Long Term Intravital Multiphoton Microscopy Imaging of Immune Cells in Healthy and Diseased Liver Using CXCR6.Gfp Reporter Mice | Protocol (Translated to Portuguese)\nLong Term Intravital Multiphoton Microscopia de imagem de células imunes no saudáveis e doentes do fígado por meio CXCR6.Gfp Reporter Mice\nInflamação do fígado como uma resposta à lesão é um processo altamente dinâmico envolvendo a infiltração de subtipos distintos de leucócitos incluindo monócitos, neutrófilos, subconjuntos de células T, células B, células assassinas naturais (NK) e as células NKT. Microscopia intravital do fígado para monitorar a migração de células imunes é particularmente desafiador devido às altas exigências em matéria de preparação de amostras e fixação, resolução óptica e sobrevivência dos animais no longo prazo. No entanto, a dinâmica dos processos inflamatórios, assim como estudos de interacção celular poderia fornecer informações importantes para compreender melhor o início, a progressão e regressão da doença inflamatória do fígado. Portanto, um método altamente sensível e confiável foi criada para estudar a migração e célula-célula-interações de células imunes diferentes em fígado de rato durante longos períodos (cerca de 6 h) por dois fótons de microscopia de varredura a laser intravital (TPLSM) em combinação com tratamento intensivo monitorização.\nent "> O método fornecido inclui uma preparação suave e fixação estável do fígado com perturbação mínima do órgão; imagiologia intravital longo prazo usando microscopia multiphoton multicolor com praticamente nenhuma fotodegradação ou efeitos fototóxicos, durante um período de até 6 horas, permitindo rastreamento de subconjuntos de leucócitos específicos; e condições de imagem estável devido à ampla fiscalização do rato parâmetros vitais e estabilização da circulação, temperatura e troca gasosa.\nPara investigar a migração de linfócitos após a inflamação do fígado CXCR6.gfp ratinhos knock-in foram submetidos a imagiologia do fígado intravital em condições basais e após os danos do fígado aguda e crónica induzida por injecção intraperitoneal (s) de tetracloreto de carbono (CCl 4).\nCXCR6 é um receptor de quimiocina expressa em linfócitos, principalmente em Natural T assassinas (NKT) -, Natural Killer (NK) - e subconjuntos de linfócitos T, tais como células T CD4 +, mas também asso mucosasated invariante células (MAIT) T 1. Seguindo o padrão migratório e posicionamento de CXCR6.gfp + células imunes permitiu uma visão detalhada sobre o seu comportamento alterado após a lesão hepática e, portanto, o seu potencial envolvimento na progressão da doença.\nA visualização de células e as funções celulares em órgãos inteiros ou até mesmo de organismos inteiros tem sido de grande interesse para mais de 50 anos, incluindo praticamente todas as partes do corpo 2. Por isso, alguns estudos iniciais já empregaram imagens intravital do fígado 3,4. No entanto, existem várias limitações atualizado sobre estável imagens de alta resolução a longo prazo do tecido do fígado.\nDevido à posição anatómica do fígado em estreito contacto com o diafragma e o tracto gastrointestinal 5, o problema mais comum para imagiologia intravital microscópica é o movimento devido à respiração e, em menor grau, peristáltica do tracto intestinal 6. Em comparação com outros órgãos sólidos, cirurgia do fígado é particularmente desafiador. Devido à estrutura microvascular densa, manipulação cirúrgica pode conduzir a lesões hemorrágicas maciças, microcirculação comprometida 7 e também a activação de residente immune células, tais como células de Kupffer 8. Portanto, a fixação mecânica do tecido como publicado anteriormente 6,9 é susceptível de interferir com a imagem de microscopia intravital.\nEm um fígado saudável, 10-15% do volume total de sangue reside dentro da vasculatura hepática, e o órgão recebe cerca de 25% do débito cardíaco geral 10, tornando o órgão altamente susceptíveis a mudanças na circulação (por exemplo, flutuações de pressão arterial ). Portanto, as interrupções no fluxo sanguíneo hepático devido, por exemplo, tensão de cisalhamento, deslocamento, lesão por manuseio excessivo dos tecidos ou circulação centralizada vai levar a alterações artificiais no comportamento migratório de leucócitos, deficiente oxigenação fígado e, portanto, mais danos ao fígado, afetando as respostas imunes do fígado, bem como preservação de órgãos e tempo de vida total do animal.\nOs primeiros estudos microscópicos foram baseados em mi epifluorescência intravitalcroscopy, mas várias restrições técnicas, tais como o branqueamento foto e baixa profundidade de penetração limitar o uso desta técnica para imagiologia do fígado a longo prazo 4,11,12. Com o desenvolvimento da microscopia multiphoton na década de 1990, as limitações de branqueamento foto ou profundidade de penetração foram principalmente resolvido, já que este novo método era tecnicamente capaz de realizar estudos de imagem em praticamente todos os órgãos em situações da vida real 13-15. No entanto, os principais desafios que subsistem no que diz respeito à geração de imagens de fígado foram: movimentos de respiração, autofluorescência do tecido do fígado, protegendo o fluxo sanguíneo inalterado nos sinusóides hepáticos, e de imagem especialmente estáveis por longos períodos de várias horas 16.\nApesar de vários estudos abordaram a função e migração de vários leucócitos no fígado 17, por exemplo, a NKT células-18-20, células T 21,22, os macrófagos do fígado 23,24 ou neutrófilos 25, a longo prazo multiphoton mimaging icroscopy ainda não tinha sido estabelecida com sucesso, uma tarefa ainda mais difícil em animais com doença hepática aguda ou crônica devido ao dano existente e, portanto, maior susceptibilidade a danos maiores 26. No entanto, monitorando o comportamento migratório e função celular de leucócitos no fígado em tempo real, permite que novas idéias em seu papel especial na homeostase do fígado e doença 27.\nO receptor de quimiocina CXCR6 é expresso em vários subconjuntos de linfócitos, incluindo células assassinas naturais (NK), as células NKT e algumas populações de células T 18,28. Estudos anteriores em ratos indicaram que CXCR6 e sua CXCL16 ligando cognato pode controlar o patrulhamento de células NKT em sinusóides hepáticos durante a homeostase. Por conseguinte, a utilização de ratinhos CXCR6.gfp (transportando um knock-in de proteína fluorescente verde [GFP] no locus CXCR6) tem sido descrita para investigar a migração de linfócitos em vários órgãos tais como o cérebro 29e também fígado 18,20, mostrando aumento da infiltração de células CXCR6.gfp sobre a inflamação.\nCom o método proporcionado no presente estudo foi possível seguir estes processos durante um longo período de tempo sob condições estabilizadas. O procedimento baseado multiphoton intravital permitido de imagem que foi altamente reprodutível com perturbação mínima do animal e do órgão; otimizado para a sobrevivência dos animais a longo prazo através de monitoramento extensa, seguida de perto o controle da respiração e circulação; e altamente flexível e fácil de adoptar igualmente para outros órgãos parenquimatosos, tais como de rim ou baço.\nNOTA: Os experimentos foram realizados em conformidade com a legislação alemã que rege os estudos em animais após o 'Guia para o cuidado e uso de animais de laboratório "(publicação NIH, 8ª edição, 2011) e da Directiva 2010/63 / UE relativa à protecção dos animais utilizados para fins científicos (Jornal Oficial da União Europeia, 2010). Permissão oficial foi concedida a partir do cuidado com os animais e uso de escritório governamental (LANUV Nordrhein-Westfalen, Recklinghausen, Alemanha).\nNota: Os passos que podem ser omitidos para a imagem latente de curto prazo (por exemplo, tirar fotos, pilhas 3-D ou também de microscopia de lapso de tempo curta duração) são marcados com asterisco (*) para reduzir o tempo de preparação e simplificar o protocolo cirúrgico. Imagiologia também pode ser realizada sem grande controlo e de circulação, se necessário, no entanto, o tempo de sobrevivência será acentuadamente reduzido.\n1. Setup Microscópio e pré-cirurgia Preparação (5-10 min)\nSistema Ligue (microscópio, laboratório de energia, laser, almofada de aquecimento, câmara climática, web cam, dispositivo de bomba de seringa, respirador).\nLigue O 2 de abastecimento para Isoflurane Vapor e definir o nível de isoflurano para 1,5 Vol% (v / v), conectar-se a um pequeno respirador animal.\nPara imagens de curto prazo, manter a anestesia com isoflurano somente após a indução inicial anestesia ip (veja o passo 2.2). Em seguida, use 2 Vol% (v / v) isoflurano, e manter o tempo de imagem inferior a 2 horas para garantir estável microcirculação hepática.\nDefinir a respiração 120-140 ciclos respiratórios / min com um volume de 150-200 uL.\nConfigure fase rato agarose. Preparar 100 ml de 3% (w / v) de agarose, vertendo-a em um prato (aproximadamente 10 cm x 15 cm base) num ângulo de 40 °.\nConfigure área de trabalho cirúrgico coletando a instrumentação necessária. Para prevenir a infecção microbiana, desinfectar instrumentos usando uma solução a 1% de Sekusept Forte S (9,9% w / v), Glutaral 9,8% w / v, formaldeído durante 5 minutos antes da experiência (Figura 1A).\nObter restantes componentes: desinfectante da pele (por exemplo, solução de povidona iodo de 10%), no fígado (fase de pilhas e ponte), solução de agarose (3% (w v) em PBS /), bomba de seringa com 5% (w / v) de uma solução de glucose (G-5), bomba de seringa com solução anestésica I (cetamina 0,1 mg / ml, xilazina 0,5 mg / ml, 5 ug de fentanil / ml), cotonetes, n-Butil-2-Cyanoacrylat, e 1x PBS. Coloque agarose fase prato em câmara de incubação para o pré-aquecimento.\n2. A traqueotomia (10-15 min)\nUse camundongos C57BL / 6 a partir da casa de reprodutoras de 25-28 g. Casa os ratinhos sob condições específicas isentas de patogénios de acordo com as orientações FELASA, num ambiente de temperatura e humidade controladas com um ciclo luz / escuro de 12 h de 12 horas de luz. Permitir que os animais livre acesso à dieta padrão ratos (Sniff Padrão Rodent Diet) e água ad libitum.\nAnestesiar o mouse pelo initial intraperitoneal (ip) de injecção de 250 ul de solução de anestésico cetamina (II 0,1 mg / ml, xilazina 1 mg / ml, de Buprenorfina 10 ug / ml).\n* Para manutenção durante imagens intravital, administrar continuamente solução anestésica I por injecção contínua ip (cetamina 0,1 mg / ml, xilazina 0,5 mg / ml, 5 ug de fentanil / ml) usando um dispositivo de bomba de seringa com uma taxa de fluxo de 0,2 ml / h em combinação com inalação de isoflurano 0,5 vol% (v / v).\nVerifique reflexos após 5 min (por exemplo pitada almofada do pé com uma pinça), desinfectar a pele de traqueostomia, preparação começar se o mouse está em estado de anestesia cirúrgica tolerante.\nAplicar olho creme de protecção (por exemplo, dexpantenol 50 mg / g) para evitar a córnea de secar (Figura 1B).\nFixar do mouse sobre a preparação mesa expondo lado ventral usando fita adesiva para as extremidades; overstretch suavemente pescoço, fixar nessa posição, por exemplo., através da utilização de uma faixa de borracha t enganchadoo incisivos.\nDesinfectar pele e da pele utilizando uma solução de povidona-iodo, mediante a aplicação de desinfectante com uma cotonete.\nEfetuar corte inicial pele (0,5-1 cm de comprimento) diretamente abaixo do queixo (Figura 1C)\nDissecar cuidadosamente tecido conjuntivo entre as glândulas salivares (Figura 1D).