WiFi y nos apuntamos la ip que tiene la Mi Box en nuestra red.\n4- Dejamos la Mi Box encendida y nos vamos al ordenador. Descargamos las ADB tools desde aquí: https://dl.google.com/android/repositor ... indows.zip y las descomprimimos en la unidad y carpeta: C : \_ ADB\n5- Ejecutamos CMD (línea de comandos) en windows y entramos en la carpeta ADB\n6- En la línea de comandos primero escribimos: adb connect <ip de la Mi box>:5555 y pulsamos enter.\nDespués: adb devices\nNos debería salir un mensajito que nos dice que estamos conectados al cacharro. Corriendo iremos a la tele porque habrá salido un mensaje en la Mi Box preguntando si queremos permitir que un ordenador de la red se conecte. Diremos que sí, claro.\n7- Volvemos al ordenador y en la misma línea de comandos escribimos lo siguiente:\nprimero: adb shell settings put global digital_sound 1 y le damos al enter (si todo va bien, no saldrá ningún mensaje)\ny después: adb shell settings put global encoded_surround_output 2 (si vuelve a ir bien, tampoco saldrá ningún mensaje)\nEsto hará que la salida óptica SIEMPRE haga passtrough de audio digital.\nchristian24 30 mar 2019 12:38\nYa no se como hacer con el xiaomi mi box 3. Le he instalado arena4viewer, previamente acestream y VLC. Al abrir arena4viewer selecciono el canal, abre el anuncio que lo cierro, eligo reproducir con VLC y tras cargar acestream prebuffering, peers y velocidad, la pantalla se queda en negro. En alguna ocasion he oido una frase de 2-3 segundos que siempre dicen lo mismo y en otras ocasiones veo un fragmento de 4-5 segundos de "cuatro" un policia entrando por la ventana y sale un anciano en una silla. Esta ultima imagen desde el miercoles y siempre la misma.\nHe intetado todo, esta mañana he restaurado valores de fabrica y he vuelto a intentar todo desde cero pero nada.\nEl aparato es nuevo. He de decir que ayer a traves de kodi con addon cristal azul y tambien a traves de wiseplay pude ver el partido del Athletic pero me gustaria poder ver toda la oferta de deporte que ofrece arenavision.\n¿Alguna sugerencia de que puedo estar haciendo mal?\nomega_rugal 31 mar 2019 15:22\nMil gracias, había localizado este post en inglés pero justamente por el motivo de que voy a seguir sin DD en Netflix y Amazon Prime en principio no voy a hacer los pasos.\nYa les vale a Xiaomi, vaya decepción, capar así el audio en la nueva actualización (si lo sé, no la aplico).\nGXY 01 abr 2019 18:16 *\nEditado 1 vez. Última: 1/04/2019 - 18:20:13 por GXY.\n* 01 abr 2019 18:16\nibero18 escribió: ¿alguna manera de desactivar el salvapantallas ? Con la app de skytv al cabo de 5 minutos de estar viendo algo me salta, he visto que en opciones se puede alargar a 2 horas pero sin rastro de opción para desactivarlo.\na mi esto mismo me pasa con kodi y la presentacion de fotos (el salvapantallas del sistema se activa) no he encontrado una opcion que me permita impedirlo. (solo configurar en los ajustes de sistema el plazo de tiempo en que se activa).\n@christian24 en todos los canales te hace lo mismo? a mi eso me lo hace cuando el canal esta KO\ncreo que el problema no es acestream sino arenavision, que la estan atacando a saco y "matan los canales". creo que el bucle es la app reproduciendo los ultimos segundos que tiene en caché\n_TRiKi_ 02 abr 2019 08:09\nomega_rugal escribió: @_TRiKi_\nSi utilizas un addon de Netflix y de Amazon en Kodi, este te convertirá el DD+ en DD y tendrás 5.1\nYo veo Prime así. Es una jodienda, pero a día de hoy es la única solución.\ntoloweo 02 abr 2019 23:18\n02 abr 2019 23:18\nPrueba,tienes mucha variedad\nFie 03 abr 2019 15:18\n03 abr 2019 15:18\notra actualizacion, esta de 638mb\nJCarlos2 03 abr 2019 19:33\n03 abr 2019 19:33\nFie escribió: otra actualizacion, esta de 638mb\nInstalada,parece que va bien,veremos que pasa con si despierta bien (ultimamente a la segunda siempre),y lo de los videos si va o no a trompicones,yo creo que esta va a mejorar por fin todos los problemas que tenia,ademas ha llegado muy prontos,por fin.\nrayoo 03 abr 2019 19:45\n03 abr 2019 19:45\nLo cachondo es que viene a decir lo mismo que lo de la anterior pero pesando mucho mas ¿actualizacion de la actualizacion? jajaja.\nomega_rugal 03 abr 2019 22:00\nNo es para la Mi Box S, comprobado esta misma tarde.\njosete2k 04 abr 2019 16:23\nomega_rugal escribió: No es para la Mi Box S, comprobado esta misma tarde.\nYo por ahora, salvo los canales promocionales que Google se empaña en que me aparezcan en la pantalla principal, con el CEC desactivado por hardware no tengo problemas de ningún tipo ya.\n_TRiKi_ 04 abr 2019 16:34\n04 abr 2019 16:34\ny qué problemas tenías que ya no tienes? tienes el firmware de la beta?\njosete2k 04 abr 2019 17:26\nPues el despertar aleatorio, a la quinta o sexta vez y parones y ralentizaciones varias.