Efeito dos extratos de Harpagohytum procumbens (garra-do-diabo) e suas frações na atividade da... - em HTML para LIVRE, página 1\nEfeito dos extratos de Harpagohytum procumbens (garra-do-diabo) e suas frações na atividade da... por Maria Cecilia Cattai Anauate - Versão HTML\n/ Inicio / Medicina / Efeito dos extratos de Harpagohytum procumbens (garra-do-diabo) e suas frações na atividade da...\nMaria Cecília Cattai Anauate\nEfeito dos extratos de Harpagohytum procumbens (garra-do-\ndiabo) e suas frações na atividade da COX-1 e COX-2 e na\nprodução de NO em sangue total\nOrientadora: Profa. Dra. Suzana Beatriz\nVeríssimo de Mello\n“QUANDO UMA CRIATURA HUMANA DESPERTA PARA\nUM GRANDE SONHO E SOBRE ELE LANÇA TODA A\nFORÇA DE SUA ALMA, TODO UNIVERSO CONSPIRA A\nUM AGRADECIMENTO ESPECIAL A MINHA AMIGA, MÁRCIA.\nPOR SUA ORIENTAÇÃO, DEDICAÇÃO E DISPONIBILIDADE EM\nCONSPIRAR AO MEU FAVOR NA REALIZAÇÃO DESSE SONHO.\nA MINHA FAMÍLIA MEUS AGRADECIMENTOS.\nAO MEU MARIDO, GILBERTO E MEUS FILHOS, RAFAEL E MARINA\nOBRIGADA PELO APOIO INCONDICIONAL NESSE PROJETO DE\nÀ Profa Dra Suzana Beatriz Veríssimo de Mello, minha orientadora, pelo\nacompanhamento, dedicação e orientação dos meus estudos.\nÀ Profa Dra Luce Maria Brandão Torres, pesquisadora do Instituto de Botânica\nde São Paulo, por sua importante participação no preparo do material vegetal utilizado nos ensaios in vitro.\nÀ Profa Dra Márcia Regina Braga, pesquisadora e chefe do Departamento de\nFisiologia do Instituto de Botânica de São Paulo, pelo incentivo, orientação, e por sua amizade e apoio na realização desse projeto.\nÀ Profa Dra Elaine Cardoso Monteiro Lopes, pesquisadora do Departamento de\nFisiologia do Instituto de Botânica de São Paulo, pela ajuda e especial participação.\nÀ Maria Aurora Gomes da Silva e à Maria de Fátima Almeida pelo carinho e pelo ensino dos protocolos experimentais e pela presteza no auxílio da realização dos procedimentos.\nA farmácia de manipulação, Pró-fórmula situada à Alameda do Jurupis, n0 1278, Moema por ter cedido gentilmente os extratos bruto hidro-alcoólico do Harpagophytum procumbens com certificado de atividade biológica e de procedência.\nÀ Tatiana Marques Ferreira da Rocha, aluna da Profa Luce do Instituto de\nBotânica de São Paulo pela ajuda na preparação e separação do material vegetal .\nÀ Maria de Fátima Correia da Silva pela ótima assistência de secretaria.\n1.2 Osteoartrite de coluna lombar…………………………………\n1.2.1Fisiopatologia da dor lombar…………………………………. 3\n1.3 Harpagophytum procumbens (Família Pedaliaceae)\n3. MATERIAIS E MÉTODOS........................................................\n3.1 Material vegetal......................................................................\n3.3 Ensaio em sangue total da atividade da COX-1 e COX-2 ......\n3.4 Ensaios in vitro........................................................................\n3.4.1 Avaliação da atividade da COX-1........................................\n3.4.2 Avaliação da atividade da COX-2........................................\n3.4.3 Quantificação de Tromboxano B2 e Prostaglandina E2.......\n3.4.4 Ensaios in vitro – efeitos do extrato bruto da garra-do-diabo\n3.4.5 Ensaios in vitro – efeitos das diferentes frações da garra-do-diabo 26\n3.5 Análise dos metabólitos do NO - NO -\n2 e NO3 ..................................\n3.6 Seleção das pacientes.......................................................\n3.6.1 Avaliação da flexibilidade da coluna lombar e questionários 29\nA - Medida da distância mão chão ............................................\nB - Teste de Thomas........................................................................ 29\nC – Questionário sobre a avaliação de saúde.................................. 30\nD – Questionário de incapacidade Roland Morris............................ 30\n3.6.2 Exames de Imagem........................................................................... 30\n3.7 Ensaio ex vivo.............................. ......................................................... 31\n3.8 Análises estatísticas............................................................................. 31\n4. RESULTADOS....................................................................................... 32\n4.1 Ensaio clínico………………………………………………………………. 32\n4.2 Ensaio in vitro ………………………………………………………………. 34\n4.2.1 Ensaio in vitro – efeito do extrato bruto da garra-do-diabo\n4.3 Ensaios ex vivem para avaliação da atividade da COX-1 e COX- 2\ne produção de NO em sangue total\n4.4 Efeitos das diferentes frações do extrato da garra-do-diabo na\natividade da COX-1 e COX-2 e produção de NO\n5. DISCUSSÃO………………………………………………………………… 41\n6. CONCLUSÕES........................................................................................ 46\n7. ANEXOS................................................................................................... 47\n8. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS...............................................\nAINH = antiinflamatórias não hormonais\nAR = artrite reumatóide\nCCDC = cromatografia de camada delgada comparativa\nCCDP = cromatografia de camada delgada preparativa\nCHCl3: MeOH = clorofórmio : metanol\nCLAE = cromatografia líquida de alta eficiência\ncNOS = óxido nítrico sintase constitutiva\nCOX-1 = ciclooxigenase 1\nCOX-2 = ciclooxigenase 2\nDMC = distância mão chão\nEVA = escala visual analógica\nFR = fator reumatóide\nHAQ = questionário de saúde\nHPLC = high performance liquid cromatography\n1 HRMN = ressonância nuclear magnético de hidrogênio\nIGF = fator de crescimento I similar à insulina\nIC50 = concentração inibitória\nIL-1β = interleucina 1 β\nIL-1 ra = receptor anti-interleucina 1\niNOS = óxido nítrico sintase induzida\nINSS = Instituto Nacional do Sistema de Saúde\nLPS = lipopolissacarídeo\nLOX = lipooxigenase\nLT = leucotrieno\nMEC = matriz extracelular\nMMP = metaloproteinase da matriz\nM/V = massa/ volume\nNF-кB = fator nuclear kb\nNO = óxido nítrico\n2 = nitrito\n3 = nitrato\nNOS = óxido nítrico sintase\nOA = osteoartrite\n2 = anion superóxido\nONOO - = anion peróxinitrato\nPGs = prostaglandinas\nPGH2 = prostaglandina endoperóxido H2\nPGI2 = prostaciclina\nPMN = polimorfonuclear\nRfs = fator de referência\nRM = questionário de incapacidade Roland Morris\nRNAm = ribossoma nuclear mensageiro\nRNM = ressonância nuclear magnético\nRPM = rotação por minuto\nTIMP = inibidor tecidual de metaloproteinase\nTGF-β = fator de transformador de crescimento\nTMS = tetrametilsilano\nTNF-α = fator de necrose tumoral – alfa\nTX = tromboxano\nVHS = velocidade de hemosedimentação\nWOMAC = Western Ontário and MacMaster Universities Osteoarthritis Index\nAnauate MCC. Efeitos dos extratos de Harpagophytum procumbens (garra-do-diabo) e suas frações na atividade da COX-1 e COX-2 e produção de NO em sangue total\n[tese]. São Paulo; Faculdade de Medicina, Universidade de São Paulo; 2007.\nOBJETIVO: O presente estudo avaliou o efeito dos extratos de H. procumbens e suas frações na atividade da COX-1 e COX-2 e produção de NO em ensaio de sangue total de voluntários sadios e pacientes com OA. MÉTODOS: A atividade da COX-1 foi\ndeterminada através da produção de TxB2 por plaquetas e da COX-2 pela produção de PGE\n2 por monócitos estimulados por LPS. A produção de NO2 /NO3 foi determinada por reação de Griess. Os ensaios in vitro foram realizados por incubação do extrato do extrato de H.procumbens e frações em sangue total. Os controles inibidores da atividade da COX-1 e COX-2 foram indometacina e etoricoxibe. A atividade enzimática das COXs e produção de NO foram avaliadas antes e após o tratamento com garra-do-diabo em pacientes com OA de coluna lombar. RESULTADOS: O tratamento com\ngarra-do-diabo foi eficaz clinicamente e aumentou a atividade da COX-1 e COX-2 basal sem LPS. O extrato bruto do H. procumbens não alterou a atividade das COX.\nEntretanto, o harpagosideo inibiu a atividade da COX-1, COX-2 e a produção de NO.\nCONCLUSÃO: A garra-do-diabo mostrou-se eficaz no tratamento de pacientes com OA de coluna lombar. O harpagosideo deve ser alvo estudos específicos.\nDescritores: 1.Osteoartrite 2.Ciclooxigenase 1 3.Ciclooxigenase 2 4.Óxido nítrico 5. Harpagophytum procumbens 6. Iridóides/ uso terapêutico.\nAnauate MCC. EFFECTS OF HARPAGOPHYTUM PROCUMBENS (DEVIL’S CLAW)\nEXTRACTS AND ITS FRACTIONS ON COX-1 AND COX-2 ACTIVITY AND NITRIC\nOXIDE PRODUCTION IN WHOLE BLOOD\nOBJECTIVE: The present study evaluated the effect of H. procumbens extracts and its fractions on COX-1 and COX-2 activity and NO production in whole blood assays of volunteers and OA patients . METHODS: The COX-1 and COX-2 activity was quantified as platelet TXB2 production in blood clotting and as PGE2 production in heparinized LPS-stimulated whole blood, respectively. Total NO -\n2 /NO3 was determined by Griess\nreaction. In vitro assays were performed through incubation of the extract and fractions with whole blood from volunteers. Controls of the inhibition of COX-1 and COX-2 activity were indomethacin and etoricoxib. Before and after treating OA lumbar spine patients with devil’s claw the COX-1 and COX-2 activity and NO production were evaluated in their whole blood. RESULTS: The treatment promoted clinical improvement and\nincrease in the activity of COX-1 and basal COX-2, without LPS. The crude extract did not affect the activity of both enzymes. However, harpagoside inhibited COX-1 and COX-2 activity and NO production. CONCLUSION: Devil’s claw promoted clinical\nimprovement of OA patients and harpagoside must be focus of specific studies.\nDescriptors: 1.Osteoarthritis. 2. Ciclooxygenase 1. 3. Ciclooxygenase 2. 4. Nitric oxide.\n5. Harpagophytum procumbens. 6. Iridoids /therapeutic use.\nA Osteoartrite (OA) pode ser definida como um grupo heterogêneo de alterações na cartilagem articular e no osso subcondral. Apesar de diversas etiologias, tem características clínicas, radiológicas, biológicas e patológicas semelhantes (Brandt et al., 2003). É a doença articular mais comum e no Brasil tem prevalência de cerca de 20% e, de acordo com os dados do INSS, é responsável por 7,5% de todos os\nafastamentos do trabalho. As mulheres apresentam uma suscetibilidade maior ao desenvolvimento da doença e as mulheres negras são as mais propensas (Seda et al., 2001).\nO quadro inicial da OA é dinâmico, marcado pela alteração no equilíbrio entre a reparação da cartilagem articular e do osso subcondral e a sua degradação. Os fatores de crescimento IGF-1 e TGF-β, que são citocinas anabólicas, estimulam a síntese de proteoglicanos e colágeno, que desempenham papel fundamental na tentativa de\nreparação da matriz cartilaginosa e esse processo leva ao espessamento cartilaginoso.