لماذا لا تستطيع الفلوجة أن تنسى ما جرى؟\nلماذا لا تستطيع الفلوجة أن تنسى ما جرى؟\nأخر تحديث : السبت 16 سبتمبر 2017 - 8:49 صباحًا\nيحاول تنظيم الدولة الاسلامية مستميتا من أجل البقاء في بعض مناطق العراق، خصوصا بعد خسارته لمعقله في الموصل. ولكن ما الذي يحدث بعد مغادرة التنظيم المعاقل التي يسيطر عليها؟\nالمثال على ذلك مدينة الفلوجة المضطربة التي مرت بتجربة مؤلمة.\nعندما يخيم الليل على الفلوجة ويخفف الظلام قيظ الصيف اللافح، ينير أنس الجنابي مصابيح مدينة الألعاب.\nعند ذاك، يبدأ دولاب الهواء المتهالك ذو العربات الملونة بالدوران.\nيبدأ الرواد بالوصول الى مدينة الألعاب، تجذبهم الأضواء الخلابة وأصوات الموسيقى الصادحة.\nتوجد في مدينة الألعاب وسائل تسلية شتى، من السيارات المتصادمة الى الالعاب الأخرى، ويمكن للرواد ان يتمتعوا بتناول “الشامية” (الذرة المقرمشة أو الفشار) ومشاهدة “سنفور” بدين يتمايل كراقصة شرقية رغم حرارة الجو.\nويرتدي الأطفال قبعات ملونة، وتلتقط الأسر صور “سيلفي” بهواتفها المحمولة في لحظات من الاسترخاء في مدينة لم تشهد الكثير منها في السنوات الـ 14 الأخيرة.\nولكن جوا من الترقب يسود المكان رغم كل ذلك. فبينما يلهو الأطفال ويركضون ويلعبون، يبدو على أولياء أمورهم القلق.\nربما يعود ذلك الى ذكريات عام 2014، عندما اصبحت الفلوجة أول مدينة عراقية تسقط في قبضة تنظيم الدولة الإسلامية.\nفبعد سنة من الاحتجاجات التي عمت محافظة الأنبار العراقية الغربية السنية، وهي احتجاجات حاولت الحكومة المركزية التي يهيمن عليها الشيعة قمعها، سقطت الفلوجة بأيدي تحالف من المسلحين المحليين ومسلحي الدولة الإسلامية.\nووجد التنظيم آنئذ نفسه مسيطرا على مدينة الألعاب حديثة الانشاء وغيرها من المنشآت.\nورغم سمعة البطش والتقشف التي اكتسبها التنظيم، بدا مسلحوه سعداء لاستغلال مدينة الألعاب لأغراضهم الخاصة.\nففي أيلول / سبتمبر 2015، نشر التنظيم صورا قال إنها “للافتتاح الكبير” لمدينة الألعاب. وكان الغرض من نشر هذه الصور الترويج “للحياة الطبيعية السعيدة” في كنف “دولة الخلافة”.\nولكن أنس الجنابي، مالك مدينة الألعاب، يقول “لم تكن هناك أي موسيقى، بل شعارات فقط.”\nأسس تنظيم الدولة الإسلامية مركزا اعلاميا ومحكمة في مدينة الألعاب، حسبما يقول أنس. وتعرضت هاتان المنشأتان الى قصف جوي لاحقا.\nكان أنس الجنابي قد أنفق 1,4 مليون دولار وقضى سنة كاملة في الاعداد لمدينة الألعاب في الفلوجة في عام 2013. ولكنه اكتشف لاحقا أن التوقيت لم يكن مناسبا بالمرة.\nيقول، “لم نكد نبدأ عملنا حتى سيطر داعش على الفلوجة.”\nولكن التنظيم طُرد من الفلوجة في عام 2016 من قبل القوات العراقية، وتمكن أنس أخيرا من العودة الى مدينته. ولكن مدينة الألعاب لم تسلم من الدمار الذي تسببت فيه “الدولة الإسلامية.”\nيقول أنس، “عندما انسحبوا، اضرموا النار في المقهى الملحق بمدينة الألعاب، واستحال المكان بكامله الى ركام.”\n“الخوف يعتصر قلبي…هذا ما خلفوه لنا”\nساهرة كريم، من الفلوجة\nأما الآن، وقد عاد معظم سكان الفلوجة الى مدينتهم، يقول أنس إن مهمته تتلخص في إسعاد الناس الذين عانوا الأمرين تحت سطوة تنظيم الدولة الإسلامية. وقد أعيد افتتاح مدينة الألعاب في أيار / مايو الماضي، وبدأت الأسر بالعودة اليها والتمتع بمباهجها.\nيقول أنس وهو يتأمل ما تمكن من إنجازه في ترميم مدينة الألعاب، “لقد نسوا ما يعنيه الفرح.”\nوأضاف قائلا، “ببركة الله، ستعود السعادة الى الفلوجة وسكانها الكرماء.”\nولكنه يعي سبب قلة عدد الرواد ولماذا يشعرون بالقلق والترقب. فقبل شهر واحد فقط، وعندما كانت مدينة الألعاب مكتظة بالرواد، انفجرت قنبلة في الجوار. لم يسفر ذلك التفجير عن مقتل أحد، ولكنه أثر سلبا وبشكل فوري على عدد مرتادي مدينة الألعاب. ومنذ ذلك الحين، وأنس يحاول، من خلال خفض الاسعار وتوفير الجوائز، جذب المرتادين مجددا.\nتقول ساهرة كريم التي كانت تزور مدينة الألعاب مع زوجها رائف وحفيدها محمد، “نستطيع القول إن داعش قد انتهى، ولكننا ما زلنا نشعر بتوجس شديد.”\nيفتقر محمد البالغ من العمر ثماني سنوات، والذي كان يجلس الى جوار جدته بهدوء، الى المرح الذي كان باديا على الأطفال الآخرين في مدينة الألعاب. فقد كانت وجنتاه وصدغه وأنفه مصابة باضرار، كما فقد الاحساس في ذراعه اليسرى.\nوعندما يحاول محمد المشي، فإنه يمشي بطريقة توحي بأنه ما زال يحاول التأقلم مع الطرف الاصطناعي الذي ثبت له.\nتروي ساهرة كيف كان محمد يلهو في حديقة الدار في عام 2014 عندما انفجرت في الجوار قذيفة مدفعية اصابته بجروح بالغة. واضطر الأطباء الى بتر ساق محمد اليمنى. وما زال محمد يعاني من كوابيس جراء ذلك.\nوتعاني ساهرة من أضرار نفسية هي الأخرى، فهي تشعر بقلق مستمر ولا تتمكن من الاسترخاء في مدينة الألعاب، وهي تكره بشكل خاص نقاط التفتيش المنصوبة في الطرق. إن الارث الذي خلفه تنظيم الدولة الإسلامية لا يمكن ازالته بسهولة.\nوتقول، “بصراحة، الخوف وجد له مستقرا في قلبي، فأنا اشعر دوما بأن شيئا ما سيحدث. هذا هو الذي تركوه (مسلحو داعش) لنا.”\nعندما اقتحمت القوات الحكومية العراقية الفلوجة في حزيران / يونيو 2016، اكتشفت أدلة تشير الى الحكم القمعي الذي فرضه تنظيم الدولة الإسلامية على المدينة.\nفقد عثرت قوات الأمن العراقية في سجون مؤقتة على اقفاص صغيرة وضعت في غرف بلا شبابيك كان يستخدمها التنظيم لاحتجاز السجناء في ظروف قذرة ومزدحمة.\nوكان يجبر السجناء في بعض من تلك الأقفاص على البقاء واقفين أو البروك على الأرض.\nوكانت هناك أدلة تشير الى وقوع عمليات تعذيب في هذه السجون، كما عثرت القوات العراقية على وثائق تشير الى أن الناس كانوا يسجنون لأسباب عدة منها التدخين ومخالفة تعليمات الألبسة التي كان يفرضها التنظيم.\nليس من اليسير الحصول على شهادات موثقة عن السنوات التي حكم خلالها تنظيم الدولة الإسلامية الفلوجة. فشهادات اولئك الذين بقوا في المدينة ابان فترة سيطرة التنظيم عليها – والتي استمرت لسنتين ونصف السنة – تتسم بالحذر، وتتأثر بما يعتقد الشهود أن المسؤولين الحكوميين أو الصحفيين يريدون أن يسمعوا.\nويبدو أن مسلحي التنظيم تصرفوا بشكل جيد أول الأمر عقب استيلائهم على الفلوجة، فقد طمأنوا السكان وقالوا لهم إنهم يسعون لمساعدتهم، وهو أمر كان السكان مستعدين لتصديقه خصوصا بعد عامين من العلاقات المتدهورة مع حكومة بغداد.\nففي هذه المدينة السنية المحافظة، لم يرق للكثيرين أن يحكموا من قبل حكومة دينية شيعية.\nوفي حقيقة الأمر، فإن بعض الفلوجيين احتفلوا بمقدم تنظيم الدولة الإسلامية، واصفين ذلك “بالفتح الإسلامي.”\nولكن شهر العسل ذلك لم يدم طويلا، إذ سرعان ما سعى الجهاديون الى فرض نظرتهم المتخلفة على السكان.\nاقتحم الملثمون المدينة…وفي غضون يومين فقط تمكنوا من السيطرة على كل شيء\nفرض مسلحو التنظيم قوانين مشددة ضد التدخين وتسريحات الشعر الغربية، كما منعت النسوة من الخروج من منازلهن الا بصحبة “محرم.”\nوراجت روايات عن عمليات قطع رقاب كانت تقع في سوق الفلوجة الرئيسي استهدف فيها رجال الدين الذين كانوا يعارضون التنظيم ورجال الشرطة السابقين.\nوعندما اشتدتت حدة القتال مع قوات حكومة بغداد، لجأ التنظيم الى العمل بنظام التجنيد الإجباري.\nحدا ذلك بعدد كبير من السكان الى الفرار الى مدن عراقية أخرى او الى مخيمات المهجرين الواقعة في المناطق الصحراوية من وادي نهر الفرات.\nهرب عبدالرحمن موضان، وهو رجل أعمال من أهالي الفلوجة، الى مدينة أربيل عاصمة اقليم كردستان العراق، ولم يعد الى مدينته الا بعد ان انتزعتها القوات العراقية من أيدي تنظيم الدولة الإسلامية.\nويتذكر عبدالرحمن بوضوح الأيام التي سبقت وصول مسلحي التنظيم الى الفلوجة.\nآنذاك، كانت أشهر من التململ في محافظة الأنبار قد تدهورت الى صدامات مسلحة بين قوات الأمن العراقية التي يهيمن عليها الشيعة من جهة ومسلحي القبائل السنية من جهة أخرى.\nوأمرت حكومة رئيس الوزراء آنذاك نوري المالكي قواتها بالانسحاب من أجل تهدئة الموقف.\nيقول عبدالرحمن إن سكان المدينة التمسوا من الشرطة البقاء فيها، وعبروا عن استعدادهم للمساعدة في حماية المدينة، ولكن رجال الشرطة خلعوا بزاتهم الرسمية والقوا اسلحتهم وولوا الأدبار. كان ذلك نذيرا بما سيحدث بعد خمسة شهور فقط في الموصل.\nيقول عبدالرحمن إن زمام الأمور في الفلوجة بدت ليومين وكأنها بأيدي مجاميع من المراهقين، ولكن لم يمض وقت طويل قبل ان يظهر في العلن حاكمو المدينة الجدد.\nيقول عبدالرحمن، “لاحظنا توافد رجال ملثمين على المدينة وقيامهم بالاستيلاء على مراكز الشرطة. بدأنا نشاهدهم وهم يتجولون في الطرقات. وفي غضون يومين أصبحوا يسيطرون على المدينة بأسرها.”\nكان الجهاديون الذين دخلوا الفلوجة يتسمون بالغضب والحذر.\nيقول عبدالرحمن، “لم يكن من اليسير التحدث اليهم. واذا خاطبتهم، يردون عليك بعبارات مقتضبة مثل نعم او كلا او ان شاء الله.”\nويتذكر عبدالرحمن اللحظة التي قرر فيها الفرار. فقد كان يراقب المسلحين وهم يزرعون العبوات في الشوارع.\nسأل أحد المسلحين عما قد يحدث اذا انفجرت واحدة من هذه العبوات بطريق الخطأ.”\nرد علي ضاحكا، ستذهب الى الجنة. في عصر ذلك اليوم، جمعت حاجياتي ووضعت أسرتي في سيارتي وغادرت المدينة. ودام غيابي ثلاث سنوات.”\nالدمار الذي اصاب الفلوجة\nوصلنا بعد رحلة قصيرة بحماية الشرطة الى حي الشهداء الواقع الى الجنوب من مركز الفلوجة. حي الشهداء حي مغبر موحش مليء بالشوارع المهشمة والحفر والمباني المهدمة.\nولكن الفلوجة لم تتعرض الى مستويات الدمار التي تعرضت لها مدن أخرى شهدت معارك بين القوات الحكومية ومسلحي تنظيم الدولة الإسلامية.\nوكانت القوات العراقية قد حاصرت الفلوجة عقب تحريرها مدينة الرمادي القريبة في شباط / فبراير 2016، وشرعت في تحرير القرى المجاورة لها أواخر أيار / مايو.\nوتكللت العملية العسكرية بالنجاح بعد شهر واحد فقط.\nلم يقاتل المسلحون حتى الموت في الفلوجة كما قاتلوا لاحقا في الموصل، فقد هرب العديد من قادة التنظيم بمعية أسرهم وتوجهوا الى اجزاء أخرى من “دولة الخلافة” المزعومة. وقتل العديد منهم في ضربات جوية استهدفتهم وهم يعبرون الصحراء.\nولكن الفلوجة لم تسوّ بالأرض رغم إصابتها بأضرار بليغة، وخصوصا حي الشهداء الذي شهد أعنف المعارك. لم تسلم أي من مباني الحي من الاصابة، وقد سوي العديد منها بالأرض.\nولكن، ورغم حر الصيف الشديد، يباشر السكان في ترميم مساكنهم المتضررة، غير أن هذه المهمة تبدو عسيرة.\nفأحمد حسين ما برح يعمل في ترميم منزل الأسرة منذ شباط / فبراير الماضي. فعندما عاد الى الفلوجة من مدينة السليمانية الكردية في تشرين الثاني / نوفمبر 2016، بعد غياب دام ثلاث سنوات، وجد الدار وقد نهبت واضرمت فيها النار. وكان الطابق الثاني من الدار مهدما تماما جراء انفجار قنبلة هدمت الدار المجاورة.\nولكن، وبفضل المساعدة التي حصل عليها من منظمة خيرية نرويجية، تمكن أحمد من استجلاب فريق من البنائين الذين يضعون الآن اللمسات النهائية لعدد من غرف الطابق السفلي للدار.\nضاقت أسرة أحمد المكونة من 11 فردا ذرعا من الإقامة في دار مؤجرة، كما يشعر أحمد بأن صبره يكاد ان ينفد.\nقال أحمد لي، “الوضع صعب للغاية، خصوصا وأني ضعيف الحال. لو عرضت علينا الحكومة تعويضا لساعدنا ذلك كثيرا ولكن الدمار منتشر في كل مكان والحكومة تقول إنها تفتقر الى الأموال بسبب الحرب.”\nمما لاشك فيه أن الصراع المرير الذي تخوضه حكومة بغداد ضد تنظيم الدولة الإسلامية، علاوة على العجز طويل الأمد الذي تعاني منه الميزانية قد اثقل كاهل الخزينة العراقية.\nفليس ثمة أموال كافية لتنفقها الحكومة على اعادة إعمار ما دمره القتال، مما يجبر الآلاف من سكان الفلوجة كأحمد وغيره على الاعتماد على أنفسهم – مع قدر يسير من المعونات الدولية.\nويقول برنامج التنمية التابع للأمم المتحدة إن 15 الف منزل على الأقل في الفلوجة قد اصيبت بأضرار، ويقدر البرنامج أن اصلاح هذه الدور قد يستغرق 18 شهرا.\nوخصص البرنامج مبلغا قدره ألفا دولار لاصلاح كل من هذه الدور، ولكنه قال في تقرير نشره في وقت سابق من الشهر الحالي إن 78 دارا فقط تم اصلاحها الى الآن.\nيقول أحمد، “أشعر بالغضب، فقد توقعت من الحكومة أن تساعدنا، ولكن لم أحصل على شيء منها.”\nخارج جامع الوحدة، عقب صلاة الجمعة، يحيط جمع من سكان الفلوجة برئيس بلديتها عيسى العيساوي ويوجهون اليه الأسئلة.\n“على الحكومة أن تساعدنا، فليست هناك أي فرص أو أي عمل.”\n“لم يعوضنا أحد، كيف لنا أن نعيد بناء منازلنا؟”\n“ليس هناك كهرباء أو ماء. كيف سنعيش؟”\nفي حقيقة الأمر، فإن كبرى منشآت اسالة الماء في الفلوجة، وهي منشأة الأزرقية، عادت الى العمل في حزيران / يونيو الماضي. ومن الناحية النظرية على الأقل، تتوفر مياه الشرب الآمنة لثلثي المدينة تقريبا.\nاضطر خبراء الأمم المتحدة الى إزالة العبوات غير المتفجرة من مساحة لا تقل عن 40 الف متر مربع في المدينة.\nمع ذلك، ورغم مرور سنة على انتهاء القتال، ما زالت الطاقة الكهربائية مقننة ومحددة بعشر ساعات يوميا، علاوة على وجود مشاكل في التوزيع. ولذا تستمر أصوات مولدات الكهرباء تسمع في أرجاء الفلوجة.\nوهناك شكاوى أخرى، مثل: “يستولي الجيش على داري منذ عشرة شهور.”\n“نتعرض الى عقاب جماعي من جانب الحكومة.”\n“لا نحب بغداد، ولكن دعونا نعيش هنا!”\nيؤمن الكثير من الفلوجيين بالفكرة القائلة إن الحكومة المركزية إنما تعاقب سكان مدينتهم لتجرؤهم على العصيان عليها. وسمعت غير مرة الناس وهم يشتكون من نقاط التفتيش التي ما زالت تحاصر المدينة.\nتقع أشهر هذه النقاط، وهي نقطة الصقور، على الطريق الرئيسي الى الشرق من الفلوجة مغلقة بذلك المنفذ الى بغداد التي لا تبعد الا بمقدار ساعة واحدة.\nنقطة تفتيش الصقور عبارة عن مكان للاختناقات المرورية والاعصاب المتوترة والخطورة بين الوقت والآخر.\nفعلى الجانب البغدادي من النقطة، تتكدس الشاحنات المحملة بالاسمنت والطابوق وغيرها من المواد الانشائية بانتظار الإذن بالعبور. وتتوجه معظم هذه الشاحنات الى الرمادي التي اصابها ضرر أكبر في القتال في العام الماضي من الفلوجة.