\nRetire com cuidado aberta muscular tubo circundante traquéia (Figura 1E, F).\nColoque fio cirúrgico debaixo da traquéia para posterior fixação do tubo de ventilação (Figura 1G).\nAbrir traqueia com micro-tesoura entre anéis cartilaginosos realizando uma incisão em forma de T (Figura 1H)\nColoque tubo de ventilação na traquéia através da incisão (~ 0,5 centímetros). Para empurrar o tubo para a frente, pegue final caudal com pequenas pinças anatômicas e avançar gentilmente o tubo na traquéia (Figura 1-I)\nFixar tubo com fio cirúrgico (por exemplo, (Figura 1J, K).\nCorte do selo com cola de tecidos (por exemplo, n-butil-2-Cyanoacrylat) (Figura 1D).\nFixar tubo na cabeça, usando fita adesiva.\n3. laparotomia (15-20 min)\nColoque o mouse sobre almofada de aquecimento para evitar a hipotermia. Shave abdômen, retire cuidadosamente o cabelo da pele. Desinfetar pele raspada e pele com a solução de iodopovidona.\nRealize uma pequena pele cortada abaixo do esterno utilizando uma tesoura cirúrgica (Figura 2A). Estender o corte lateralmente abaixo das costelas para ambos os lados, cauterização todos os vasos sanguíneos visíveis para evitar sangramento.\nExecutar cuidadosamente um pequeno corte na linha alba abaixo do esterno, a abertura do peritônio (Figura 2B). Estender o corte para ambos os lados usando cauterizção para impedir o sangramento (Figura 2C, D).\nColoque o mouse em agarose fase prato (Figura 2E). Inserir as pilhas de altura adequada em ambos os lados do rato (geralmente 12-14 lamelas) (Figura 2F).\nColoque sensor de gatilho respiratório debaixo parte superior das costas para sincronizar o microscópio com a respiração. Ative unidade de gatilho (Figura 2G).\nColoque fio cirúrgico (5-0) através do esterno para retrair costelas (Figura 2?).\nCuidadosamente corte ligamento ligar fígado e diafragma (ligamento falciforme), bem como do tracto gastrointestinal e fígado usando tesouras cirúrgicas curvas. Cortar o ligamento falciforme para baixo na aorta (Figura 2J).\n4. Configuração da amostra (10-15 min)\nColoque o mouse sobre o lado direito, com um ângulo de 45 ° para facilitar o acesso a grande lobo hepático.\nAdicionar ponte encenar abaixo das costelas, que abrange o abdominalcavidade. Fabricação de uma ponte, usando uma lâmina de cobertura padrão com revestimento de fita adesiva para cobrir as bordas cortantes (Figura 2K).\nColoque grande lobo hepático no palco. Deslizar cuidadosamente sonda stylus dupla bola ou uma espátula acolchoado abaixo do fígado e segure a parte superior do órgão com um cotonete molhado ou tecido molhado. Levante lobo para o slide e aplicar arrastar suave. Lobe pode ser dobrado ou enrolado. Prestar cuidados extra para só manipulação suave do fígado (Figura 2L).\nColoque estacas laterais de apoio, por exemplo, pilhas de pequenas peças de cobertura (20 mm x 20 mm), com aproximadamente a mesma altura do lóbulo do fígado ao lado dela para suportar a cobertura de deslizamento.\nColoque grande lamela (24 mm x 50 mm) no lóbulo do fígado. Certifique-se de que lamela é orientada mais horizontal possível (Figura 2 M).\nNOTA: A cobertura de vidro deve estar em contato com o tecido sem apertar. Verifique se há sinais visíveis de fluxo sanguíneo prejudicado (tecido branco). Se microcircmento é interrompido, adicionar um maior apoio stakes.\n* Coloque dois cateteres intraperitoneal independentes (Figura 2 N) para anestesia longo prazo e G-5 aplicação. Instale cateteres lateralmente na parte inferior do abdômen ao lado dos membros posteriores.\nNOTA: Os cateteres intraperitoneais podem ser auto-fabricados através da ligação 27 agulhas G com tubagem de silicone flexível (Figura 3).\n* Agulha Fixate com um laço de 5-0 cirúrgica na pele para evitar o deslocamento acidental.\n* Prenda bomba de seringa com solução anestesia I à cateterização 1, defina a taxa de fluxo de 0,2 ml / h; anexar bomba de seringa com G-5 ao cateter 2, definir taxa de fluxo de 0,1 ml / hr.\n5. Rato Monitoring\n* Coloque eletrodos de ECG em frente e as extremidades traseiras (Figura 4A).\n* Conecte a tubulação de expiração para o CO 2 sensor de nível.\nAdicionar sensor de temperatura externo conectado a almofada de calor (Figura 4C).\n6. Incorporação e fixação do tecido (5-10 min)\nPreparar 100 ml de 3% (w / v) de agarose em 1X PBS. Incorporar fígado quando a temperatura é 41 ° C, utilizando uma seringa de 5 ml e uma agulha de 18 G (Figura 5A).\nPour agarose restante em lamela e em torno do rato (Figura 5B, C). Espere até agarose está totalmente gelatinizado.\nRetire o excesso de agarose usando a espátula Heidemann, preparando uma grande viewfield suficiente para digitalizar o lobo hepático preparado (Figura 5D, E).\n7. Criação de Imagens\nTransferir o mouse na câmara de microscópio climáticas.\nAdicionar 50-100 ml de 1x PBS (pré-aquecido a 37 ° C).\nCubra amostra prato para evitar a evaporação (Figura 5F).\n* Diminuição isoflurano inalativa de 0,5 Vol% (v / v).\n* Iniciar o monitoramento de software, a gravação de ECG, freqüência cardíaca e expiratória CO 2.\nComece imagem: abrir lapersianas SER, identificar campos exibição de interesse, definir limites superior e inferior para Z-stacks, e começar a tempo de gravação lapso. Reajustar Z pilhas se necessário, para corrigir-Z deriva (ex., Devido a alterações na pressão sanguínea ou a variação de temperatura, Figura (5G).\nNOTA: Após a conclusão do período de imagem, ou se a circulação ou anestesia dos animais torna-se instável, sacrificar os ratinhos por deslocamento cervical (sem despertar da anestesia).\nPara validar nossa abordagem TPLSM intravital, nós submetido GFP / + camundongos CXCR6 a imagem TPLSM intravital. Os ratos foram quer deixados sem tratamento como controlos de linha de base ou submetido a uma única injecção intraperitoneal de tetracloreto de carbono (CCl 4) para induzir danos no fígado aguda 20.\nAs sequências de vídeo foram tomadas ao longo de um período de tempo de 2-5 horas, e as células foram traçadas ao longo do tempo, devido à sua fluorescência verde. Para mostrar a motilidade celular geral, todas as faixas que foram detectados durante o procedimento foram representados como uma imagem sobreposta (Figura 6A). Enquanto as células sob condições de base apresentaram migração de longa distância ao longo dos sinusóides hepáticos para a veia central, 18 horas após o CCI4 tratamento das células + / GFP CXCR6 mostrou padrões de movimento já parcialmente depreciados. Apesar de algumas células em movimento rápido ainda estavam presentes nos sinusóides hepáticos, várias áreas focais eram visíveis com células quetinha mudado de migração aleatória de varrimento local, indicando uma resposta quimiotáctica recrutar as células para a área de lesão. O efeito foi ainda mais acentuada após 36 h, mostrando uma prisão quase completa das células CXCR6 + praticamente sem migração ativa. Embora sob condições basais maioria das células migratórias tinha velocidades de migração variável com mudanças de direção aleatórias, CCl 4 animais tratados apresentaram células que foram apenas lentamente rastejando, bem como algumas células livremente motilidade patrulhando as sinusóides depois de 18 horas, mas não depois de 36 horas. Usando faixas de migração codificados por cores, a velocidade célula pode ser visualizado directamente para avaliar o efeito do tratamento com CCl4. A migração foi prejudicada também visível no diagrama de pistas normalizada (Figura 6B), indicando que 18 horas após o CCl4 quantidade de longa distância faixas, bem como o comprimento do rasto médio foi significativamente reduzida, enquanto que após 36 horas sem células móveis foram detectáveis quaisquer mais. Em linha wom estes resultados, o deslocamento celular, que descreve a capacidade de uma célula para patrulha livremente na vasculatura, diminuiu ao longo do tempo, indicando um aprisionamento das células 36 horas após CCl4 tratamento no local da lesão hepatocelular (Figura 6C).\nPara seguir o comportamento migratório das células CXCR6 + / GFP em fígado em mais pormenor, a velocidade de migração de células individuais representativos foi representada graficamente para visualizar o seu nível de motilidade ao longo do tempo. Nós e outros previamente descritos vários padrões de movimento distinto de CXCR6 células + / GFP: crawling aleatória ativa com a degola padrão rolando, mostrando as fases da motilidade celular e estados quiescentes temporais; dirigido recrutamento celular com células digitalizar uma área de interesse, mas ainda capaz de rastreamento ativo; detenção celular total acompanhado por activação de células imunes 18,20. Enquanto os ratos sem tratamento mostrou principalmente as células que estavam Moti livrementele com velocidades de até 15 mm / s, células CXCR6 + / GFP em camundongos tratados com CCl4 exibida uma redução marcada velocidade de migração celular e parada parcial já depois de 18 horas e parada migratória integral após 36 h (Figura 7a). De acordo com a análise de uma única célula, os dados estatísticos de todas as células dentro de uma seqüência revelou diminuir a velocidade de migração global após CCI4 tratamento (Figura 7B), que também foi assemelhava por velocidades de trilha médios (Figura 7C) e acompanhar as velocidades máximas de migração (Figura 7D), mostrando que a abordagem foi adequado para descrever as diferenças de migração celular e posicionamento no desenvolvimento de doença hepática.\nFigura 1:. Tracheotomy do mouse (A) equipamentos cirúrgicos utilizados para a preparação. 1x patter padrãon fórceps, pinça 1x Semken, fórceps 1x Dumont No.7, fórceps Graefe (serrilhada, 2x straight / 1x curvas), afastadores 2x Blair (4 frentes (rombo)), sonda stylus duplo bola (por exemplo, Amálgama burnisher 3PL), Heidemann espátula HD2, porta-agulha (Mathieu ou Halsey), pequenas tesouras cirúrgicas 1x (sharp / sem corte, 1xcurved, 1x retas), micro-tesoura (eg, Vannas Primavera Scissors), 1x pequeno Cauter animal, cotonetes, Olho Salve protetora, cirúrgico rosca, n-Butil-2-Cyanoacrylatglue. (B) Os olhos são protegidos usando uma pomada protetora dos olhos. (C) corte da pele inicial para a preparação traquéia. (D) Dissecção do tecido conjuntivo entre glândulas salivares submandibular. (E) Exposition da traquéia. (F) dissecção do tecido muscular circundante traquéia. (G) A colocação de fio cirúrgico debaixo traquéia para fixação do tubo. (H) Tracheincisão al usando microtesoura entre anéis cartilaginosos superiores. (I) A inserção do tubo de ventilação na traquéia. (J) A colocação de fio cirúrgico craniana tubo para fixar à pele. (K) de fixação do tubo duplo. (I) Vedação incisão cirúrgica usando n-Butil-2-Cyanoacrylat. Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.\nFigura 2:. Laparotomia e fígado preparação (A) incisão cutânea inicial, os vasos sanguíneos foram cauterizados para evitar sangramento excessivo. (B) a abertura do peritônio debaixo do esterno. (C) A prorrogação do corte peritoneal usando unidade cautério. (D) Selagem de vasos epigástricos. ( g> E) Nova prorrogação da incisão peritoneal abaixo das costelas. (F) A colocação de animais em fase de agarose prato. (F) A colocação de pilhas de apoio. (G) Colocação de sensor de gatilho respiratório. (H) Configuração de limite de trigger para a respiração sincronizada de imagem. (I) de fixação do esterno para retrair costelas usando fio cirúrgico. (J) Desconexão da vesícula biliar a partir do diafragma e dissecção do ligamento falciforme. (K) Colocação de encenar tampa de deslizamento. (L) Colocação de lobo hepático no palco. (M) Colocação de lamela no lobo hepático. (N) A colocação de cateter ip para anestesia longo prazo. Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.\nFigura 3:. Cateter intraperitoneal 27 agulhas G ligados com tubo de silicone flexível.\nFigura 4: Acompanhamento do mouse. (A) A colocação de eletrodos de ECG (verde, vermelho, azul cabos). Agulhas para detecção ECG são colocados subcutaneamente como mostrado. (B) Monitoramento de ECG (vermelho), expiratório CO 2 (azul) e freqüência cardíaca (vermelho) de apresentar evolução a longo prazo (à esquerda) e medição real (à direita). (C) unidade de energia controlado por controle almofada de calor Temperatura. A temperatura é ajustada para 36 ° C. Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.\nve_content "fo: manter-together.within-page =" always ">\nFigura 5: Incorporação de fígado e de imagem. (A) A incorporação de lobo hepático. 3% de agarose em PBS é injetado a 41 ° C sob a cobertura de vidro usando uma seringa de 2 ml com agulha de 18G. (B) do lóbulo do fígado está totalmente incorporado em agarose para minimizar artefatos de movimento. (C) A vedação do peritoneu com o restante de agarose para evitar a desidratação. (D) A remoção do campo cobertura microscópio agarose de vista depois de gelatinização total. (E) Preparação de viewfield. F Ajustamento de-nível Z e avaliação do fluxo sanguíneo amostra usando microscopia de luz. (D) Cubra a assadeira para evitar a evaporação excessiva. A tampa é levantada na foto para mostrar a configuração. Por favor, clique aqui para ver um maiorversão desta figura.\nFigura 6:. Seguimento de células CXCR6 gfp / + em danos no fígado crónica após injecção CCl4 Os ratinhos foram injectados ip com 0,6 ml / kg de CCl 4 dissolvido em óleo de girassol 18 h ou 36 h antes de imagem. No dia da experiência, os ratinhos foram submetidos a TPLSM intravital como descrito. (A) imagens de rastreamento de celular Still. Faixas de todos os pontos de tempo foram sobrepostas para mostrar motilidade celular e deslocamento. Imagens foram feitas usando um único feixe Titan Saphire Laser em 840 nm e um microscópio TPLSM. Áreas foram escaneados tendo 3-5 Z-stacks com uma profundidade de penetração de 70μm com uma taxa de amostragem de cerca de 30 segundos por ciclo de scan. Faixas foram codificados por cores para mostrar a velocidade de migração (azul claro: rotatividade ou células sésseis; roxo: células móveis). Barras de escala: 100 μ; M. (B) XY-diagramas de caminhos normalizado para sua origem, mostrando faixa direcionalidade e comprimento da pista (um). (C) o deslocamento total de células a partir de sua origem. Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.\nFigura 7: As estatísticas de migração de células gfp CXCR6 / + seguido de TPLSM intravital no tecido do fígado na linha de base e CCl 4 ratinhos tratados As células foram analisadas quanto à sua velocidade de migração que patrulha o fígado.. (A) a velocidade Representante de células individuais seguido ao longo do tempo. A velocidade foi medida em cada ponto de tempo e traçada para cada quadro individualmente. As linhas representam as células individuais. Eixos Y são dimensionados de acordo com a velocidade máxima de migração. (B) Stanálise atistical de velocidades específicas A. Quadro de todas as células foram agrupadas e analisadas no início do estudo e CCI4 camundongos tratados. (C) A velocidade média foi calculada faixa por faixa e os dados de todas as faixas foram agrupados para análise. (D) A velocidade máxima de cada faixa foi traçada e analisados. Todos os experimentos foram realizados em grupos de 3 animais e os resultados foram confirmados em duas experiências independentes. *** P <0,001 (bicaudal teste t de Student não pareado). Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.\nO objetivo do nosso estudo foi desenvolver um método altamente padronizada, estável e reprodutível para a imagem latente TPLSM intravital do fígado. Imaging Intravital em geral deu informações valiosas sobre o comportamento celular sob condições reais seguintes homing e interação de diferentes populações de leucócitos em desenvolvimento, a homeostase e da doença. No entanto, a posição anatómica um pouco difícil de fígado, devido a que movimento respiratório e intestinal peristáltica são transmitidos directamente para o fígado, bem como a sua elevada fragilidade em relação a outros órgãos sólidos imposta vários desafios para imagens intravital estável a longo prazo. Nos últimos anos, muitos estudos experimentais em camundongos revelaram a natureza altamente dinâmica de infiltração de células imunes no fígado lesado 28, com importantes contribuições dos residentes ou infiltrando monócitos / macrófagos, neutrófilos 30-32 33 ou várias subpopulações celulares 34,35. No entanto, most destes dados foram obtidos a partir de análises de ponto final (por exemplo, multicolor citometria de fluxo após o sacrifício dos animais). Até agora apenas existem poucos estudos que descrevem a dinâmica do tráfego celular durante a inflamação do fígado usando imagens intravital multicolor. Usando microscópios invertidos contorna a necessidade de fixação e hidratação do fígado devido à adesão firme do tecido para o fundo de vidro 24. No entanto, uma vez que muitos microscópios Multiphoton são construídos como sistemas de imagem verticais, são necessários de preparação e métodos de fixação mais elaboradas para estabilizar o tecido para a obtenção de imagens. Comumente, os sistemas de estadiamento custom made foram descritas para fixação do tecido 6, 36,37, porém com estes é crucial para validar a microcirculação hepática, uma vez que a pressão mesmo mínima no tecido afeta o fluxo sanguíneo sinusoidal com efeitos ainda mais graves no fígado doente 38 .\nPortanto, os seguintes pontos foram advestido com a configuração deste método para otimizar os resultados obtidos por in vivo TPLSM imagem: Melhorar a qualidade da preparação por perturbação da amostra minimizados e perturbação da microcirculação devido a lidar com questões de maior sobrevida dos animais; monitorização de cuidados intensivos e subsequente adaptação de anestesia, a respiração e a estabilização da circulação reforçada sobrevivência dos animais e artefactos fisiológicas minimizadas, por exemplo, causada por desequilíbrios no pH do sangue. Respiração controlada, em combinação com a imagem desencadeada era essencial para eliminar artefactos de movimento devido a sincronização do microscópio com os ciclos respiratórios. A incorporação do órgão em agarose contendo concentrações fisiológicas de sal foi benéfica para fixar suavemente o órgão após a preparação, sem qualquer outra manipulação mecânica e impediu também a desidratação da amostra. A maioria dos protocolos utilizados para a microscopia de fígado fornecer métodos só insuficientes para sta ble, anestesia longo prazo. No entanto, a sobrevivência dos animais pode ser significativamente melhorada com o protocolo fornecido aqui anestesia e em combinação com o controlo foi suficiente para garantir a sobrevivência de até 8 horas. Métodos alternativos são geralmente adequados para visualizar processos dentro de um período de tempo de até 3 horas, tais como invasão de neutrófilos 39, mas falta-lhes a possibilidade de imagem mais processos duradouros, tais como monócitos ou linfócitos invasão 22 ou mesmo 6 a proliferação celular. Compreender a dinâmica de recrutamento, infiltração e interação celular durante a inflamação hepática aguda e crônica podem fornecer uma visão mais detalhada sobre o desenvolvimento e progressão da doença hepática. Ao utilizar este melhor compreensão da imunopatologia, será possível conceber terapias muito mais refinado em termos de tratar as células-alvo de interesse, em vez de utilizar abordagens imunossupressores por exemplo, não selectivos.\nove_content "> Para abordar o posicionamento, a transmigração de leucócitos e de interacção, as imagens de alta qualidade são necessários para o rastreamento 4D precisa das células dentro da vasculatura hepática e fígado tecido 18,20,40.\nO método que proporcionam aqui pode ser aplicado, utilizando os reagentes e equipamentos de laboratório comuns, tornando-o ao mesmo tempo fácil de manusear e de custo eficiente com o mínimo de perturbação da amostra. Para manter as condições fisiológicas do rato por tanto tempo quanto possível, é necessário ajustar com precisão o volume respiratório e a frequência para controlar a oxigenação do sangue e os níveis de CO 2. Embora, devido à infusão contínua de líquidos no peritoneu não é, pelo menos, uma fonte de tentativa de estabilizar as medições de circulação, ECG e do ritmo cardíaco apenas permitir que um controle parcial sobre a estabilização da circulação. Com a implementação de controle da pressão arterial e aplicação direta líquido venoso central é provável que o PARAMET vitalers pode ser estabilizado ainda mais, levando a maior reforço da estabilidade e sobrevivência.\nMesmo sob condições altamente controladas, imagens de animais que foram submetidos a modelos de dano hepático comumente usados em camundongos como o paracetamol induzida danos no fígado, CCI4 induzida danos do fígado ou doença hepática gordurosa induzida alimentar continua sendo um desafio. Devido à função essencial do fígado no controle estado metabólico e sua posição central na circulação, alterações da funcionalidade do fígado ou microcirculação impacta diretamente a sobrevivência a longo prazo dos animais, portanto, limitando a possibilidade de obter TPLSM vídeo-sequências longas de pesadamente órgãos danificados, por exemplo, com hemorragias graves ou microvasculature destruído. Além disso, em severamente alterado microanatomy fígado como em modelos com necroses extensas, continua a ser difícil de estudar célula-célula-interações e compartimentalização local dos agregados de células inflamatórias, porque nenhum standardized "contra-coloração" para estruturas (tais como hematoxilina-coloração em microscopia convencional ou DAPI nas técnicas de imunofluorescência) está disponível para a qualidade TPLSM.The intravital dos dados obtidos pelo processo de imagem depende, ainda, da intensidade de marcação das células e a configuração microscópica.\nExistem várias abordagens para a visualização de células GFP + no fígado. A maior fluorescência com muito baixa fluorescência de fundo é obtido entre 900 e 920 nm de comprimento de onda de excitação. A perda quase completa de fundo de fluorescência do fígado não permite investigar o posicionamento das células dentro do fígado, quando não utilizar rastreadores adicionais do reservatório, como dextrano ou lectina. Por isso, decidimos imagem os leucócitos migram em um comprimento de onda de 840 nm, dando a melhor relação entre o sinal de GFP e detalhada, mas não muito brilhante fundo fígado fluorescência.\nTomados em conjunto, o intrsistema de imagem avital TPLSM introduzido neste estudo pode ser aplicado a uma ampla variedade de questões de microscopia intravital específicas do fígado. Com esta abordagem, a imagem latente TPLSM em outros órgãos sólidos, tais como rim, fígado, bexiga, intestino ou pâncreas é viável com apenas pequenas modificações dos procedimentos cirúrgicos e estadiamento de tecido, proporcionando assim uma abordagem altamente flexível para investigar processos migratórios longo prazo de células em vivo.