\nA secreção das citocinas inflamatórias (IL-1 e TNF-α), bem como da citocina\nmodulatória (IL-6), pelos condrócitos parece ser a principal responsável pelo aumento da produção das metaloproteinases matriciais (MMPs), de seus ativadores e do inibidor tecidual das metaloproteinases (TIPMs) (Figura 1). Com o aumento da liberação dessas enzimas, ocorrem alterações nas propriedades fisiológicas da cartilagem (Fernandes et al., 2002). Com a evolução do processo, a superfície da cartilagem torna-se áspera e/ou desgastada com a formação de fissuras (fibrilação) e erosões, com exposição do osso subcondral. Após o desgaste da cartilagem, ocorre uma\nneoformação óssea e o resultado final é a alteração da função articular. A inflamação é um elemento fundamental na fisiopatologia da OA, pois acelera o catabolismo da cartilagem (Berenbaum et al., 2001).\nO quadro clínico é geralmente insidioso e caracterizado por dor articular\nprotocinética (antes da movimentação), acompanhada de aumento da sensibilidade articular e limitação do movimento (Long et al., 2001).\nRegulação da síntese e degradação da cartilagem\nDegradação da cartilagem\nApoptose dos condrócitos\nExpressão de IL-1ra, TIPM, colágeno tipo II\nSíntese das MMPs\nSíntese dos eicosanóides\nRegulação da expressão do IL-1 receptor\nAntagonistas do receptor de IL-1(IL-1ra) a as proteases inibitórias (TIMP-1,\nTIMP-2 e α – 2-macroglobulinas) podem diminuir o processo de degradação da\nFigura 1 - Processo de remodelação da cartilagem. Na OA existe aumento das enzimas degradativas, com desequilíbrio que leva ao desarranjo do colágeno e dos proteoglicanos da matriz.\n1.2 OA de coluna lombar\nDor lombar ou lombalgia pode ser definida como dor, tensão muscular ou\nsensibilidade localizada abaixo da margem das costelas e acima da borda inferior dos glúteos com ou sem irradiação da dor para a perna. Embora o episódio agudo de dor lombar seja freqüente e permaneça geralmente menos que três meses, os episódios recorrentes são responsáveis pela incapacidade física e alterações psicológicas (Chrubasika et al., 2003). A OA é a principal causa de incapacidade física nos países industrializados, sendo a segunda causa de procura por assistência médica entre as doenças crônicas. Os fatores de risco para ocorrência de dor lombar estão\nrelacionados à idade, sexo, tabagismo, etc. O estresse, a dor, o humor depressivo e as funções cognitivas são os fatores psicossociais que influenciam o aparecimento da dor (Chantre et al., 2000).\n1.2.1 Fisiopatologia da dor lombar\nAs fontes potenciais de lombalgia incluem os discos intervertebrais, articulações das facetas, vértebras, estruturas neurais, músculos, ligamentos e fáscia. Os mecanismos e as vias pelas quais os processos degenerativos do disco intervertebral levam ao quadro doloroso ainda não estão bem compreendidos (Biyani et al., 2004).\nO disco intervertebral é composto de tecido fibrocartilaginoso que apresenta\npropriedades mecânicas de absorção e dissipação das cargas da coluna lombar,\npermitindo o seu movimento suave. Possui estrutura única composta por um núcleo pulposo gelatinoso interno circundado por um anulo fibroso externo. No processo de envelhecimento ocorre uma desidratação do núcleo pulposo com diminuição do\nnúmero de células da matriz cartilaginosa extracelular (MEC) e da concentração dos proteoglicanos. A presença de co-morbidade tais como diabetes, doenças vasculares e o fumo podem acelerar o processo degenerativo (Biyani et al., 2004).\nA mudança na estrutura do disco altera sua resposta à sobrecarga e o\nalinhamento da coluna vertebral em repouso, transformando as articulações facetárias, os ligamentos e os músculos para-vertebrais em fontes adicionais de dor. As mudanças do disco na forma e no volume ocorrem com o envelhecimento a partir dos 50 anos (Biyani et al., 2004) (Figura 2).\nFigura 2 - Coluna lombar com aspecto normal (A) e com mudanças no volume e na forma do disco intervertebral (B), sinais de degeneração que ocorrem quase universalmente com o envelhecimento.\nOs eventos bioquímicos que ocorrem com a degeneração do disco\nintervertebral, em particular o papel dos mediadores químicos envolvidos na regulação do processo inflamatório, como a interleucina -1 (IL-1) e fator de necrose tumoral-α\n(TNF- α), tromboxano A2 (TxA2) e óxido nítrico (NO), têm sido apontados como fontes geradoras de dor na região lombar (Takayashi et al., 1996) (Figura 3).\nA ação da IL-1 está relacionada ao aumento dos fatores de catabolismo nos\ncondrócitos, como as MMPs e o NO, levando a um dano da MEC. Através da\nestimulação da IL-1, ocorre aumento da expressão das formas indutíveis das enzimas óxido nítrico sintase (iNOS) e ciclooxigenase 2 (COX-2) nos condrócitos (Amin et al.,1999). A participação do NO como mediador na lesão do disco intervertebral e a sua relação com o envelhecimento e a doença degenerativa do disco intervertebral ainda não são totalmente compreendidas. Além disso, o aumento na produção de NO diminui os níveis do inibidor natural da IL-1, o antagonista de receptor IL-1 que é uma citocina 5\nanticatabólica, produzindo aumento ainda maior na concentração dessas citocina no local da inflamação (Solovieva et al., 2004). A compressão mecânica da cartilagem aumenta a produção de COX-2 e PGE2, através de uma via nitrito dependente\n(Takayashi et al., 1996).\nDor - Inflamação\nprodução de NO\nIL-1 ,IL-6 e TNF-α\nFigura 3 - Relação entre os mediadores químicos responsáveis pela produção de dor e inflamação.\nO NO é um radical livre gasoso liberado nos tecidos por duas classes diferentes de enzimas sintases (NOS), uma constitutiva (cNOS) e outra forma enzimática induzida (iNOS), cuja síntese é estimulada por fatores imunológicos, é citosólica e cálcio independente. Essa forma enzimática é produzida por macrófagos, polimorfonucleares (PMN), células endoteliais, hepatócitos, fibroblastos, condrócitos e sinoviócitos (Stefanovic-Racic et al., 1994), com implicações na inflamação. A inibição da produção do NO, principalmente o gerado pela iNOS, pode ter um valor terapêutico\nparticularmente durante a inflamação e o choque séptico (Kim et al.,1999). O NO é capaz de reagir rapidamente com o ânion superóxido (O2 -) e essa reação é capaz de gerar outros radicais destrutivos. O peróxinitrato (ONOO–) em especial, que quando 6\nprotonado pode ser decomposto e formar o radical OH, com grande capacidade\noxidante. Sendo assim, a produção dessas espécies reativas de nitrogênio pode estar ligada à destruição tecidual que ocorre durante o processo inflamatório e,\nparticularmente, no dano articular (Su et al., 1996). Adicionalmente, a liberação endógena de NO aumenta a atividade da enzima COX macrofágica que pode resultar na produção de PG pró-inflamatórias (Mello et al., 2000). (Figura 4). A modulação da produção de NO e o conhecimento do seu papel fisiológico e a sua participação nas doenças cardiovasculares e inflamatórias pode ser outra estratégia terapêutica essencial para o desenvolvimento de drogas no tratamento de doenças inflamatórias crônicas (Kang et al., 1996).\nentre a síntes\nese de PGs e de NO\nO - + NO ONOO\n2 + NO ONOO-\nasodilatação, Dor e Cito\nFigura 4 - Relação entre a síntese das prostaglandinas e a produção de NO.\nA liberação dos AA por ação da fosfolipase A2, que hidrolisa fosfolipídios da membrana celular, serve como substrato para duas vias enzimáticas distintas: a via das COXs, que desencadeia a síntese das PGs e dos TXs, e a via das lipooxigenases (LOX), responsável pela síntese dos LT. A síntese das PG inicia-se com a atividade da 7\nCOX catalisando a adição do O2 molecular ao AA para formar PGH2. O metabolismo da PGH2 pelas enzimas isomerases teciduais específicas leva à formação de um produto final biologicamente ativo e localmente específico como as PGE2 expressa nos\nsinoviócitos e TxA2 presente nas plaquetas incluindo também a formação de PGD2, PGF2 e PGI2 (Penglis et al., 2000).\nA COX, enzima chave que catalisa a síntese das PG, também conhecida como\nPGG/H sintase, possui duas isoformas distintas bastante similares: a COX-1 e COX-2.\nAs duas isoformas são expressas a partir de dois genes diferentes, possuem estrutura protéica primária similar e catalisam essencialmente a mesma reação. A COX-1 foi a primeira a ser caracterizada e é expressa constitutivamente, ou seja, está presente nas células em condições fisiológicas, principalmente nos vasos sangüíneos, plaquetas, estômago e rins. As PGs que são derivadas da COX-1 têm papel importante na\nhomeostasia e participam da proteção celular da mucosa gástrica, da hemodinâmica renal e trombogênese plaquetária. Por outro lado, as PGs derivadas da COX-2\ncontribuem de forma mais significativa para os processos de inflamação e malignidade.\nA COX-2 pode ser induzida na presença de citocinas (IL-1, IL-2 e do TNF-α), ésteres do forbol, fatores de crescimento e endotoxinas, sendo expressa caracteristicamente nas células envolvidas no processo inflamatório, como macrófagos, monócitos e sinoviócitos (Penglis et al., 2000). Entretanto, achados mais recentes mostram que a COX-2 pode ser expressa constitutivamente nos vasos renais, na mácula densa\ncortical, nas células intersticiais dos rins, no ducto coletor e na porção delgada da alça de Henle, na traquéia e no sistema nervoso central. A COX-2 pode também ser\nmediadora nas funções fisiológicas do endotélio vascular. A liberação da prostaciclina (PGI2), resultante da metabolização da AA pela COX-2 endotelial, desempenha papel importante no mecanismo de defesa homeostático que promove vasodilatação,\nfibrinólise e limita a ativação plaquetária. O eicosanoide produzido pela metabolização do AA através da COX-1, o TXA2, promove vasoconstrição e agregação plaquetária. É\nimportante salientar que, o envelhecimento pode aumentar a expressão de COX-2 em determinadas áreas, e a conseqüente produção de PG fisiológica passar a ser atributo 8\ndessa enzima, tornando-se, portanto, arriscada a inibição completa da atividade da mesma com drogas de ação seletiva (Salinas et al.,2007) .\nUma terceira isoforma de COX, COX-3, foi recentemente descoberta em cães; é produzida pelo gene da COX-1 e é expressa no córtex cerebral e coração. É\nseletivamente inibida pelas drogas analgésicas e antitérmicas como o acetaminofen e dipirona e pode ser inibida por certos antiinflamatórios não hormonais (AINHs). Ainda não está claro se os AINHs inibidores seletivos da COX-2 também inibem a COX-3 e se essa inibição pode ser um mecanismo primário central através do quais essas drogas diminuem a dor e, provavelmente, a febre (Chaiamnuay et al., 2006).