\nلكن يمكن رؤية المشاكل الحقيقية على الجانب الفلوجي من نقطة التفتيش، إذ لا تسمح قوات الأمن لأي من سكان المدينة بالعبور، وعلى أي من سكان الفلوجة الذين يرغبون بالتوجه الى بغداد أن يتوجهوا الى نقطة التفتيش سيرا على الأقدام تحت أشعة الشمس الحارقة ويقدمون مستنداتهم بأمل أن يكون العسكريون القائمون بالواجب في تلك الساعة يتمتعون بمزاج رائق.\nالا ان التهديد الدائم الذي يمثله الانتحاريون يجعل هؤلاء العسكريين غاضبين وعدوانيين في معظم الوقت.\nنعيش في سجن\nأحد سكان الفلوجة\nقبل أيام قليلة من وصولنا الى الفلوجة، أسفر هجومان انتحاريان في ناحية الكرمة القريبة من الفلوجة عن مقتل 8 من العسكريين والعناصر المسلحة الموالية للحكومة المركزية.\nوبعد عودتنا بوقت وجيز، قتل 3 من رجال الشرطة في نقطة تفتيش الحلابسة الى الغرب من الفلوجة بانفجار سيارة مفخخة.\nيمكن تفهم الذعر الذي يشعر به القائمون على نقاط التفتيش العسكرية حول الفلوجة، فلا يريد أحد منهم أن يكون مسؤولا عن السماح لانتحاري بالوصول الى بغداد.\nولكن النتيجة بالنسبة لعشرات الآلاف من الفلوجيين الأبرياء يصعب مشاهدتها، خصوصا بعد سنة من طرد الجهاديين من المدينة.\nقال أحد سكان الفلوجة وهو يخرج من المسجد بعد أدائه صلاة الجمعة، “قضيت سبع ساعات عند نقطة التفتيش عندما كنت احاول نقل قريب مريض الى خارج المدينة.”\nوقال آخر، “نعيش في سجن.”\nتؤدي هذه العراقيل – علاوة على غياب الاستثمارات وتردد الحكومة المحلية في إعادة فتح المنطقة الصناعية الرئيسية في الفلوجة – الى مستويات عالية من البطالة.\nومن نافلة القول إنه يتوجب ايجاد فرص عمل لشباب المدينة.\nجسر الفلوجة الحديدي\nلا تنخفض درجة الحرارة في الفلوجة عن الـ 40 مئوية حتى في المساء، ولذا يتوجه شبان المدينة الى نهر الفرات سعيا وراء نسمات النهر الباردة.\nويلقي الشبان بأنفسهم في مياه النهر من جذع نخلة يستخدمونه كمنصة للقفز.\nاذا تتبعت مجرى النهر الى الشمال، بعد مدن الرمادي وهيت وحديثة، ستجد نفسك في معقل الدولة الإسلامية الذي تتضاءل مساحته باستمرار.\nوتعد بلدة القائم العراقية الحدودية احد آخر المعاقل التي ما زالت في قبضة التنظيم في العراق، وهي المكان الوحيد الذي ما زال يسيطر التنظيم فيها على نقطة حدودية مع سوريا.\nففي عام 2014، أقام جهاديو التنظيم حفلا كبيرا تيمنا بازالة الحدود القديمة التي رسمها البريطانيون والفرنسيون بموجب اتفاق سايكس بيكو عام 1916.\nويربط الفرات القائم بمناطق القتال في دير الزور والرقة في سوريا.\nيبدو نهر الفرات من الجو كشريط أخضر ضيق ولكنه متواصل، في مساره وسط صحارى شرق سوريا وغرب العراق القاحلة.ولكن في الفلوجة، وعلى ضفاف الفرات، وبعيدا عن الضحك والمزاح والسباحة، يثير النهر ذكريات عن تاريخ المدينة في السنوات القليلة الماضية.\nنرى، في ضوء الشمس الغاربة، منظر ما تبقى من “الجسر الانجليزي” الذي شيده البريطانيون ابان احتلالهم للعراق في عشرينيات القرن الماضي.\nسقطت أجزاء من الجسر في الفرات، ويقول سكان محليون إن مسلحي تنظيم الدولة الإسلامية فجروا الجسر اثناء هروبهم من الفلوجة في العام الماضي.\nقبل ثلاثة عشر عاما، اكتسب “الجسر الانجليزي” شهرة كبيرة في العراق.\nففي الحادي والثلاثين من آذار / مارس 2014، قتل بالقرب منه اربعة من عناصر شركة بلاكووتر الأمنية الأمريكية.\nوفي واقعة مماثلة لما جرى لجنود أمريكيين في الصومال منذ عقد خلى، سحل الأمريكيون الأربعة من السيارات التي كانوا يستقلونها واشبعوا ضربا حتى الموت ثم سحلت جثثهم في الشوارع.\nووسط هتافات وتهليل الجموع، علقت جثتين متفحمتين من جثث الأمريكيين الأربعة من على “الجسر الانجليزي.”\nإثر ذلك الحادث، اصبحت الفلوجة بالنسبة للتحالف الذي كانت تقوده الولايات المتحدة الذي غزا واحتل العراق، أخطر مناطق البلاد واكثرها “شرا.”\nعسكريون أمريكيون عند جسر الفلوجة الحديدي عام 2004\nولكن الأمر لم يكن كذلك في بداية الاحتلال. فعندما وصل الأمريكيون الى الفلوجة في اوائل نيسان / أبريل 2003، يتذكر عبدالرحمن موضان بأنه كان يرى الجنود الأمريكيين وهم يوزعون الحلوى في الشوارع ويتساءلون “إن كانت المدينة آمنة؟”\nفقد سقطت محافظة الأنبار بأسرها في أيدي الأمريكيين دون مقاومة.\nلكن الفلوجة كانت موطنا للعديد من ضباط جيش ومخابرات النظام المنهار ناهيك عن عدد كبير من اعضاء حزب البعث.\nوكان مبعوث الرئيس الأمريكي جورج بوش الابن الى العراق، بول بريمر، الذي كان قد وصل توا الى البلاد، وقع في أيار / مايو 2003 على قرارات حظر بموجبها حزب البعث وحل الجيش العراقي.\nأصابت هذه القرارات الفلوجة بصدمة كبيرة.\nيقول عبدالرحمن، “أثرت قرارات بريمر على آلاف الأسر، فكان العديد من سكان المدينة يقولون فقدت وظيفتي ومرتبي.”\nوبذا، انقلب الرأي العام في المدينة على الغزاة وبدأ الوضع الأمني فيها بالتدهور.\nومن جانبهم، بدأ قادة التحالف العسكريون ينظرون الى ما كانوا يطلقون عليه “المثلث السني” الواقع الى الغرب والشمال من بغداد على انه أخطر مناطق العراق على الاطلاق.\nوبتواصل القتال في الفلوجة وتخومها، بدأ يتردد على المدينة اثنان من اشهر المسلحين في العراق آنذاك.\nأحدهما، وهو الأردني ابو مصعب الزرقاوي، كان يقود حملة تفجيرات وقطع رؤوس ليصبح في نهاية المطاف على رأس قائمة مطلوبي واشنطن في العراق.\nوكان التنظيم الجهادي الذي يقوده الزرقاوي – تنظيم القاعدة في بلاد الرافدين – قد بدأ في مهاجمة الأمريكيين بعد شهور فقط من غزوهم للعراق. وفي أيار / مايو 2004، وفي أول شريط مصور من نوعه، ظهر الزرقاوي وهو يجز عنق الرهينة الأمريكي نك بيرغ الذي كان يبلغ من العمر آنذاك 26 عاما.\nأما القائد الخطر الثاني، فلم يكن يتمتع بشهرة الزرقاوي، في تلك الفترة على الأقل.\nفعندما القى الأمريكيون عليه القبض في نيسان / ابريل 2004 بالقرب من الفلوجة، لم يكونوا يعرفون عنه الا أن اسمه عواد ابراهيم البدري وانه كان يبلغ من العمر 33 عاما. واحتجزه الأمريكيون لمدة 10 شهور قبل أن يطلقوا سراحه باعتباره “سجينا لا يشكل خطرا كبيرا.”\nولكن لم تكد تمر عشر سنوات حتى اعتلى هذا منبر الجامع النوري الكبير في الموصل ونادى بنفسه خليفة للمسلمين وزعيما “للدولة الإسلامية.”\nوأصبح يعرف منذ ذلك الحين بأبي بكر البغدادي.\nولكن في عام 2004، كان التحالف الأمريكي المحتل منشغلا بالزرقاوي وليس بالبغدادي.\nفلفترة ما، كان التشدد الديني الذي ينادي به تنظيمه – القاعدة في بلاد الرافدين – يلاقي قبولا في الفلوجة التي كانت تدعى “مدينة الجوامع” والتي كان العديد من رجالها ملتحين والعديد من نسائها محجبات.\nوكان بيع المشروبات الكحولية محظورا في المدينة.\nفالفلوجة لم تكن مدينة متعددة الأعراق كالموصل، بل كانت وما زالت مدينة سنية بشكل كامل تقريبا، وكانت تغلي بالغضب.\nبعد مقتل عناصر بلاكووتر الأربعة، شن الأمريكيون هجومين كبيرين على الفلوجة بهدف تطهيرها من وجود تنظيم الزرقاوي الذي كان يحقق نجاحات مهمة في قتال القوات المحتلة.\nووصف الجيش الأمريكي الهجوم الثاني الذي شنه في اواخر عام 2004، والذي اطلق عليه اسم “غضب الأشباح”، بأنه شهد أعنف حروب شوارع خاضتها القوات الأمريكية منذ حرب فيتنام.\nهرب معظم سكان الفلوجة من المدينة قبيل اندلاع القتال، ولكن قتل المئات منهم الذين اختاروا البقاء أو لم يتمكنوا من الفرار. وأصاب القتال المدينة بدمار كبير.\nفقد دمرت او أصيبت بأضرار بالغة العشرات من مساجد المدينة الـ 200.\nوقتل في الهجوم نحو 1500 من مسلحي تنظيم القاعدة، ولكن الزرقاوي نفسه لم يقتل الا بعد مرور 18 شهرا في ضربة جوية استهدفت مخبأه في قرية تقع الى الشمال من بغداد.\nتمكن الأمريكيون من السيطرة على الفلوجة في نهاية المطاف، ولكن لم يتمكن سكانها من العودة الى مدينتهم المهشمة الا بعد مرور شهور عدة. وعند عودتهم، وجدوا الوضع ما زال محفوفا بالمخاطر.\nيقول عبدالرحمن، “في بداية الأمر، كان تنظيم القاعدة يقتل الأمريكيين فقط، ولكن بعد ذلك بدأوا بقتلنا كلنا.”\nفقد اغتيل أو اختطف العديد من السياسيين المحليين ورجال الدين، واصبح الاختطاف من أجل الفدى أمرا مألوفا.\nفي نهاية المطاف، انقلب سكان الأنبار على تنظيم القاعدة، إذ تحالفت العشائر السنية مع الأمريكيين لتشكيل “صحوات” لمحاربة التنظيم. وأذن تشكيل هذه الصحوات بنهاية الارهاب الذي كان يمارسه تنظيم القاعدة.\nولكن حكومة بغداد المركزية التي يهيمن عليها الشيعة كانت تنظر بريبة شديدة الى الصحوات التي كانت تضم في صفوفها آنذاك عشرات الآلاف من المسلحين السنة – تحت عنوان “ابناء العراق”.\nوبعد انسحاب القوات الأمريكية من العراق في عام 2011، توقفت الحكومة عن دفع رواتب “أبناء العراق”.\nكان لهذا القرار، الذي صاحبه طرد الكثير من السنة من وظائفهم الحكومية، تأثير متوقع: فقد بدأ العديد من السنة يشعرون مجددا بأن لا مكان لهم في عراق ما بعد صدام حسين.\nشاهد عبدالرحمن التاريخ وهو يعيد نفسه في الفلوجة.\nفقد فصل الموظفون السنة واستبدلوا بآخرين شيعة، وعين ضابط شيعي قائدا لشرطة الفلوجة.\nوبدأت حملة اختطافات جديدة يعتقد ان المسؤولين عنها فصائل مسلحة موالية للحكومة.\nوفي الانتفاضة الشعبية التي تلت ذلك، استدل جيل جديد من الجهاديين بوجود فرصة مؤاتية، كما استدل على ذلك تنظيم القاعدة قبل عقد من الزمن.\nوأصبح هؤلاء في نهاية المطاف طلائع تنظيم الدولة الإسلامية.\nالحياة في الفلوجة عسيرة جدا بالنسبة لاولئك الذين عادوا الى المدينة في الشهور الأخيرة.\nولكن في الصحراء خارج الفلوجة يتجمع الآلاف من سكان المدينة الذين لا يستطيعون العودة اليها الى الآن.\nهؤلاء هم المنبوذون الذين لا يريدهم أحد.\nفعلى الساحل الجنوبي لبحيرة الحبانية، يقيم الآلاف من مهجري الحرب ضد تنظيم الدولة الإسلامية في مدينة الحبانية السياحية التي كان يؤمها أهالي بغداد في المناسبات.\nوبانتقال المعركة ضد تنظيم الدولة الإسلامية من مدينة الى أخرى، مما حدا بالعديدين الى هجر مساكنهم وبآخرين الى العودة اليها، يتأرجح عدد ساكني مخيمات المهجرين صعودا ونزولا.\nولكن مجموعة واحدة لم يتغير وضعها، وهي أسر اولئك المتهمين بالانضمام لتنظيم الدولة والمتعاونين معه.\nعلى مسافة من مخيم الحبانية الرئيسي، هناك منطقة مخصصة لسكن اهالي قرية الصقلاوية الزراعية التي لا تبعد عن الفلوجة سوى ببضعة كيلومترات.\nفي هذه المنطقة، يمكن مشاهدة صفوف من الخيام البيضاء وهي ترفرف في الرياح الصحراوية الحارة، بينما يتراكض الأطفال ويتصارعون من اجل الفتات ويسعى الناس الى ملء أوانيهم بالماء من خزانات ترتفع فوق طريق رئيسي مغبر يمر في وسط المخيم.\nمهجرون في مخيم الحبانية\nاكتسبت الصقلاوية سمعة بوصفها معقلا لتنظيم الدولة الإسلامية. وشهدت القرية الصغيرة في أيار / مايو وحزيران / يونيو الماضيين قتالا شرسا.\nويشاهد ساكنو مخيم الحبانية آخرين وهم يعودون الى ديارهم ويتساءلون عن موعد عودتهم هم ايضا.\nفبدرية حسن تقيم في هذا المخيم بمعية أسرتها – البالغ عددها 22 فردا – منذ 14 شهرا.\nبقيت الأسرة في الصقلاوية في الفترة التي سيطر فيها التنظيم، ولم تفر من القرية الا بعد بدء هجوم القوات الحكومية عليها في العام الماضي.\nأما الآن وقد سيطرت الفصائل الشيعية على القرية، حذرت بدرية وأسرتها من مغبة العودة اليها.\nفأبناؤها متهمون بالانضمام الى تنظيم الدولة الإسلامية.\nتقول بدرية، “إنهم ينوون الانتقام منا في الصقلاوية.”\nوتمضي قائلة، “اتصلنا بالمسؤول مطالبينه باثبات أن أي من اولادي حمل يوما بندقية كلاشنكوف او ارتدى زي قندهار (الزي الذي يرتديه مسلحو حركة طالبان الأفغانية).”\nويؤكد ابناؤها، الذين كانوا يحيطون بها في الخيمة، براءتهم من أي شبهة تربطهم بالتنظيم المتشدد.\nأطلعنا احدهم، واسمه محمد، على بطاقتي هوية حصل عليهما في الأشهر الأخيرة، يبدو انهما تثبتان براءته. وهاتان البطاقتان معنونتان الى كل القوى الأمنية وكل نقاط التفتيش.\nقالت بدرية، “أحيطت سلطات الاستخبارات والجنايات ومكافحة الارهاب في الفلوجة علما بهذا الشخص. وفي الوقت الراهن، هو ليس مطلوبا من قبل أي من الجهات الأمنية.”\nولوحت بدرية بكفيها الموشومين قائلة، “اذا كان عندكم أي برهان بأنهم (اولادها) اعضاء في داعش، فنحن مستعدون لذبحهم.”\nمن العسير التأكد من حقيقة التهم الموجهة الى اولاد بدرية، إن كانت حقيقية أو انها مجرد غطاء لقضايا ابسط كالصراعات العشائرية او الخلافات حول الأرض والأملاك.\nيقول محمد ابن بدرية إن ثلاثا من سياراته قد صودرت، وإن هناك في الصقلاوية أناسا يسعون للاستيلاء على مسكنه.\nيذكر أن السلطات العراقية تنظر الى كل الذين بقوا في المناطق التي سيطر عليها تنظيم الدولة الإسلامية على انهم متعاونون مع التنظيم ولكن محمد يدحض ذلك ويقول، “الكل؟ لا يمكنهم ادعاء ذلك. فالآلاف بقوا في مساكنهم.”\nيخشى محمد من أن داره وأملاكه ستتعرض للسرقة بينما يقبع هو في معسكر المهجرين\nويقول محمد مشيرا الى ندبة في جبينه إنه تعرض للضرب من قبل عناصر تنظيم الدولة الإسلامية في عام 2015 في خلاف يتعلق بشقيقتيه.\nوتمكن أحد أشقاء محمد، واسمه هيثم، من العودة الى الصقلاوية دون أي عائق.\nولكن افرادا آخرين من الأسرة، بينهم أحد ابناء العمومة، اعتقلوا عند نقاط التفتيش ولم يسمع عنهم منذ ذلك.\nيبدو أن كل نزلاء معسكر الحبانية للنازحين يعرفون احدا اختفى بعد اعتقاله.\nوعقب وصولنا الى الحبانية، أحاط بنا على الفور نزلاء اخبرونا عن أقارب لهم اعتقلوا عند نقاط التفتيش ولم يعثر لهم على أثر بعد ذلك.\nوقال معظم هؤلاء إن ذلك كان من عمل ما يسمى بقوات الحشد الشعبي، وهي عبارة عن فصائل شيعية مسلحة شاركت في عملية تحرير الفلوجة في العام الماضي والتي ما زالت تلعب دورا في حفظ الأمن في المنطقة.\nوقال البعض إن هذه الفصائل ما زالت تعتقل السنة انتقاما للمذبحة التي اقترفها تنظيم الدولة الاسلامية في حزيران / يونيو 2014 في قاعدة “سبايكر” (كلية تكريت الجوية، التي اطلق عليها الأمريكيون اسم أحد طياريهم الذي قتل في حرب الكويت عام 1991) والتي راح ضحيتها 1500 على الأقل من المتدربين الشيعة.