Início Internacional Trump se despede da presidência dos EUA, mas cria expectativa ao fazer...\nO presidente Trump divulgou nesta terça-feira um adeus à nação via vídeo, mas criou expectativa ao prometer que o movimento “Make America Great Again” [Faça a América grande de novo] está “apenas começando”, dando a entender que não deixará de lutar politicamente pelo país.\n“Nunca houve nada parecido”, disse ele. “Enquanto os americanos mantiverem em seus corações o amor profundo e devotado pelo país, não há nada que esta nação não possa alcançar.”\nEle mencionou muitas das centenas de realizações que a Casa Branca divulgou em uma lista na semana passada [aqui]. O documento cita a “melhor economia de todos os tempos”, cortes de impostos, reforma da regulamentação, o abandono do “impossível” acordo climático de Paris e acordos comerciais, etc.\nEle elogiou a nação por se defender do “vírus da China”, incluindo o desenvolvimento de duas vacinas em tempo recorde. Ele lamentou pelas vidas perdidas para o coronavírus, mas chamou de “milagre médico” as vacinas estarem disponíveis cinco vezes mais rápido do que nunca.\nEle também citou baixo desemprego e salários em alta. Trump ainda indicou três juízes da Suprema Corte e quase 300 juízes federais para “interpretar a Constituição como ela está escrita”. Depois, citou fronteiras seguras, os acordos de paz no Oriente Médio e um aumento do respeito pela América no exterior.\n“Por favor, não perca esse respeito”, disse ele ao novo governo. Outros pontos foram reconstruir os militares, trazer soldados americanos para casa e ser o primeiro governo em muitos anos a não envolver os Estados Unidos em uma nova guerra.\nE, disse ele, colocou o povo americano de volta no comando do país. Na verdade, muitos dos sucessos de Trump foram ignorados, e Joe Biden, por meio de ações executivas e legislação, planeja uma blitz de 10 dias assim que tomar posse para eliminar o legado de Trump. Com: WND.\nCâmara dos EUA aprova o impeachment de Trump por “incitação à insurreição”


No Dia da Consciência Negra, José Vicente fala da importância da renovação da lei das cotas - Glamurama\nNo Dia da Consciência Negra, José Vicente fala da importância da renovação da lei das cotas\nA vitória de Lewis Hamilton no GP de São Paulo do último domingo (14) já seria motivo para comemorar por si só, mas o triunfo do maior vencedor da história da Fórmula 1 ganhou contornos épicos quando o piloto repetiu o gesto do lendário Ayrton Senna e empunhou, com orgulho, a bandeira do Brasil. Lewis provocou a emoção do público não apenas por citar o ídolo brasileiro, mas, também, porque, mais uma vez, mostrou que é uma voz potente na visibilidade negra e na luta pela igualdade racial.\nO professor e empresário José Vicente, reitor da Universidade Zumbi dos Palmares, ressalta como personalidades na mira da mídia – caso Lewis Hamilton e da ginasta Receba Andrade -, trazem muito mais do que bons exemplos para jovens negros: são provas vivas da potência dessa parcela da população, historicamente relegada a segundo plano.\nAtuando de maneira destacada na valorização da educação inclusiva e equânime, ele está à frente do projeto Cotas Sim!, que quer a renovação das leis de cotas na educação e na administração pública. “A lei esta chegando ao fim e ninguém se manifestou, nem o Congresso, nem a sociedade e nem as universidades”, lamenta. Vicente diz que o fim da lei pode levar ao retrocesso de uma medida de grande magnitude e importância, principalmente para esse público que paga a universidade nos impostos, mas nunca pode usufruir desse bem público.\nO movimento nasceu para apoiar os Projetos de Lei em tramitação na Câmara dos Deputados e no Senado Federal, que visam colocar as cotas raciais na agenda das duas casas, tendo em vista que está previsto no artigo sétimo da Lei de Cotas (Lei nº 12.711, de 29 de agosto de 2012), um processo de revisão em dez anos, que pode extinguir as cotas em 2022.\nAlém das cotas em universidades, a ação também luta pela renovação da lei que destina 20% de vagas para negros em concursos públicos em cargos administrativos, que, em junho de 2024, também passará por uma revisão de acordo com a Lei 12.990, de 9 de junho de 2014.\n“Com o fim da lei, deixa de existir a possibilidade de que esse público possa frequentar a universidade publica federal”, diz Vicente, que argumenta que as cotas, além de serem um avanço, são uma necessidade. “Construiu-se uma ação social para poder garantir que essa lei seja prorrogada por pelo menos mais 10 anos”, afirma.\nO acadêmico ressalta que a instituição comunitária de ensino superior Zumbi dos Palmares lidera o Movimento Cotas Sim e quer angariar um milhão de assinaturas em abaixo-assinado a ser enviado ao Senado e à Câmara dos Deputados. Para ele, além do descaso da justiça, outro muito provável empecilho para renovação da lei é a base governista do Presidente Jair Bolsonaro, principalmente “pelo o que tem sido a verbalização de expoentes do governo que acompanham os posicionamentos de Bolsonaro, que frequentemente combate medidas dessa natureza”, aponta.\nJosé Vicente avalia que, do ponto de vista técnico, os último nove anos em que a lei das cotas esteve vigente representaram uma transformação da universidade pública, tornando a instituição em um lugar mais plural e igualitário. “Uma expressão mais visível e objetiva do que pode e deve ser um país que se propõe a ser democrático, a disponibilizar as oportunidades sociais de forma igualitária”, diz, ressaltando que, até então, a universidade pública e federal sempre foi algo para poucos. “Para os abastados, em outras palavras, para a elite sustentada primordialmente pelos pobres, já que a universidade é bancada pelos impostos”, afirma.\nContudo, apesar de expressivos, os resultados ainda são limitados. E não há hora mais oportuna para trazer o assunto à tona do que o Dia da Consciência Negra, celebrando neste 20 de novembro. “É lógico que o combate à desigualdade e a criação de oportunidades para equilibrar o processo jamais seria possível de se alcançar em 10 anos”, diz. “130 anos de falta de oportunidades, exclusão e segregação de toda natureza não serão corrigidos com uma lei de 10 anos”, afirma o reitor.\nPara além da diversidade dos alunos, José Vicente lembra que as universidades ainda não representam a diversidade brasileira, visto que, apesar de ser a maioria da população do país, os negros ainda não são nem metade do corpo docente, de funcionários ou de pesquisadores das instituições. E esse é mais um retrato da imensa desigualdade do país.\nPara consolidar o apoio, a Faculdade Zumbi dos Palmares criou um abaixo assinado para apoiar todos os Projetos de Lei que estejam alinhados com a perspectiva de renovação das cotas. O objetivo é alcançar um milhão de assinaturas no documento – CLIQUE AQUI para assinar.\nConfira também 7 livros sobre a discussão em torno de questões raciais indicados por José Vicente\ncotas sim,Igualdade Racial,José Vicente,Lei de Cotas,Reitor da Universidade Zumbi dos Palmares,Universidade Zumbi dos Palmares


Departamento de Informática – PUC-Rio | Lives\n‘O aprendizado de máquinas se sobrepôs à computação visual’, diz Raposo em live\nSeminário abordou a área de computação visual inteligente a partir de resultados de pesquisas do DI e do Instituto Tecgraf\nVisão computacional, realidade virtual e realidade aumentada são algumas das vertentes que compõem a computação visual. Mas atualmente, é difícil falar sobre o assunto sem interligá-lo à área de aprendizado de máquinas. “Nos últimos anos, a inteligência artificial, mais especificamente o aprendizado de máquinas, se sobrepôs à computação visual”, disse o professor do Departamento de Informática (DI) da PUC-Rio Alberto Raposo na live “Desafios e oportunidades em computação visual inteligente”, na sexta-feira (19) e disponível no canal do DI no YouTube.\nDe acordo com o professor, a inserção do machine learning na área de computação visual vem trazendo resultados “melhores e mais surpreendentes”. Nesse sentido, Raposo conduziu a sua apresentação mostrando pesquisas e soluções trabalhadas no DI e no Instituto Tecgraf de Desenvolvimento de Software Técnico-Científico da PUC-Rio, que desenvolve projetos para a indústria. Raposo é gerente de projetos do Tecgraf.\nNa live, Raposo apresentou pesquisas voltadas à computação visual inteligente na área médica, como a tese de doutorado de Victor de Almeida Thomaz, defendida em abril de 2020, que retratou o aprimoramento de dados a partir da geração sintética de dados de treinamento para algoritmos de detecção de pólipos. “Com os métodos utilizados no trabalho, conseguimos melhorar as técnicas de detecção [de pólipos] que já existiam, mexendo só nos dados”, explicou.\nRaposo trouxe outros exemplos em que a computação visual inteligente se relaciona com a área de imagens médicas, como os projetos realizados em parceria com a GE Healthcare e com o Hospital de Amor (antigo Hospital de Câncer de Barretos). Um desses projetos é a análise automática de ecocardiografia fetal, que pretende desenvolver softwares para ajudar os médicos na detecção precoce de possíveis cardiopatias existentes no feto. Outro projeto é a análise de imagens de mamografia, com o intuito de aprimorar as imagens obtidas por meio desse exame.\nSegundo o professor, todos os trabalhos relacionados às imagens médicas abordam o mesmo problema: a geração de dados dos exames, pois as bases de dados existentes são limitadas e têm pouca variedade. Logo, o aprendizado de máquina busca trabalhar com o aprimoramento desses dados.\nAprendizado de máquina interativo\nOutra ramificação da computação visual inteligente é a área de aprendizado de máquina interativo, que também foi abordada na palestra. Segundo Raposo, esse campo conta com a participação do ser humano. “Ele vai ajudar a ensinar o algoritmo de aprendizado de máquina compensando a falta de dados”, explicou.\nNesse viés, o professor discorreu sobre outra tese de doutorado, desta vez da doutoranda do Programa de Informática da PUC-Rio Jessica Pecho. O trabalho “Uma abordagem baseada no aprendizado de máquina interativo para customização de tecnologias adaptáveis para reabilitação física”, que será apresentado em abril deste ano, aborda o aprendizado de um sistema inteligente por meio de práticas humanas.\nNesse caso, o sistema Open Pose consegue captar os movimentos de um fisioterapeuta, entendê-los como “corretos” e detectar anomalias (ou seja, movimentos “contrários”) vindas por parte de um paciente.\nComputação visual inteligente na indústria\nAlém do ramo médico, Raposo trouxe exemplos de projetos que envolvem computação visual inteligente dentro da indústria de petróleo, principalmente para a Petrobras, parceira do Instituto Tecgraf).\nUm dos trabalhos é o SMS 360, que cria ambientes 3D e fotos 360º das locações reais, como plataformas e navios, com o intuito de fazer avaliações mais objetivas da percepção de riscos dos funcionários. Raposo também falou sobre o projeto Segurança em Operações de Mergulho, cuja ideia é aumentar as atividades de mergulho na indústria de óleo e gás, essenciais na produção de petróleo em águas profundas.\n“Como essa é uma área arriscada, na qual ocorrem muitos acidentes, esse projeto quer aumentar a segurança operacional dessa atividade por meio do desenvolvimento de novas tecnologias”, disse o professor, que trouxe como exemplo o desenvolvimento de vestimentas (wearables) inteligentes que ajudam a monitorar os batimentos cardíacos dos mergulhadores.\nOutras teses, como “Automatic image annotation using deep reinforcement learning”, de Leonardo Cruz, e outros projetos do Instituto Tecgraf, como o trabalho que alia inteligência artificial e imagens 3D no combate à Covid-19 apoiado pelo Programa de Combate a Epidemias da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), também foram apresentados na live.