\nA inibição da atividade das COXs, COX-1 e/ou COX-2, é o principal alvo das\ndrogas AINHs impedindo a formação de PG. As inibições não seletivas das isoenzimas COXs levam a efeitos terapêuticos benéficos, mas também a grande número de efeitos adversos. Os efeitos adversos gastrintestinais dos AINHs estão associados à\nsupressão da expressão constitutiva da COX-1, resultando em lesão gástrica,\nhemorragia e ulceração. Teoricamente, a inibição seletiva da COX-2 nas células inflamatórias poderia ter efeitos favoráveis, mas efetivamente essa inibição nos vasos sangüíneos, cérebro e coração pode ter efeitos deletérios. A inibição seletiva da COX-2\npode levar a um desequilíbrio entre as PGI2 e TXA2 que pode ser resumido pelo aumento do risco de eventos cardiovasculares, levando a vasoconstricção e trombose.\nSendo assim, todos AINHs apresentam algum risco cardiovascular mas com diferentes gradientes de gravidade, que dependem do seu grau de seletividade de inibição da COX-2 que irá gerar um desequilíbrio maior ou menor entre as duas PGs. Em relação à pressão arterial, os inibidores seletivos da COX-2 podem transitoriamente induzir uma elevação de leve a moderada na pressão sangüínea pela diminuição da excreção de sódio urinário. Isso pode contribuir também para o aumento do risco cardiovascular.\nEssa alteração da pressão arterial pode também ser observada com o uso de AINHs tradicionais (Chaiamnuay et al.,2006).\nHarpagophytum procumbens [Burch] DC Ex Meissn. (garra-do-diabo) é uma espécie vegetal da família Pedaliaceae (Figura 5) e juntamente com H. zeyheri representam as duas únicas espécies do gênero. Originária do deserto de Kalahari, das estepes da Namíbia, Botswana e África do Sul (Brien et al., 2006), não é, portanto uma planta nativa do Brasil. H. procumbens é uma planta herbácea perene, conhecida popularmente como garra-do-diabo ou unha-de-diabo, nome dado em função do\naspecto ramoso e lenhoso do fruto, provido de barbas semelhantes a garras. As raízes tuberosas primárias e secundárias de ambas as espécies são utilizadas por nativos africanos na forma de infusões para o tratamento de doenças reumáticas, diabetes, arteriosclerose e malária. Embora conhecidas desde o século XIX, somente após a primeira guerra mundial começaram os estudos sobre suas propriedades\nfarmacológicas (para revisão ver Clarkson et al ., 2003).\nO extrato seco de raízes secundárias do H. procumbens (garra-do-diabo) tem como principais constituintes químicos os iridóides, presentes em concentração maior que os outros constituintes. Os iridóides são metabólitos secundários derivados da via da mevalonato (monoterpênicos), caracterizados por um grupo amplo de princípios amargos, constituídos por um núcleo fundamental formado pelo ciclopentano ligado a α-pirona, contendo um átomo de oxigênio (Benito et al., 2000). Os seus derivados são encontrados na natureza sob a forma de β-glucosideos: foram denominados iridóides, por serem derivados do iridodial, composto isolado nas formigas da Austrália\n( Iridomyrmex spp.) (Costa, 2002). O principal princípio ativo do extrato é um iridóide glicosilado, o harpagosideo (Figura 6), isolado em 1962 e responsável pelas inúmeras propriedades terapêuticas da planta, tendo sido a ele atribuído os efeitos\nantiinflamatórios bem como a ação sobre a síntese dos eicosanóides (Setty e Sigal, 2005).\nOs outros componentes da planta são os ácidos terpênicos: oleanólico, β-\nacetiloleanólico e ursólico; a quinona harpagoquinona; alguns fitoesteróis como estigmasterol e β-sitosteróis; certos flavonóides como a lutoelina, kaempferol; os ácidos\nfenólicos representados pelos ácidos clorogênico, cafeico e cinâmico livre; alguns aminoácidos; os açúcares (50%), principalmente estaquiose (46%) e pequenas\nconcentrações de glicose, sacarose e rafinose. Não foram encontrados polissacarídeos como o amido. A presença de monossacarídeos confere uma alta solubilidade da\nfração de 50-70% em água. Os minerais presentes são: cálcio, cromo, ferro, magnésio, manganês, potássio, fósforo, selênio, silício e zinco. Seus tubérculos e suas raízes secundárias contêm uma mistura heterogênea de substâncias e, de acordo com os processos de extração, podem conter diferentes frações de constituintes com\npropriedades analgésicas e anti nflamatórias agonistas ou antagonistas, sinérgicas ou complementares (Loew et al., 2001).\nFigura 5 - Aspecto da planta com tubérculos e raízes secundárias responsáveis pelo seu efeito terapêutico (A). A seta indica o fruto que dá o nome popular (B). Estrutura química do harpagosideo (C).\nExistem evidências demonstrando que os diferentes extratos de garra-do-diabo\npossuem diferentes mecanismos de ação e que são comparáveis aos dos AINH, pela interação da mediação nas vias metabólicas do AA, da COX e da LOX e também\natuando na liberação das citocinas e na produção de NO (para revisão ver, Spelman et al., 2006). Estudos em modelos experimentais de inflamação realizados com extrato seco aquoso das raízes secundárias de H. procumbens (Lanhers et al., 1992) demonstraram efeitos analgésico e anti nflamatório dos extratos (Andersen et al., 2004). Estudos in vitro foram realizados para confirmação da ação dos extratos secos do H. procumbens ou do seu principal composto ativo, o iridóide glicosilado harpagosideo, na síntese de eicosanóides e na produção de NO. Em cultura de\ncondrócitos de coelho, foi observado efeito condroprotetor do harpagosideo pela inibição da MMP - 2 (gelatinase A) (Chrubasik et al., 2006).\nFiebich et al., (2001) mostraram que a síntese de TNF-α em monócitos humanos\nestimulados por LPS foi inibida de modo dose dependente pelo extrato hidro alcoólico de H. procumbens. Entretanto, os iridóides harpagideo e harpagosideo não tiveram efeito sobre a liberação de TNF-α em doses baixas. Os mesmos extratos com\nconcentrações maiores que 100 µg/ml inibiram a liberação de citocinas, IL-6 e IL-1B e PGE2. O extrato aquoso de H. procumbens suprimiu a síntese de PGE2 e a produção de NO pela inibição da expressão de RNA-m em fibroblastos de ratos estimulados por LPS (Jang et al., 2003). Extratos de H. procumbens contendo porcentagens de 8,9% a 27% de harpagosideo foram incubados com células mesangiais de ratos para avaliar seus efeitos na formação de NO induzido pela IL-1β e também na regulação da\ntranscrição da enzima NOS. Os resultados mostraram que os extratos contendo 2% de harpagosideo não inibiram a formação de NO, sugerindo que somente extratos com grande conteúdo de harpagosideo causam inibição da NO sintase indutível (Kaszkin et al . 2004). O mecanismo de ação do harpagosideo foi investigado usando células HepG2 humanas e macrófagos RAW 264,7 estimuladas com LPS, e o resultado\nmostrou inibição do RNAm e expressão protéica da COX-2 e iNOS nas células HepG2.\nEssa inibição parece estar relacionada à modulação da atividade do fator de\ntranscrição do NF-кB (Huang et al., 2006).\nAs propriedades farmacocinéticas da garra-do-diabo e seus efeitos sobre a\nsíntese dos eicosanóides (TxB2 e LT) foram avaliados em voluntários sadios, e os resultados indicaram que não houve alteração nos níveis de TXB2, havendo correlação entre os níveis séricos de harpagosideo e a inibição da síntese de LT. Os estudos farmacocinéticos mostraram que os níveis plasmáticos máximos de harpagosideo são alcançados após 1,3 a 2,5 horas (Loew et al., 2001).\nUma série de ensaios clínicos foi realizada para se aquilatar a eficácia clínica dos diferentes extratos de H. procumbens, aquosos ou hidro alcoólicos, contendo concentrações de harpagosideo entre 35 a 60 mg/dia no tratamento de OA de joelhos, coluna lombar e quadris. Um desses estudos foi realizado em comparação com uso de AINH, Vioxx (rofecoxibe) (12,5mg) para tratamento de pacientes com exacerbação da dor lombar (Chrubasika et al., 2003). Os resultados indicam não haver diferença de 13\ntratamento entre os dois grupos. Em um outro estudo comparativo para tratamento de pacientes com OA de joelhos e quadril durante 4 meses com diacireina 100mg/dia e extrato aquoso de garra-do-diabo na dose de 2,6 g ao dia os resultados mostraram eficácia comparável, entretanto o extrato de garra-do-diabo foi superior em segurança (Chantre et al., 2000). Outro estudo, realizado com 250 pacientes com OA de joelhos, verificou a eficácia terapêutica do extrato aquoso de garra-do-diabo (60mg/dia de harpagosideo durante 8 semanas). Esse protocolo envolvia quadril e dor lombar inespecífica e foram realizadas avaliações com escala visual analógica (EVA), índice de Arthus para dor lombar e “Western Ontario and MacMaster Universities\nOsteoarthritis index” (WOMAC). Os resultados mostraram uma melhora de 50 a 70%\nnos parâmetros avaliados (Chrubasikb et al., 2003).\nO único ensaio ex vivo realizado para avaliar o efeito da garra-do-diabo sobre a síntese dos eicosanóides, TxB2 e PGE2 foi feito em voluntários sadios que utilizaram 2g do extrato seco contendo 3% de iridóides glicosilados por 21 dias. Entretanto, nesse estudo não especificada a quantidade de harpagosideo presente no extrato. Os autores não observaram nenhum efeito sobre a síntese dos eicosanódes (Moussard et al., 1992). É importante ressaltar que, devido a problemas metodológicos, esse estudo de Moussard permitiu avaliar unicamente a influência do extrato bruto sobre a atividade da COX-1. Os dados da produção de PGE2 não refletiram a atividade da COX-2, pois foi avaliada em condições de não estimulação.\nEnsaios in vitro realizados com onze tipos de iridóides isolados do H.\nprocumbens mostraram que o iridóide 8-O-p-coumaroil harpagideo apresentou atividade inibidora do “burst” respiratório em macrófagos de rato, com valor de IC50 de aproximadamente 32µM, sendo o valor encontrado para o harpagosideo de 200µM (Qi Ji et al., 2006). O resultado desse estudo sugere que nessa mistura heterogênea de iridóides presentes no extrato seco etanólico da garra-do-diabo talvez exista um ou mais iridóides que atuem reduzindo a resposta inflamatória por vias diferentes das descritas para o harpagosideo (Qi Ji et al., 2006).