\nولأهالي الصقلاوية سبب آخر للشعور بالتوجس.\nفعندما استولى مسلحو “الحشد الشعبي” على القرية في أيار / مايو 2016، اعتقلوا 1200 من رجالها. وأطلق سراح نصف هؤلاء لاحقا بفضل تدخل الشرطة المحلية، ولكن العديد منهم انتهى بهم الحال في المستشفيات نتيجة الضرب الذي تعرضوا له.\nولكن 643 منهم ما زالوا في عداد المفقودين.\nوبعد ضغوط دولية من منظمات حقوق الانسان، شكّل رئيس الوزراء العراقي الحالي حيدر العبادي لجنة للتحقيق في هذا الموضوع. ولكن بعد مرور عام كامل، لم تتوصل هذه اللجنة الى أي استنتاجات.\nتقول بلقيس واللي، الباحثة في شؤون العراق في منظمة هيومان رايتس ووتش لحقوق الانسان، “الحقيقة القائلة إنه لم نتسلم أي اجابة عن هذا الأمر من السلطات يعد أمرا مقلقا جدا بالنسبة لي.”وتقول واللي إن الفصائل الشيعية المسلحة ترتكب انتهاكات بحق السنة دون أي وازع.\nوتمضي قائلة، “وهذا مؤشر آخر الى ان الأمور لم تتغير فيما يخص انهاء حقبة التملص من المساءلة، وهو الأمر الذي دفع بالعديد من الشباب الى الإنضمام الى داعش اساسا.”\nكما تشير هيومان رايتس ووتش الى الاجراءات الادارية الحكومية التي اتخذت لمنع ما توصف “بالأسر الداعشية” من العودة الى ديارها.\nنص مرسوم صدر عقب تحرير الفلوجة مباشرة على أنه لا ينبغي السماح لاولئك الذين “روجوا” لداعش بالعودة الى ديارهم الا “بعد النظر في التهم الموجهة اليهم.”\nولكن متى سيحصل ذلك؟\nإلا أن السلطات العراقية تصر على أنه من الضروري معرفة من الذي كان متورطا مع تنظيم الدولة الإسلامية. ومن المرجح جدا أن يكون بعض من مؤيدي التنظيم، بمن فيهم رجال ملطخة أياديهم بالدم، ما زالوا يقيمون في المخيمات.\nفعندما سقطت الفلوجة بأيدي القوات العراقية، كان بعض من الذين التحقوا بتنظيم الدولة الإسلامية يأملون في أن يتمكنوا من الذوبان في المجتمع دون أن يعثر عليهم على أثر.\nوشملت القرارات التي اتخذتها المجالس المحلية في المناطق المحررة أوامر بهدم منازل اولئك الذين ثبت تورطهم في نشاطات ارهابية.\nوكانت صور لعمليات قتل انتقامية ضد عناصر في تنظيم الدولة الإسلامية في الموصل نشرت في تموز / يوليو الماضي أثارت غضبا كبيرا. وبعد نشر هذه الصور التي تظهر الانتهاكات التي اقترفتها وحدة من القوات الخاصة العراقية، قال رئيس الوزراء حيدر العبادي إن المسؤولين عن هذه الانتهاكات سيحالون للقضاء.\nولكن واللي تقول إن المشكلة الرئيسية طويلة الأمد تكمن في مخيمات النازحين التي يقبع فيها الناس لأشهر وربما لسنوات تحت ظلال من الشك.\nوتقول، “أخشى ما أخشاه أن تتحول هذه المخيمات الى اراض خصبة لتفقيس مسلحي داعش المستقبل.”\nلافتة في الفلوجة\nفي مركز الفلوجة، وعلى مقربة من المكان الذي شنق فيه مسلحو تنظيم الدولة الإسلامية جنديا عراقيا في عام 2015، تنتصب لوحة كبيرة تحذر السكان بضرورة تجنب اخطاء الماضي.\nتقول اللوحة، “يجب علينا أن نتصدى لمن كان سببا في تهجيرنا وتدمير مدننا ومن حاول تسميم افكار شبابنا.”\nويكرر أئمة صلاة الجمعة الرسالة ذاتها، إذ قال أحدهم للمصلين، “ستغرق سفينتنا من جديد اذا عدنا الى نفس العقيدة”، دون أن يشير الى تنظيم الدولة الإسلامية بالإسم.\nيخاطر رجال الدين في الفلوجة بحياتهم عندما يتكلمون هكذا.\nففي تشرين الثاني / نوفمبر 2005، قتل مفتي المدينة الشيخ حمزة العيساوي رميا بالرصاص أمام جامع الوحدة.\nوكان قتلته، وهم من عناصر تنظيم القاعدة في بلاد الرافدين الذي كان يتزعمه ابو مصعب الزرقاوي، مصممون على معاقبته لرفضه ادانة الأمريكيين. أدى ذلك بالعديد من رجال الدين المعتدلين الى الفرار من الفلوجة خوفا على حياتهم.\nوبعد سنوات عشر، هدم مؤيدو تنظيم الدولة الإسلامية ضريح الشيخ العيساوي ونقلوا جثمانه الى مكان آخر. يبدو أن سمعته كانت تهدد سطوتهم حتى بعد مماته.\nلكنه ليس من المستغرب أن يمتنع سكان الفلوجة اليوم عن الدفاع عن سيرة تنظيم الدولة.\nفبدل ان يعالج التنظيم تظلمات السنة، فتح فصلا جديدا في تاريخ هذه المدينة البائس.\nوكما يقول رجل الأعمال الفلوجي عبدالرحمن موضان، “لا نريد ان نخسر مدينتنا مجددا.”\nخرجت الفلوجة عن سيطرة الحكومة المركزية مرتين منذ عام 2003 عندما شعرت سلطات بغداد – الأمريكية ثم العراقية – بأنها تستطيع تجاهل مصالح الأقلية السنية.\nشعر السنة بأنهم يعاقَبون أولا لولائهم للحاكم السابق صدام حسين، ولاحقا لاستعداد بعض من شيوخ عشائرهم لاحتضان مسلحي تنظيم القاعدة والدولة الإسلامية.\nلاتبعد الفلوجة عن بغداد الا بمسافة 60 كيلومترا، ولكن بونا شاسعا من الشك والريبة ما برحت تفصل بين المدينتين لـ 14 سنة. وما لم يتم جسر هذه الهوة، لا يمكن استبعاد اندلاع اضطرابات جديدة في المستقبل.\nيعبر رئيس بلدية المدينة عن هذه المخاطر بصراحة.\nويقول، “كانت هناك فجوة بين الحكومة وأهالي الفلوجة بشكل خاص وأهالي محافظة الأنبار بشكل عام. وكان ذلك احد أسباب سقوط الفلوجة بأيدي داعش.”\nرئيس البلدية العيساوي: نحقق بعض التقدم\nويضيف، “لم تردم هذه الفجوة تماما، ولكننا نحرز بعض التقدم في اعادة الثقة وتثبيت الأمن.”\nولكن هل هناك امكانية في أن تحتضن الفلوجة حركة مسلحة أخرى في المستقبل؟ يتأمل العيساوي قليلا، وعندما اجاب لم تشبه اجابته شعارا ملقنا.\nقال، “تعلم أهل الفلوجة الدرس وعانوا الأمرين، ولذا لا أظن أنهم سيدعمون أي عصيان جديد.”\nفي الوقت الراهن، تبدو المدينة منشغلة بتضميد جراحها وجعل حياة سكانها محتملة بقدر الامكان. فبالرغم من المعاناة المستمرة، تعج شوارعها بالسيارات والمارة وذلك في فرق شاسع من مدينة الاشباح التي كانت تشبهها بعد تحريرها في العام الماضي.\nتقول ليسا غراندي من برنامج التنمية التابع للأمم المتحدة، “عندما وصلنا (الى الفلوجة عقب تحريرها) لم يكن فيها مدني واحد على الاطلاق.”\nوأردفت قائلة، “كان ينبغي اعادة الأمن، وازالة الركام، وترميم شبكات النقل والماء والكهرباء والصرف الصحي بالسرعة الممكنة.”ولكنها قالت ايضا، “أما اليوم فالفلوجة مدينة تعود الى الحياة من جديد.”\nولكن اعادة اللحمة الى نسيج العراق الطائفي الممزق تعد مهمة أصعب بكثير. فكل جولة قتال جديدة توغل في تمزيق هذا النسيج الهش، ولم يخل تاريخ البلاد من هذه الجولات منذ عام 2003 الا لفترات وجيزة.\nيعتقد كثيرون بأن رئيس الوزراء الحالي حيدر العبادي أقل طائفية من سلفه نوري المالكي.\nولكن العبادي مع ذلك رفض اتهامات انتهاك حقوق الانسان التي وجهتها منظمات حقوقية الى وحدات الحشد الشعبي.\nوفي آب / أغسطس الماضي، رفض العبادي مناشدة اطلقها رجل الدين الشيعي البارز – والزعيم السابق لاحدى الفصائل الشيعية المسلحة – مقتدى الصدر بحل الحشد الشعبي.\nعلى صعيد آخر، يبدو أن دولة الخلافة التي اعلن تنظيم الدولة الاسلامية عن قيامها قبل ثلاث سنوات آيلة للزوال.\nفقد تمت مطاردة مسلحي التنظيم في مدينة تلو الأخرى.\nولكن حتى بعد سقوط آخر معاقل التنظيم، تعتقد قلة من العراقيين فقط أن الصراع قد انتهى.\nفيمكن تدمير دولة الخلافة، وقتل قادتها، واعادة العمل بحدود البلاد، واذا كانت ثمة بقية من المال، اعادة تعمير المدن المدمرة.\nولكن الصراعات المعتملة في سوريا والعراق لها العديد من العوامل المساعدة – طائفية وسياسية واجرامية واقليمية – التي ستجعل البلدين ارضا خصبة للصراعات المسلحة ما لم يتم تداركها.\nوتشير سلسلة من التفجيرات شهدتها بغداد مؤخرا الى ان خسارة تنظيم الدولة الإسلامية للأرض التي كان يسيطر عليها لن تؤثر على قدرته على نشر الفوضى في مناطق أخرى من العراق.\n“متى ستنتهي الحرب؟”\nسألت أحد العسكريين عند نقطة تفتيش الصقور.\nأجاب، “لن تنتهي ابدا.”\nلذا ليس من المستغرب ان يشعر زبائن مدينة العاب أنس الجنابي بالتوجس حتى وإن كانوا يتمتعون بالعابها واضوائها البراقة.\nالرئيس الأسد .. الغرب يتحدث عن...\nالسويد تدين صحفيا ساعد شابا سوريا...\nدولة القانون يسعى لضمان “رئاسة الوزراء”...\nداعش يستأنف الحرب في العراق باعتماد...


ترتيب هدافي الدوري الانجليزي بعد هدف محمد صلاح في شباك واتفورد - جول العرب\nترتيب هدافي الدوري الانجليزي بعد هدف محمد صلاح في شباك واتفورد\nتمكن الهداف العالمي محمد صلاح من تسديد الهدف الثاني لفريق ليفربول الذي أحرزه بالأمس ، في شباك كريستال بالدوري الإنجليزي. حيث يقوم اللاعب محمد صلاح بتقديم أداء ملفت للأنظار في فريق ليفربول . حيث حقق الكثير من الأهداف في سبع جولات من الدوري الإنجليزي لهذا العام.\nمحمد صلاح بطل ليفربول\nقد تمكن محمد صلاح من إثبات نفسه في فريق ليفربول الإنجليزي حيث تعملق في المباراة التي جمعت بين مانشستر وليفربول . يتمكن من تسديد هذفًمميز مما جعل المباراة تنتهي بالتعادل فيما بين الفرقتين بهدفين مقابل هدفين.\nمما عمل على رفع رصيد النقاط الخاصة بمحمد صلاح والتي جعلته السادس في ترتيب البطولة . وقد تساوى مع جيمي فاردي الهداف فريق ليستر سيتي الإنجليزي\nينافس الريدز هذا الموسم علي صدارة البريميرليج بشكل كبير وقدم أداء ومستوي مميز بالفعل وتمكن في الوصول إلي المركز الثاني برصيد 15 نقطة ويأتي خلف نادي تشيلسي صاحب الصدارة بفارق نقطة واحدة ، ويسعي دائماً في الإقتراب علي الصدارة بشكل كبير وينتظر إسقاط المنافس وتعثره في المواجهات التالية لينفرد بالصدارة ، فقد شهدت المباراة الماضية قمة ندية وإثارة كبيرة بينه وبين نادي مانشستر سيتي والتي قد إنتهت بالتعادل الإيجابي بهدفين مقابل هدفين مثلهم.\nبعد الإعلان من نتائج مباريات اليوم في الدوري الإنجليزي ، سوف نعرض لكم ترتيب الهدافين في بطولة الدوري الإنجليزي لهذا العام، وهذا بعد أن مرت سبع مرت سبع جولات لعمر هذه المسابقة.\nحيث تصدر قائمة اللاعبين اللاعب محمد صلاح الهداف في فريق – ليفربول حيث يتصدر بمجموع 6 أهداف.\nليأتي اللاعب فاردي الهداف في نادي ليستر سيتي بمجموع نقاط 6 أهداف جعلته يحصل على الترتيب الأول .\nليأتي اللاعب ميشيل أنطونيو ويتصدر بمجموع خمس نقاط في ترتيب الدوري الإنجليزي واللاعب في نادي وست هام يونايتد.\nويأتي من أفضل هدافي الدوري الإنجليزي اللاعب مومباي في نادي برايتون الذي يتصدر بمجموع أربع أهداف في الدوري الإنجليزي الممتاز لعام ٢٠٢٢


نُشر في 7 حزيران (يونيو) 2015 - فوائد الصابون المضاد للبكتيريا على أشجار الفاكهة - معلومة\nتم النشر في 7 حزيران (يونيو) 2015\nلن يؤدي التحول من الصابون التجاري التقليدي إلى الصابون المضاد للبكتيريا إلى تقليل استخدام الماء ومياه الغسيل فحسب ، بل يمكن أن يظل غسيلك نظيفًا لفترة أطول مما لو كنت تستخدم الصابون التقليدي. يمكن أن يبدأ البستانيون لأول مرة في استخدام الصابون المعتمد على المطهر على نباتاتهم للمساعدة في منع انتشار الأمراض الفطرية إلى بساتين الفاكهة المحفوظة في أصيص.\nإليك برنامج تعليمي سريع حول كيفية استخدام الصابون المضاد للبكتيريا في منزلك ، بالإضافة إلى بعض النصائح للبدء. تحقق من هذه الروابط للعثور على معلومات حول نوع معين من الصابون والمنظفات.\nنوع الصابون للغسيل اليومي\nتحتوي معظم صابون الغسيل التجاري التقليدي على هيدروكسيد الصوديوم وهذه الصابون قاسية على منتجات الخشب الطبيعي ويمكن أن تترك سطحًا داكن اللون على القماش. نظرًا لأن الهدف هو التنظيف ، فمن الأفضل غسل ملابسك الشخصية أولاً قبل غسل الملابس الأخرى في منزلك.\nأنواع الصابون التي يمكنك استخدامها\nالصابون الهيدرولوجي الأساسي\nالصابون الهيدرولوجي الأساسي ذو أساس طبيعي مع عدم استخدام هيدروكسيد الصوديوم أو استخدامه بشكل منخفض للغاية. هذه رائعة للاستخدام الكثيف ، والتنظيف اليومي مثل غسل سيارة العائلة ، وغسل الأطباق أو الأواني.\nمنتجات الصابون التجارية\nيعتمد الصابون التجاري على هيدروكسيد الصوديوم وعادةً ما يحتوي على عوامل تنظيف إضافية مثل الجليكول والسيليكون والإنزيمات. يمكن استخدام الصابون التجاري بكمية أقل من الماء ولا يترك بقايا على ملابسك وأثاثك وأرضياتك الخشبية مقارنة بصابون المنزل العادي.نظرًا لطلاء الحاجز الواقي لمنظف الغسيل ، يمكن أن يترك ملمسًا ناعمًا ولامعًا ، ولكن معظم الصابون التجاري يكون أيضًا أكثر قسوة على الملابس لأن الطلاء يسمح لها بالرغوة بدرجة أكبر.\nيعتبر الصابون المطهر رائعًا لمقاومة الجراثيم ويعتمد عادةً على حمض اللاكتيك ، وهو حمض طبيعي في الحليب يقضي على العديد من الجراثيم والبكتيريا. إنها ممتازة لتنظيف أسطح العمل والزجاج والأرضيات والخشب والفولاذ المقاوم للصدأ. من المهم اتباع التعليمات الموجودة على الملصق حول الأس الهيدروجيني للصابون ، حيث أن درجة الحموضة العالية (أكبر من 8.0) تعتبر رائعة للتطهير كما أن درجة الحموضة المنخفضة (أقل من 6.0) أفضل للتنظيف الشامل.\nشاهد الفيديو: استخدام الثوم كمبيد حشري و فطري طبيعي للنباتات, مبيد حشري طبيعي للنبات, Using Garlic as Insecticide\nفوائد الصابون المضاد للبكتيريا على أشجار الفاكهة...


عثر نزلاء سجن بلغاري، على كنز ضخم يحوي عملات فضية نادرة تعود إلى الإمبراطورية العثمانية؛ ممَّا أدخلهم في حالة صدمة وباتوا غير مصدقين لما عثروا عليه.\nتَمّ اكتشاف الكنز إلى جانب وعاءين مكسورين كانا يحملان العملات الفضية، في أحد السجون في مدينة بليفين البلغارية؛ حيث عثر السجناء على النقود تحت سطح حقل كانوا يزرعونه، بينما يعتقد سكان المنطقة أنَّ الكنز دفن في القرن التاسع عشر، ويضم 1046 قطعة نقدية من الفضة التركية العثمانية تسمى “آقجة”، وتزن القطع النقدية معاً، أكثر من 8 كجم؛ وفقاً لقناة روسيا اليوم..\nوقال فلاديمير نايدنوف، (عالم آثار ساهم في عمليات الحفر): “إنها من أنواع مختلفة من العملات، وذات قِيَم مختلفة، وربما تَمّ جمعها على مدى سنوات عديدة”. مشيراً إلى أن القرن التاسع عشر ليس معروفاً بشكل جيد في الواقع، ولهذا السبب فإنَّ الكنز يعتبر مصدراً لمعلومات تاريخية”.\nوأخيراً، نتقدم لكم بجزيل الشكر زوار ومتابعي موقع الشرق تايمز، كما نعدكم بتقديم كل ماهو جديد وهام من كافة المصادر الإخبارية الموثوقة، حيث قمنا بنقل ( سجناء في بلغاريا يعثرون على كنز ضخم ) , والمصدر هو المسئول عن صحة الخبر أو عدمه.