As sobrancelhas são muito importantes. Elas devem ser bem modeladas e expressivas.\nUtilize um delineador para reforçar a força do olhar como fazia a atriz francesa Brigitte Bardot. Experimente fazer um olho gatinho e lembre-se: no quesito delineador, quanto mais preto, melhor.\nOs lábios vermelhos chamam a atenção, assim como os olhos esfumados. Tome cuidado com a purpurina, entretanto, pois um visual infantil não combina com uma bad girl.\nNão é preciso se produzir o tempo inteiro, mas o desleixo também não é legal. A regra de ouro é: jamais vista uma calça de moletom fora de casa.\nVista preto e couro, mas não o tempo inteiro. Todos ficam bem de preto, mas você deve ser capaz de arrasar com um look colorido também.\nBrinque um pouco com a monocromia. Quando Solange Knowles, irmã da cantora Beyoncé, apareceu em público vestindo vermelho da cabeça aos pés, ela foi muito elogiada.\nFaça uma tatuagem pequena e com significado, mas pare por aí. Não faça nada que possa ser escondido. Quando estava tentando mudar a imagem de garota boazinha, Selena Gomez fez uma pequena tatuagem na parte de trás do pescoço com numerais romanos. Isso é perfeito.\nNão siga tendências, crie-as! A Madonna é um ótimo exemplo de bad girl que fazia as coisas a seu próprio modo. Ela quebrava convenções, seja mudando as regras impostas pela sociedade, seja utilizando um sutiã pontudo. Encontre a sua marca, algo que seja só seu. Uma bad girl precisa encontrar um visual próprio e ater-se a ele.\nDemonstre sua confiança. As pessoas costumam se aproveitar de garotas que não exibem que são confiantes. Ser passiva e ser uma bad girl são coisas contrárias: você não pode ter medo de dizer o que quer. Vá e pegue o que é seu por direito!\nAs bad girls nunca pedem elogios, elas os esperam.\nNão demonstre desespero. Nunca implore ou peça algo muitas vezes. É claro, isso não significa que você deve ser grossa: se alguém enviar uma mensagem, responda. Apenas não seja sempre você a começar o contato.\nSeja um pouco misteriosa. A ex-Primeira Dama americana Jacqueline Kennedy Onassis nunca falava sobre os segredos que tinha. Nunca deixe que a vejam transpirar ou sofrer. Como bem disse a Duquesa de Windsor, "Nunca reclame e nunca explique". A estrela Sophia Loren também dizia "O sex appeal é composto metade por você e metade por coisas que os outros acreditam que você tenha."\nSeja uma pessoa divertida. Você deve ser o centro das atenções em uma festa, não aquela pessoa que fica apoiada contra a parede em silêncio. Ria e, mais importante ainda, faça os outros rirem. Converse, até mesmo com estranhos!\nNão permita que a tratem mal. Jamais tolere abuso e deixe que a xinguem. As bad girls simplesmente vão embora quando são destratadas. Seja forte e nunca seja capacho de ninguém.\nNão se desculpe. As bad girls nunca pedem desculpas por serem elas mesmas.\nA paixão da atriz Angelina Jolie, os trabalhos humanitários, não abalaram sua imagem de bad girl, mas deram mais profundidade a ela. Você não precisa ser realmente má para ser uma bad girl: a paixão faz parte da personalidade de todas as bad girls.\nA atriz Mae West dominou a arte da provocação através do uso do duplo sentido.\nPesquisas demonstram que os homens sentem-se mais atraídos por garotas com empregos interessantes. As bad girls costumam ter carreiras interessantes que permitem que interajam com os outros.\nVocê pode optar por uma carreira não tradicional. Seja uma policial, uma piloto ou uma bombeira, você escolhe! A personagem Lisbeth Salander, da série de livros Os Homens que Não Amavam as Mulheres possuía uma habilidade com computadores e não tinha medo de utilizá-la.\n"As modelos que tiveram uma infância deslocada e estranha, sendo zombadas pelos outros, são as que demonstram mais caráter e força", já dizia a modelo Binx Walton. "Elas sabem lidar com os outros."\nAssuma a liderança. Jamais espere os outros se decidirem. Você sabe o que quer, deixe que os outros a sigam. Desafie as regras de vez em quando, mas nunca de modo que possa machucá-la.\nVocê nunca verá uma bad girl virando diversas doses de vodca, perdendo o controle ou dançando em cima de um balcão.\nOuça um pouco de rock. A roqueira Joan Jett é a personificação de "bad girl" para muitas pessoas e até mesmo escreveu a música Born to be Bad sobre o tema.\nNão vista roupas reveladoras demais, pois isso construirá uma reputação indesejada. Exibir demais o corpo cria uma impressão exagerada.\nObtida de "https://pt.m.wikihow.com/index.php?title=Ser-uma-Bad-Girl&oldid=366396"


De Gennaro Motors: 06/12/09 - 13/12/09\nArrumando algumas fotos do arquivo da De Gennaro Motors, achei está preciosidade acima.\nEu tirei está foto a uns 2 anos atrás. É o meu labrador (Thob), mascote da De Gennaro Motors abordo de um Chamonix Spyder 550-S e com muito estilo, ele possou para a foto.\nDireto dos EUA / De Nova York City até Southampton\nNosso correspondente nos EUA, Marcos “Tenere” da série Caminhão nos Estados Unido, nos traz está semana um vídeo feito durante uma viagem. Marcos pegou uma carona com seu amigo Célio, que dirige um caminhão cegonheiro.\nEles foram de New York até Southampton, entregar alguns veículos 0KM nas revendas Jeep, Chrysler, Dodge e GM,\nPodemos observar neste vídeo a visão do caminhoneiro quando passa por Nova York (no lado norte) na saída da Big Apple até a chegada em Southampton. Fora isso é interessante observar os principais pontos de NY que Marcos gravou.\nA cidade de Southampton fica no estado de NY. É um local que os americanos usam muito para descansar e passar os finais de semana, por ser uma cidade bonita, com belas praias e de fácil acesso, diz Marcos “Tenere”.\nSobre as Revendas Automotivas Americanas:\nMarcos comentou um ponto interessante sobre as revendas americanas de automóveis, nas quais eles visitaram.\nNos EUA boa parte das revendas americanas costumam ser enormes, principalmente nos grandes centros. Nesta cidade que eles visitaram, diversas revendas ficam juntas, às vezes chegam a serem todas do mesmo proprietário.\nNo final do vídeo, vamos observar uma revenda Audi, Porsche e Jeep, todas juntas em um único terreno.\nRepare onde as Porsche’s ficam estacionadas, na frente da loja a céu aberto. Bem diferente daqui do Brasil, pois às vezes não conseguimos ver os carros na frente da vitrine por motivos de “segurança”.\nConfira algumas das fotos desta viagem\nNovo Porsche Panamera S - 0KM em exposição na Revenda\nPorsche 911 - 0KM\nPorsche Boxster - 0KM\nPorsche Cayman S - 0KM\nPorsche Cayenne - 0KM\nDodge Challanger 2010 0KM - Lindo este exemplar branco !\nPostado por De Gennaro Motors 20 comentários: Links para esta postagem\nO final de uma saga !\nAs últimas 75 unidades do Mercedes SLR Mclaren, já estão em produção, na fábrica de Working Inglaterra.\nA Mercedes-Benz em conjunto com a Mclarem produziram alguns dos superesportivos mais desejado do mundo, como o SLR Mclaren 722 e o Stirling Moss, que foi inspirados nos modelos de corrida da década de 50.\nCom o fim da parceria, a Mclaren vai se de dedicar a produção do MP4 12 C, já a Mercedes irá produzir o SLS, esportivo que foi apresentado em setembro no Salão de Frankfurt.\nPara comemorar, separei algumas imagens deste esportivo que vai ficar marcado na hístoria automobilística mundial.\nFerrari Califórnia by Novitec Rosso\nA Novitec Rosso, uma famosa preparadora alemã, conhecida por preparar esportivos da Ferrari, apresentou nesta terça um novo kit para a Ferrari California.\nNo exterior a California ganhou um boky kit feito de fibra de carbono, novas saias laterais, um novo sistema de exaustão e um pequeno spoiler traseiro.\nA preparadora também equipou a Ferrari com rodas de liga leve aro 21 na parte dianteira e de 22 polegadas na traseira.\nFora o upgrade no exterior da Ferrari California, a preparadora também realizou alterações no motor V8. O resultado foi um bolído de 500 cavalos de potência ( 40 CV a mais do que o modelo convencional), capaz de ultrapassar a barreira dos 300 km/h.\nA Subaru lança uma serie especial do modelo Impreza WRX STI. Serão produzidas, inicialmente, apenas 125 unidades, com motor boxer de 2,5 litros turbo com 305 cv.\nO modelo, que lembra muito o WRX STI Spec C, inclui suspensão de desempenho, com grossa barra estabilizadora traseira, além de molas e amortecedores traseiros do padrão WRX STI.\nNo interior, CD/MP3, com capacidade para seis CD's, com quatro alto-falantes, ar condicionado regulável e bancos com o logotipo WRX bordado. Outros itens são: sistema Homelink com interface para iPod, um subwoofer, pedais de metal, rodas 18x8.5" JDM Spec C, etc.\nO WRX STI Special Edition, que terá as 125 unidades em uma exclusiva cor branca Aspen e deve se tornar um modelo de produção em série em 2010.\nNova Hyundai Tucson - Design totalmente renovado\nA nova Hyundai Tucson 2010 sofreu uma verdadeira revolução no visual. Com design moderno, a nova Tucson 2010 deixou de lado o ar sóbreo.\nOs faróis e as lanternas estão contornados, dando aparência agressiva. Outra novidade é o teto solar panorâmico.\nO carro que terá o motor 1.6 de 173cv, está sendo produzido em linha pela Hyundai, o que dá indício de que deve ser usada na geração nova do utilitário.\nCitroën apresenta o novo C3 2010\nA marca disponibilizou algumas imagens do carro, que está, realmente, muito ousado e moderno.\nO enorme pára-brisa, prologando até a altura da coluna que divide as portas. Fora isso, o novo C3 tem 9 cm a mais de comprimento, 4 cm a mais de largura e, supõe-se, 8 cm extras de entre eixos.\nA parte interna o novo C3 traz algumas novidades como diversos gadgets com entrada múltipla para iPod, navegador, som Hi-Fi e viva-voz com Bluetooth.\nDepois de ser mostrado no Salão de Frankfurt, em setembro, o novo C3 já está a venda somente na Europa. No Brasil ainda não tem data prevista para sua chegada.\nConfira no De Gennaro Motors Matérias está Puma GTE 1974.\nDireto dos EUA / De Nova York City até Southampton...