\nO uso dos produtos contendo H. procumbens entre os pacientes com afecções reumáticas tem sido altamente prevalente nos últimos anos, portanto é importante determinar sua eficácia e segurança no tratamento da OA. A baixa incidência de eventos adversos e os baixos custos fazem com que os fitoterápicos representem uma alternativa no tratamento da OA ao invés do uso de antiinflamatórios tradicionais (Setty e Sigal, 2005).\nA melhora no conhecimento da utilização dos fitoterápicos, como o extrato do H.\nprocumbens, sua aplicabilidade, mecanismo de ação, doses apropriadas e formulações podem preencher a lacuna existente entre o uso folclórico das plantas medicinais e sua prescrição por médicos. Dessa maneira, o presente estudo inédito sobre os efeitos da garra-do-diabo e suas sub-frações sobre a atividade de COX-1, COX-2 e produção de NO visa contribuir para isso.\nO presente trabalho teve por objetivos:\n• Avaliar, em ensaio de sangue total, a influência do extrato de H.\nprocumbens sobre as atividades da COX-1 e COX-2.\n• Avaliar uma possível ação dos metabólitos do extrato sobre a atividade\ndessas enzimas e produção de NO em pacientes com OA de coluna\n• Investigar a importância dos diversos constituintes do extrato bruto sobre a atividade dessas enzimas e produção de NO.\nExtrato hidro alcoólico bruto (seco) das raízes secundárias de Harpagophytum procumbens (Burchell) DC. Ex Meissn. (Pedialiaceae) (garra-do-diabo), contendo 1,78% de harpagosideo, com certificado de procedência e atividade biológica.\n3.2 Fracionamento do extrato\nO fracionamento do extrato hidro alcoólico de H. procumbens e as análises fitoquímicas para obtenção e identificação das frações foram efetuadas no Instituto de Botânica de São Paulo e encontram-se resumidas no fluxograma da Figura 6.\nAnálise de iridóides revelada com\nvanilina sulfúrica (3%) em etanol\nCCDP frações reunidas de 5 a\n12 (ricas em iridóides)\nFigura 6 - Esquema do fracionamento do extrato seco da garra-do-diabo por cromatografia\n“flash” em coluna de sílica (200-400 mm Merck) com gradiente de eluição conforme (Zarate et al., 1992) e por cromatografia em camada delgada preparativa (CCDP) (Huang et al., 2006). As frações obtidas por cromatografia “flash” foram monitoradas usando cromatografia de camada delgada comparativa (CCDC) e revelação com vanilina sulfúrica e cromatografia líquida de alta eficácia (CLAE).\nO extrato seco (26g) foi submetido a fracionamento em cromatografia “flash”,\nutilizando coluna de vidro de 13,5 cm x 2,0 cm e contendo 14g de sílica gel (200-400\nmm) (Merck) formando uma coluna de 5 cm da fase estacionária. A coluna permaneceu sob vácuo, sendo que o eluente CHCl3: MeOH adicionado lentamente (100ml) nas\nproporções: 100% clorofórmio, 99:1, 98:2, 96:4, 94:6, 92:8, 90:10, 85:15, 80:20, 70:30, 50:50, 100% metanol, resultando em 12 frações, conforme procedimento descrito por Huang et al. (2006). O rendimento das frações obtidas nesse fracionamento encontra-se na tabela 1.\nTabela 1- Peso e rendimento (%) das frações\nFrações Peso Rendimento\nO monitoramento do fracionamento foi efetuado por cromatografia de camada\ndelgada comparativa (CCDC) (Zarate et al., 1992) utilizando cromatoplacas de\nalumínio, recobertas com sílica gel 60 F 254 (Merck), eluídas com a mistura CHCl3: MeOH (75:25 v/v). As cromatoplacas foram observadas sob luz UV nos comprimentos de onda 254 e 366 nm e reveladas com vanilina sulfúrica a 3% em etanol, um revelador que cora os iridóides (Chantre et al., 2000). As cromatoplacas foram fotografadas em sistema Camag Reprostar 3 a 256 e 366 nm e sob luz branca. Os resultados foram expressos em Rf. O perfil cromatográfico das 12 frações é apresentado nas Figuras 7 e 8.\nFigura 7 - Foto em sistema CAMAG da placa cromatográfica em CCDC das 12 frações do extrato de H. procumbens obtidas por cromatografia “flash”, e revelada com vanilina sulfúrica (3%). Eluição com CHCl3: MeOH (75:25 v/v) , mostrando os iridóides glicosilados.\nFigura 8 - Foto em sistema CAMAG da placa cromatográfica em CCDC das 12 frações do extrato obtidas por cromatografia “flash”. Eluição em CHCl3: MeOH (75:25 v/v) e visualização no comprimento de luz UV curto (256 nm).\nAs frações de F5 a F12 foram reunidas e alíquotas de cinco µl foram aplicadas nas placas cromatográficas de sílica gel 60 P254 (Merck) com 1mm de espessura, preparadas segundo Sthal (1969), eluídas em CHCl3: MeOH (75:25 v/v) e visualizadas em câmara de UV a 254nm e 366nm para determinação das áreas onde ficaram\nadsorvidas as substâncias. As cinco sub-frações (G0 a G4) obtidas foram eluídas da sílica com metanol e o solvente eliminado em evaporador rotatório, pesadas e\narmazenadas para análise. O perfil cromatográfico dessas sub-frações obtido com vanilina sulfúrica foi coerente com aquele descrito por Chantre et al., (2000). As três manchas de cor lilás de Rfs = 0,10; 0,33 e 0,49 foram atribuídas aos iridóides harpagideo, 8-p-coumaroil harpagideo e o harpagosideo, respectivamente. (Figura 9) Rf=0,49\nFigura 9 - Cromatograma em CCDC das frações G1, G2 e G3 obtidas por CCPD. Rf= 0,49\n(harpagosideo), Rf= 0,33 (8-p-coumaroyl harpagide), Rf= 0,10. Eluida em CHCl3: MeOH (75:25) e revelada com vanilina sulfúrica (3%)\nAs frações de 5 a 12 obtidas por cromatografia flash e as frações G1, G2 e G3\nobtidas pela CCDP ricas em iridóides (teste positivo com vanilina sulfúrica) foram submetidas à cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em cromatógrafo Varian Pro-Star série 00368, equipado com detector UV/Vis Pro-Star modelo 310, sistema de bomba Varian Pro-Star modelo 330, Workstation Star versão 6, 41, coluna analítica de\nfase reversa C-18, 90 A, tamanho de 150 mm x 4,6mm com partículas de 5 mm de diâmetro. Foram aplicados 20µL de cada amostra filtrada em Millex HV 0,45 µm, utilizando como fase móvel da bomba A, água deionizada 50% e na bomba B, metanol grau CLAE (Baker). A eluição foi realizada com fluxo de 1mL/min, a detecção foi efetuada em 278 nm e o tempo de corrida foi de 30 minutos (Chantre et al., 2000; modificado). Os resultados foram expressos em tempo de retenção (Tr) em minutos e a concentração em %.\nA mistura das frações de 5 a 12 obtidas por cromatografia flash foi denominada extrato B para os ensaios in vitro, e correspondem às frações ricas em iridóides (figura 10). Essa mistura de frações foi analisada em CLAE e os resultados mostraram que o harpagosideo estava presente na concentração de 56,1% e o ácido cinâmico na\nconcentração de 25,8%. As doses utilizadas nos ensaio foram de: 1 (30µg/ml), 2\n(100µg/ml) e 3 (300µg/ml).\n(frações 5 - 12)\nFigura 10 - Perfil cromatográfico das frações de 1 a 12 (CCDC) mostrando a seleção dos extratos A, B e C utilizados nos ensaios in vitro.\nA fração 5, obtida por cromatografia “flash” e denominada de extrato C (figura 10) foi selecionada com base na concentração de 2,7% harpagosideo e 84,6% de ácido cinâmico (CLAE) (figura 11). Os dados de deslocamento químico do espectro de\n1HRMN que confirmaram a presença de ácido cinâmico livre nessa fração estão\ndescritos a seguir. As doses utilizadas no ensaio foram 1 (30µg/ml), 2 (100µg/ml) e 3\nA fração 7, obtida por cromatografia flash, denominada extrato A (figura 11) para os ensaios in vitro, foi selecionada com base na concentração de 88,6% harpagosideo CLAE (figura 12), sem ácido cinâmico. As doses utilizadas no ensaio foram de\n1(30µM), 2(100µM) e 3 (300µM).\n2,7 %harpagosideo +\n84,6% ácido cinâmico\nFração G1 - harpagosideo\nFigura 11 - Cromatogramas em sistema CLAE das frações obtidas por CCDP. Fase móvel A 50% metanol/fase móvel B 50%, fluxo de 1 ml/min, λ 278 nm, 30 minutos de tempo de eluição.\nVarian Pro Star. Ensaio in vitro: Azul extrato A=88,8% harpagosideo; Vermelho =extrato C=\n2,7% harpagosideo e 84,6% ácido cinâmico livre. Verde = fração G1 (CCDP) Rf= 0,49=\nm V olts\nMin ut es\nFigura 12 – Cromatogramas em sistema CLAE em coluna phenomenex Luna 5uC 18250 X\n4,60mm, bomba A H2O deionizada (50%) e bomba B metanol grau HPLC (Baker) (50%), fluxo de 1 ml/min, λ 278 nm, em 30 minutos, em sistema Varian Pro Star. Azul =extrato B= mistura das frações 5 a 12, a seta assinala o tempo que o harpagosideo aparece no sistema CLAE.\nVermelho = extrato C 84,6 % de ácido cinâmico e a estrutura química do harpagosideo.\n3.3 Ensaios em sangue total da atividade da COX-1 e COX-2\nDentre as diferentes técnicas utilizadas para a avaliação da atividade das\nenzimas COX-1 e COX-2 optou-se pelo método descrito por Patrignani et al., (1994) que expressa o resultado da atividade da COX-1 pela produção de TxB2 por plaquetas durante a coagulação e a atividade da COX-2 pela produção de PGE2 em sangue\nhumano total estimulado por LPS de Escherichia colli. Esse método permite avaliar a eficácia seletiva de drogas inibidoras de COX-2 em triagens clínicas, sendo o único método que permite ensaios ex vivo de drogas com potencial antiinflamatório.\n3.4 Ensaios in vitro\n3.4.1 Avaliação da atividade da COX-1\nUma amostra de 500µL de sangue venoso sem anticoagulante foi incubada por\n1 hora a 37ºC e 5% de CO2. Após centrifugação (5 minutos, 1500 rpm), uma alíquota de 100µl de plasma (sobrenadante) foi misturada a 400µl de metanol, para precipitação de proteínas e o sobrenadante (200µl) armazenado a –70ºC para posterior\nquantificação de TxB2 por radioimunoensaio (Patrignani et al., 1994).\n3.4.2 Avaliação da atividade da COX-2\nUma amostra de 500µl de sangue venoso contendo 10 UI (1 gota) de heparina\nfoi incubada com 10µl/ml de LPS por 24h a 37ºC e 5% de CO2. Esse mesmo protocolo foi utilizado para incubação com extrato bruto hidro-alcoólico da garra-do-diabo e suas frações. Para avaliação da atividade basal da enzima, um tubo controle foi incubado sem LPS. Após centrifugação, uma alíquota de 100µl de plasma foi misturada a 400µl de metanol para precipitação de proteínas e o sobrenadante foi estocado a -70oC, para posterior quantificação de PGE2 (200µl em cada eppendorf) por radioimunoensaio (Patrignani et al., 1994, Mel o et al., 2000).