ماستركارد آسيا تقدم براءة اختراع لنظام فوترة للأجهزة قائم على تانغل – ArabTopForex\nالرئيسية/العملات الرقمية/ماستركارد آسيا تقدم براءة اختراع لنظام فوترة للأجهزة قائم على تانغل\nعرب توب فوركسأغسطس 27, 2020\nقدمت شركة ماستركارد ومقرها سنغافورة براءة اختراع لدى مكتب براءات الاختراع في الولايات المتحدة توضح بالتفصيل نظام الدفع لاستخدام الأجهزة التي تذكر على وجه التحديد تقنية تانغل من أيوتا (MIOTA).\nويقترح طلب براءة الاختراع، الذي نُشر يوم ٢٠ أغسطس، نظام الدفع عند الاستخدام الذي يستخدم “نظام تخزين وتجميع بيانات شفاف”. يجب على المستخدمين تقديم بيانات اعتمادهم للوصول إلى جهاز معين – وتستشهد براءة الاختراع بآلات النسخ والطابعات ثلاثية الأبعاد كأمثلة – ويتم إصدار فواتير بدقة لما استخدموه.\nويمكن أن تستند أنظمة تخزين البيانات المقترحة إلى تانغل أو شبكة بلوكتشين عامة. لا تذكر براءة الاختراع شبكة أيوتا أو عملتها، حيث يمكن أيضًا استخدام النظام في البيئات الخاصة.\nوتدعي براءة الاختراع أن مثل هذا النظام سيقدم تحسينًا على آليات الدفع التقليدية المستخدمة بشكل شائع للأجهزة المشتركة. وتجادل بأن البطاقات المدفوعة مسبقًا تحبس المستخدمين في النظام حتى لو لم يعرفوا مقدار الاستخدام الذي سيرونه، في حين أن الدفع الكامل لكل استخدام “غالبًا ما يستخدم الأجهزة المتصلة التي تقبل العملة الفعلية للتشغيل”. قد تحد هذه الأنظمة القديمة أيضًا من خيارات الدفع المتاحة للمستخدمين، حسبما تشير براءات الاختراع.\nوتشمل المزايا المذكورة درجة أعلى من الشفافية والثقة في النظام، والقدرة على مراقبة الاستخدام في الوقت الفعلي وإلغاء الرسوم الarabtopforex.comة ببطاقات الائتمان وأنظمة الدفع الأخرى. ومع ذلك، لا تشرح براءة الاختراع كيف سيدفع المستخدمون مقابل الاستخدام، وتركز فقط على التنفيذ التقني لمثل هذا النظام. نظرًا للحاجة إلى تسجيل المعاملات في دفتر السجلات الموزع، فمن المحتمل أن تكون هناك حاجة إلى نظام يشبه العملة المشفرة، مما قد يحد من خيارات الدفع للمستخدمين أيضًا.\nبدأت ماستركارد مؤخرًا في تأييد العملات المشفرة، حيث أطلقت مبادرة داخلية مخصصة لمصدري بطاقات العملات المشفرة لاستخدام الشبكة في يوليو. وفي مايو، دخلت أيضًا في مشروع خصوصية البيانات مع مقدم خدمة بلوكتشين للشركات “آر ثري”.\nآسيا اختراع براءة تانغل تقدم على فوترة قائم للأجهزة لنظام ماستركارد


غلاية لأنظمة التدفئة الأرضية\nتدفئة أرضية إشعاعية كهربائية: الأساسيات ، التكلفة ، الإيجابيات والسلبيات\nيمكن لأنظمة التدفئة الكهربائية المشعة المدفونة داخل الكتل الحرارية (مثل الخرسانة) أن تحتفظ بالحرارة لفترة طويلة ، حتى بعد إيقاف تشغيل الطاقة. طريقة سرية لتدفئة الأرضية.\nغلاية كهربائية للتدفئة الأرضية: الميزات والأنواع ومعايير الاختيار\nهناك عدة أنواع من أنظمة التدفئة الأرضية - الأشعة تحت الحمراء والكهرباء والمياه. في معظم الحالات ، يعطي الملاك الأفضلية لأنظمة المياه. يدور ناقل الحرارة باستمرار عبر الأنابيب الرئيسية ، التي يتم تسخينها في غلاية ...\nقبل تصميم نظام التدفئة ، وتركيب معدات التدفئة ، من المهم اختيار غلاية غاز قادرة على توليد الكمية اللازمة من الحرارة للغرفة. لذلك ، من المهم اختيار جهاز بهذه القوة بحيث يكون أداؤه أعلى مستوى ممكن ، ويكون المورد كبير ا.\nيسعدنا أن نرحب بكم على صفحات متجرنا على الإنترنت! تمكن العديد من المشترين بالفعل من تقدير المتجر الإلكتروني لأنظمة التدفئة والماء الساخن "ERA TEPLA". ستفاجأ بسرور من المجموعة الواسعة من معدات التدفئة في متجرنا على ...\nالتدفئة الأرضية || Floor heating\n· هذه الدورة من إعداد الطالب هاني العطار من دورة I want to be a professor\nغلاية التدفئة غير المباشرة هي عبارة عن عنصر تسخين أو خزان ، تم تجهيز المبنى بالماء الساخن. للبيع هناك نوعان من المنتجات: غلاية تدفئة مباشرة مراجل التدفئة غير المباشرة.\nمخطط التدفئة من غلاية غاز في منزل من طابقين: مراجعة ومقارنة لأفضل أنظمة التدفئة 0 تسخين البخار في منزل خاص وفي منزل ريفي على أساس موقد أو مرج ولكن من أجل أن تكون كفاءة التدفئة المركزية على المستوى المناسب ، يتم وضع مخطط ...\nSource JNOD غلاية كهربائية للتدفئة المركزية الماء . JNOD غلاية كهربائية للتدفئة المركزية الماء الساخن, You can get more details about from mobile site on m.al Smart Heat 01093396677 لأنظمة التدفئة المركزية والتسخين . 2019-3-24 مصدر التدفئة المركزية (غرفة الغلاية ...\nالتدفئة المركزية الأرضية, التدفئه المركزيه الارضيه مكونات النظام : يتكون …\nالتدفئة المركزية الأرضية تدفئة تحت الأرض - ويكيبيدي التدفئة والتبريد تحت الأرض هو شكل من أشكال التدفئة والتبريد المركزية التي تحقق التحكم بالمناخ الداخلي من أجل الوصول إلى الارتياح الحراري باستخدام التوصيل، والحمل ...\nالتدفئة الأرضية تعد التدفئة الأرضية إحدى أحدث الطرق في التدفئة حول العالم ،حيث أنها تعمل على تدفئة الأرضيات عن طريق أنابيب حرارية يتم تركيبها أسفل الأرضيات .\nكيف تعزز التدفئة تحت الأرضية الراحة وتوفر الطاقة وتحسن جودة الهواء\n· هناك نوعان رئيسيان من أنظمة التدفئة تحت الأرضية ، ونظام التدفئة الكهربائية تحت الأرضية ، والمعروف أيضًا باسم النظام الجاف ، ونظام التدفئة تحت الأرض.\nغلاية كهربائية للتدفئة الأرضية - ميزات العمل ، والأصناف ، وحساب الطاقة ، ومعايير الاختيار ، وأفضل العلامات التجارية ، وتعليمات الاتصال في منزل خاص.\nخصائص نظام التدفئة الأرضية النحاس هي التالية: درجة حرارة الماء داخل عادة ما تصل إلى 30-50 درجة. يتم التسخين بمساعدة مرجل حراري ؛ بالإضافة إلى ذلك ، يمكن استخدام مجمعات الطاقة الشمسية أو المياه الجوفية لنفس الغرض.\nالتدفئة المركزية و لاية معسكر😍(التدفئة الارضية ساربونتا حمام 🥰)\nيتميز صمام الأمان المركب خارج غلاية التدفئة بتصميم مشابه ويمكن أن يتسرب أيض ا ، الأمر الذي يتطلب إصلاح ا ... يتم تنظيم متطلبات صمامات الأمان لأنظمة التدفئة بواسطة GOST 12.2.085-2002.\nمخطط التدفئة من غلاية غاز في منزل من طابقين: مراجعة ومقارنة لأفضل …\nمخطط التدفئة من غلاية غاز في منزل من طابقين: مراجعة ومقارنة لأفضل أنظمة ... بالنسبة لأنظمة التدفئة الأرضية ، استخدم مجمعات منفصلة ، مع انخفاض درجة حرارة سائل التبريد.\nما هي أنظمة التدفئة المركزية؟ إنه نظام يتكون من غلاية مركزية تنقل الماء الساخن في الأنابيب إلى مصدر التسخين في الغرف ، وهناك مصدران للتدفئة أحدهما دفايات الألمنيوم والآخر هو التدفئة تحت الأرض.\nخدمات التدفئة مكونات انظمه التدفئة عباره عن سخان مركزي يعمل بالغاز الطبيعي مخصص لانظمه التدفئة و دفايات حائطيه وشبكه تأسيس لربط السخان بالدفايات أو التدفئة الارضيه وهي عباره عن شبكه مواسير تحت...\nموازنة نظام التدفئة ، وتعديل المشعات * أنظمة التدفئة\nعندما تحتاج إلى موازنة نظام التدفئة لمنزل خاص. كيفية ضبط بطاريات التدفئة ذات الأنبوبين والأنبوب الواحد. تعديل أرضية عازلة للحرارة. نقطة مهمة. لا تفرط في شد الصنابير ، فلن تحصل على أي مدخرات بهذه الطريقة.\nالمجمع Valtec للتدفئة الأرضية: كيفية تركيب Valtec\nيجب اختيار مقياس التدفق لمجمع التدفئة الأرضية بضمان 5-7 سنوات ، ويفضل أن يكون في جسم نحاسي. لا يتطلب التثبيت على مشعب وتعديل مقياس التدفق معرفة خاصة. التثبيت الهادف لنظام التجميع لكن من المستحيل تثبيت نظام تدفئة المجمع ...\nالتدفئة بالغاز المسال (البروبان). استهلاك الوقود ، تجربة شخصية: استهلاك الغاز من غلاية الغاز الأرضية HOT SPOT 12 kW (مراجعة المستخدم):\nما هي أنواع التدفئة الأرضية الموجودة. ميزات تثبيت كل منها. مراجعات مقارنة للخيارات المختلفة لبناء نظام "أرضية دافئة" فيما بينها. ما هي الأنابيب الأفضل والأرخص: معدن بلاستيكي أو بولي ...\nSmart Heat 01093396677 لأنظمة التدفئة المركزية والتسخين. نظام التدفئة المركزية. هو نظام يعمل على مخططات التدفئة المركزية نظام التدفئة المركزية.هو نظام يعمل على السولار (الديزل) بهدف تدفئة المكان المحيط سواء كان منزلا ، أو مؤسسة ...\nغلايات غاز الأرض في المتوسط أقوى بكثير من المراجل المثبتة على الحائط: يمكن استخدامها لتدفئة منزل ريفي كبير إلى حد ما. ميزة أخرى لأنظمة التدفئة الأرضية هي طول عمر التشغيل.\nمقارنة أنظمة التدفئة »تدفئة المباني والمستودعات الموفرة للطاقة …\nالتكلفة التقديرية لأنظمة التدفئة لمنزل 100 م 2 ، (فرك.) غلاية وقود صلب (فحم) ... تستخدم التدفئة الأرضية في المنازل والشقق كتدفئة رئيسية وكتدفئة إضافية. الخيارات الرئيسية لتدفئة الكوخ 4.\nالتدفئة تحت الأرضية - كفاءتها وتوافقها مع غلايات الوقود الصلب الميزة الرئيسية التي تتمتع بها الأرضية المسخنة مقارنة بطرق التدفئة الأخرى هي منطقة التسخين الموحدة للمساحة الداخلية.\nالأرضية المعزولة بالحرارة كهربائية وماء. المبرد في الماء هو الماء الساخن ، والذي يتدفق عبر أنابيب مرنة تحت الأرض ويسخن الأرضية نفسها والغرفة. يمكن أن يكون مصدر تسخين المياه غلاية غاز.\nأما بالنسبة لأنظمة التدفئة الكهربائية الأرضية ، فقد أصبحت في السنوات الأخيرة تقليدية. مبدأ تشغيلها هو توليد الحرارة عن طريق عناصر التسخين للنظام تحت تأثير تيار كهربائي.\nصمام ثلاثي الاتجاهات لأنواع التدفئة تحت الأرضية لخلط الصنابير الثرموستاتية ...\nإذا تم تغذية الماء من غلاية التدفئة (غالب ا ما تصل درجة حرارته إلى 90-95 درجة مئوية) مباشرة في دوائر نظام التدفئة تحت الأرضية ، فسيكون الجو حار ا جد ا في الغرفة.\nتنص وكالة حماية البيئة على أن مضخة حرارية تعمل بالطاقة الحرارية الأرضية يمكن أن توفر ما بين 30 إلى 70 بالمائة على التدفئة المنزلية و 20 إلى 50 بالمائة على تكاليف التبريد المنزلي مقارنة بالأنظمة التقليدية.\nفي مواجهة معضلة: غلاية غاز جدار أو أرضية - أيهما أفضل؟ صدقوني ، كل مشتري ثاني لمعدات التدفئة يلجأ إلى الاستشاريين مع هذا السؤال. ومن الجيد أن يصادف أخصائي ا كفؤ ا ومؤهل ا.\nمع بداية فصل الشتاء ، أريد أن يكون المنزل دافئًا ودافئًا. غلاية كهربائية قادرة على توفير ظروف مريحة للعيش في منزل خاص أو ريفي في موسم البرد. في السوق هناك العديد من النماذج من الغلايات الكهربائية لأنظمة التدفئة ...\nالقائمة حيدر أباد الكسارات\nسحق الحجر الهندي حجر في الهند\nتلبد الخام في فرن الحزام


الموصل، 30 آب 2017 – زار نائب الممثل الخاص للأمين العام للأمم المتحدة في العراق السيد جورجي بوستين مدينة الموصل في 29 آب 2017، حيث التقى محافظ نينوى السيد نوفل السلطان ورئيس مجلس المحافظة السيد بشار الكيكي وعدداً من أعضاء مجلس المحافظة. وعقد نائب الممثل الخاص اجتماعات منفصلة مع كلٍ من مسؤول فرع الحزب الديمقراطي الكردستاني في الموصل السيد عصمت رجب، والسيد عبد الله النجيفي بصفته المستشار السياسي لائتلاف متحدون للإصلاح.\nوهنأ السيد بوستين محاوريه بالنصر العسكري الذي تحقق مؤخراً في تلعفر ضد داعش، وكذلك بالتقدم الملحوظ المحرز في عملية إعادة تأهيل الجانب الشرقي لمدينة الموصل. كما جرت مناقشة التطورات السياسية والأمنية في المحافظة.\nوقال نائب الممثل الخاص السيد بوستين: "أحث وأشجع كافة الأطراف على مواصلة جهودهم للمصالحة بين مختلف المكونات في نينوى، والإسهام بشكل فاعل في تحقيق مستقبل أفضل للعراق"، وأضاف أن "يونامي مستعدة لتقديم دعمها الكامل في هذا الصدد."\nإضافة إلى ذلك، أشار السيد بوستين على أصحاب الشأن بأن يسعوا تجاه إجراء الانتخابات في موعدها المقرر، وأن يتعاملوا مع العملية الانتخابية بوصفها إجراءً ذا أولوية لتحقيق المشاركة العامة والمساءلة والمصالحة، وأكد على ضرورة تحسين حالة الأمن لجميع مواطني نينوى.\nالمزيد في هذه الفئة : « يونامي تدين بأشد العبارات التفجيرين الإرهابيين في بغداد\tالصندوق والعراق يستثمران في شراكة جديدة لإعادة تنشيط أصحاب الحيازات الصغيرة »


الآباء المسنون: 8 علامات تحذير لمشاكل صحية - Mayo Clinic (مايو كلينك)\nبتقدم والديك في العمر، كيف تكون متأكدًا من أنهم يعتنون بأنفسهم ويحافظون على صحتهم؟\nعند زيارتك لوالديك، فكر في هذه الأسئلة:\nانتبه إلى مظهر والديك. فقد يشير الفشل في الحفاظ على العادات الروتينية اليومية — مثل الاستحمام وتنظيف الأسنان — إلى وجود حالة من الخرف أو الاكتئاب أو الضعف الجسدي.\nإن أي تغيرات في طريقة أداء والديك للمهام المنزلية قد تقدم مؤشرات حول صحتهما؛ فعلى سبيل المثال، قد تعني الأواني المحترقة أن والديك لا يتذكرون الطعام أثناء طهيه على الموقد. وقد يكون إهمال الأعمال المنزلية علامة على وجود حالة من الاكتئاب أو الخرف أو مشكلات أخرى.\nانتبه إلى الكيفية التي يمشي بها والداك. هل هم مترددين أو غير قادرين على مشي المسافات المعتادة؟ هل تعثروا أثناء مشيهم مؤخرًا؟ هل سيستفيد أي من الوالدين بعكاز أو مشاية؟\nإن مشكلات كضعف العضلات وآلام المفاصل قد تجعل من التجوال أمرًا عسيرًا كذلك. إذا كان والداك يواجهان صعوبةً في الوقوف على قدميهما، فإنهما قد يكونا عرضةً لخطر السقوط — وهو سبب رئيسي في حالات الإعاقة بين كبار السن.\nهناك العديد من الخطوات التي يمكنك اتخاذها للتأكد من سلامة صحة والديك وعافيتهما، حتى إن لم تكن تعيش بالجوار. حاول القيام بما يلي:\nشجّعهما على إجراء الفحوصات الطبية بانتظام. إذا كنت قلقًا بشأن فقدان أحد والديك لوزنه أو بشأن حالته المزاجية المكتئبة أو فقدان الذاكرة أو أي أعراض وعلامات أخرى، فشجّع والديك على تحديد موعد لزيارة الطبيب. فيمكن أن تعرض تحديد موعد الزيارة أو اصطحابهما إلى الطبيب — أو حتى العثور على شخص آخر يحضر معه الزيارة. أسأل كذلك عن زيارات المتابعة.\nناقش مشكلات السلامة. أشر إلى أي مشكلات محتملة للسلامة قد يتعرض لها والداك — ثم ضع خطة لمناقشة المشكلات. مثلًا، قد يساعد استخدام مقعد مرحاض مرتفع أو درابزين ثابت في المرحاض على تجنب السقوط. إن لم يعد بمقدور والديك القيادة بأمان، فاقترح خيارات أخرى للمواصلات — مثل ركوب الحافلة أو استخدام إحدى خدمات سيارات أو شاحنات نقل الركاب أو استئجار سائق.\nفكّر في الاستعانة بخدمات الرعاية المنزلية. يمكنك أن تستأجر شخصًا لتنظيف المنزل وأداء المهام المنزلية. يمكن لمساعد الرعاية الصحية المنزلية أن يساعد في الأنشطة اليومية، كالاستحمام وتوصيل الوجبات لكبار السن، أو قد تقوم خدمات مُجتمعية أخرى بإعداد الطعام. إذا كان البقاء في المنزل يمثل صعوبة لهما، فقد تقترح عليهما الانتقال إلى أحد مرافق المساعدة على المعيشة.\nاطلب المساعدة من الهيئات المحلية. يمكن أن تساعد الهيئات المحلية المتخصصة في شؤون الشيخوخة — التي يمكنك العثور عليها باستخدام خدمة تحديد مواقع دور الرعاية في الولايات المتحدة، وهي خدمة عامة مقدمة من إدارة الشيخوخة — في توصيلك بهذه الخدمات في المنطقة التي يعيش بها والدك. فعلى سبيل المثال، قد يكون في المقاطعة التي يعيش بها والداك اختصاصيون اجتماعيون يمكنهم تقييم احتياجات والديك وتوصيلهم بخدمات مثل اختصاصيي الرعاية المنزلية.\nفي بعض الأحيان، لا يعترف الوالدان باحتياجهم للمساعدة، ولا يدرك الآخرون أنهم بحاجة للمساعدة. وهنا يأتي دورك. تأكد من إدراك والديك للمشكلة والحل الذي تقترحه.\nOriginal article: https://www.mayoclinic.org/ar/healthy-lifestyle/caregivers/in-depth/aging-parents/art-20044126


قدم الأن في منحة جامعة ترانسلفانيا في لدراسة البكالوريوس والماجستير والدكتوراه رومانيا 2022 | ممولة بالكامل - المنحة\n1 فرصة التقديم في منحة جامعة ترانسلفانيا في لدراسة البكالوريوس والماجستير والدكتوراه رومانيا 2022 | ممولة بالكامل\n2 لمحة عن جامعة ترانسلفانيا\n3 لماذا قد تختار التقديم في جامعة ترانسلفانيا\n4 تفاصيل منحة جامعة ترانسلفانيا\n5 التمويل المقدم في منحة جامعة ترانسلفانيا\n6 شروط التقديم في منحة جامعة ترانسلفانيا\n7 المستندات الملطلوبة للتقديم في منحة جامعة ترانسلفانيا\n8 الجدول الزمني للتقديم في منحة جامعة ترانسلفانيا\n9 كيفية التقديم في منحة جامعة ترانسلفانيا\nفرصة التقديم في منحة جامعة ترانسلفانيا في لدراسة البكالوريوس والماجستير والدكتوراه رومانيا 2022 | ممولة بالكامل\nإذا كنت ترغب بالدراسة في رومانيا يمكنك التقديم في منحة جامعة ترانسلفانيا والمقدمة للطلاب الدوليين من مختلف الجنسيات حول العالم الذين يرغبون في الحصول على فرصة لدراسة درجة البكالوريوس أو الماجستير أو الدكتوراه في رومانيا للعام الدراسي 2022-2023. تساعد المنح الدراسية على تعزيز أهدافك الأكاديمية والوظيفية عن طريق إزالة الحواجز المالية من أجل تغطية نفقات الدراسة.\nلمحة عن جامعة ترانسلفانيا\nجامعة ترانسيلفانيا في براشوف هي مؤسسة حكومية للتعليم العالي في مدينة براشوف في رومانيا. تأسست الجامعة عام 1948 ويوجد في الجامعة 16 كلية، وهي تتسع لما مجموعه 25،000 طالب وفيها 800 معلم، أختصار الجامعة (UTBv).تقدم الجامعة مناطق ترخيص مدتها 105 يومًا، و 12 مجالًا للتعليم عن بعد، و 5 مناطق للتردد المنخفض الأعلى، بالإضافة إلى 73 برنامجًا للدراسات العليا و 18 برنامجًا للدكتوراه.\nلماذا قد تختار التقديم في جامعة ترانسلفانيا\nتَم تصميم منحة ترانسيلفانيا الأكاديمية كمنافسة للطلاب الدوليين من دول خارج الاتحاد الأوروبي أو خارج المنطقة الاقتصادية الأوروبية. تُمنح المنحة للحضور الكامل لدراسات درجة البكالوريوس أو الماجستير أو الدكتوراه للمرشحين المقبولين للدراسات في جامعة ترانسيلفانيا. تَهدف المنحة إلى جذب الطلاب الدوليين للدراسة في جامعة ترانسيلفانيا و تشكيل مجموعة من سفراء جامعة ترانسيلفانيا وبالتالي زيادة الرؤية الدولية للجامعة.\nالموعد النهائي: 27 أبريل 2022\nالتمويل المقدم في منحة جامعة ترانسلفانيا\nالرسوم الدراسية. (بما في ذلك رسوم التسجيل والتخرج)\nراتب شهري قدره 800 ليو (170 دولارًا).\nرسوم التأشيرة لرومانيا.\nعلم الاجتماع والاتصال.\nلمزيد من المعلومات عن الكليات و التخصصات من هنا\nيمكن التقديم في أي تخصص دراسي حددته المنحة مسبقاً في الجامعة.\nيجب ألا يزيد عمر المتقدم عن ماقامت جامعة ترانسلفانيا في تحديده مسبقاً.\nلديك الحافز والدافع المناسب للتقديم.\nالمستندات الملطلوبة للتقديم في منحة جامعة ترانسلفانيا\nالجدول الزمني للتقديم في منحة جامعة ترانسلفانيا\n15 فبراير حتي 27 إبريل: ملء استمارة الطلب عبر الإنترنت.\n3 مايو حتي 26 مايو: تقييم ملفات الطلاب المتقدمين.\n27 مايو حتي 28 مايو: الموافقة على قائمة الطلاب المقبولين.\n31 مايو: الإعلان عن الطلاب وارسال نتائج القبول.\nعليك أولاً اختيار برنامج الدراسة.\nبعد ذلك عليك أن ترسل ملف الطلب مع المستندات المطلوبة إلى [email protected]\nقم بتعبئة بيانات طلب المنحة بشكل صحيح وتأمد من ملئ حميع الفراغات المطلوبة.\nعليك ارسال الطلب الى الجهة المانحة.