Prefeitos cearenses perderam quase R$ 900 milhões de repasses federais em dez anos - Cariri Notícias\nInício Educação Prefeitos cearenses perderam quase R$ 900 milhões de repasses federais em dez anos\nSegundo a Aprece, o uso de mais de 60% do Fundeb para pagamento de pessoal afeta outros investimentos\nNa prática, porém, segundo o consultor, prefeitos utilizam, pelo menos, 80% do Ideb apenas para pagamento de pessoal. Há casos em que a totalidade dos recursos não é suficiente para arcar com todos os custos da folha salarial.\nO prefeito de Mombaça, Ecildo Filho (MDB), classifica o Fundeb como “um instrumento falido”. Ele conta que o atual sistema de repasse é “insustentável” e que “a maioria dos municípios não consegue pagar sequer a folha”.\nPara conseguir equilibrar as contas e manter investimentos na Educação, o emedebista busca estratégias já conhecidas dos prefeitos. “As perdas são enormes. O que temos feito para conseguir manter os salários pagos é enxugar o máximo possível, e fazer nucleações de escolas”.\nEm meio a esforços para quitar as dívidas mensais, o prefeito afirma que no ano passado precisou tirar R$ 3 milhões de outras áreas da administração para a folha da educação. “E não se faz educação apenas com a folha”, desabafa Ecildo.\n“Meu avô tinha onze filhos. Hoje (a média por família), é de dois, três filhos. Com isso diminui o número de alunos. Os professores não se aposentam e fica a carga de muitos professores e menor número de alunos, e essa conta não fecha”, reclama o gestor.\nPrefeito de Cariré, Elmo Aguiar (PDT) resume a realidade dos gestores do interior do Estado. “É a história do lençol curto. Cobre a cabeça, e descobre os pés”, afirma. Segundo ele, “há uma dificuldade grande” dos prefeitos em relação ao recurso do Fundeb.\n“Há um tempo, o dinheiro era suficiente para pagar professores e ainda sobrava. No ano passado, nós gastamos 73% só com a folha. Gastamos 13% a mais do que o recurso necessário dos 60%. Gastamos só 26% dos 40% para aplicar na melhoria das escolas”, relata o gestor.\nEm Cariré, no ano passado, Elmo Aguiar tirou R$ 1,5 milhão da Infraestrutura para custear a educação. “A gente sacrifica a Infraestrutura, mas tento sempre novas receitas através de emendas parlamentares. A gente até conseguiu, mas o difícil é liberar”.\nSegundo o consultor da Aprece, Irineu Carvalho, não há expectativa para uma recuperação total das perdas acumuladas nos últimos anos. “Isso vai depender muito do desempenho da economia. Se a economia não voltar a crescer essa crise vai ser perpétua”. Para ele, consequência da perda financeira dos municípios é a redução de investimentos públicos e as dificuldades na oferta de serviços prestados.\n“Será um momento fundamental, não só para aproximar os prefeitos e a bancada, mas (para) promover um importante debate em torno de temas capazes de fortalecer as gestões municipais e fomentar o desenvolvimento dos municípios cearenses”, espera o presidente da Aprece, Nilson Diniz, prefeito de Cedro.\nSegundo ele, todos os 22 deputados federais cearenses foram convidados para o encontro estadual que precede a próxima Marcha a Brasília em Defesa dos Municípios, marcada para abril. “Estamos contando com o apoio do próprio coordenador da bancada federal, deputado Domingos Neto, nesta importante mobilização. É fundamental que todos os prefeitos e prefeitas se articulem e sensibilizem seus deputados para garantir a participação de todos neste momento de luta em favor de nossos municípios”, sustenta.\nArtigos anteriores Juazeiro do Norte-CE: Recém-nascido com cardiopatia é transferido do São Lucas para o Hospital de Messejana\nPróximos artigos Cariri será a primeira região do interior a receber a Casa da Mulher\nDados do Departamento Estadual de Trânsito (Detran) revelam também que entre 2016 e 2018, …\nAbertas a partir de hoje, dia 31 de maio e vai até dia 14 de junho as inscrições para o pr…\nOs estudantes da rede pública de educação de Barbalha participaram de aulões promovidos pe…\nAs inscrições para o Exame Nacional do Ensino Médio (Enem) 2019 nesta segunda-feira (6), à…\nO livro ‘Juazeiro do Norte, Cidade da Gente, Estudos Regionais I e II’, lançad…


Maranhense que já visitou 143 países palestrará sobre superação\nO “Setembro Amarelo”, como é amplamente divulgado, caracteriza-se pela realização de caminhadas, conferências e outras ações de conscientização sobre o suicídio. Trata-se de uma campanha efetuada no Brasil desde 2014 pela Associação Brasileira de Psiquiatria (ABP), em parceria com o Conselho Federal de Medicina (CFM). Dentro desse contexto de reflexão, o 24º Batalhão de Infantaria de Selva (24º BIS), sediado em São Luís/MA, está realizando um ciclo de palestras sobre prevenção ao suicídio e valorização da vida. Amanhã (22), o engenheiro agrônomo Luiz Thadeu Nunes e Silva, de 61 anos, palestrará sobre superação. Ele é o brasileiro com mobilidade reduzida que mais viajou no mundo.\nThadeu se superou e já visitou 143 países em todos os continentes (Foto: Arquivo Pessoal)\nA palestra, de acordo com informações de Luiz Thadeu, será realizada no Salão Principal da Igreja Universal do Reino de Deus, na Rua Grande (Rua Oswaldo Cruz), Canto da Fabril, nas proximidades da Faculdade Estácio. O evento será iniciado por volta das 13h, sendo que terá a presença de pelo menos 1 mil pessoas convidadas, incluindo integrantes do Exército, Marinha e Aeronáutica, que constituem as Forças Armadas. Primeiramente, um general, de nome Luiz Henrique Moura Barreto, discursará, em teor motivacional, sobre a felicidade, tema que está evidentemente relacionado à valorização da vida. O oficial realizará o ato diretamente de Brasília, no Distrito Federal.\nEm seguida, será a vez de Luiz Thadeu, conhecido como “Marco Polo moderno”, iniciar sua palestra. “Falarei sobre minha experiência e minha vida de superação após quatro anos sem andar e ter passado por 43 cirurgias. Eu me reinventei e comecei a andar pelo mundo, superando minhas limitações físicas. Hoje, sou o brasileiro mais viajado do mundo com mobilidade reduzida”, frisou o engenheiro agrônomo, considerado um “wanderlust”, termo alemão que se refere às pessoas que adoram viajar, conhecer novos lugares e interagir com outras culturas.\nO "Marco Polo moderno" conhece como ninguém o planeta Terra (Foto: Arquivo Pessoal)\nA vida de Thadeu é um exemplo de superação para brasileiros, argentinos, cubanos, franceses, italianos, australianos, egípcios e assim sucessivamente. Por onde passou, deixou saudades e um pouco de sua experiência. O “Marco Polo moderno” não se entregou ao sofrimento e ganhou o mundo, literalmente. Em outubro de 2019, inclusive, foi lançado um selo dos Correios, no Aeroporto Internacional Marechal Cunha Machado, em São Luís/MA, em homenagem ao maranhense, que possui mobilidade reduzida em decorrência de um acidente de trânsito que sofreu em 2003. Em janeiro do mesmo ano, ele já havia recebido uma placa celebrativa no mesmo local, quando completou 130 países visitados.\nThadeu está no topo do mundo porque não se entregou ao sofrimento (Foto: Arquivo Pessoal)\nA história do “Marco Polo moderno” começou, no se refere à sua vida como “wanderlust”, em 2009, quando foi à Europa, ao encontro do filho, que estudava inglês em um intercâmbio. Naquela ocasião, Luiz Thadeu viajou com ele em oito países, sendo sete europeus e um africano, que é o Marrocos. Antes dessa saga, no entanto, o engenheiro agrônomo permaneceu durante quatro anos no Maranhão, em virtude de tratamento e cirurgias concernentes ao acidente de trânsito.\nSelo dos Correios que foi confeccionado em homenagem a Thadeu no Aeroporto de São Luís\n“Esse acidente aconteceu no interior do Rio Grande do Norte, em 2003. Eu estava dentro de um táxi. O motorista perdeu o controle da direção depois que atendeu ao celular enquanto dirigia. Ele jogou o carro para o meu lado. Sofri fratura exposta no fêmur”, relembrou Luiz Thadeu em uma entrevista que me concedeu quando eu trabalhava no Jornal O Estado, em 2019. Como resultado disso, adquiriu uma infecção óssea. Durante quatro anos, não caminhou e foi submetido a 43 cirurgias. O tratamento na perna foi intenso.\nPor onde passa Luiz Thadeu conquista as pessoas devido à sua alegria (Foto: Arquivo Pessoal)\nDa queda, o engenheiro agrônomo se levantou mais forte e, desde então, pode ser comparado ao mercador veneziano Marco Polo, que passou 24 anos viajando pelo mundo, enfrentando muitas adversidades, entre os séculos XIII e XIV. Luiz Thadeu é o exemplo de ser humano que vislumbra uma luz no fim do túnel em qualquer situação, não importando se o copo está vazio ou preenchido. Para ele, as barreiras não são intransponíveis, sendo percebidas como muros transparentes que dão acesso definitivo à felicidade.\nEntrevistei o viajante Luiz Thadeu no ano passado quando eu era repórter do Jornal O Estado


DHL usa van elétrica para distribuir produtos em São Paulo -\nInícioSem categoriaDHL usa van elétrica para distribuir produtos em São Paulo\n17 de julho de 2018 Redação Futuretransport Sem categoria, Transporte e Logística, Veículos elétricos 0\nA DHL Supply Chain, empresa do Grupo Deutsche Post DHL que atua com logística, armazenagem e distribuição, está utilizando uma van elétrica da BYD na distribuição de produtos para empresas do ramo do varejo, consumo, tecnologia e saúde na Grande São Paulo e região de Campinas (SP). O veículo elétrico começou a ser utilizado para fazer entregas no Rio de Janeiro, agora foi introduzido em São Paulo e a empresa pretende expandir esta opção para outros clientes de diversos setores.\nModelo escolhido para operar em São Paulo é o mesmo que a DHL já utiliza na China\nO modelo escolhido para realizar as entregas no Brasil é um BYD T3, com capacidade de carga de 750 kg ou 3.330 litros, com dois ocupantes. O veículo tem autonomia de até 250 km e pode atingir até 130 km/h de velocidade máxima. A bateria tem capacidade de armazenamento de 48 kWh, com tempo de recarga de até duas horas, e o freio motor utiliza a tecnologia regenerativa, aproveitando a energia gerada no processo de frenagem. A DHL instalou pontos especiais de recarga em seu campus de Louveira (munícipio localizado entre Campinas e a capital paulista).\n“Fora do Brasil, já utilizamos esses veículos há algum tempo. Especificamente no Brasil, utilizamos em uma solução last mile em 2014. O resultado foi tão bom que a operação foi mantida”, conta Fabio Miquelin, diretor sênior de transportes da DHL Supply Chain Brasil. Entre as vantagens do uso do veículos elétricos, o executivo destaca a ‘zero emissão’, de gases nocivos ao meio ambiente, o que contribui com as metas de redução de clientes e com a estratégia de sustentabilidade da própria DHL – Go Green. Outra grande vantagem é a redução da poluição sonora, uma vez que os motores elétricos são muito silenciosos. “Logo, o uso deste tipo de veículo traz grandes benefícios à sociedade e para a distribuição de cargas nos centros urbanos”, diz. Essa iniciativa local deverá ajudar também o Deutsche Post DHL Group a atingir sua meta global de zerar a emissão de carbono até 2050.\n“O carro elétrico não apenas chama atenção por onde passa – por seu ineditismo no Brasil – como traz muitas vantagens práticas. O som que ele emite é apenas do atrito do pneu com o asfalto. Para os condutores, ele oferece grande conforto interno, regulagem de volante, além de ser muito estável e desenvolver boas velocidades. Por fim, por ser elétrico, ele não tem restrições para trafegar na Zona de Máxima Restrição de Circulação de São Paulo”, completa Miquelin.\nNa mesma linha, o Grupo Deutsche Post DHL e a Ford apresentaram recentemente, na Alemanha, o primeiro dos seus furgões elétricos de distribuição, ou “e-van”, produzido conjuntamente. O veículo, denominado StreetScooter Work XL, usa como base um chassi da Ford Transit, com sistema de transmissão elétrico a bateria e carroceria desenhada e construída de acordo com as especificações da Deutsche Post DHL. A Deutsche Post DHL usará as e-vans como apoio a seu serviço de distribuição urbana de encomendas na Alemanha.\nStreetScooter Work XL, usa como base um chassi da Ford Transit\nCada Work XL pode reduzir cerca de 5 toneladas de CO2 e economizar 1.900 litros de diesel por ano. Com o plano de 2.500 veículos em operação, isso resultaria em uma redução total de 12.500 toneladas de CO2 e 4,75 milhões de litros de combustível por ano. O Work XL terá um volume de carga de 20 metros cúbicos e espaço para acomodar mais de 200 encomendas. A e-van é equipada com um sistema de bateria modular disponibilizando entre 30 a 90 kWh de potência, com autonomia entre 80 km e 200 km.\nO Grupo Deutsche Post DHL tem hoje, além do novo modelo Work XL, mais de 5.500 veículos elétricos StreetScooter Work e Work L, além de cerca de 10.500 pedelecs (bicicletas elétricas) em operação, destacando o grupo como um dos maiores operadores de e-frota da Alemanha.