\n_TRiKi_ 04 abr 2019 17:30\n04 abr 2019 17:30\njosete2k escribió: Pues el despertar aleatorio, a la quinta o sexta vez y parones y ralentizaciones varias.\nPero tienes el nuevo firmware que está en versión beta o qué?\njosete2k 04 abr 2019 17:54\n04 abr 2019 17:54\nNo, tengo la versión S con el firmware oficial.\nJCarlos2 04 abr 2019 21:27\nAlucino,ahora va peor,me ha despertado a la 4ª,porque la han tocado para dejarla peor?\n_TRiKi_ 04 abr 2019 21:41\nJCarlos2 escribió: Alucino,ahora va peor,me ha despertado a la 4ª,porque la han tocado para dejarla peor?\nPrueba a despertarla con el botón del micrófono. Dicen que sale del standby al 100%\nJCarlos2 04 abr 2019 22:15 *\nEditado 1 vez. Última: 5/04/2019 - 12:57:47 por JCarlos2.\nLe he hecho un reset de fabrica,lo quise hacer desde el mando y ha fallado 4,5 veces que lo he intentado,al final lo hice desde configuraciom-ajustes,a ver que tal va,pero habria preferido quedarme como estaba,iba mas o menos bien.\nPara mi que han puesto el firmware anterior,va igual de mal,los parones y ralentizaciones han vuelto tambien,con la otra al principio iba bien,aunque despues los hubo,con esta a la primera ya iba muy mal,otra vez activar el CEC.\njosete2k 05 abr 2019 19:56\n05 abr 2019 19:56\nHazme caso y prueba con el adaptador que puse.\nkolombo 06 abr 2019 12:50\n06 abr 2019 12:50\nEl otro día estuve trasteando con el Mi Box S de un amigo intentando reproducir ISO3D desde Kodi (por usb) y no hubo manera, ¿es que no es compatible?\ntoloweo 06 abr 2019 17:20\n06 abr 2019 17:20\nkolombo escribió: El otro día estuve trasteando con el Mi Box S de un amigo intentando reproducir ISO3D desde Kodi (por usb) y no hubo manera, ¿es que no es compatible?\nNo,no es compatible\nhaber si un dia pillo un tv box chino y le meto libreelec y pruebo a reproducir ISO3D ,creo que no tenga problemas\njosete2k 07 abr 2019 18:01\nSe me puso el fondo de pantalla de inicio en color granate.\nAl reiniciar se volvió al negro pero me dejó mosqueado por si es indicativo de calentamiento o algo...\nJCarlos2 08 abr 2019 13:06 *\nEditado 1 vez. Última: 8/04/2019 - 13:09:53 por JCarlos2.\n* 08 abr 2019 13:06\njosete2k escribió: Hazme caso y prueba con el adaptador que puse.\nSi,lo he pensado,voy a intentar comprarlo en una tienda fisica,si no lo hago en una online,la semana pasada compre cosas en una online pero no me gustaba los que tenia,eran en forma de codo y me quedaba mal el cable.\nTe contesto al otro post,ya que no me deja hasta dentro de 5 dias publicar otro ,lo del color granate suele pasar,cuando te mueves por el resto de notificaciones de videos,peliculas.....,luego vuelve al negro,no es ningun problema.\njosete2k 08 abr 2019 13:09\nOjo que han de ser NON CEC.\nJCarlos2 08 abr 2019 13:10\n08 abr 2019 13:10\nGracias,como lo se?,viene en las especificaciones?.\njosete2k 08 abr 2019 13:11\nYo te recomiendo comprar el del enlace que puse en Amazon.\nSi vas a una tienda no te van a saber decir porque por fuera son todos igual.\nJCarlos2 08 abr 2019 13:13\n08 abr 2019 13:13\njosete2k escribió: Yo te recomiendo comprar el del enlace que puse en Amazon.\nGracias josete2k,si lo voy hacer por medio del enlace,lo del color granate ya edite mi primera respuesta,no es ningun problema.\nfbetes 09 abr 2019 15:46\n¿El Mi box S tiene el mismo problema de despertar que el 3?\ntermi 09 abr 2019 18:42\n09 abr 2019 18:42\nbuenas, tengo un mi box 3 y acabo de comprarme el mi box s, pero el mi box s me esta dando problemas, estoy usando el adaptado de red usb u green que tenia en el mi box 3, pues cuando lo pongo en el mi box s para tenerlo por cable, con el plex se ven todas las peliculas muy pixeladas (y tengo desactivada la opcion de ajustar la calidad automaticamente) , pero cuando lo pongo por wifi se ven perfectas, cuando en el mi box 3 con el adaptador se ven perfectamente, a alguien le pasa algo similar?\nrokero_loko 10 abr 2019 09:10\n10 abr 2019 09:10\nBuenas, el problema está comentado en páginas anteriores, me paso exactamente lo mismo. Parece ser que es problema de la versión de Android, cuando se conecta a través de USB, entiende como si estuviera en red móvil y plex transcodifica el contenido a 720Kbps o menos.\nHay gente que con el mismo adaptador ugreen le funciona perfecto, se ha reportado en los foros de Plex y reddit.\nEn mi caso particular, vendí la xiaomi mi box s.\njosete2k 10 abr 2019 23:33\nA mi en general me iba mejor por wifi que por cable.\nDe hecho la primera vez que lo encendí fue con cable directamente y no pude ni actualizar las app... Fue cambiar a wifi y "apañao".\nibero18 11 abr 2019 13:37 *\nEditado 1 vez. Última: 11/04/2019 - 13:55:01 por ibero18.\n* 11 abr 2019 13:37\nme Caba de saltar una actualización en el mi s, pone que incluye mejoras en Netflix, el mando bluetooth, el sistema de "wake up" y el auto frame\nEDITADO: acabo de probar en kodi y la TV se ha puesto en modo 24p sola al iniciar una película.