ارتداء بنطال الجينز الضيق مع حذاء الكاحل - wikiHow\nكيفية ارتداء بنطال الجينز الضيق مع حذاء الكاحل\nتتناغم بناطيل الجينز الضيقة (بالإنجليزية: Skinny jeans) مع أحذية الكاحل أو الرقبة القصيرة بشكل أنيق، كما لو أنهما قد صنعا خصيصًا لارتدائهما معًا. ومع ذلك، فإن طريقة ارتدائك لبنطالك الجينز تؤثر بشكل كبير على أناقة مظهرك. فعلى سبيل المثال، إذا كان بنطالك بطول كاحلك أو تم ثني أطرافه، فسيبدو أكثر أناقةً من كرمشة ساقي البنطال (أي ضم الطول الزائد إلى بعضه للأعلى). فمع تصميم بنطالك المميز واختيار الحذاء الأفضل لمظهرك وارتداء الزي المناسب لكِ، ستبدين رائعة دون عناء.\nتصميم البنطال الجينز\nارتدي بنطالًا قصيرًا من الجينز مع حذاء الكاحل. تتناغم البناطيل القصيرة مع أحذية الكاحل بشكل مثالي. اختاري بنطالًا يرتفع طوله نحو 3 سنتيمترات عن حرف حذائك العلوي. يمكنك كذلك اختيار بنطال بفارق 5 سنتيمترات إذا أردت أن تظهري المزيد من ساقيك. إذا لم يظهر أي جزء من الجلد ما بين الحذاء والبنطال فسوف تظهر ساقيك بشكل أقصر. X مصدر بحثي\nشمري أساور بنطالك الجينز. سيكون من الجيد إذا اشتريتِ بنطالًا من الجينز الضيق ذي أساور مثنية جاهزة. ولكن إذا اشتريتِ بنطالًا طويلًا، يمكنك ثنيه من الأسفل بكل سهولة. يعتمد عدد الثنيات أو الطيات على طول البنطال وعلى مقدار ما ترغبين أن تظهريه من جلدك. يمكنك ثني البنطال مرة واحدة أو مرتين أو حتى ثلاث مرات على حسب طولك. X مصدر بحثي\nاثني البنطال الجينز من الداخل لتقصير طوله. إذا كنتِ لا ترغبين في دس بنطالك في الحذاء لجعله يبدو كما لو كان أقصر، فيمكنك ثنيه من الداخل بحيث لا تظهر الطيات، وذلك إذا كان بنطالك طويلًا. سيساعدك ذلك على ظهور ساقيكِ بشكل أطول مما هي عليه. X مصدر بحثي\nضعي بنطالك داخل حذاء الكاحل. إذا كان بنطالك الجينز طويلًا، دسي أطرافه السفلية داخل حذائك. تبدو البناطيل المدسوسة داخل الأحذية أكثر أناقةً إذا كان طول الحذاء يحاذي الكاحل تقريبًا أو أطول قليلًا. تأكدي من استواء البنطال عند دسه في الحذاء كي لا يكون متجعدًا. X مصدر بحثي\nاختيار حذاء الكاحل أو ذي الرقبة القصيرة\nاختاري حذاء الكاحل الأرضي لراحتك وأناقتك. البناطيل الجينز الضيقة هي أفضل ما يناسب أحذية الكاحل الأرضية أو المسطحة. يمكنك ارتداء بنطال أسود وسترة مع حذاء الكاحل لتحصلي على مظهر أنيق ومريح بنفس الوقت. أو يمكنك ارتداء بنطال جينز وقميص أو تي شيرت للحصول على مظهر مريح وشبابي. X مصدر بحثي\nارتدي أحذية سوداء لتناسب العديد من ملابسك. تعتبر أحذية الكاحل السوداء خيارًا رائعًا ومناسبًا لكل الملابس تقريبًا. فعلى سبيل المثال، يمكنك ارتداء الحذاء الأسود مع بنطال جينز وتي شيرت أو ارتدائه مع سترة جلدية وبنطال أسود أو مع أي ملابس أخرى بخلاف الملابس الرسمية. X مصدر بحثي\nاشتري أحذية ذات ألوان جريئة لذوق فريد من نوعه. كل ما يتطلبه الأمر لإعطاء مظهرك الحيوية هو زوج من الأحذية الملونة. على سبيل المثال، ارتدي حذاءً أحمر اللون مع زي أسود للحصول على لمسة رائعة. أو ارتدي ثوبًا أصفر اللون مع حذاء أرجواني للحصول على مظهر بديع وحيوي. X مصدر بحثي\nيمكنك أيضًا ارتداء أحذية مزركشة أو مطرزة لإضفاء لمسة متميزة وفريدة.\nجربي الأحذية ذات الإبزيم أو الرباط لمظهر جذاب. تأتي أحذية الكاحل عادة بالسحاب (السوستة) أو الإبزيم أو الرباط. يمكنك ارتداء الأحذية ذات الأربطة أو الأبازيم مع سترة جلدية للحصول على مظهر أكثر جرأة وجمالًا. ولمزيد من الإثارة يمكنك ارتداء الجينز المقطع. X مصدر بحثي\nارتدي الجوارب القصيرة مع حذاء الكاحل. نظرًا لأن بعض الجلد يجب أن يظهر ما بين البنطال والحذاء، لذلك يجب ارتداء الجوارب القصيرة التي لا تعلو عن طرف حذائك العلوي. يمكنك ارتداء جوارب الكاحل القصيرة أو جوارب "الباليرينا" التي تناسب الأحذية الأرضية. X مصدر بحثي\nإذا أردت أن تظهري جواربك، ارتدي جوارب رفيعة وداكنة.\nتنسيق ثيابك أو مظهرك\nارتدي زيًا موحد اللون. الزي الأحادي اللون يعد من أفضل الخيارات للحصول على مظهر بسيط. ارتدي قميصًا أسود وبنطالًا أسود من الجينز الضيق إذا كان حذاؤك أسود اللون. بالنسبة إلى أحذية الكاحل الملونة مثل الحذاء الأزرق، فكوني جريئة وارتدي زيًا أزرق اللون! X مصدر بحثي\nاختاري الألوان المحايدة لمظهرك اليومي. للحصول على أفضل إطلالة هادئة وشبابية، فإن الألوان المحايدة هي أفضل اختيار. اختاري حذاءً لونه بيج، مع بنطال فاتح اللون من الجينز الضيق، وقميص أبيض أو محايد اللون وذلك للحصول على إطلالة هادئة ورائعة. من الممكن ارتداء قبعة بنية أو بيج لمزيد من الأناقة. X مصدر بحثي\nارتدي السترة الشتوية في الطقس البارد. عادةً ما ترتبط الأحذية ذات الرقبة الطويلة بالطقس البارد. ولكن يمكنك ارتداء أحذية الكاحل طوال العام. ارتدي بنطالًا يمكنك دس أطرافه في الحذاء، أو ارتدي جوارب داكنة مع أحذية الكاحل للحصول على الدفء ثم ارتدي معطفًا من الفرو أو معطف طويل "بالطو" أو معطف منفوخ "بامب" على حسب ذوقك الشخصي. X مصدر بحثي\nارتدي الجينز الأبيض طوال العام. يمكنك كسر القاعدة وارتداء الجينز الأبيض بعد انتهاء دوام عملك مع حذاء أسود وقميص أسود أو "تي شيرت". من الممكن أيضًا أن ترتدي حذاءً بيج مع جينز أبيض اللون وقميص أو تي شيرت محايد اللون وسترة ضيقة من الجينز. X مصدر بحثي\nارتدي البلوزة القصيرة في الطقس الدافئ. من الأزياء اللطيفة للجو الدافئ ارتداء بلوزة قصيرة وبنطال من الجينز الضيق وحذاء الكاحل. يمكنك الحصول على مظهر شبابي بارتداء الجينز المقطوع مع البلوزة الواسعة وحذاء الكاحل، أو يمكنك الحصول على مظهر أنيق مع بنطال جينز أسود وبلوزة أنيقة وحذاء الكاحل. X مصدر بحثي\nلا تضعي الجينز الطويل في حذائك. سيجعل ذلك ساقك تبدو أقصر مما هي عليه. X مصدر بحثي\nما لم ترتدي بنطالًا واسعًا أو شارلستون، فلا تدلى بنطالك على الحذاء أو تغطيه به من الخارج. X مصدر بحثي\nشارك في التأليف: Candace Hanna . كانديس هانا خبيرة أناقة وجمال في جنوب كاليفورنيا بأمريكا. تملك خبرة أكثر من 15 عامًا في مجال الأزياء، وجمعت بين دهائها في عالم الأعمال مع عينها المبدعة في مجال الأزياء لتنشئ وكالتها الخاصة للأزياء. تم عرض هذا المقال ١٬٤٠٥ مرة/مرات.


خطورة الـ"آي باد" على نمو الأطفال\n20 مارس 2018 - 08:55 ص\nكشفت دراسات حديثة عن خطورة كبيرة للتغير الذي حدث في حياة الأطفال ، إذ أصبحوا أكثر اهتمامًا بـ"الآي باد" بدلًا من اللعب بالمكعبات .\nو تسهم هذه الأجهزة في جذب انتباه الطفل على نحو يراه الأباء المشغولون بأداء المهام إيجابيا، فضلا عن كونها تعد مصدرا جذابا للمحفزات الحسية لدى الأطفال، لكن هل يعني ذلك أن الأطفال لا يطورون المهارات الحركية الدقيقة التي يحتاجون إليها لأداء عملية الكتابة بخط اليد؟\nرصدت سالي باين، مديرة في مجال العلاج الوظيفي بطب الأطفال بمؤسسة "قلب إنجلترا"، أدلة على ذلك.\nوقالت لصحيفة "الغورديان" البريطانية إن :"أطفال المدارس لا يستطيعون الإمساك بالقلم الرصاص لأنهم يفتقدون إلى مهارات الحركة الرئيسية".\nوأضافت :"حتى تكون قادرا على الإمساك بالقلم وتحريكه، تحتاج إلى تحكم قوي في عضلات الأصابع".\nوقالت :"يحتاج الأطفال إلى فرص كثير لتطوير هذه المهارات".\nوقالت :"ما أسهل أن تعطي طفلا آي باد بدلا من تشجيعه على أداء لعبة تبني العضلات مثل بناء أشكال بالمكعبات أو القص واللصق أو تكوين أشكال دمى بالحبال".\nوقالت جين ميدويل، طبيبة مشاركة في حملة "أكتب مستقبلك" التي تدعم أهمية الكتابة بخط اليد، إن تسلل الأجهزة إلى المنازل يعني "حرمان بعض الأطفال من اللعب بالقلم كما اعتادوا"، كما تتغير عادات الآباء أيضا.\nلكنها لا تعتقد في وجود صلة بين الحاسب اللوحي وافتقاد المهارات الحركية.\nو قالت :"ليست لدينا دراسات تقول إن استخدام حاسب لوحي يعني إمكانية استخدام الشاشة وليس استخدام القلم للكتابة بخط اليد، ولا نعلم إن كان يوجد نقص في الأقلام في المنازل أم لا".


هنا القدس - اعترافٌ صريح | عبد الرحمن جاسم\nنعترف اليوم أمامكم، بصوتٍ مرتفعٍ، بأن الفلسطيني دائماً وحيد. لا يشاركه أحد وجعه. اللهم إلا القليل، والمشاركة الأكثر إبهاراً تكون – عادةً – طعنةً في الظهر: شماتةٌ به، تصغيرٌ بمقاومته، وفوق كل هذا التطرّب على فكرة: أنتم خارج فلسطين تختلفون عمّن في داخلها. في الداخل أنتم مقاومون، وفي الخارج أنتم خونة.\nكيف يستطيع إخوتنا العرب التفكير بهذه الطريقة؟ لا أحد يعلم. كيف يستطيعون القول إن الدم الفلسطيني الذي يسقط خارج فلسطين يختلف عن الذي يسقط داخلها، لا أحد يعلم. لكن جل ما نعلمه هو أننا وحدنا. خلقنا وحدنا، وسنبقى وحدنا؛ وسنموت وحدنا، بالتأكيد. هو ليس استنتاجاً جديداً، نحن نرى، ونشاهد؛ بصمت. فبعد اعتصام الأسرى الطويل (أكثر من 53 يوماً) اكتشفنا كم نحن وحدنا، مرة أخرى، وكم أن قضيتنا تخصّنا وحدنا، وكل من يتشدّق بالحديث عنها غير معني بها. كل جماهيره غير معنية، كل وسائل إعلامه غير مهتمة، وكل ما يهمه من الأمر هو كيف يستفاد من القضية. كيف نعرف ذلك؟ راقبوا إخوتنا العرب، من الخليج الثائر إلى المحيط الهادر، يتلهون بأي شيء، ولديهم القدرة على تضييع أوقاتهم في أي نقاشٍ وخلاف، خلا الدفاع عن أسرى فلسطينيين من المفروض أنهم يعتبرونهم «قضيتهم المركزية». الحقيقة الوحيدة هي: فلسطين ليست القضية المركزية إلا للقلة القليلة. القابضون على جمرها، وهم كما أشرتُ: قلة. إذاً، فلننسَ المجتمع العادي، ماذا عمّن يدّعون أنّهم «خيرة المجتمع»، الطيبون الحساسون، أولئك المرهفة مشاعرهم تجاه صورةٍ حزينة، أولئك الذين يتحدثون طوال الوقت عن عملهم «الإنساني». ماذا عن الجمعيات «المدنية»؟ الجمعيات الأهلية والأوروبية والإنسانية وحقوق الإنسان وكل هذه الترهات والأكاذيب والخدع، لم تحرّك ساكناً لما يحدث في فلسطين.\nلم يتحركوا من أجل الأسرى، ولا من أجل ما يحدث اليوم في الخليل. نحن الفلسطينيين، هذه هي الحياة التي اخترناها، ونعرف أنها حياةٌ واحدة. نعرف ذلك تماماً، وهو موتٌ واحد كذلك. لن يقتلنا أحدٌ مرتين، وإذا قطّعت جثثنا أو مُثِّل بها لن يعنينا الأمر، إذ إننا أموات أحياء. لذلك نحن لا نخاف شيئاً أو أحداً. ولا يهمنا كيف سنموت، «الغزلان تموت عند أهلها، أما الصقور: فلا يهمها أين تموت»، كما يقول الكاتب الفلسطيني غسان كنفاني. منذُ أيامٍ قرر فتيتنا المقاومون التحرك لإخراج إخوتهم من السجون، فعلوا ما يعرفونه جيداً، ضربوا الصهيوني في نقطة ضعفه: جنوده ومستوطنوه. هم يعرفون أن هذا الصهيوني لا تعنيه العدالة الدولية ولا القانون.\nكل ما يفهمه هو القوة. هل تتناقش مع قرشٍ مفترسٍ يدور حولك مثلاً؟ هل يهتم نمرٌ جائعٌ بالقوانين والعقوبات التي ستفرض عليه؟ اختار شبابنا أن يضربوا ذلك المكان الحساس، فأسروا 3 «شلاليط» هذه المرة (في إشارة إلى جلعاد شاليط الأسير الصهيوني السابق لدى المقاومة). ولندع التفاؤل جانباً. قد تنجح العملية وقد لا تنجح، لكن مجرد حدوثها هو إشارةٌ بكل اللغات لأن نبض الشعب الفلسطيني هو هكذا: مقاومة. باختصار، فصلاً للخطاب: إننا مصلوبو هذا الكوكب، مستضعفوه، نعرف ذلك، وندركه، وكلما شتمنا أحدٌ، أو أهاننا، أو سجننا، أو قتلنا أو عذبنا، نعرف طريقنا، ونعرف ماذا نريد. للشاتمين نقول: زيدوا شتائمكم، للكارهين زيدوا كراهيتكم، للأغبياء زيدوا ما تفعلونه، وللقتلة نفس الشيء. طريقنا واحدٌ مرسوم، نعرفه جيداً ويعرفنا: فلسطين.