Ministro da Ciência se diz apreensivo com julgamento sobre células-tronco | Blog do Boock\nMinistro da Ciência se diz apreensivo com julgamento sobre células-tronco\nGoverno não tem ‘plano B’ caso Supremo decida impedir as pesquisas.\nMinistro não esperava tantos votos restringindo os estudos na área.\nEstou apreensivo porque nós estávamos certos de que o ministro Direito (Carlos Aberto Direito) fosse votar contra. Já esperávamos que desde ontem tivéssemos maioria de votos a favor. Então, o fato de terminado a sessão de ontem empatada está deixando todos nós muito preocupados, disse Rezende, que mesmo assim se manifestou esperançoso de que o Supremo decida pela liberação das pesquisas.\nResende ainda contestou a sugestão do ministro Direito para a criação de um órgão para gerir este tipo de pesquisa. Não precisamos de outro órgão além da CNTBio. Temos que solidificar a CNTBio, comentou sobre a Comissão Técnica Nacional de Biossegurança.\n« Danos à natureza ‘cortarão padrão de vida de pobres’ A comida que Deus recomenda »


Endereço IP Local Do Meu Computador 2021 - btfs.se\nComo descobrir o número do IP do meu computador - TecMundo.\n01/07/2014 · Assim, para descobrir o endereço de IP interno do seu computador basta seguir as orientações: 1 Para quem faz uso do Windows 8 basta clicar com o botão direito do mouse sobre o canto inferior esquerdo da tela e na janela que abrir clicar em "Promt de Comando". 02/10/2014 · O Sinônimo de IP Local se refere ao IP que o seu Provedor de Internet oferece, a qual você pode saber por esse site:.br Em relação ao Gateway Padrão e IPv4, um é o IP do Roteador Gateway e o outro é IP da máquina que você está usando IPv4. A localização do IP por geoip também pode ser utilizada em sistemas anti-fraude. Em uma compra por cartão de crédito na Internet, a instituição responsável por autorizar a transação pode cruzar os dados do proprietário do cartão como seu país com a localização do IP de onde partiu a compra. 14/01/2014 · O IP é um número que identifica o computador em uma rede, seja na internet, rede local ou empresarial. Sem um IP, o PC fica invisível para as outras máquinas conectadas e, assim, não será possível compartilhar arquivos e conexões. Por alguns motivos, é necessário trocar o IP da máquina. 15/05/2012 · Ali, procure o comando “Gateway Padrão IPv4”, uma vez que é ele quem traz o endereço de IP do seu roteador. Pronto, agora você já sabe como descobrir o IP do roteador da rede na qual você está inserido. Lembre-se de que, ao realizar mudanças nas configurações do aparelho, você pode comprometer o funcionamento de toda a rede.\n29/04/2016 · Veja como descobrir o IP do seu computador de forma fácil e rápida. IP significa "Internet Protocol" e é um número que identifica um dispositivo em uma rede. Estes dispositivos são parte de uma rede e são identificados por um número de IP único na rede. O endereço IP é composto por 4 números até 3 dígitos e separados. O painel de Configurações de Rede mostra-nos de forma bem limpa e direta e permite salvar como ver o ip do pc, e toda a configuração dos adaptadores de rede que seu computador possuir, assim você pode optar como eu a não usar o prompt de comandos do Windows 10. Como descobrir meu endereço IP no Windows.\nSe você estiver usando um computador Mac OS X com mais de um adaptador de rede físico, será necessário utilizar o endereço do adaptador de rede principal. Nome do host: O identificador exclusivo que serve como nome do seu computador ou do servidor pode ter 255 caracteres e consiste em números e letras. No mesmo sentido em que alguém precisa de seu endereço para enviar uma carta, um computador remoto precisa do seu endereço IP para se conectar ao computador. A sigla "IP" vem do inglês e significa Internet Protocol ou Protocolo de Internet, sendo assim, um endereço IP é um protocolo de. IP Público: IP é chamado de endereço IP público que é visível a partir da Internet. É geralmente aquele com o seu roteador ou modem. IP Privado: O endereço IP privado é aquele que pertence a uma rede privada. Este é geralmente o IP da placa de rede do seu computador, uma impressora de rede ou o roteador de rede. 01/01/2019 · Os comandos abaixo irão ajudá-lo a encontrar o endereço IP do seu computador. O ipconfig no Windows ou o ifconfig no Linux darão o seu endereço IP. Mas se você estiver atrás de um roteador que faça NAT, isto não corresponderá ao seu endereço IP.\nSempre que ligamos um PC a uma rede local, este recebe um endereço IP de forma automática que o vai identificar de forma inequívoca nessa rede, e permitir que este comunique com outros dispositivos ligados à mesma. Através desse endereço podemos por exemplo, aceder remotamente a determinado PC para auxiliar na resolução de algum. Vai aaprecer várias informações da rede, a informação que interessa aparece dentro do campo “Endereço IPv4”, este é seu IP local. Como descobrir IP do meu computador Descobrindo IP público do computador. A maneira mais fácil de descobrir o IP público é acessando sites epecíficos. Desde ontem meu PC Windows 7 onde estão conectados o modem e o roteador vem apresentando problemas de REDE NÃO IDENTIFICADA e de IP INVÁLIDO. Como resolver? O engraçado é que apesar disso ontem a internet no celular e no notebook estava pegando normalmente, agora no entanto só a do notebook funciona.\nComo você pode saber se está mudando seu endereço local? Se você entrar nas configurações do seu sistema operacional para alterar seu endereço de IP manualmente, provavelmente está mudando o endereço de IP local. Este endereço é usado para se comunicar com outros computadores dentro de sua rede local, como em casa ou no trabalho.\n22/05/2018 · Saiba qual o seu endereço ip local e externo. Configurar IP é DNS do seu computador - Duration: 5:52. Mundo Conectado 786,517 views. 5:52. Como ver o endereço IP do seu celular Android - Duration: 1:28. Cuper Colored 100,114 views. 1:28. O que é um Endereço IP?\nO QUE É MEU IP? IP significa Internet Protocol e é um número que seu computador ou roteador recebe quando se conecta à Internet. É através desse número que seu computador é identificado e pode enviar e receber dados. Como rastrear um endereço IP · Como encontrar o endereço IP do seu PC · Como configurar um endereço IP estático Win XP · Como encontrar alguém através de seu endereço IP · Como encontrar o Internet Protocol IP Endereço de e Media Access Control MA · Como renovar o seu endereço IP no Windows para ajudar a sua conexão de.\nPortanto, o IP é uma informação muito valiosa para os hackers, pois conhecendo seu IP na internet, eles tem um endereço do seu computador na rede. A partir daí, é possível direcionar ataques para hackear o seu computador. Não apenas isso, é possível identificar. 02/11/2016 · Uma aula sobre como descobrir o endereço IP da rede local nos Windows 7, 8, 8.1 e 10, contendo também explicações básicas sobre a diferença entre o IP da rede local e IP da Internet. A maioria das redes locais usam endereços IP dinâmicos atribuídos pelo DHCP do roteador, mas às vezes você pode querer atribuir um endereço IP fixo para um computador, em vez de usar o endereço IP dinâmico. O IP fixo tem vários benefícios, como permitir que você configure programas com base no endereço IP dos computadores.\nMas, nesse post, problemas como não saber o endereço IP vão ser esclarecidos e resolvidos. Vamos mostrar como é possível descobrir o endereço IP do seu roteador facilmente. Antes de qualquer coisa, é preciso entender que sempre que você fica online, um endereço de IP é atribuído ao seu computador.\nComo configurar o TCP/IP Na propriedades do meu computador Windows XP, Vista, 7,8, Mac. Para verificar o endereço IP do computador,. Nota: Na maioria dos casos, digite os endereços IP de servidor DNS de área local para ele. O servidor DNS preferencial é o mesmo para o gateway padrão. O protocolo de internet TCP/IP atribui um endereço único de IP representado no formato ponto-decimal como 193.45.12.4 para cada computador ou servidor na rede. Na Internet, os servidores de sistema de nomes de domínios special domain name system - DNS traduzem nomes de computadores nos seus respectivos endereços. Olá, gostaria de descobrir o IP do meu DVR 3104 intelbras, ele está conectado com o PC através de um roteador D-Link DIR 165, só que não detecta o DVR, vi na internet que é problema de IP, mas não consigo identificar o IP do DVR nem alterá-lo. A luz LAN atrás do DVR acende. Gostaria de ajuda. Obr.\nPor outro lado, se você quer acessar seu computador através de uma rede externa, é preciso fazer alguns pequenos ajustes de direcionamento no seu roteador. Para isso, siga os passos: 1 - Abra seu navegador e digite o endereço IP do seu router. Por esse motivo cuidamos para que a informação meu IP seja fornecida com instruções de cabeçalho para não armazenar cache de outra conexão, evitando assim que o endereço IP fornecido seja o consultado em um acesso anterior feito pelo seu próprio computador, ou pior, através do computador de outro usuário que armazenou no cache do seu.\nComo descobrir o ip ou nome do meu servidor ? Clique no Iniciar e escolha a opção executar caso seu computador seja windows 7, e digite CMD conforme mostra figura abaixo. Tela windows xp: Tela Windows 7. Na sequencia abrirá a tela no prompt de comando basta digitar IPCONFIG ou HOSTNAME.


Como faço para mudar minha senha do portal do cliente\nEntre em contato com o serviço de atendimento ao cliente em [email protected]\nNão consigo lembrar minha identificação na Tickmill\nFechar uma conta de negociação\nSe você deseja fechar uma conta, envie-nos um e-mail para [email protected]\nDiferença entre contas "ativa" e "demonstração"\nUma conta de demonstração é uma forma livre de riscos para testar as funcionalidades da plataforma de negociação. Com uma conta ativa, você precisará depositar fundos, poderá acessar as bolsas de valores e negociar de verdade.\nPosso abrir uma conta corporativa e uma conta privada ao mesmo tempo?\nEntre em contato com o serviço de atendimento ao cliente para discutir suas solicitações.\nEu mantenho acesso à minha conta de demonstração depois de abrir uma conta ativa?\nSua conta de demonstração ficará ativa por 14 dias. É possível estendê-la por mais 14 dias enviando um e-mail para a equipe de atendimento ao cliente da Tickmill em [email protected] ou ligando para +44 203 995 2388.\nLeva minutos para submeter sua solicitação e nós ativaremos sua conta o mais rápido possível. Tudo que você precisará fazer após a aprovação é transferir fundos para sua conta e selecionar os mercados que você deseja negociar através da premiada plataforma CQG.\nPreciso fornecer documentos traduzidos para a abertura de conta?\nA documentação pode ser apresentada em inglês, árabe ou chinês.\nPosso abrir uma conta na Tickmill UK como residente dos EUA?\nInfelizmente, não podemos aceitar clientes dos EUA neste momento.\nCom quem posso falar se eu tiver perguntas específicas sobre suas ofertas?\nPor favor, envie um e-mail para a equipe de atendimento ao cliente da Tickmill em [email protected] ou contate-nos por telefone em +44 203 995 2388.\nVocês têm um programa de indicações?\nNão temos um programa de indicações no momento, entretanto você pode entrar em contato com a equipe de atendimento ao cliente da Tickmill para registrar seu interesse em que criemos um no futuro.\nEstou tentando abrir uma conta. 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Se você gostaria de ser informado sobre quando esta opção estiver disponível, por favor envie-nos um e-mail e nós lhe contataremos assim que essa opção estiver disponível\nQuais países podem ser aceitos para negociação de futuros na Tickmill?\nA Tickmill é uma corretora de valores global e fazemos o melhor para atender a todos os nossos clientes. Ocasionalmente, porém, os regulamentos nos impedem de oferecer nossos serviços em determinados países. Se você não conseguir encontrar seu país de residência no processo de abertura de conta, mas achar que cometemos um erro, por favor, envie um e-mail para [email protected].\nQuantas contas de futuros eu posso ter?\nAtualmente, há um limite de uma conta por pessoa.\nComo posso abrir uma conta de futuros?\nNossa conta de negociação fornece acesso a futuros negociados na premiada plataforma CQG. 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Devemos prestar a nossos clientes o melhor serviço possível e assim priorizar diferentes fatores na execução de ordens para clientes de varejo e profissionais. Os clientes profissionais podem não ter acesso ao serviço de ombudsman financeiro. Clientes de varejo e profissionais são protegidos pelo esquema de compensação de serviços financeiros (FSCS) até o valor de £ 85.000 em caso de inadimplência por parte da Tickmill UK Ltd.