\n3.4.3 Quantificação de TXB2 e PGE2\nAs concentrações de TXB2 e PGE2 no sobrenadante seco por aeração com\nnitrogênio foram determinadas por radioimunoensaio com separação magnética\nempregando-se reagentes disponíveis comercialmente. Após a reconstituição dos reagentes com tampão, aos tubos 1 e 2 foram acrescentados 900µl do tampão e 100µl do eicosanóide marcado (contagem total); nos tubos 3 e 4, 200µl de tampão, 100µl do eicosanóide marcado (contagem não específica); nos tubos 5 e 6, 100µl do tampão, 25\n100µl do eicosanóide marcado e 100µl de anti-soro não específico (B0). Os tubos 7 e 8\nreceberam 10µl do eicosanóide marcado, 100µl do anti-soro e 100µl do eicosanóide em duplicata em concentrações determinadas. Nos demais tubos foram colocados 100µl das amostras, 100µl do eicosanóide marcado e 100µl do anti-soro. Após incubação por 24 horas a 4oC, foram adicionados a todos os tubos, exceto nos tubos 1 e 2 , 750µl de uma suspensão de carvão magnético coberto por dextran e os tubos foram submetidos à centrifugação para separação magnética.O sobrenadante foi transferido para os frascos contendo 7 ml de líquido de cintilação e estes levados para contagem. Da média do número de contagens por minuto de cada amostra, foi subtraída a média da ligação não específica; o resultado foi dividido pela contagem total; o resultado foi dividido por aquele encontrado na ausência do ligante frio (B0) e foi expresso na forma de porcentagem, sendo os valores das concentrações padrões dos ligantes frios plotados em gráfico contra as concentrações. Os valores em pg/ml das amostras foram obtidos desse gráfico.\n3.4.4 Ensaios in vitro – efeito do extrato bruto da garra-do-diabo na atividade enzimática da COX-1 e COX-2.\nPara os ensaios in vitro, foram selecionados dentro do serviço de Reumatologia cinco voluntários sadios, que não estavam tomando nenhum tipo de droga\nantiinflamatória pelo menos 15 dias antes do ensaio. O extrato hidro alcoólico bruto das raízes secundárias do H. procumbens foi dissolvido (1mg/1ml) em água destilada e 10µl de cada solução foram adicionados aos tubos. A concentração final de H.\nprocumbens no ensaio foi de 0,62; 1,25; 2,5; 5,0 e 10 µg. Essas concentrações representam doses crescentes de harpagosideo presentes em cada tubo e variaram de 1,12 a 17,8 µg.\n3.4.5 Ensaios in vitro - efeito das diferentes frações da garra-do-diabo na atividade enzimática da COX-1 e COX-2 e produção de NO\nAs frações com diferentes composições e concentrações de harpagosideo foram\npreparadas e utilizadas no ensaio in vitro para avaliação da atividade de COX-1, COX-2\ne NO em sangue venoso de voluntários sadios sem uso de AINH por um período de 15\ndias. As doses utilizadas foram: dose 1 contendo 30µM do extrato A e 30µg/ml dos extratos B e C; dose 2 100µM de A e 100µg/ml de B e C; dose 3 foram 300µM de A e 300µg/ml dos extratos B e C. Como controles positivos foram utilizados indometacina 40µM como inibidor da atividade da COX-1 e etoricoxibe 300µM como inibidor seletivo da atividade da COX-2 (Tacconelli et al., 2002).\nOs ensaios para atividade da COX-1 e COX-2 foram realizados como descrito\nanteriormente no item ensaio in vitro.e produção de NO foi determinado como descrito a seguir.\n2 e NO3\nUma amostra de 500µl de sangue venoso periférico sem anticoagulante foi\nretirada de voluntários sadios (ensaio in vitro) e foi adicionada a um tubo contendo 10 U\nde heparina (1 gota) ,10µl de LPS e acrescidos de 10µl da dose das frações do extrato seco a ser testada. Para avaliação da produção basal de NO, um tubo controle foi incubado sem LPS. Os tubos contendo as amostras foram estimulados com LPS e\nincubados por 24h a 37ºC com as mesmas frações utilizadas no ensaio in vitro. A quantificação de nitrito e nitrato foi realizada através da reação enzimática colorimétrica de Griess. A desproteinização das amostras foi realizada em plasma diluído a ½ em água miliQ, seguida por filtragem em filtro Milipore estéril de 0,44 µm. Para as dosagens de NO -\n2 e NO3 foram misturados 200µl da amostra filtrada, 100µl de NADPH,\n100µl de FAD, e 200µl de tampão padrão. Nos tubos para dosagem de NO -\n2 , foram\nadicionados 100µl de água e nos tubos para dosagem de NO -\n3 100µl da enzima nitrato\nredutase (Sigma). Os tubos com as amostras, bem como os das curvas padrão para NO -\n2 e NO3 , foram incubados por 1 h a 25oC em banho - maria. Em seguida, os tubos foram imersos em banho por 3 minutos. Foram adicionados aos 200µl dessas amostras 400µl de reagente de Griess (Sigma) e após 10 minutos de incubação a 60oC, foi efetuada leitura em espectrofotômetro (Hitashi U-2000) a 546 nm. Nessas condições, o método tem sensibilidade de 30pmol para cada íon. Os resultados foram expressos como valores médios dos ensaios realizados em duplicata contra as respectivas curvas padrão. (Gillian et al., 1993). Os valores foram apresentados como a soma dos valores de NO -\n2 e NO3 (µM) para cada amostra (Ding et al.,1988)\nEsta determinação foi também realizada no sangue das pacientes selecionadas\npara o ensaio ex vivo antes e após o tratamento.\n3.6 Seleção das pacientes\nO ensaio clínico foi realizado com 20 pacientes selecionadas de acordo com um protocolo clínico adaptado daquele proposto por Chrubasika et al. (2003). A adaptação foi necessária uma vez que algumas medidas e questionários utilizados no referido protocolo ainda não se encontram validados para a língua portuguesa. Os critérios de inclusão foram os seguintes:\nOA de coluna lombar com dor por pelo menos seis meses, não atribuída a\nqualquer causa específica como: prolapso discal, dor no quadril, espondilolistese, osteomalácia ou artrite reumatóide (AR);\nQueixa de exacerbação da dor por pelo menos oito semanas em repouso\nou ao movimento;\n(c) Valores maiores ou iguais a 5 na escala visual analógica horizontal de\nNecessidade de tratamento sintomático por um período de seis semanas\navaliado pelo examinador.\nTrauma recente e possibilidade de fratura;\nParticipação em outro ensaio no período de 30 dias;\n(c) Doenças sistêmicas graves como: neoplasias, hepatite auto-imune,\ncirrose biliar, doenças hematológicas (anemia aplástica, plaquetopenia) e alteração da função renal;\nHistórico de abuso de álcool ou drogas;\nAlergia ao fito-terápico e\nOutras considerações tardias poderiam afastar as pacientes do estudo, tais\ncomo uma perda acentuada de peso, fatores de risco para infecção medular ou\nsintomas de acometimento da cauda eqüina.\nAs 20 participantes receberam informações verbais e escritas sobre o estudo\nantes de serem convidadas a participar e deram consentimento por escrito de acordo com protocolo aprovado pelo Conselho de ética da Universidade de São Paulo (Anexo 1).\nNenhuma paciente fez uso de antiinflamatório não hormonal ou hormonal,\nsulfato de glucosamina e condroitina, diacireína ou estatinas por um período de 15 dias antes do início do ensaio. Foi permitido o uso de cloridrato de tramadol (50mg) como medicação de resgate. As pacientes com fibromialgia associada não utilizaram\nantidepressivos tricíclicos e foram monitoradas quanto ao número inicial e final dos pontos de gatilho (Anexo 2).\nTodas as pacientes foram recrutadas em consultório particular na cidade de São Paulo. Para cada paciente uma ficha clínica com seus dados pessoais, peso, altura e índice de massa corporal, atividade física (tipo/duração/tempo), tempo de doença, co-morbidades e medicações em uso, foi preenchida (Anexo 2).\nCada paciente, antes e depois do tratamento, foi examinada (medida da\ndistância mão chão (DMC) e teste de Thomas) e respondeu aos questionários (“Health assessment questionnaire” (HAQ), questionário de incapacidade de Roland-Morris (RM) e avaliação global do tratamento). Amostras de sangue foram coletadas para análises laboratoriais, tais como velocidade de hemossedimentação (VHS), proteína C\nreativa (PCR), cálcio, colesterol e fator reumatóide (FR) e para os ensaios ex vivo. A escala analógica visual (EVA) foi utilizada como parâmetro de inclusão no estudo.\n3.6.1 Avaliação da flexibilidade da coluna lombar e questionários\nA - Medida da distância mão chão\nO teste DMC foi realizado instruindo a paciente a ficar em pé com os pés\nafastados em uma distância de aproximadamente 15 cm. Nesse teste, o observador permanece atrás para observar as costas durante o movimento e adicionalmente\nobserva-a de lado para uma melhor vista do contorno da curva lombo sacro. A\ndistância entre o dedo médio e o chão foi medida sem que a paciente dobrasse os joelhos (Grom et al., 2000) (Anexo 2).\nB - Teste de Thomas\nO teste de Thomas foi realizado para avaliação da flexibilidade do quadril. O\nteste consiste em deitar a paciente em posição supino sobre a mesa de exames, um joelho é levado ao peito da paciente e mantido por alguns segundos. É necessário que a região inferior da coluna lombar permaneça sobre a mesa. Na presença de uma 30\ncontratura em flexão do quadril, a perna estendida dobrará no nível do joelho e a coxa elevar-se-á da mesa (Grom et al., 2000) (Anexo 2).\nC - Questionário sobre a avaliação de saúde\nO HAQ foi também avaliado com a finalidade de medir o desgaste psicológico\nassociado com a dor lombar como parte do protocolo utilizado por Chrubasika et al.\n(2003) (Anexo 4).\nD - Questionário de incapacidade Roland Morris (RM)\nO questionário RM foi respondido pelas pacientes antes e depois do tratamento (Martin et al., 2000). Esse questionário é simples, curto e facilmente entendido e enfoca exclusivamente as funções motoras (andar, curvar, vestir, sentar, deitar, dormir e cuidar-se). Apresenta escore com 24 pontos no qual a paciente assinala qual (is) a(s) frase (s) que descreve(m) a sua dor lombar naquele momento; as alterações de 2 a 3\npontos no escore são consideradas critérios de melhora para quadro de dor crônica (Anexo 5).\n3.6.2 Exames de imagem\nOs exames de Rx e a RNM da coluna lombar foram realizados antes do início do\ntratamento para a caracterização do grau de OA das pacientes. A classificação de Modic utilizada foi usada para interpretação da doença degenerativa lombar discal com mudança no sinal adjacente na medula (Jones et al., 2005).\nEssas mudanças à RNM podem ser caracterizadas por hipossinal em T1,\nhiperssinal em T2 e realce na fase pós-contraste, indicando edema no osso subcondral (Modic I). Com a evolução do processo, ocorre a substituição da medula\nhematopoiética por medula amarela (gordurosa) devido regressão do quadro\ninflamatório visualizado como aumento do sinal em T1 e em T2 e ausência de realce (Modic II); na fase tardia do processo existe o predomínio de esclerose óssea (tecido fibrótico e neoformação óssea) caracterizada por um aumento de densidade nos Raios-X e por áreas de hipossinal em T1 e T2 sem realce (Modic III).\n3.7 Ensaios ex vivo\nUma amostra 5 ml de sangue total de cada paciente participante foi coletada\nantes e após o tratamento com garra-do-diabo para avaliação da ação terapêutica nas atividades das enzimas COX-1, COX-2 e produção de NO. Todos os passos para\nessas avaliações já foram descritos acima no ítem ensaio in vitro.