Imaging Intermediate Filaments and Microtubules with 2-dimensional Direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopy | Protocol (Translated to Arabic)\nالتصوير خيوط متوسطة وميكروتوبوليس مع الفحص المجهري 2-الأبعاد التعمير البصرية العشوائية المباشرة\nوالهدف العام لهذه المنهجية إعطاء أفضل الظروف التجريبية من إعداد نموذج للحصول على الصور، وإعادة الإعمار من أجل أداء 2D ثنائي اللون دستورم الصور ميكروتوبوليس وخيوط متوسطة في الخلايا الثابتة\nسيتوسكيليتون، تتألف من أكتين ميكروفيلامينتس، ميكروتوبوليس، وخيوط متوسطة (إذا كان)، دوراً رئيسيا في السيطرة على شكل الخلية والأقطاب وحركية. درس تنظيم شبكات أكتين وميكروتوبولي على نطاق واسع ولكن أن الاتحاد لا بعد تماما وتتميز. الاتحاد يكون متوسط قطرها 10 نانومتر وشكل شبكة تمتد في جميع أنحاء السيتوبلازم الخلية. أنها ترتبط فعلياً مع الأكتين وميكروتوبوليس من خلال المحركات الجزيئية و cytoskeletal linkers. هذه الرابطة ضيق يقع في صميم الآليات التنظيمية التي تكفل تنظيم الشبكات cytoskeletal الثلاث المطلوبة لمعظم وظائف الخلية المنسقة. ولذلك من الأهمية بمكان لتصور الاتحاد وحدها وأيضا جنبا إلى جنب مع كل من الشبكات الأخرى سيتوسكيليتال. إذا كانت شبكات غير كثيفة جداً في معظم أنواع الخلايا، لا سيما في الخلايا الدبقية، مما يجعل من الصعب جداً تحقيق مع الفحص المجهري fluorescence القياسية قرارها (الأفقي القرار ~ 250 nm). مباشرة "العشوائية بصري التعمير مجهرية" (دستورم) أسلوب يسمح مكسب في القرار الأفقي من حجم واحد. هنا، نحن تبين أن القرار دستورم الجانبي كافية لحل المنظمة كثافة الشبكات إذا، وعلى وجه الخصوص، إذا كانت حزم المحيطة microtubules. هذه الرابطة ضيق من المحتمل أن تشارك في تنظيم منسق لهذه الشبكات اثنين وأيار/مايو، وشرح كيف فيمنتين الاتحاد القالب واستقرار المنظمة microtubule فضلا عن يمكن أن تؤثر على الاتجار حويصلية التابعة ميكروتوبولي. وبصورة أعم، نعرض كيفية مراقبة عنصرين cytoskeletal مع تقنية دستورم المزدوج-لون يجلب ثاقبة جديدة من التفاعل المتبادل بينهما.\nهيولى خيوط متوسطة (IFs) هي هومو 10 نانومتر-قطر-أو هيتيروبوليميرس من نوع الخلية مجموعة فرعية معينة من البروتينات إذا. ويشارك الاتحاد في مجموعة كبيرة من الوظائف الخلوية مثل الخلية استجابات حركية وانتشارها والإجهاد. دورهم الرئيسي هو أبرز حقيقة أن أكثر من 90 من الأمراض البشرية هي الناجم مباشرة عن طفرات في البروتينات إذا؛ على سبيل المثال، التغييرات في تكوين إذا ترافق نمو الورم وينتشر1،،من23. تتزايد الأدلة التي تعمل بثلاثة أنظمة سيتوسكيليتون في التعاون لمراقبة الوظائف الخلوية مثل الخلية الاستقطاب، شعبة والهجرة2،3. إذ هناك اقتران ضيق بين الهيكل المكاني، والوظائف، من الأهمية بمكان للحصول على رؤى في الهيكل التنظيمي المتكامل مع خيوط أخرى وفهم أفضل سيتوسكيليتال للتحدث عبر. تنص هذه المادة على بروتوكول لأداء ثنائي اللون دستورم (المباشر العشوائية بصري التعمير مجهرية) تقنية فائقة القرار4 وكيف يتم استخدامه للتحقيق بالتفاعل بين إذا و microtubules في ثابت، ومثقف. الخلايا في 2 الأبعاد (2D).\nوقد وضعت العديد من التقنيات فائقة القرار على مدى العقد، وهناك اكتشافات كانت في الأصل على جائزة نوبل في الكيمياء في عام 20145. تقع بين جميع هذه التقنيات الأساليب المستندة إلى التعريب جزيء واحد مثل النخيل6 (فوتواكتيفاتيد التعريب مجهرية) الذي يستخدم البروتينات الفلورية فوتوسويتشابل، العاصفة7 مع أزواج من فلوروفوريس أو دستورم4 مع فلوروفوريس التقليدية. جميع هذه الأساليب تقوم على نفس المبدأ الذي يتألف من (ط) تبديل معظم الصحفيين الفلورية إلى حالة "إيقاف التشغيل" "(غير-فلوري)، (ثانيا) تفعيل العشوائية لمجموعة فرعية منها في فلوري الدولة من أجل ترجمة هذه الموقف المكاني بدقة نانومتر، و (iii) تكرار هذه العملية من أجل تفعيل العديد من مجموعات فرعية من فلوروفوريس قدر الإمكان. يتم إعادة إنشاء صورة نهائية باستخدام جميع تعريب من جزيئات المنشط، تقديم قرار جانبية وصولاً إلى ~ 20-40 نانومتر. عدة نظم الضوئية تجارياً يسمح بألم/العاصفة متاحة الآن لعلماء الأحياء لإجراء التجارب الروتينية. هنا، كان يستخدم واحد مثل هذا النظام لدراسة هيكلية رابطة microtubules والاتحاد. بين كل جزيء مفرد المستندة إلى تعريب الأساليب، اختير هذا الأسلوب المزدوج-لون دستورم، لأنها مناسبة تماما لمراقبة المناطق رقائقي رقيقة جداً (< 1 ميكرومتر) من الخلايا ملتصقة ويمكن أن توفر تحسنا كبيرا من دقة الصورة مع الحد الأدنى من استثمار الوقت والمال. وفي الواقع، دستورم هو تقنية مريحة للغاية وتنوعاً متوافق مع الأصباغ العضوية القياسية المستخدمة بشكل روتيني لتلطيخ الخلوية والفلوره.\nبينما الصور دستورم لون واحد بسيطة نسبيا للحصول على استخدام فلوروفوري Alexa6478، يتطلب دستورم اللون المزدوج تحسين ظروف تجريبية بحيث يمكن وميض الأصباغ اثنين بشكل صحيح في المخزن المؤقت الذي تم اختياره، ولا سيما عندما يكون هناك محدودة طاقة الليزر. أوراق ممتازة متاحة بالفعل على أساليب لإعداد التصوير متعدد الألوان مع دستورم9،،من1011،،من1213، وهذه الورقات شرح بالتفصيل المصادر الممكنة من القطع الأثرية ودقة وضوح الصورة المتدهورة وكيفية التغلب عليها. في هذه المقالة، والظروف التجريبية الأمثل من حيث تثبيت الخلايا، إيمونوستينينج، وإعداد نموذج، اقتناء التصوير وإعادة بناء صورة موصوفة بغية الحصول على الصور من شبكات إذا هيولى كثيفة وميكروتوبوليس في الخلايا الدبقية مع دستورم اللون المزدوج. بإيجاز، الطريقة استخراج/التثبيت الموضحة في كازو et al12 تم تكييفها للخلايا الدبقية واستخدامها مع خطوة بعد انتهاء تثبيت، تركيز الأجسام المضادة الأمثل، مخزن مؤقت عاصفة مع 10 ملم وصف اتفاق بيئي متعدد الأطراف في ديمبسي9 et al. الذي كان وجد أن الأمثل لإعداد تجريبية ونوع العينة.\nالخلايا الدبقية express أساسا ثلاثة أنواع من البروتينات إذا: فيمنتين، نيستين وتوصيني (الدبقية الحمضية البروتين فيبريلاري). وعرضت هذه البروتينات الثلاثة بلمرة يشترك في أستروسيتيس14. أظهرنا سابقا باستخدام فائقة القرار تنظيماً إضاءة مجهرية (SIM ريال) أن ويمكن الاطلاع على هذه البروتينات إذا كان ثلاثة في الشعيرة إذا واحد نفسه وأنها عرض التوزيع وديناميات مماثلة في الخلايا الدبقية 15. نظراً للتشابه بين البروتينات إذا ثلاثة، تلطيخ فيمنتين كمراسل لشبكة الاتصال إذا كان كله. باستخدام دستورم، تمكنا من حل كيف إذا شكل حزم على طول ميكروتوبوليس، التي لم يكن من الممكن مع حيود محدودة المجهري تقنيات15. قد تساعد هذه الملاحظات فهم كيف يمكن للاتحاد فيمنتين microtubules القالب وتنظم على مسار النمو، تعزيز الحفاظ على محور قطبية أثناء الهجرة الخلية16. صور فائقة الدقة قدمت معلومات أساسية عن التفاعل المتبادل بين نظامين فرعيين cytoskeletal، والتبصر في الربط بين الرابطة المكانية والوظيفة المحلية التي يمكن أن تكون من نوع خلية محددة17. وبصفة عامة، يمكن استخدام دستورم اللون المزدوج للدراسة الحديث المتبادل بين العناصر سيتوسكيليتال أو أنواع أخرى من العضيات، شريطة أن يتم التوصل إلى شروط إيمونوستينينج جيدة من حيث الكثافة وخصوصية. سوف تكون هذه التقنية مفيدة لأفضل وصف التغييرات cytoskeleton لاحظ أثناء أستروجليوسيس وفي جليوبلاستوما، والورم الأكثر شيوعاً والأكثر الخبيثة للنظام العصبي المركزي، حيث يتم التعبير عن البروتينات إذا غيرت 18 ،19،،من2021.\n1-كوفيرسليبس إعداد (اليوم 1، 30 دقيقة)\nضع كوفيرسليبس الزجاج nº1.5H 18 ملم (ميكرومتر 170 +/-5µm) على رف بلاستيك.\nوضع على الرف في كوب 100 مل مليئة بالأسيتون ونقع لمدة 5 دقائق.\nنقل الحامل إلى 100 مل كوب مليئة الإيثانول المطلقة ونقع لمدة 5 دقائق.\nنقل الحامل إلى كوب 100 مل جديدة مليئة الإيثانول المطلقة ووضع في الكأس في جهاز الموجات فوق الصوتية أنظف (انظر الجدول للمواد) في درجة حرارة الغرفة. اضغط على "على" والانتظار لمدة 10 دقائق.\nوضع على الرف تحت غطاء الاندفاق الصفحي وترك كوفيرسليبس جاف أو جاف كوفيرسليبس مع تدفق الهواء التي تمت تصفيتها.\nوضع على الرف مع كوفيرسليبس في جهاز بلازما أنظف. التبديل على مضخة فراغ، أغلق الباب، انتظر 3 دقائق لجعل الفراغ والتبديل على البلازما لدقيقة 1 استخدام كوفيرسليبس وقت قصير بعد التنظيف. لا تقم بتخزين لهم.\n2-خلية الطلاء (اليوم 1، 20 دقيقة)\nتنمو الخلية الدبقية خط U373 في الحد الأدنى الأساسية المتوسطة (MEM) مع 10% "مصل بقرى الجنين"، 1% البنسلين والستربتوميسين، و 1% من الأحماض الأمينية غير الضرورية في صحن بيتري البلاستيك قطرها من 10 سم.\nضع كوفيرسليبس زجاج نظيفة في لوحات 12-البئر تحت غطاء محرك السيارة الاندفاق الصفحي وإضافة 1 مل متوسطة مسخن الخلية الواحدة وكذلك.\nتأخذ طبق يحتوي على خلايا من الخلية الحاضنة (37 درجة مئوية، وأول أكسيد الكربون 5%2).\nإزالة المتوسطة وإضافة 10 مل برنامج تلفزيوني.\nإزالة برنامج تلفزيوني وإضافة 1 مل 0.05% يدتا التربسين.\nضع الطبق مرة أخرى في الحاضنة لمدة 2-3 دقائق.\nأضف 10 مل متوسط الحار يسخن عند 37 درجة مئوية في الطبق وريسوسبيند الخلايا.\nالخلايا عن كل 100000 البذور كل بئر (~ 150 ميليلتر من الخلايا) في لوحات 12-جيدا التي تحتوي كوفيرسليبس.\nانتظر على الأقل 6 ح (أو بين عشية وضحاها) للسماح بانتشار الخلايا.\n3-خلية التثبيت (اليوم 2، ح 2)\nإعداد المخزن المؤقت سيتوسكيليتون مع أنابيب 80 مم، 7 مم مجكل2، 1 مم اجتا، 150 مم كلوريد الصوديوم، وضبط درجة الحموضة إلى 6.9.\nتغسل الخلايا مرة واحدة مع برنامج تلفزيوني.\nإزالة برنامج تلفزيوني وإضافة 1 مل كل بئر لاستخراج/تثبيت الحل بلطف (0.25 ٪ glutaraldehyde، 0.3% X-100 تريتون في المخزن المؤقت cytoskeleton) يسخن عند 37 درجة مئوية.\nاحتضان 60 ثانية في درجة حرارة الغرفة.\nإزالة الحل وإضافة 1 مل كل من حل منهاج العمل (بارافورمالدهيد) مسخن والطازجة 4% المخفف في المخزن المؤقت سيتوسكيليتون جيدا برفق.\nتنبيه: استخدام قفازات وتعمل تحت غطاء محرك السيارة الكيميائية.\nضع لوحة 12-جيدا في الحضانة عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.\nإزالة منهاج عمل بيجين وأضف 3 مل من برنامج تلفزيوني في البئر.\nملاحظة: تعمل تحت غطاء محرك السيارة الكيميائية مع القفازات ووضع منهاج العمل المعاد تدويرها في سلة محددة.\nتغسل مرتين مع برنامج تلفزيوني.\nإزالة برنامج تلفزيوني وإضافة حل الطازجة 10 ملم نأبه4 المخفف في برنامج تلفزيوني من أجل إخماد أوتوفلوريسسينسي القادمة من جلوتارالديهيدي.\nاحتضان لمدة 7 دقائق في درجة حرارة الغرفة.\nوضع نأبه المعاد تدويرها4 في سلة محددة.\nأغسل ثلاث مرات 5 دقيقة مع برنامج تلفزيوني.\nإزالة برنامج تلفزيوني وإضافة عرقلة الحل (5% جيش صرب البوسنة في برنامج تلفزيوني).\nاحتضانها ح 1 في درجة حرارة الغرفة (أو بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية).\nملاحظة: ويمكن تخزين المخزن المؤقت سيتوسكيليتون في درجة حرارة الغرفة لمدة بضعة أشهر. منهاج عمل بيجين ونابه4 glutaraldehyde يجب أن تعالج الرعاية الخاصة (هود، والقفازات، وصناديق إعادة التدوير المحددة). وينبغي إضافة حلول وإزالتها بلطف من أجل الحفاظ على سلامة الخلايا. من المهم عدم السماح للخلايا الجافة.\n4-إيمونوستينينج (اليوم 2، ح 5)\nإعداد الحل الأجسام الأولية باستخدام مكافحة فيمنتين tubulin لمكافحة مع إضعاف 1: 500 في عرقلة الحل.\nوضع 100 ميليلتر قطرات من الأجسام المضادة الأساسي المخفف على طبقة فيلم بارافين ومكان كوفيرسليبس فوقهم مع الخلايا التي تواجه إلى الأسفل.\nاحتضان الخلايا مع الأجسام المضادة الأولية حاء 2 وضع ملء كوفيرسليبس مرة أخرى في صفيحة 12-جيدا مع برنامج تلفزيوني. شطف ثلاث مرات لمدة 5 دقائق في كل مرة في برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة على شاكر مداري.\nوفي الوقت نفسه، تعد الأجسام المضادة الثانوية الحل باستخدام الماوس لمكافحة Alexa647 و Alexa555 لمكافحة الفئران في إضعاف 000 1:1، في عرقلة الحل. احتضان الخلايا مع الأجسام المضادة الثانوية ح 1 في درجة حرارة الغرفة. تمضي مثل 4.2. حماية الخلايا من الضوء.\nوضع ساترة مرة أخرى في صفيحة 12-بئر مليئة ببرنامج تلفزيوني. شطف ثلاث مرات لمدة 5 دقائق في كل مرة في برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة على شاكر مداري. إزالة برنامج تلفزيوني وإضافة 0.5 مل من برنامج تلفزيوني مختلطة مع 1 ميليلتر من 0.1 ميكرون تيتراسبيك الخرز.\nوضع الآبار شاكر مداري ل 30 دقيقة شطف مع برنامج تلفزيوني. قم بإزالة برنامج تلفزيوني واحتضان الخلايا لمدة 5 دقائق مع حل منهاج عمل 4% في برنامج تلفزيوني. شطف ثلاث مرات في برنامج تلفزيوني.\nملاحظة: ويمكن تخزين الخلايا الثابتة لبضعة أسابيع في برنامج تلفزيوني في 4 درجات مئوية. وينبغي أن يتم إيمونوستينينج في اللحظة الأخيرة.\n5-نموذج إعداد (اليوم 3, 5 دقيقة)\nوضع مختبرين اتفاق بيئي متعدد الأطراف (pH سيستيميني، م 1، 8.3)، أوكسيديز الجلوكوز (100 x، 50 ملغم/مل)، كاتالاز (500 x، 20 ملغ/مل) في سلة جليد.\nإعداد 50 مل من كلوريد الصوديوم تريس المخزن المؤقت (50 مم تريس، 10 مم كلوريد الصوديوم، ودرجة الحموضة = 8) تستكمل مع 10% السكر (100 مغ/مل).\nإعداد 1.2 مل من التصوير المخزن المؤقت قبل التصوير مع 10 ملم اتفاق بيئي متعدد الأطراف، أوكسيديز الجلوكوز 0.5 ملغ/مل (75 U/mL)، 40 ميكروغرام/مل كاتالاز (80-200 U/mL) في المخزن المؤقت تريس-كلوريد الصوديوم مع السكر 10%.\nجبل ساترة التي تحتوي على الخلايا المسماة على صاحب العينة المغناطيسية (مثل غرفة تشامليدي) وإضافة المخزن المؤقت التصوير لملء تماما من الدائرة. وضع الغطاء على وتأكد من أنه لا يوجد أي فقاعة هواء بين المخزن المؤقت التصوير والغطاء.\nتنظيف الجزء السفلي من النموذج مع الإيثانول المطلقة والتحقق من أنه لا يوجد تسرب. استخدام الشحوم بختم صاحب العينة بشكل صحيح إذا لزم الأمر.\nملاحظة: إعداد المخزون 1 م حل اتفاق بيئي متعدد الأطراف (pH 8.3 ضبط استخدام HCl) وتقييم أوكسيديز الجلوكوز في 50 ملغ/مل والمخزون من كتالاز في 20 ملغ/مل في المياه، وجعل مختبرين وتخزينها في-20 درجة مئوية لمدة تصل إلى شهر واحد لاتفاق بيئي متعدد الأطراف، وسنة للغلوكوز أوكسيديز والكاتالاز. عدم إعادة تجميد مختبرين. إعداد المخزن المؤقت تريس-كلوريد الصوديوم مسبقاً وتخزينها في درجة حرارة الغرفة لعدة أشهر. قم بإضافة الجلوكوز في يوم التجربة (الخطوة 5، 3).\n6-صورة اقتناء (يوم 3، ح ~ 1 كل خلية)\nقم بالتبديل في المجهر. التبديل على اقتناء البرمجيات واضغط على بدء تشغيل النظام.\nحدد توسيع علامة التبويب اقتناء أداة الإعداد التصوير في المجموعة الأداة "إدارة الإعداد". حدد وضع الليزر WF (حقل واسعة) لاقتناء. حدد هدف 100 س نا 1.46 . حدد وضع TIRF يو-إتش بي الذي يستخدم صيد تلسكوب للحد من مجال الرؤية ويجري مضيئة، وتركيز طاقة الليزر في منطقة صغيرة. تستخدم في أوبتوفار عدسة 1.6 x يعطي حجم بكسل 100nm.