por Stéfano Bozza · 11/08/2020\nStéfano Bozza 9 min de leitura - 11/08/2020\nA indústria bancária representa um dos setores mais importantes da economia brasileira. Não por acaso, ela possui participação relevante no Ibovespa, principal índice da Bolsa de Valores do Brasil.\nAo longo dos últimos anos, porém, algumas fintechs ganharam destaque e começaram a colocar em dúvida o tradicional sistema bancário. Afinal, os bancos estão ameaçados? Ou ainda vale a pena investir no segmento? É o que vamos responder neste artigo.\nBancos x fintechs: quem vai vencer?\nA grande preocupação dos investidores dos bancos está sobre o crescimento das pequenas empresas financeiras. Podemos mencionar aqui diversos exemplos como o Banco Inter, o Nubank ou o Next, por exemplo.\nApesar de um crescimento nítido, algo que fatalmente aumenta a competição, é importante que você entenda que isso não significa, nem de longe, que os bancos tradicionais vão acabar. Muito pelo contrário: na prática, podem surgir boas parcerias entre eles.\nHá ainda um longo caminho a percorrer no entendimento de como será o mercado no futuro. Os negócios inovadores das fintechs certamente incomodam o modelo antigo e que sempre funcionou dos grandes bancos. Ao mesmo tempo, trazem oportunidades, como a redução de custos com agências bancárias.\nVamos então entender como esse novo cenário para a indústria bancária se desenha em termos de investimentos. Começando, é claro, pelas vantagens oferecidas pelo segmento.\nQuais as vantagens de investir na indústria bancária?\nO setor bancário é, certamente, um dos favoritos dos investidores. E isso começa pelo seu alto poder de rentabilizar os investimentos. Os bancos, afinal, possuem como objetivo justamente o mesmo de qualquer acionista: gerar riqueza. O seu produto é o próprio capital.\nAssim, a estrutura desse tipo de empresa tem um propósito muito atrativo. Os seus custos são repassados aos seus clientes, gerando lucro nas operações financeiras. Essa diferença entre as taxas cobradas e pagas é chamada de spread e reflete em ganho de capital para a companhia.\nOutro ponto que costuma agradar os acionistas são os dividendos pagos pelas empresas do setor bancário. Historicamente, a distribuição de lucros é bem mais comum e recorrente do que em outros setores. É, portanto, uma boa opção para quem busca fluxo de caixa.\nComo está o cenário para a investir na indústria bancária?\nVamos então discutir a partir de agora alguns pontos que devem ser avaliados e monitorados pelo investidor da indústria bancária. Para facilitar a compreensão, dividimos essa análise em alguns tópicos, comentando cada um deles.\nCaso você fique com qualquer dúvida, a área de comentários está sempre disponível para você deixar sua pergunta.\nCompetição e market share\nAinda falando sobre as fintechs, temos então um cenário incerto sobre os efeitos do aumento da competição. Os grandes bancos, como Banco do Brasil, Bradesco ou Itaú, certamente precisarão rever alguns custos e processos.\nVale observar que as pequenas empresas do setor precisaram de ações arrojadas para entrar em um mercado amplamente dominado por algumas companhias tradicionais. Para isso, apelaram para contas isentas de taxas, cartões de crédito sem custos e uma menor burocracia. Além disso, os aplicativos são focados em experiência.\nÉ inegável que as iniciativas vêm trazendo bons resultados às fintechs. O gráfico abaixo, feito pela corretora XP Investimentos, mostra o crescimento de usuários de diversas companhias no primeiro trimestre de 2020. E os destaques, claro, são os bancos digitais.\nIsso vai exigir uma revisão completa por parte dos bancos tradicionais, empresas cujo modelo de negócios ainda apresenta alto custo aos usuários. Vai ser cada vez mais difícil conquistar clientes cobrando por conta e cartão de crédito, enquanto concorrentes isentam esses valores.\nPor outro lado, alguns fatores ainda desafiam as empresas digitais. Um deles é a lucratividade, muito abaixo do que conquistam os grandes bancos. Há casos de fintechs que ainda sequer conseguem gerar lucro pela necessidade de investir em crescimento.\nAlém disso, alguns mercados são mais difíceis de entrar, como é o caso do mercado de crédito. Segundo dados da XP Investimentos, Banco Inter e Nubank já possuem, juntos, 10% do market share da indústria bancária. No entanto, no mercado de crédito, eles representam menos de 2%.\nNovos entrantes no segmento\nAinda pensando em competição, não podemos ignorar um risco adicional de novos entrantes no mercado bancário. Ao longo do tópico anterior, mencionamos algumas companhias já consolidadas — o que não significa que novas empresas estão descartadas.\nEsse é um processo que já vem aumentando por meio do Banking as a Service, mecanismo pelo qual empresas não financeiras criam seus próprios bancos. Uma competição que não existia em período anterior.\nNeste sentido, não podemos ignorar o que ocorreu com a Cielo. A companhia era amplamente dominante no setor de máquinas de cartão de crédito, mas viu seus resultados despencarem com novos entrantes.\nNada indica, por enquanto, que o mesmo deve ocorrer com a indústria bancária (a qual, afinal, já oferece uma boa diversificação). No entanto, a perspectiva de longo prazo é de impacto negativo nos resultados dos grandes bancos pela perda da market share.\nA indústria bancária é, naturalmente, exposta à taxa de juros do Brasil. Quanto maior está a Taxa Selic, maiores são os custos de empréstimos e operações financeiras. Em outras palavras, o lucro dos bancos é maior.\nEm 2020, vivemos um cenário inédito, com a menor taxa de juros da história. Isso, claro, afetará os resultados dos bancos na medida em que a oferta de crédito fica mais barata ao consumidor.\nHá o risco, ainda muito baixo no Brasil, de chegar aos juros negativos — algo que acontece no Japão e na Europa, por exemplo. Por outro lado, bancos estrangeiros entregam resultado mesmo operando com juros baixos.\nCenário político e regulação\nAlgo que preocupa bastante os donos dos grandes bancos são as discussões regulatórias. De tempos em tempos, medidas são debatidas para aumentar os impostos para o setor, algo que afeta seus lucros.\nEm 2020, por exemplo, ocorreu o aumento da CSLL (Contribuição Social sobre o Lucro Líquido) para 20%. Há ainda discussões no Senado sobre limites para custos de cheque especial e crédito rotativo, duas grandes fontes de receitas para as companhias bancárias.\nIsso sem falar no risco político. Bancos estatais, como Banco do Brasil e Banrisul, estão expostos ao uso do governo. Ao mesmo tempo, tornam-se protegidos na medida em que uma quebra é extremamente improvável.\nA privatização é outro tema que surge com frequência, mas ainda nada sugere a aceleração do processo.\nOutro ponto a ser monitorado pela indústria bancária é a mudança de hábitos dos consumidores e, principalmente, como isso pode afetar resultados. Já comentamos, por exemplo, o crescimento de usuários das fintechs.\nO aumento de usuários das corretoras também é um risco. Muitos bancos oferecem produtos ruins, mas com altas taxas aos seus clientes. Trata-se, afinal, de uma boa fonte de geração de capital que, conforme o investidor amadurece, tende a cair — ou ao menos exige uma revisão dos custos cobrados.\nUma prova disso foi a polêmica recente que envolveu o Itaú. A empresa preparou um comercial com ataque às corretoras, mesmo sendo investidor da XP Investimentos. Um sinal de preocupação com a migração dos investidores.\nAfinal, vale a pena investir na indústria bancária?\nComo vimos ao longo do texto, existem diversos pontos que afetam os resultados da indústria bancária. E, antes de comprar qualquer ação, você deve compreender bem os efeitos gerados por cada um deles.\nA boa notícia é que os bancos, em especial aqueles de maior porte, representam algumas das empresas mais seguras dentro do cenário brasileiro. A nossa economia mais fechada, menos dependente do mercado externo, acaba por ser uma proteção.\nEm 2020, tivemos a oportunidade de comprovar a maturidade do setor. Praticamente todos os bancos listados na Bolsa de Valores reportaram resultados bem ruins, mas por uma boa causa: aumento da Provisão para Devedores Duvidosos (PDD), uma reserva de capital contra inadimplência. Prova da consciência sobre a importância do longo prazo em comparação a um resultado de curto prazo.\nIsso não significa que os riscos não devam ser monitorados pelo investidor. Bancos estão e estarão sempre expostos à inadimplência. Além disso, muitas das fontes de receitas passarão por revisão. Parece improvável que a cobrança pelo uso de cartão de crédito de mantenha com concorrentes isentando-a.\nNa mesma linha estão os custos dos bancos. Com bancos digitais consolidados, em especial o Banco Inter e o Nubank, diferenciais competitivos passam a ser ainda mais necessários. Há muita discussão sobre o futuro das agências físicas.\nLembrando que, ainda que você goste muito de uma companhia da indústria bancária, deve diversificar seus investimentos. Nada impede a composição de uma carteira com, por exemplo, dois grandes bancos, um banco de médio porte e um banco digital.\nDe qualquer forma, não enxergamos um viés negativo para o setor bancário. Muito pelo contrário: as companhias listadas na Bolsa de Valores são fortalecidas e possuem ótima estrutura de capital. É, portanto, um ótimo segmento para o investidor compor a sua carteira.\nO tal do COE (Certificado de Operações Estruturadas) é um investimento curioso. Às vezes parece…\n20/07/2017 · 15 min de leitura


Pnad 2012: desemprego caiu e renda aumentou! | VAGAS Profissões\nHome > Notícias > Pnad 2012: desemprego caiu e renda aumentou!\nPnad 2012: desemprego caiu e renda aumentou!\nDesemprego vem caindo há mais de uma década e rendimentos têm taxas maiores que a produto interno bruto. Estas são algumas das constatações da Pesquisa Nacional por Amostra de Domicílios (Pnad), divulgada pelo Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística (IBGE) no último dia 27. O levantamento é um recorte do Brasil no ano passado – foram visitados 147 mil domicílios e entrevistadas 363 mil pessoas.\nMesmo com a economia ruim de 2012 — o produto interno bruto (PIB) foi de 0,9% –, o mercado de trabalho brasileiro gerou 1,4 milhão de postos de trabalho naquele ano, entre formais e informais. A taxa de desemprego caiu: de 6,7% em 2011 para 6,1% em 2012. Este é o menor valor registrado desde 2001.\nAo observar os resultados por faixa etária, é possível encontrar um padrão: quanto maior a faixa de idade, menor o desemprego. Entre os jovens de 15 a 17 anos, o desemprego tem taxa de 21%; entre os trabalhadores de 18 a 24, 13,2%; de 25 a 49 anos, 4,8%; acima de 50 anos, 2,2%.\nEntre 15 e 17 anos: 21%\nEntre 18 e 24 anos: 13,2%\nEntre 25 e 49 anos: 4,8%\n50 anos ou mais: 2,2%\nO IBGE acredita que este fenômeno se deve ao fato de que trabalhadores mais jovens buscam trabalho com mais frequência e, consequentemente, encontram mais portas fechadas. Já os trabalhadores mais idosos buscam menos emprego, o que os torna menos suscetíveis ao índice, pois a taxa de desemprego inclui apenas pessoas que procuram emprego e não conseguem.\nO rendimento médio mensal do trabalhador teve um ganho real de 5,8% em relação ao ano anterior e chegou a R$ 1.507 em 2012 ante R$ 1.425 de 2011. O Centro-Oeste registrou o maior rendimento médio – R$ 1.803 –, enquanto o Nordeste manteve o pior valor – R$ 1.044. Em termos percentuais, contudo, o Nordeste foi a região com maior aumento em relação a 2011 – 8,1%.\nEntre as categorias de emprego, destacam-se os ganhos do trabalho doméstico com carteira assinada (10,8%) e sem carteira (8,4%). Os percentuais são animadores mas, na prática, a categoria ainda recebe os piores rendimentos – R$ 811 para os com carteira e R$ 491 para os sem carteira.\nOutro ponto que merece atenção na Pnad é a elevação no ganho das mulheres que, em comparação ao ganho dos homens, foi menor. Em 2012, elas tiveram aumento no rendimento de 5,1% em relação a 2011; os homens, 6,3%. Com isso, o rendimento médio do trabalho da mulher chegou a R$ 1.238 em 2012, ou seja, 72,9% do obtido pelos homens, R$ 1.698 – em 2011, o rendimento delas representava 73,7% do valor recebido por eles.\nSobre esta constatação, a coordenadora da pesquisa, Maria Lúcia Vieira, afirmou à Agência Brasil:\n“É preciso tomar um certo cuidado, porque nessa média a gente não está levando em consideração a função que ela exerce, a carga horária em que ela trabalha. O trabalho doméstico, por exemplo, tem normalmente rendimentos menores e é feito, em 98% dos casos, por mulheres. Já em algumas ocupações e cargos de chefia, os homens são maioria. É preciso tomar cuidado para não dizer que é simplesmente discriminação pelo sexo.”\nRendimento dos mais pobres\nÉ acirrada a desigualdade no âmbito do sexo. Por outro lado, na esfera social, o cenário é mais ameno.\nA desigualdade de renda registrou queda em 2012, ano em que o desempenho da economia foi fraco. O PIB não chegou a 1%, mas a renda per capita das famílias cresceu 7,9%. O destaque é a evolução dos ganhos das famílias mais carentes: os 10% mais pobres do Brasil tiveram aumento de 14% em seus rendimentos, segundo o Instituto de Pesquisa Econômica Aplicada (Ipea) em estudo baseado nos dados da Pnad.\nÀ Agência Brasil, o presidente do Ipea, Marcelo Neri, comenta o resultado:\n“Três milhões e meio de pessoas saíram da pobreza em 2012 e 1 milhão da extrema pobreza, em um ano em que o PIB cresceu pouco. Para a pobreza, o fundamental é o que acontece na base – cuja renda cresceu a ritmo chinês. O bolo aumentou com mais fermento para os mais pobres, especialmente para os mais pobres dos pobres.”\nA íntegra da Pnad pode ser acessada aqui.