\nNesse protocolo, cada paciente recebeu 180 cápsulas gelatinosas contendo 500\nmg do extrato hidro alcoólico seco das raízes secundárias da garra-do-diabo, para serem ingeridos (VO) quatro vezes ao dia, por seis semanas. O conteúdo diário de harpagosideo foi de 35,6 mg (ESCOP, 1997).\nOs resultados dos valores não paramétricos foram expressos em mediana\n(variação). As comparações dentro do mesmo grupo foram analisadas por teste “t-Student” e quando a distribuição normal foi observada, os resultados foram expressos em média ± e.p.m. Para as medidas analisadas, o valor significativo foi p <0,05.\n4.1 Ensaio clínico\nO ensaio clínico foi realizado em 20 pacientes que apresentavam OA de coluna\nlombar com exacerbação da dor. O tratamento com extrato bruto de garra-do-diabo na dose de 2g/dia, contendo 35,6mg de harpagosideo, foi mantido por seis semanas.\nNossa casuística está apresentada na Tabela 2. A média de idade das pacientes foi de 58 anos, variando entre 44 a 69 anos; a duração média da doença foi de 8,5\nanos (2 - 20 anos), 55% das pacientes (11) tinham fibromialgia antes do tratamento, entretanto, não houve diferença estatística entre os grupos com e sem fibromialgia frente aos parâmetros analisadas (p>0,05). Cerca de 85% das pacientes realizavam atividade física por ocasião do estudo.\nTabela 2 - Características antropométricas e dados clínicos das 20\npacientes no início do ensaio clínico\n58 (44 – 69)\n26,8 (20,8 – 36,4)\n8,5 (2 – 20)\nDor a menos de 8 anos (%)\nModic – Tipo II (%)\nO quadro de OA de coluna lombar foi confirmado por exames de Raios-X e RNM\ne classificado pelo índice de Modic. As pacientes foram classificadas como sendo 98%\ndo tipo II e 2% do tipo I. Os resultados da avaliação clínica e parâmetros laboratoriais antes e depois do tratamento estão resumidos na tabela 3. Os valores de cálcio, EVA, DMC e RM foram reduzidos pelo tratamento (p<0,05). A avaliação funcional (HAQ) embora tenha melhorado, não atingiu níveis de significância estatística (p=0,063). O\nVHS não foi alterado pelo tratamento. A prova de atividade inflamatória, proteína C\nreativa (PCR) foi realizada por todas as pacientes e os resultados foram <0,5 mg/dL\nantes do tratamento e após o tratamento.\nTabela 3. Avaliação clínica das 20 pacientes antes e após o tratamento com 2g/dia do extrato da garra-do-diabo por 6 semanas.\n10(2 -51 )\n202(149 - 332 )\n204(162 - 313)\n6(5 -8 )\n3,5(0 -9 )\n13,5(0 -36 )\n8(0 -21 )


Roberto Dinamite e Márcio Braga relembram negociação frustrada com o Urubu e volta do ídolo ao Vasco | NETVASCO\nRoberto Dinamite e Márcio Braga relembram negociação frustrada com o Urubu e volta do ídolo ao Vasco\nSegunda-feira, 04/05/2020 - 10:55\nRoberto Dinamite é o maior ídolo da história do Vasco – status ratificado nesta semana em enquete no GloboEsporte.com. Por muito pouco, no entanto, não teve sua trajetória em São Januário "manchada" por uma transferência para o maior rival.\nEm 1980, ele esteve a um passo do Flamengo e chegou a falar como jogador rubro-negro. Pressionado, o Vasco, através de Eurico Miranda, atravessou a negociação e repatriou seu maior ídolo. Há exatos 40 anos, em 4 de maio daquele ano, Roberto voltava ao Maracanã com a camisa cruz-maltina, em uma das maiores atuações de sua carreira. Fez cinco gols contra o Corinthians.\nÉ a história desse jogo, com o contexto da disputa nos bastidores entre Vasco e Flamengo e depoimentos de protagonistas da negociação, que recordamos hoje, no aniversário de 40 anos de uma das maiores atuações individuais que o Maracanã viu.\nPré-contrato com Flamengo, e chapéu do Vasco\nApós quase dez anos como profissional do Vasco, Roberto Dinamite foi negociado com o Barcelona no fim de 1979. Chegou com status de craque, marcou dois gols na estreia, mas perdeu espaço por conta da troca de treinador no clube catalão. Sem jogar, foi procurado pelo Flamengo para retornar ao Brasil. O então presidente rubro-negro Márcio Braga foi à Espanha, assinou um pré-contrato com o clube catalão e praticamente concretizou a negociação.\n- O Roberto deve chegar ao Brasil na próxima segunda, acompanhado de um dirigente do Barcelona – disse Márcio Braga, na ocasião.\nPor telefone, à TV Globo, Roberto confirmou a negociação avançada e praticamente falou como jogador rubro-negro.\n- Posso até antecipar a viagem, dependendo da conversa que terei com o presidente do Barcelona. Faltam poucas coisas para acertar, e assim posso regressar ao Brasil o mais rápido possível. Quanto mais craques, melhor para a equipe. Que eu possa brilhar, dar alegrias e marcar os gols que a torcida do Flamengo tanto espera. Claro que com a colaboração de Zico, Carpegiani, Adílio e todos jogadores – disse Dinamite, na ocasião.\nO acerto caiu como uma bomba em São Januário. Procurado antes, o Vasco não havia demonstrado interesse. A prioridade era receber o que o Barcelona ainda devia pela compra de Roberto há alguns meses. No entanto, pressionado pela proximidade do acerto entre Roberto e o rival, o presidente Olavo Monteiro de Carvalho enviou Eurico Miranda a Barcelona para atravessar a negociação. O coração vascaíno pesou, e Dinamite acabou retornado a São Januário.\nMárcio Braga: "Foi um escândalo no Rio"\nPresidente do Flamengo na época, Márcio Braga relembra a negociação, em depoimento ao GloboEsporte.com.\n"Naquele momento, o Flamengo precisava de um centroavante. Era o pedido do (Cláudio) Coutinho. Tentamos pegar Bira, do Remo. Mas o Remo não cedeu o jogador que estava nas finais do campeonato estadual. Outro jogador indicado era o Nunes, que estava no México (Monterrey). Fomos atrás dele, mas foi complicado.\nFoi aí que o almirante Heleno Nunes nos alertou que o Barcelona ainda não havia pago pelo Dinamite. Fui verificar, era verdade. No dia que fechamos com o Nunes, peguei o avião e fui pra Barcelona comprar o Roberto. Um grande empresário da época, Elias Zaccour, foi me encontrar na Espanha para me ajudar junto à direção do Barcelona. Ficamos hospedados no hotel do vice de finanças do clube, Juan Gaspar, que anos depois veio a ser presidente do Barcelona (2000 a 2003). Ali começou a negociação.\nO Roberto foi muito simpático e correto. A mulher dele na época (Jurema) foi importantíssima na vida do Roberto. Ela me ajudou muito. Ela queria tirar o Roberto de lá. Ela via a tristeza que ele estava, abatido. No dia chegamos a Barcelona, fomos a um jogo na tribuna de honra. O Roberto saiu na metade do primeiro, com 30 minutos. Ele era um ídolo aqui e não era nada lá.\nQueríamos trazer o Roberto para o Flamengo. Ele topou. Mas tinha um grande problema: 700 mil dólares (risos). O Roberto já tinha recebido a parte dele na negociação com o Barcelona, mas o Vasco nada. Eles tinham que pagar os 700 mil dólares para o Vasco.\nA verdade é que não tínhamos dinheiro. Aí disse que iria embora para o Brasil. Arrumei as malas e fui para o aeroporto. Quando chego lá, quem encontro? O Juan Gaspar (Barcelona), sua secretária e uma máquina de escrever. Fizemos ali mesmo no aeroporto um pré-contrato. Ficou fechado. Voltei para o Brasil para conseguir o dinheiro.\nMas foi aí que o (radialista) Washington Rodrigues montou uma fita narrando um eventual gol do Roberto com passe do Zico no Maracanã. Isso foi um escândalo no Rio de Janeiro. O torcedor do Vasco enlouqueceu (gargalhada).\nO Vasco entrou na jogada, meu grande amigo Olavinho Monteiro de Carvalho (então presidente do Vasco) me ligou. Eu disse que estava fechado com Roberto, até brinquei e pedi dinheiro emprestado. Ele mandou na hora o Eurico Miranda para Barcelona e fecharam a contratação. O Vasco não recebeu nada pela venda do Roberto e ainda teve que pagar alguma coisa. A história foi essa"\nDinamite: "Minha volta começou no interesse do Flamengo"\nDinamite recordou a passagem pelo Barcelona e a negociação com Flamengo. Em seu depoimento, ele reforça que só retornou ao Vasco por conta do interesse do rival.\n"Cheguei ao Barcelona, comecei bem, mas teve troca de treinador. O cara (treinador Helenio Herrera) só queria que eu treinasse. Naquela época só podiam jogar dois estrangeiros por clube. Não aconteceu. Minha volta ao Vasco começou a partir do interesse do Flamengo. O Marcio Braga foi a Barcelona para me contratar.\nEm um primeiro momento, o Vasco não demonstrou interesse na volta, mas no Brasil começou uma pressão grande. Foi um fim de semana inteiro, todo mundo falando disso. E eu no meio da confusão.\nCom a pressão do torcedor, o Vasco mudou de ideia, me ligou, entrou em contato com o Barcelona e mandou o Eurico Miranda para Espanha. Eles conversaram e a decisão de voltar para o Vasco foi minha.\nNaquela época, o jogador tinha outro tipo de relação com o clube. O cara pensava em ficar a carreira no clube. Quando sai para o Barcelona já tinha 10 anos de Vasco. Era diferente, mexia comigo. O mercado era outro. Foi difícil sair do Vasco. As decisões eram mais baseadas no coração. Eu comecei no Vasco com 14 anos. Isso teve um peso grande na decisão.\nPoderia ter jogado naquele time da década de 80 do Flamengo? Poderia. Daria certo no Flamengo? Talvez. Mas tinha algo maior na minha decisão. Sinceramente, priorizei voltar para o Vasco.\nBrinco com Zico até hoje. Ele brinca que eu deveria ter ido para o Flamengo, e eu digo que ele deveria ter jogado no Vasco. Muito legal, nos falamos sempre. Fomos contemporâneos no juvenil, começamos juntos no profissional. Tínhamos uma rivalidade enorme em campo. Mas nunca tivemos nenhum atrito e temos uma amizade muito legal até hoje. Conversamos muito sobre futebol. Era uma rivalidade enorme, mas a amizade ficou acima disso"\nJogo para história no Maracanã\nPoucos meses após ser negociado com Barcelona, Dinamite estava de volta ao Vasco nos braços da torcida. Foi recebido com festa no aeroporto. A reestreia aconteceu em jogo na Venezuela, pela Libertadores. Mas o reencontro com a torcida, e jogo que entrou para a história, foi o seguinte, em 4 de maio de 1980, contra o Corinthians, no Maracanã.\nNaquela noite, Dinamite acabou com qualquer dúvida que o torcedor poderia ter, após passagem apagada pelo Barcelona. Marcou todos os cinco gols do Vasco e mostrou que voltou para fincar de vez seu nome na história do clube.\n- Fazer cinco gols contra o Corinthians, que tinha um time do c..., foi muito bacana. Foi a única vez que fiz cinco gols, que eu me recorde. É a magia do futebol. Voltei para o Brasil como uma interrogação, pois não fui bem no Barcelona. Aí volto contra o Corinthians, no Maracanã, com um público enorme (cerca de 107 mil pessoas) e marco cinco gols. Guardo esse jogo com muito carinho. Foi uma das minhas grandes atuações. Até porque foram gols bonitos - recorda Roberto.\nO curioso é que, justamente o Flamengo, que havia tentando sua contratação, fez a preliminar contra o Bangu, naquela noite. Parte da torcida permaneceu para o jogo do Vasco, e alguns rubro-negros levaram faixas "Fla-Fiel". Não deram sorte, mas presenciaram uma das maiores atuações individuais que o Maracanã já viu. Um verdadeiro show de Dinamite, fiel à Cruz de Malta e ao doce hábito de fazer gols.\nMarcio Braga e Roberto Dinamite recordaram negociação em 1980\nA volta de Roberto Dinamite ao Vasco\nVolta de Roberto Dinamite ao Vasco\nVolta de Roberto Dinamite\n10:16 - Veja vídeo em homenagem ao vascaíno Aldir Blanc\n11:41 - Confira a participação de Valdir Bigode no programa 'A Voz do Vascaíno'\n04/05/20 - Há 40 anos, Dinamite voltava ao Maracanã após passagem pelo Barcelona e fazia 5 gols no Corinthians\n04/05/20 - Em rede social, Roberto Dinamite agradece por votos em enquete de maior ídolo do Vasco\n03/05/20 - Rafael Silva relembra o título estadual do Vasco em 2015, fala sobre o elenco e cita seu gol mais marcante, contra o Urubu\n03/05/20 - Roberto Dinamite vence enquete do GloboEsporte.com de maior ídolo do Vasco: 'O Vasco está dentro de mim'\n01/05/20 - Feminino: Kaylane fala sobre recusa ao Urubu: 'Preferi ficar no Vasco. Pelo coração e para honrar a Cruz de Malta'\n01/05/20 - Há 26 anos, torcidas de Vasco e Urubu homenageavam juntas Ayrton Senna; veja vídeo