\nحدد أداة السلاسل الزمنية وإعداد الفاصل الزمني مع إطارات 50 000 و 0.0 مرض التصلب العصبي المتعدد بين الإطارات. توسيع الأداة القنوات في المجموعة أداة المعلمة اقتناء وحدد "إظهار الكل".\nتعيين المسار Alexa647: التحقق في 642 و 405 الليزر خطوط للإثارة وقبول لتشغيلها. حدد عامل التصفية "655 ليرة لبنانية" الانبعاثات في الإعداد التصوير. إعادة تسمية "647".\nانقر على '+' في الأداة القنوات لإضافة آخر تمرير الضوء وتحديد الوضع "المسار رمز التبديل كل: الإطار" في أداة إعداد التصوير . تحقق 561، 488 وخطوط الليزر 405 وقبول لتشغيلها. حدد "بي بي 570-650 + LP750" الانبعاثات التصفية واستخدام العدسة أوبتوفار 1.6 x. تحقق من أن يتم تحديد الوضع يارثلينك TIRF. قم بإعادة تسمية المسار "555".\nحدد أداة وضع الحصول على وتعيين حجم الإطار إلى 200 × 200 بكسل. حدد أداة استراتيجية وأجهزة التركيز وتعيين تركيز محدد للإطارات من 1000 (إذا لم يكن هناك نظام لقفل تركيز).\nوضع الزيت على الهدف ووضع العينة. حدد علامة التبويب تحديد موقع ، وفتح مصراع مصباح الأسفار. العثور على التركيز والبحث عن الخلية إلى صورة باستخدام العدسة. وضعه في مركز مجال الرؤية باستخدام الجويستيك.\nحدد علامة التبويب اقتناء للعودة إلى وضع اقتناء. حدد المسار "647"، تعيين السلطة 642-الليزر بنسبة 0.2 في المائة، تعيين قوة 405-ليزر إلى 0، تعيين وقت التعرض إلى 50 مللي ثانية والكسب من 50. اختر طريقة اكتساب مستمر لمراقبة الخلية على الشاشة. ضبط التركيز. تأكد من وجود واحد على الأقل تيتراسبيك حبة في مجال الرؤية، وزيادة التباين لرؤية لهم إذا لزم الأمر. استخدام وضع مقياس تلقائي للعرض. تأخذ صورة ابيفلوريسسينسي واسع المجال فيمنتين الشبكة بالنقر فوق المفاجئة وحفظه. للتحقق من الإضاءة TIRF، انقر فوق TIRF، وضبط زاوية الإضاءة و/أو صيد تلسكوب إذا اقتضى الأمر أن يكون حقل متجانس للإضاءة وحفظه.\nملاحظة: من المهم أن الصور TIRF وابيفلوريسسينت بجودة عالية قبل البدء في الحصول على البيانات الخام. خيوط متقطع، غير موحد المسمى ستؤدي إلى سوء نوعية دستورم الصور.\nقم بإلغاء تحديد المسار "647" وحدد والتحقق من المسار "555". تأخذ صورة ابيفلوريسسينسي من شبكة ميكروتوبولي وحفظه. تأخذ صورة TIRF وحفظه أيضا.\nقم بإلغاء تحديد المسار "555"، حدد والتحقق من المسار "647"، ثم اضغط على استمرار. وضع الربح إلى 0 وتعيين وقت التعرض للسيدة 10 قوة الليزر 642-نانومتر إلى 100% من أجل ضخ أكثر من الأصباغ Alexa647 للدولة الظلام (~ 2 كيلو واط/سم2). بمجرد فلوروفوريس ابدأ وامض، وضع التعرض إلى 15 مللي ثانية، والحصول على 300. حدد وضع TIRF للإضاءة. استخدام وضع مؤشر مجموعة دون مقياس تلقائي للتحقق من أن إشارات جزيء واحد لا تشبع الكاميرا (المشار إليها باللون الأحمر). في هذه الحالة، تقليل الربح حتى يختفي الإشباع. وستظل الخرز تيتراسبيك المشبعة في بداية اقتناء. اضغط إيقاف لإيقاف المراقبة المستمرة للخلية.\nتوسيع الأداة على الإنترنت تجهيز والتحقق عبر الإنترنت معالجة النخيل لتصور صورة العاصفة خلال اقتناء. استخدم المعلمات التالية: 9 لأقصى حجم قناع (قطرها 9 بكسل)، و 6 لشدة الذروة للضوضاء. وسوف تحدد المعلمات أطروحات الجزيئات التي تؤخذ في الاعتبار عند المعالجة (مشرق ما فيه الكفاية وعدم التداخل). في أداة PAL-الإحصاءات ، حدد نوع الأرض: الرسم البياني، و "المدرج التكراري المصدر": الدقة. اضغط على البدء في اقتناء.\nخلال اقتناء، إعادة تركيز إذا لزم الأمر (إذا لم يكن هناك أي جهاز قفل التركيز). ضبط المعلمات (التعرض، صلاحيات الليزر) والتبديل في نهاية المطاف على السطر 405 نانومتر الليزر (بدءاً من 0.001 ٪) للحفاظ على كثافة متوسطة من فلوروفوريس مع مسافة أدنى من 1 ميكرومتر بين جزيئات مفردة (100 بكسل > 9 نانومتر، وحجم قناع الذروة) ( الشكل 1A-ب). إذا كانت كثافة الجزيء قليلاً عالية جداً، استخدم وضع حلو (ورقة عالية يميل ومغلفة الضوئية) للإضاءة بدلاً من TIRF. وهذا سيزيد طاقة الليزر بنسبة 20%. تأكد من أن ذروة الدقة التعريب في الرسم البياني أدناه الصورة أعيد بناؤها ويتركز حول أو أقل من 10 نانومتر.\nملاحظة: عادة إنقاص عدد الجزيئات مع مرور الوقت، وزيادة قوة 405 نانومتر الليزر ببطء تبعاً لذلك. والهدف تقليل دقة الترجمة (الرسم البياني المعروض أدناه صورة ذات دقة فائقة) قدر الإمكان مع ذروة أقل من 10 نانومتر (الشكل 1). زيادة تباين الصورة بألم إذا لزم الأمر، إذا كانت حبات مشرقة كثيرة جداً موجودة في الميدان.\nاضغط إيقاف لإيقاف الفيلم عندما تم التوصل إلى أكثر من 106 تعريب (عادة بعد الإطارات 40 000). وضع الليزر مرة أخرى إلى 0.2% (642 nm) و 0 (405 nm). حفظ البيانات الخام لاقتناء العاصفة بتنسيق.czi. قم بإلغاء تحديد المسار "647" في الأداة "قنوات"، وحدد والتحقق من المسار "555".\nتعيين وقت التعرض إلى 25 مللي ثانية وكسب إلى 0. اضغط على زر مستمر وتعيين الليزر 488 و 561 سواء عند 100% للأصباغ Alexa555 مضخة للدولة الظلام (~ 2 كيلو واط/سم2 كل). مرة واحدة فلوروفوريس بدء وامض، وضع المكسب 250، استخدم وضع الإضاءة حلو والتحقق من أن الجزيئات واحدة لا تشبع الكاميرا مع وضع مؤشر مجموعة. إذا كان هذا هو الحال، انخفاض الربح. اضغط على التوقف. إنقاص قوة 488-ليزر إلى 50%.\nاضغط على البدء في اقتناء. خلال اقتناء، تزيد تدريجيا الربح لتكون دائماً في حد التشبع. زيادة خطوة بخطوة قوة 405 نانومتر الليزر للحفاظ كثافة متوسطة من جزيء واحد في مجال الرؤية (انظر الخطوة 6.18). إنقاص قوة الليزر 488 إلى 20-30% عندما يكون الليزر 405 أعلى من 15%. ثم تنخفض تدريجيا 488 مع زيادة خط الليزر 405 بغية الحفاظ على تطرف الجزيئات في أسرع وقت ممكن. خط الليزر 488 مقترنة بالليزر الإثارة 561 في الشدة القصوى يزيد على حد سواء وإيقاف معدلات فلوروفوريس، بينما السطر 405 الليزر إلا يزيد معدل على.\nالتوقف عن شراء عندما تم التوصل إلى تعريب أكثر من 500 000 (بعد حوالي 20 000 الإطارات) أو أكثر عندما يتم الوميض لا جزيئات أكثر. حفظ البيانات الخام لاقتناء العاصفة بتنسيق.czi.\nملاحظة: تبدأ دائماً مع طول موجي أعلى لتجنب تبيض (أو تنشيط) للألوان الأخرى. إذ لا مختومة في دائرة تشامليدي، فمن الممكن لتغيير المخزن المؤقت التصوير بصورة منتظمة، مثلاً المخزن المؤقت لمختلف ظروف الاختبار. استخدام خط الليزر 488 إلى استنزاف الأصباغ 555 أليكسا ضروري فقط عند طاقة الليزر 561 محدودة (مع 100 ميغاواط ليزر).\n7-صورة إعادة الإعمار (5 دقائق)\nفي أداة PAL-الانجراف ، استخدم نوع التصحيح المستندة إلى النموذج مع شرائح تلقائي مع حجم الحد أقصى من 8. اضغط تطبيق عدة مرات في صف حتى يتم تصحيح الانحراف. ينطبق هذا التصحيح على أساس نموذج خوارزمية استناداً إلى التحليل عبر الارتباط الذي يقوم بتصحيح الانحراف.\nباستخدام أدوات تصفية PAL ، تحسين مظهر الصورة العاصفة بتحديد الجزيئات التي كانت أفضل المترجمة فقط. على سبيل المثال، الحد من دقة الترجمة إلى 30 نانومتر و PSF إلى 120-180 نانومتر.\nاستخدام دقة بكسل من شمال البحر الأبيض المتوسط 5 أو 10 في أداة تجعل PAL ، فضلا عن وضع عرض ضبابي، مع عامل توسع 1 حدد تجعل PSF. السيارات دينامية مجموعة الموارد البشرية بقيمة 95% وتجعل السيارات الديناميكي فرنك سويسري بقيمة 90%. حدد جودة تقديم أفضل.\nحدد تحويل النخيل، النخيل القائمة من علامة التبويب معالجة (الوضع بعد المعالجة). اضغط على اختيار ومن ثم تطبيق. حفظ الصورة التي تم إنشاؤها باستخدام تنسيق. LSM (وليس.czi، هام جداً).\nملاحظة: يمكن تنفيذ إعادة بناء الصورة مباشرة بعد اكتساب أو الأحدث استخدام طريقة معالجة الصور برنامج اقتناء. في السطر قبالة تجهيز الوضع، من الممكن ريناليزي المداخن مع قيم مختلفة للمعلمات (حجم قناع الذروة، ذروة شدتها إلى الضوضاء). دائماً اختيار "تجاهل تداخل جزيئات" وليس "متوسط قبل التعريب".\n8-تقدير دقة الترجمة من صورة العاصفة (10 دقيقة)\nفتح البيانات الخام العاصفة واستخدام علامة التبويب تجهيز الصورة حدد الأسلوب النخيل وثم ألم مرة أخرى. اضغط على اختيار.\nاضغط تطبيق لبدء إعادة استخدام قناع ذروة حجم 9 وكثافة ذروة للضوضاء 6 (أو المعلمات التي تختارها للصورة).\nحدد أداة المستطيل الرسومات ورسم مستطيل في الصورة الخام حول جزيء واحد موجود على سطح الزجاج. عادة ما تكون هناك عدد قليل من الجزيئات واحدة هناك.\nوسيتم تحليل صحفي تطبيق مرة أخرى، وإلا الجزيئات الحالية داخل منطقة المستطيل.\nفي أداة PAL-الإحصاءات ، حدد نوع الأرض: الرسم البياني، و "المدرج التكراري المصدر": X الموقف أو موقف Y، لتصور رسوم بيانية الموقف.\nحفظ الجدول بقائمة بتعريب على اليسار أسفل الصور.\nاستخدام برمجيات لتحليل البيانات، وإنشاء رسوم بيانية X و Y المواقف (الشكل 1).\nتناسب التوزيعات قبل ضبابي وحفظ قيمY X و σ σ. ويقدر σ دقة الترجمةسملم (X *σ σY) ^ 0.5.\nكرر الخطوة 8.3 8.8 على جزيئات أكبر عدد ممكن ومتوسط σسملم\n9-قناة التسجيل (5 دقائق)\nفتح صورة العاصفة من كل لون باستخدام البرمجيات فيجي (صورة ي).\nحدد أداة العصا لقياس مواقف كل حبات تيتراسبيك.\nحساب التحولات X و Y لكل حبة ومتوسط لهم.\nاستخدم الأمر "ترجمة" ترجمة الصورة الثانية مع المحسوب تحولات X و Y.\nدمج الصورتين باستخدام الأمر دمج القنوات.\nمجهر مزودة بكاميرا 512 × 512، ألفا X Apo خطة 100 50 ميغاواط 405 نانومتر و 100 ميغاواط 488، 561 و 642 نانومتر ليزر الحالة الصلبة، امككد/1.46 الهدف والفرقة تمرير 570-650/طويلة تمرير 655 الانبعاثات مرشحات كان يستخدم للممثل النتائج الواردة أدناه.\nيعطي الشكل 1A مثال كثافة الجزيء وإشارة إلى نسبة الضوضاء التي يجب استخدامها أثناء الحصول على الصورة الخام. يتم الحصول على صور ذات نوعية جيدة مع الحد أدنى من ~ 1 ميكرومتر بين الجزيئات المجاورة. في ظروف جيدة وامض، ينبغي أن يكون فلوروفوريس هذا في إطار واحد فقط. امض جيدة يتطلب تعديل شروط المخزن المؤقت للتصوير (درجة الحموضة، وعامل التخفيض، والأكسجين مسح النظام) والليزر القوى، التي تؤثر على--وإيقاف-معدلات في فلوروفوريس، وبالتالي الواجب دورة (الجزء من الوقت ينفق فلوروفوري في الدولة على)9،11. على العكس من ذلك، يعطي الشكل 1B، مثال على الصورة الخام حيث كثافة جزيء عال جداً ولا يمكن أن تحل جزيء واحد.\nويبين الشكل 1 رسم بياني نموذجية للايضاحات التعريب لجميع الجزيئات الكشف عنها وتحليلها من قبل الشركة المصنعة للبرنامج من كومة من الإطارات 20 000. ويناظر هذا الرسم البياني الصورة دستورم شبكة ميكروتوبولي هو موضح في الشكل 3 (ب). تكون القيم للتعريب الإيضاحات المقدمة من الشركة المصنعة للبرنامج باتفاق جيد مع خطوة القيم التالية ما يقدر 8، استخدام الدقة التأشير لجزيء واحد مترجمة في وقت مختلف النقاط22 (الشكل 1).\nويبين الشكل 2A مثالاً نموذجياً لصورة فيمنتين خيوط إيمونولابيليد مع Alexa647 دستورم. يمكن ملاحظة الزيادة في القرار الواضح في المقارنة مع الصورة المكتسبة مع مجهر واسع المجال قياسي (الشكل 2-ج). كثافة fluorescence ممثلة في 2D الرقم تبين أن تصوير مجهرية فائقة القرار يتيح حل حزم فيمنتين. القرار دستورم غير كافية لحساب عدد خيوط موجودة في الحزم.\nويبين الشكل 3 مثالاً نموذجياً للصورة دستورم المزدوج-لون من إيمونولابيليد شبكات فيمنتين وتوبولين مع Alexa647 و Alexa555 على التوالي. يظهر التراكب لشبكتي أن حزم فيمنتين غالباً ما تكون مترجمة على طول microtubules، توفير المعلومات الهيكلية الرئيسية في اقتران بين نظامين فرعيين cytoskeleton.\nويبين الشكل 4 أمثلة مختلفة من الصور دستورم من ميكروتوبوليس التي تم الحصول عليها في ظروف غير مثالية. أولاً، باستخدام Alexa488 ومخزن مؤقت مع مم 143 بيتا-mercaptoethanol (عامل التخفيض آخر يستخدم بدلاً من شركة طيران الشرق الأوسط9،،من1011)، ونظام المسح الأوكسجين (تتألف من 0.5 ملغ/مل الجلوكوز أوكسيديز و 40 ميكروغرام/مل الكاتلاز)، فلوروفوريس كانت تطرف ولكن لم تكن مشرق بما يكفي لتكون دقة موضعية (عدد فوتون منخفضة جداً) (الشكل 4 أ). ثانيا، استخدام Alexa555 مع مم 143 بيتا-ميركابتوثانول ومم 50 شركة طيران الشرق الأوسط واكسجين مسح النظام، فلوروفوريس يمكن أن لا يتم ضخه إلى حالتها الظلام وبالتالي لا يكون كذلك مكانياً مفصولة (دورة الخدمة عالية جداً، أي الجزء من الوقت في الدولة "وعلى" طويل جداً) (الشكل 4 باء). أخيرا، استخدام Alexa568، مع مم 143 بيتا-ميركابتوثانول ومم 50 شركة طيران الشرق الأوسط واكسجين مسح النظام، فلوروفوريس لم تكن مشرقة وكانت الوميض ببطء مع جداً منذ فترة طويلة "عن" و "إيقاف" الدول (دورة الخدمة عالية جداً وعدد فوتون منخفضة) (الشكل 4). في كل هذه الظروف غير مثلى، صدر الشبكة microtubule سيئة في الصور دقة فائقة. وفي الختام، تتطلب الظروف المثلى fluorophores مع عدد الفوتونات عالية ومنخفضة واجب دورة9،10 في المخزن المؤقت للتصوير المقابلة. ملاحظة أن وسم كثافة الأمثل والتصوير شروط المخزن المؤقت للحصول على شروط جيدة وامض هو إجراء قياسي لثنائي اللون دستورم وليست محددة للتصوير إذا microtubule.\nوفقا لنظرية نايكست-شانون، من الضروري أن يكون فلوروفوريس على الأقل مرة كل 10 نانومتر الحصول على قرار 20 نانومتر. الموسعة في 2D الهياكل، يقدر ديمبسي وآخرون أن من الضروري وسم ~ 104 فلوروفوريس الواحدة ميكرومتر2 . كما الشبكة إذا كان أكثر كثافة ولها خيوط أرق (10 نيوتن متر مقابل 25 نانومتر القطر دون الأجسام المضادة الأولية والثانوية) مقارنة بشبكة ميكروتوبولي، نحن لاحظ أن مرتين تعريب أكثر ضرورية لوصف الشبكة إذا. حصلنا على صور جيدة مع 5 000 تعريب/ميكرون2 إذا وتعريب 2500/µm² ميكروتوبوليس، التي تم الحصول عليها مع إطارات 40 000 وإطارات 20 000 على التوالي. وتم الحصول على الصورة بأعلى دقة بدقة ترجمة من σسملم ~ 8-12 شمال البحر الأبيض المتوسط المقدر في أعقاب الخطوة 8 من البروتوكول (الدقة التأشير لجزيء واحد مترجمة في وقت مختلف نقاط22). وكان هذا تقدير دقة الترجمة في اتفاق جيد مع القيم التي تم توفيرها من قبل الشركة المصنعة للبرنامج هو موضح في الرسم بياني للتعريب الإيضاحات المستخرجة من جميع الجزيئات تم الكشف عنها في البيانات الخام (على سبيل المثال المبين في الشكل 1). يمكن أن توفر مثل هذه الدقة التعريب صورة بدقة ~ 30 نانومتر (2.35 * الدقة) إذا كانت كثافة وضع العلامات عالية بما يكفي. لاحظنا بشكل روتيني فيمنتين خيوط ذات "عرض كامل" في نصف الحد الأقصى (فومه) ~ 40 نيوتن متر وميكروتوبوليس مع عرض فومه ~ 55 نانومتر. نظراً لدقة وضوح الصورة يعتمد على دقة الترجمة وكثافة التعريب، نوفر الظروف التجريبية التي تسمح الحصول على أفضل النتائج مع مراعاة المعيارين.\nالشكل 1 : الكثافة المثلى للجزيئات واحدة أثناء تقدير الدقة اكتساب وتوطين.