As cem (100) vagas anuais a serem ofertadas no turno diurno e noturno para o curso de Psicologia da FISMA apresentam as seguintes formas de ingresso aos candidatos(as):\nPROCESSO SELETIVO: O acesso ao curso será mediante aprovação dos candidatos classificados no processo seletivo da instituição (vestibular), que tenham concluído o Curso de Ensino Médio, ou equivalente. O processo seletivo ocorre semestralmente. As inscrições para o processo seletivo são divulgadas em Edital, com as respectivas vagas, prazos e documentação exigida para a inscrição, bem como calendário das provas, critérios de classificação e demais informações úteis.\nEDITAL DE VAGAS: Após a realização da matrícula dos aprovados no processo seletivo e das rematrículas, havendo vagas remanescentes, será publicado um Edital para inscrições nestas vagas. O ingresso pelo Edital de Vagas poderá ser por meio de:\nExame Nacional do Ensino Médio (ENEM): O candidato que realizou o ENEM poderá realizar a inscrição para o processo seletivo, de acordo com os critérios estabelecidos em Edital. O portador de desempenho no ENEM poderá solicitar ingresso, comprovando que realizou o ENEM a partir do ano de 2010, cujo desempenho deverá ser igual ou superior a quatrocentos (400) pontos como média de todas as notas e a redação superior a zero (0).\nReingresso: O reingresso poderá ser solicitado por ex-acadêmico da FISMA que tenha abandonado o curso. Este poderá reingressar em seu curso de origem ou em outro curso oferecido na instituição, desde que se enquadre nas condições vigentes no Projeto Pedagógico do Curso (PPC) e na disponibilidade de vagas.\nTransferência Interna: O acadêmico matriculado em um curso da Instituição poderá solicitar transferência para outro curso, na condição de ingressante, após o encerramento das matrículas do processo seletivo vigente e das rematrículas dos acadêmicos com vínculo na Instituição.\nTransferência Externa: O acadêmico com vínculo (matriculado ou com matrícula em trancamento) em um curso de outra Instituição de Ensino Superior (IES) devidamente credenciada pelo Ministério da Educação (MEC), inclusive se contemplado com Financiamento Estudantil (FIES) e/ou Bolsa PROUNI, poderá transferir-se para o mesmo curso na FISMA ou outro curso oferecido na Instituição, desde que atendendo aos critérios e à disponibilidade de curso constante no Edital.\nPortador de Diploma em Curso Superior: Poderá solicitar ingresso, o candidato que possua diploma de Ensino Superior, devidamente registrado, desde que existam vagas, após o encerramento das matrículas dos (as) selecionados (as) no processo seletivo.


O símbolo do fervor brasileiro - CatolicaConect\nO símbolo do fervor brasileiro\nO mês de outubro rememora aos brasileiros a construção do monumento símbolo de nossa Fé, a imagem de Cristo Redentor: de braços abertos à espera de irmos ao seu encontro.\nRedação (11/10/2020 11:51, Gaudium Press) O ano de 1850 foi marcado por uma aspiração que ousou remexer o estável e sossegado Brasil-Império.\nFoi a partir de uma sugestão dada pelo Pe. Boss à princesa Isabel, para que se colocasse um símbolo católico no Monte do Corcovado, que o rumo da atenção do Rio de Janeiro, e, por consequência do Brasil, começou a mudar de direção, fazendo com que até hoje desfrutemos, ao lado do Pão de Açúcar, de uma das consideradas “novas sete maravilhas do mundo”!\nPreâmbulos da edificação\nA sede imperial de Dom Pedro II, em 1850, estava fixada no Rio de Janeiro, local onde o sua glória rutilava como nunca. Por esta razão, o atual Estado fluminense se tornara a fonte de todas as atrações dos brasileiros, portugueses e estrangeiros vindos das mais variadas partes do mundo, pois era ali que residia o curioso “imperador do Brasil” e a sua corte.\nPorém, sem grandes horizontes, o império de Dom Pedro tendia cada vez mais a estabelecer-se em si mesmo, e por isso, nesse ano de 1850, o Brasil não desfrutava de grandes inovações nem novos empreendimentos. As coisas tendiam resolverem-se por si mesmas, e a possibilidade de um possível golpe de estado de algum partido republicano se afigurava tão longínquo quanto longínqua era a ideia de sonhos ousados.\nUma ideia fora do comum\nFoi nesse contexto que apareceu um certo Pe. Boss com uma sugestão fora do comum.\nPe. Pedro Maria Boss aparecera um dia na corte com a intenção de fazer uma sugestão à princesa Isabel, filha do imperador Pedro II, para que se colocasse um monumento cristão no topo do Monte do Corcovado, com o intuito homenageá-la, diante de toda a corte portuguesa.\nSua sugestão agradou enormemente à princesa e foi prontamente acatada por ela, a qual inclusive se dispôs a ajudá-lo nesse empreendimento.\nTentativa de início da construção\nO empreendimento, contudo, demorou em começar. Foi só “na época da assinatura da Lei Áurea, diante da possibilidade de uma homenagem à princesa com uma estátua que a representaria como ‘A redentora’”, que finalmente a construção começou a tomar corpo.\n“A Princesa Isabel, entretanto, se recusou” rotundamente que fosse feita uma estátua sua no Corcovado, “conforme o aviso de 2 de agosto de 1888”, dizendo que “a homenagem deveria ser feita ao verdadeiro “Redentor dos homens”, com uma imagem ao Sagrado Coração de Jesus”.\nAssim se afigurou o plano de construção do Cristo, a qual, somente 38 anos depois, começou a se concretizar…\nPorém, no ano seguinte 1889, o país se tornou uma República e, “com a oficialização da separação entre Igreja e Estado, a proposta foi descartada pelo Governo”, e os planos da construção da imagem de Cristo foram mais uma vez relegados ao esquecimento…\nRessurgimento da ideia e construção\nA ideia reapareceu só em 1920, quando o Círculo Católico do Rio de Janeiro tomou as rédeas da iniciativa nas mãos, criando a “Semana do Monumento” com o fim de “atrair doações e recolher assinaturas para apoiar a construção da estátua”. As doações afluíam de todos os lugares do país, “principalmente de católicos brasileiros”.\nE, após terem terminado a arrecadação dos meios, a construção foi por fim iniciada. “Seu projeto foi confiado ao engenheiro local Heitor da Silva Costa, e foi esculpida sob a direção do famoso escultor franco-polonês Paul Landowski”.\nA cerimônia de inauguração foi presidida por inúmeros prelados e sacerdotes da Santa Igreja, bem como por personalidades civis brasileiras.\nSeria um momento importante para todo o país: por fim o Corcovado seria coroado com o símbolo da fé católica no Brasil. A Baía de Guanabara estava em festa.\nPara salientar a continuidade do ato com a Igreja de Roma, “durante a cerimônia de inauguração, a estátua foi iluminada por uma bateria de holofotes acionada remotamente pelo pioneiro da rádio de ondas curtas, Guglielmo Marconi, que estava em Roma, na Itália” acompanhando o desenrolar da cerimônia junto com o Papa.\nA Missa de inauguração foi feita no estádio de Laranjeiras em 2 de outubro de 1931, nove anos depois do início da construção.\nDe braços abertos à nossa espera\nAinda hoje o Cristo Redentor desperta interesse em todo o mundo. A afluência de visitantes ao Corcovado é intensa e numerosa, desde a sua inauguração; e supera a casa do milhão ao ano. Parece até que Ele está à espera dos filhos de braços abertos para nos abraçar e nos inebriar com a sua doçura.\nComo bem apontou certo autor, o Cristo Redentor está a nos dizer que “em nenhum instante, por mais densas que forem as névoas das provações, a luz dele deixará de encontrar certo ponto em nosso coração e que, em nenhum momento, a neblina conseguirá apagar a figura do Redentor” dos nossos horizontes!\n“Com esta fé [devemos caminhar] para o futuro, quaisquer que sejam as circunstâncias. Pode ser que provações muito difíceis toldem, nos nossos olhos, as perspectivas da vitória, ou circunstâncias imprevistas coloquem para nós problemas que hoje ainda não são os nossos. Mas, para além das névoas, para além de tudo quanto pode tapar a verdade, no horizonte visual do brasileiro há algo que nada tira: é a imagem do Cristo Redentor, a Fé em Nosso Senhor Jesus Cristo. Esta Fé há de nos salvar!”\nE que “o Brasil há de vencer, e é rumo a esta vitória que todos caminhamos com o passo resoluto e a alma cheia de fé”.\nThe post O símbolo do fervor brasileiro appeared first on Gaudium Press.\nArtigo anteriorSanto Alexandre Sauli