\n(أ-ب) اليسار: الممثل صور raw من إطار واحد مع كثافة مثلى لجزيئات مفردة في مشرق الدولة (أ) ومع كثافة عالية جداً (ب) أثناء عاصفة اقتناء (الخطوة 6.12.) ثابت U373 الخلايا ملطخة فيمنتين المضادة والمناهضة الماوس Alexa647. الحق: صور raw حيث الجزيئات واحدة مع مستوى الأسفار أعلى كثافة الذروة إلى عتبة الضوضاء (تعيين 6) محاطة بدوائر (الأبيض أو الأحمر). يتم تعيين قطر دائرة بحجم قناع الذروة (مجموعة إلى 9 بكسل) واللون يحدد ما إذا كانت الجزيئات التداخل (أحمر) أو لا (أبيض). ملاحظة أن كثافة عالية من جزيئات مفردة (في (ب)) تؤدي إلى ارتفاع مقدار تداخل الجزيئات التي لا تؤخذ في الاعتبار لإعادة بناء صورة العاصفة. A داخلي: تناسب الرسم البياني عرض ملف تعريف كثافة fluorescence نموذجية من جزيء واحد باللون الأحمر وبه الضبابي باللون الأسود. في هذا المثال، يتم دقة الترجمة σس = 6.7 شمال البحر الأبيض المتوسط. تم الكشف عن مقياس بار، 1 ميكرومتر. (ج) بياني نموذجية للايضاحات التعريب لجميع الجزيئات وتحليلها من قبل الشركة المصنعة للبرنامج. فإنه يمكن تصور ويتم تحديثها بانتظام من خلال الحصول على البيانات الخام بفضل المعالجة عبر إنترنت. ويناظر هذا الرسم البياني الصورة دستورم شبكة ميكروتوبولي هو موضح في الشكل 3 (ب). (د) اليسار: ويعرض صورة عاصفة من جزيء واحد على سطح الزجاج بعد إعادة الإعمار. الحق: رسوم بيانية للمواقف X و Y التي تم الحصول عليها بعد تركيب الضبابي. غاوسي توزيعات X و Y من المناسب إعطاء تقدير لدقة الترجمة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالشكل 2 : الصورة دستورم ممثل شبكة فيمنتين- الصورة (ب) صورة دستورم (A)، يقابلها معيار واسع المجال وتراكب (ج) عرض الحافة الأمامية للخلية الدبقية U373 ثابتة كما هو موضح في البروتوكول والملون فيمنتين مع Alexa647. أسفل: تكبير/تصغير للمنطقة المبرزة. (د) كثافة عرضية على طول الخط الأصفر على الصور التكبير في ألف والجدول باء بار، 2 ميكرومتر و 500 نانومتر في التكبير/التصغير. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالشكل 3 : لون مزدوج الممثل دستورم الصورة شبكات فيمنتين وميكروتوبولي. (أ) شبكة فيمنتين ملطخة Alexa647 (نفس كما في الشكل 2 أ). (ب) شبكة Microtubule المسمى مع Alexa555. (ج) تراكب فيمنتين (أحمر) وشبكات ميكروتوبولي (سماوي) مع منطقة تكبير على اليمين. تم الحصول على صورة دستورم فيمنتين مع ~1.5 مليون من تعريب خارج إطارات 40 000. تم الحصول على صورة دستورم ميكروتوبوليس مع تعريب ~ 850 000 من إطارات 20 000. مقياس بار، 2 ميكرومتر و 500 نانومتر في التكبير/التصغير. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالشكل 4 : أمثلة لظروف التصوير غير الأمثل microtubules. عندما فلوروفوريس وميض لكن ليست مشرقة ما يكفي مع العلامات Alexa488 tubulin في الخلايا الدبقية U373 و 143 مم بيتاميركابتوثانول والأكسجين الكاسح في المخزن المؤقت للتصوير (A)، عندما فلوروفوريس مشرق بما يكفي ولكن لا يمكن أن يكون بشكل صحيح المنضب في الظلام الدولة (في قوة الليزر القصوى المتاحة) وطرفة ببطء مع Alexa555 المسمى توبولين في 143 مم بيتاميركابتوثانول، مم 50 شركة طيران الشرق الأوسط والأكسجين الكاسح المخزن المؤقت (ب) وعندما fluorophores الوميض ببطء وليست مشرقة باستخدام Alexa568 المسمى توبولين في عاصفة المخزن مؤقت الذي يحتوي على 143 مم بيتاميركابتوثانول، 50 مم الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف والكسح الأكسجين (ج)- وفي جميع هذه الحالات، قد تدهورت الصور دستورم القرار. مقياس بار، 2 ميكرومتر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالشكل 5 : صورة الممثل المزدوج-لون دستورم شبكات فيمنتين و microtubule لخلية U373 الثابتة مع الميثانول الباردة للحد الأدنى 5 (أ) شبكات microtubules فيمنتين و (ب) المسمى مع Alexa647 و Alexa555 على التوالي مع الأزيز المميز. ملاحظة وجود جزيئات مفردة في الجزء الأمامي الخلايا المترجمة في السيتوبلازم انخفاض القرار العالمي لشبكات خيوط. مقياس بار، 2 ميكرومتر و 500 نانومتر في التكبير/التصغير. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالرقم 6 : مقارنة بين دستورم بناؤها الصور\nالصورة دستورم أعيد بناؤها عن طريق برنامج الشركة المصنعة (A) وعواصف رعدية (فيجي المساعد) (ب). (ج) تراكب من (أ) في أرجواني و (ب) باللون الأخضر. مقياس بار، 2 ميكرومتر و 500 نانومتر في التكبير/التصغير. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nنحن الحاضرين هنا بروتوكول الذي يقلل من القطع الأثرية في صور دستورم ميكروتوبوليس والاتحاد في الخلايا الدبقية. يمكن إنشاء القطع الأثرية في كل خطوة من إعداد العينة والتصوير: التثبيت، حجب، إيمونولابيلينج، الانجراف خلال اقتناء، غير أمثل الظروف وامض23. نحن قائمة أدناه الخطوات الأكثر أهمية.\nالتنظيف في كوفيرسليبس خطوة هامة للحد من الربط غير محددة من فلوروفوريس على السطح، وبالتالي الحد من الضوضاء الخلفية في الصورة دستورم.\nونحن نقترح تحديد العينة مع خطوة لاستخراج وتثبيت الحلول باستخدام مزيج من جلوتارالديهيدي وتريتون، ومن ثم تثبيت مع منهاج عمل بيجين (بارافورمالدهيد) (الخطوة رقم 3). تثبيت بروتوكول تم تكييفها من تشازياو et al12: نحن انخفض الوقت حضانة خطوة الاستخراج/التثبيت إلى 60 s (الخطوة 3، 4)، إزالة الجلوكوز من المخزن المؤقت سيتوسكيليتون، وتخطي الخطوة الإضافية من بيرميبيليزيشن. وميزة هذا الأسلوب أن مفارز cytoskeletal تتحرك بحرية تستنزف، السماح بتصوير القرار فائقة مع أقل الخلفية12. أعم خطوة التثبيت حاسم نظراً لتثبيت سيئة (باستخدام منهاج العمل القديمة وحلول البرد، والخطوات حضانة طويلة/قصيرة جداً) تؤدي إلى تدمير جزئي لشبكات خيوط (microtubules مكسورة، ميكروتوبوليس التي لا تصل إلى الجبهة الخلية و/أو في منخفض الكثافة). لاحظ أن من الممكن أيضا استخدام الميثانول التثبيت، خاصة إذا كان فقط يتم تصويرها الشبكة فيمنتين كما هو موضح في لوديك et al15. ومع ذلك، يمكن ملاحظة ضجيج الخلفية داخل الخلية (الشكل 5). على الرغم من أن الحصول على صور دستورم مع الميثانول ثابتة الخلايا أقل جودة، وأنها لا تزال تقدم معلومات عن كل ما إذا وشبكات ميكروتوبولي يجب أن تبدو مثل المدى من كثافة خيوط. التثبيت مع glutaraldehyde فقط أعطت نتائج سيئة للغاية للاتحاد، على الرغم من أن هذا هو البروتوكول الذي أفضل ل التثبيت ميكروتوبولي23.\nفي الجزء "إيمونوستينينج"، من المهم استخدام الماوس المضادة الأجسام المضادة التي تقلل كروسريكشن مع الأجسام المضادة في الفئران. نحن تعذر استخدام القوات المسلحة البوروندية شظايا (المضادة الماوس) لهذا السبب، لأنهم كروسريكت غير على وجه التحديد مع tubulin لمكافحة الفئران بالإضافة إلى الماوس المضادة-فيمنتين.\nنظراً لقوة الليزر المحدودة المتاحة، من الضروري استخدام كل 488 و 561 نانومتر الليزر خطوط ضخ الأصباغ Alexa555 للدولة الظلام. من الضروري أيضا 488 ليزر عالية الطاقة (~ 50 ٪) خلال الاستحواذ على التقيد بتطرف جيدة ودورة العمل منخفضة (ينفق جزء يسير الوقت فلوروفوري في الدولة على)، على الرغم من أنه يزيد من الضوضاء الخلفية، فضلا عن. وضع الإضاءة TIRF يحد من إثارة فلوروفوريس في طبقة رقيقة (~ 200 نانومتر أعلاه ساترة زجاجية). يزيد نسبة الإشارة إلى الضوضاء بتقليل الإضاءة الخلفية، لكنه يقلل أيضا من قوة الإثارة. يسمح تمزيقها محورية الوضع حلو ويمكن أن تكون فعالة لتحسين نسبة الإشارة إلى الضجيج. ومن ثم وسيط جيد بين برنامج التحصين الموسع و TIRF. استخدام وضع حلو ضروري لكفاءة تثير فلوروفوريس Alexa555، الذي يتطلب طاقة الليزر العالية وميض بشكل صحيح.\nخطوة حاسمة أخرى هي الحصول على البيانات الخام (الخطوة 6). من الضروري ضبط لبارامترات (مكسب والتعرض والتركيز حتى عندما يتوفر لا جهاز كتلة التركيز، TIRF) بينما يتم الحصول على الفيلم. الاحتفاظ كثافة مثلى من fluorophores مشرق هو المهم (الشكل 1A): يجب أن يكون منخفضا بما يكفي لفصل كل صبغة، لكن عالية بما يكفي وضع تصور كامل هيكل بعد الإطارات 40 000 مكانياً. إذا كان عدد جزيئات المنشط منخفضا جداً، ينبغي الحصول على مداخن أطول. حصلنا على صور جيدة مع ~ تعريب 5000 كل µm² للاتحاد، وتعريب من 2500 كل cm ² ل microtubules.\nالتعديلات واستكشاف الأخطاء وإصلاحها للأسلوب\nهام للعمل مع عينات جديدة ومحسنة التصوير المخازن المؤقتة. ينبغي التحديد تعديل درجة الحموضة، لا سيما بالنسبة شركة طيران الشرق الأوسط.\nيجب أن تبدو فيمنتين و microtubules المسمى موحد عند تصويرها بأسلوب قياسي واسع المجال مجهرية (WF). إذا خيوط نظرة تتخللها/متقطع مع الفحص المجهري التقليدي، هذا سوف تتضاعف عند استخدام دقة فائقة. وفي هذه الحالة، فمن الأفضل تحضير عينات جديدة. قد تؤدي الظروف المحسنة لعدم التثبيت (منهاج العمل القديمة وغيرها) microtubules تبحث مجزأة. خلفية عالية على سطح الزجاج قد تنشأ من حظر عدم الكفاءة. في هذه الحالة، جيش صرب البوسنة (ألبومين المصل البقري) يمكن الاستعاضة عن FBS (الجنين المصل البقري)، والمستخدمة في كل الخطوات حضانة.\nإذا كانت كثافة وضع العلامات عالية جداً (الشكل 1B) ولا يمكن أن يكون بما فيه الكفاية دفعت في الظلام قبالة-الدولة، حتى مع أعلى سلطة الليزر، مقدار الثانوية ينبغي تخفيض الأجسام المضادة (أفضل من تقليل كمية الأجسام المضادة الأولية). ومع ذلك، وهذا يتطلب إعداد عينات جديدة. وبصفة عامة، من الضروري تقييم تجريبية كمية الأجسام المضادة الثانوية لاستخدام.\nإذا لم وميض fluorophores عادة (يجب أن تكون في الدولة مشرق خلال إطار واحد فقط)، تحقق من أن الرقم الهيدروجيني للمخزن المؤقت التصوير الصحيح (pH 8.3). إعداد حلول جديدة إذا استمرت المشكلة (لا سيما اتفاق بيئي متعدد الأطراف). دائماً التحقق من أن يتم صيد تلسكوب TIRF في (TIRF u_HP). مع طاقة الليزر المحدودة، الحصول على السليم وامض قد تكون صعبة (وإيقاف معدلات كذلك صبغ السطوع تعتمد على طاقة الليزر، كما هو موضح في فإن دي ينده et al.11). الأصباغ الأخرى مثل Alexa488 أو Atto488 يمكن أن تستكشف إذا كان المزيد من السلطة لليزر الإثارة هو متاح14.\nإذا فلوروفوريس إيقاف الوميض قبل نهاية الإطارات 40 000، تغيير المخزن المؤقت التصوير التي قد تم تتأكسد. تحقق من وجود لا فقاعات الهواء بين المخزن المؤقت والغطاء بعد تغيير المخزن المؤقت. ويمكن تصوير العينات مختومة لبضع ساعات في الخام.\nإذا تكتسب الأفلام العاصفة في مجهر TIRF عادية مزودة امككد، فمن الممكن استخدام عاصفة رعدية24 لإعادة بناء الصور. تتوفر خيارات مماثلة لتصحيح الانحراف وتصفية الصورة وعرض الصورة. عاصفة رعدية هو المساعد المستخدمة مع البرنامج فيجي/إيماجيج. تم الحصول على نتائج مماثلة مع برنامج الشركة المصنعة وعواصف رعدية (الشكل 6).\nعند استخدام سرير (سيكلوكتاتيترايني) يمكن أن تضاف إلى المخزن المؤقت التصوير لتحسين دقة الترجمة جزيئات مفردة. أنه يزيد عدد الفوتونات المنبعثة لكل دورة Alexa64725. لوحظ في الواقع بأفضل دقة ترجمة (وصولاً إلى 6 نانومتر) عند إضافة 2 مم عند استخدام سرير إلى المخزن المؤقت عاصفة الموصوفة في الخطوة 5 أو مع 100 ملم اتفاق بيئي متعدد الأطراف كما هو موضح في مرجع25. ومع ذلك، يتناقص عدد جزيئات مشرقة خلال اقتناء في ظل هذه الظروف، الكثير أسرع من دون عند استخدام سرير، الحد من العدد الإجمالي لتعريب جزيء في نهاية اقتناء ويحتمل أن تؤدي إلى وكيل لأخذ عينات الشبكة إذا. المخازن المؤقتة التصوير الأخرى أفيد أن تعمل جيدا مع الأصباغ أليكسا، على سبيل المثال باستخدام اللاكتاز وأوكسيراسي كالأوكسجين مسح النظام26. في هذا البروتوكول، يمكننا تقرير تكوين المخزن المؤقت التي تعطي أفضل النتائج في مدة القرار لدينا نوع من العينات وتصوير إعداد، ولكن يتطلب كل نوع العينة الأمثل العازلة، بالإضافة إلى وضع العلامات، وتحسين شروط التثبيت.\nقيود الأسلوب و التحسينات الممكنة\nالطريقة المعروضة هنا يقتصر على الخلايا الثابتة وصور ثنائية الأبعاد. باستخدام معيار التصوير مجموعة حتى مع مجهر TIRF وامككد، كان عاملاً آخر يحد من صلاحيات الليزر (100 ميغاواط الليزر 561 من شمال البحر الأبيض المتوسط لم يكن كافياً لجعل الأصباغ Alexa555 الطرفة). قد يكون خط ليزر 532 نانومتر أكثر كفاءة لإثارة هذه الأصباغ. إمكانية تحسين الأسلوب الذي سيكون لأداء دستورم ثلاثي الأبعاد باستخدام الاستجماتيزم الضوئية27. وهذا يتطلب الحد الأدنى من التعديلات للبروتوكول، باستثناء أقل كثافة التوسيم وعدد زيادة إطار. اللون المزدوج 3D صورة العاصفة سيقدم عرض أفضل للاتحاد ملفوفة حول microtubules، لا سيما في حزم. لاحظ أن خيوط الأكتين يمكن أيضا أن استخدام نفس أسلوب التثبيت ومبلغ أمثل فالويدين نيون8. ويمكن استخدام لون 3 العاصفة لمراقبة المنظمة من ثلاثة أنظمة فرعية cytoskeletal.\nاستخدام الأجسام المضادة الأولية والثانوية يزيد من حجم موضع اهتمام منذ جسم الثانوي يتم ترجمة ما يصل إلى 20 نيوتن متر من الهدف. عادة، سوف يكون microtubule قطرها 25-شمال البحر الأبيض المتوسط عرض ~ 50 نانومتر بعد وضع العلامات. إحدى الإمكانيات لتحسين المسافة بين الهدف والصبغة تسمية الأجسام المضادة الأولية مع الأصباغ المناسبة مباشرة. ومن الناحية المثالية ينبغي nanobodies المسمى بالأصباغ العضوية المستخدمة28.\nنحن نقدم هنا مجرد طريقة بسيطة لتقدير دقة الترجمة متوسط جزيء واحد عقب انديسفيلدير et al22. حل شامل للصور التي تأخذ في الاعتبار كل دقة الترجمة ووصفها بكثافة، ويمكن أيضا قياس استخدام نهج "فورييه خاتم الارتباط"29.\nوفيما يتعلق بتسجيل القناة، من الصعب تراكب تماما جميع الخرز الحالية في مجال الرؤية. يمكن العثور على تصحيح أكثر تعقيداً في كازو et al 12.\nيمكن التغلب على القيود الناشئة عن تطرف من فلوروفوريس وتبيض التحقيقات باستخدام الحمض النووي--الطلاء (تراكم النقاط الحمض النووي للتصوير في تضاريس النانو)30. في هذا الأسلوب، يتم إنشاء الوميض اللازمة للتعريب جزيء واحد ملزمة عابرة من النوكليوتيد قصيرة-صبغ-المسمى بأهدافها مكملة.\nتعرض هذه المقالة بروتوكول قوية للقيام بتصوير دستورم اللون المزدوج في بعدين من خيوط سيتوسكيليتال في الخلايا الثابتة. الظروف التجريبية التي تم العثور عليها الأمثل من حيث المخزن المؤقت التثبيت، إيمونولابيلينج، وتصوير لنوع العينة لدينا موصوفة في التفاصيل. ثم، في عملية الحصول على البيانات الخام ونوع الصور وامض التي يجب أن تكون مسجلة (دورة جزيء الكثافة، إشارة إلى نسبة الضوضاء، واجب fluorophore إلخ) يرد فضلا عن كيفية إعادة بناء الصور دستورم، وتصحيح الانحراف وتصفية البيانات. هذه الخطوات هي عامة لتصوير ثنائي اللون دستورم وعينه غير محددة النوع. أخيرا، فإنه يظهر كيف يساعد هذا الأسلوب على حل المنظمة كثيفة من شبكتين cytoskeletal المقرونة.\nونحن نشكر ليليك ميكائيل، فاكلاريس أوريستيس ونيكولا بورغ لمناقشة مثمرة، أندري اريستوف وايلينا رينسين للحصول على مساعدة تقنية فائقة القرار وسيتارامان شيلاجا للقراءة المتأنية للمخطوطة. ونعترف مع الامتنان ستيش أوتيتشس بيويماجينج الضوئية (إيماجوبولي) من معهد باستور (باريس، فرنسا)، فضلا عن شبكة البنية التحتية بيويماجينج فرنسا تدعمها وكالة الأبحاث الوطنية الفرنسية (ANR-10-إينسب-04؛ الاستثمارات في المستقبل)، والقارسة ضمور (برنامج Domaine د ' الاهتمام القاهرة-مالينف) لاستخدام المجهر اليرا. أيد هذا العمل مكافحة السرطان الرابطة والوكالة الفرنسية للبحوث الوطنية (ANR-16-CE13-0019).