This page is currently only available in English. Possui um efeito reverb? Seja um moderador do Clube do Hardware! Moderadores deste fórum ilkyest. O reverb ocorre naturalmente quando um som é criado em um espaço fechado e reflete nas paredes.\nNome: programas pcdj red\nComparações de softwares rec DJ vs. Seja um moderador do Clube do Hardware! Teste da placa de vídeo Radeon VII. Como ganhar dinheiro montando computadores. Outro Como calcular AxL e Valor de metro quadrado em ecommerce. Possui mudança de pitch?\nPossui recurso de linhas de batidas?\npfdj É compatível com Windows? Esse efeito pode ser criado digitalmente e é mais perceptível quando um som é interrompido de repente e continua ecoando, ficando progressivamente mais silencioso.\nThis page is currently only available in English. No ar desdeo Clube do Hardware é uma das maiores, mais antigas e mais respeitadas publicações sobre tecnologia do Brasil. Boot pelo pendrive erro. Pprogramas você tem uma conta, faça o login para postar.\nMensagens Relacionadas BAIXAR MUSICAS DE MARIAH CAREY PALCO MP3\nPC pedindo F1 sem acusar o motivo. Mais recentes Tópicos Respostas. Gabriel Torres, fundador e editor executivo do Clube do Hardware, acaba de lançar um minicurso totalmente gratuito: É o formato nativo com perda do iTunes da Apple, iPod, iPad, etc.\nO reverb ocorre naturalmente quando um som é criado em um espaço fechado e reflete nas paredes. Possui atalhos de pistas? Seja um moderador do Clube do Hardware!\nComo Rodar o PCDJ RED no Windows 7? – Programas – Clube do Hardware\nComo ganhar dinheiro montando computadores. Sobre o Clube do Hardware No ar desdeo Clube do Hardware é uma das maiores, mais antigas e mais respeitadas publicações sobre tecnologia do Brasil. Possui um efeito flanger? Que cooler comprar para esse pc?\nModeradores deste fórum ilkyest. Possui um efeito reverb? Comparações de softwares de DJ vs. Você pode postar agora e cadastrar-se depois. Ir proogramas lista de tópicos.\nMensagens Relacionadas SKIN DENON MC6000 VIRTUAL DJ BAIXAR\nRazer revela novos acessórios mais em conta para jogos. PC para stream jogos leves.\nTeste do processador Core iF. MP3 é o mais difundido dos formatos com perdas.\nO software permite a você mixar alguns tipos de arquivo de vídeo a fim de criar um visual, bem como uma performance musical. Top 10 softwares de DJ 1. Você tinha que rec exatamente quando você apertasse os botões para obter o loop perfeito. Postado 1 de março de Tabela comparativa de preços AMD vs.\nBAIXAR PROGRAMA SNAPSHOT VIEWER


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NOTA DE PESAR: Psicóloga Julliane Ferreira Aguiar\n28 de agosto de 2020 29 de agosto de 2020 Assessoria de Comunicação - CRP 23ª Região\nUm dia após a celebração do dia da(o) psicóloga(o), uma das profissionais da nossa categoria que contribuía com a história da psicologia tocantinense veio a falecer em decorrência de complicações da COVID-19, e junto a ela, as suas filhas gêmeas.\nJulliane Ferreira Aguiar natural de Arapoema, formou em Psicologia na Faculdade Integrada de Colinas. Como psicóloga, atuou na Casa de Acolhimento Ana Carolina Tenório e no Recursos Humanos da prefeitura de Araguaína.\nO Conselho Regional de Psicologia – CRP do Tocantins 23ª Região lamenta o falecimento da psicóloga Julliane Ferreira Aguiar (CRP 23/1043) e solidariza-se com os familiares, amigos e a categoria que tiveram a honra em conviver com esta profissional.\nLIVE: Desafios da Psicologia Jurídica Pós Pandemia\nVOZES NEGRAS DO TOCANTINS


Portal Underground: Carnaval no Terraza Balneário Camboriú/SC com Carl Craig dia 17/02/15\nCarnaval no Terraza Balneário Camboriú/SC com Carl Craig dia 17/02/15\nNo dia 17 de fevereiro de 2015, na terça-feira de Carnaval, Carl Craig, a lenda de Detroit, finalmente estreia em Balneário Camboriú. O veterano pertence à linhagem "puro sangue" dos criadores do techno e, ainda hoje, é um dos nomes mais produtivos da cena eletrônica. Prepare-se para uma festa imperdível.\nLocal: Rua Francisco Correa, 908. Balneário Camboriú/SC.\nDanee - (detroitbr)\nDaniel Waltrick Pinto, aka Danee, começou sua carreira como DJ em 2006 na sua cidade natal, Balneário Camboriú (SC), fortemente influenciado pelo que sua cidade representa para a música eletrônica no Brasil, acompanhou de perto a evolução da cena o qual mais tarde veio fazer parte.\nMusicalmente, suas influências vem das pistas. Sons dançantes, com energia, sutileza e a musicalidade de elementos hipnóticos, fazem seus sets serem sempre muito dinâmicos e envolventes. Com apresentações sempre muito marcantes, teve convites para dividir line-ups com artistas como Dubifre, Jamie Jones, Seth Troxler, Hernan Cattaneo, Gui Boratto, Audiofly, Michael Mayer, Beckers, Amirali, Tale of Us, Gorge, apenas para citar alguns.\nAntonela Giampietro (24bit)\nPara Antonela Giampietro, música é algo orgânico. É algo que vive e respira, suspirando de cada canto do mundo. Como artista, ela gosta de expressas a profundidade e a liberdade em seu trabalho. Da Argentina para o Brasil, seus sets conquistam os ouvidos dos mais exigentes amantes da música.\nVJ Trilux (All night long)\nCompre online: http://goo.gl/xnypTH\nPontos de venda: http://goo.gl/11pF5u\nIngresso válido a noite toda, com entrada especial sem filas.\nA Terraza tem uma lista de desconto exclusiva da casa. Envie seu nome e garanta seu desconto! Nomes até às 18 horas do dia do evento: http://bit.ly/1se3WMZ\nInformações: (47) 3366 6330 | terraza@musicparkbc.com.br


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17/09/14 - 10h01 - Atualizado em 17/09/14 - 10h01\nNo domingo, 14, Mallet Esporte Clube e Independente realizaram mais um jogo do Campeonato Amador da Liga Iratiense de Futebol. A partida disputada no estádio Claudinor Machado, em Mallet, terminou empatada: 2 a 2.\nNo primeiro tempo, Sidnei aos 15 minutos abriu o marcador para a equipe mandante. O gol não intimidou os rio-azulenses, que conseguiram a virada ainda no primeiro tempo com gols de Crentinho aos 32, e Elói aos 45 minutos. No segundo tempo, Mallet reagiu e buscou o empate com Gilmar aos 7 minutos, dando números finais ao jogo.\nA partida teve a arbitragem de Joel Ferreira Martins, que foi auxiliado por Narciso Muller e Flávio Artner. O representante foi James Mac Arthur Bitencourt de Sá.\nDois cartões amarelos foram distribuídos na partida para a equipe de Mallet. Diemes foi punido aos 24 minutos do primeiro tempo e Felipe aos 31 minutos da segunda etapa.\nConfira as imagens da partida na lente de James Mac Arthur Bitencourt de Sá.\nPresidente do Independente, Eloir de Quadros, acompanhou o jogo atentamente\nFilho de Eloir, Márcio de Quadros, mais conhecido como Tiope é o treinador do Independente\nTrio de arbitragem ao lado do representante da partida\nOutros três jogos movimentaram a quarta rodada da primeira fase do Campeonato Amador. Pelo grupo B, o mesmo de Mallet e Independente, o Ivaí recebeu a equipe da Associação Vila Maria, de Rebouças. Com quatro gols de Binho, os visitantes golearam por 4 a 1. Cleverson descontou para os donos da casa.\nO empate entre Mallet e Independente e a vitória da Vila Maria deixou a briga pelas duas vagas nas semifinais embolada. O Independente lidera o grupo com sete pontos, mas já entrou em campo quatro vezes. Vila Maria e Relicon, que folgou na rodada do fim de semana, somam seis pontos, mas disputaram três partidas. A equipe de Mallet ocupa a quarta posição do grupo com quatro pontos, enquanto que o Ivaí ainda não pontuou.\nNa próxima rodada, que acontece no domingo, 21, o Independente irá secar os adversários, pois irá folgar. Em Rebouças acontece o confronto entre Vila Maria e Mallet. Já em Irati, o Relicon recebe o Ivaí. As duas partidas acontecem às 15h30.\nGuarani lidera grupo A\nPelo grupo A duas partidas foram realizadas no domingo, 14. O Guarani se manteve na liderança isolada após vencer Inácio Martins por 2 a 1. Marquinho e Daniel Molinari fizeram os gols do time iratiense. Dieisson marcou para os visitantes.\nJá no estádio Manoel de Andrade, na localidade de Taquari, em Rio Azul, o Transportes Dussanoski/Mercado Hrinczuk derrotou o Sene por 3 a 1. Mauricio, Adilson e Vando foram os autores dos gols do time da casa. Cezar fez o gol de honra do time malletense.\nOs resultados deixaram o Guarani na liderança isolada com nove pontos, seguido do Transportes Dussanoski/Mercado Hrinczuk com seis. O SENE somou quatro pontos, o Valinhos três, e Inácio Martins apenas um.\nNa rodada do próximo domingo, 21, o Inácio Martins folga. O SENE enfrenta o Guarani, no estádio Claudinor Machado, em Mallet. No distrito de Guaraúna, em Teixeira Soares, a Sociedade Valinhos recebe o Transportes Dussanoski/Mercado Hrinczuk. As duas partidas também acontecem às 15h30.\nCom os quatro gols marcados sobre Ivaí, Binho assumiu a artilharia do Campeonato Amador. O atleta da Vila Maria já balançou as redes cinco vezes em três partidas disputadas. Coxinha (Valinhos), Andrey (SENE), Edimar e Crentinho (Independente), e Adilson (Transportes Dussanoski/Mercado Hrinczuk) dividem a vice-artilharia com três gols.


dezembro | 2013 | Chulezinho\nOlha essa atualização do Louco Por Pés!\nPublicado em 12/30/2013 por redesexo\nAs solas perfeitas da Andrea em ação!\nPublicado em 12/28/2013 por redesexo\nEla é realmente a deusa dos footjobs!\nVocê gostaria que fosse o seu caralho nessas fotos?\nO meu presente de natal foi ontem!\nPublicado em 12/24/2013 por redesexo\nOntem fui saborear meu presente de natal! Foi caro mas valeu a pena!\nAgora que estou satisfeito, compartilho com voces leitores do Blog!\nRainha do Solejob!\nPublicado em 12/23/2013 por redesexo\nOlá amigo acompanho constantemente seu blog sou louco por pés e solas assim como vc rsrs tenho um canal no xhamster onde posto meus videos com minha parceira ela adora fazer footjob e solejob e ainda oque é melhor ama leitinho quente nas solas heheh estou mandando algumas fotos para vc divulgar em seu blog … meu canal éhttp://xhamster.com/user/jonesolass valeu abrass !!!\nQuer as solas da minha namorada?\nPublicado em 12/22/2013 por redesexo\nCasal Marcelo e Dani escreveu:\nEssa é minha namorada Dani. Ela é patricinha, gosta de luxo, presentes e vida boa. Dou tudo isso a ela, mas em troca ela faz todas as putarias que eu quero. E agora eu quero um cara com um pinto muito grande para foder as solas dela! Se você tem um pau acima de 18 cm e quer tentar a sorte deixe um comentario com email. Se nos interessar vamos entrar em contato com vc.\nDe chinelinho na balada!!\nTem que ter personalidade para usar um chinelinho desses numa balada chique! Essa garota quase me matou de tesão, mas infelizmente minha lábia não foi suficiente para arrastar ela pro motel e sentir o gosto e o cheiro daquelas jóias raras!\nMas é claro que alguma lembrança eu iria levar desses pés! Espero que gostem!\nSolas flagradas na praia!\nPublicado em 12/17/2013 por redesexo\nMais uma vez as solas divinas de Andrea!\nPublicado em 12/05/2013 por redesexo\nParceiros do Chulezinho a anos, esse casal tem um blog pesdaandrea.tumblr.com e simplesmente ja foram responsaveis pela punheta de milhares de podolatras no mundo todo! É realmente demais e vale muito a pena ver!!\nPodolatria com dominação é no FETICHE TOTAL!\nPublicado em 12/02/2013 por redesexo\nO Fetiche Total é da mesma rede de sites que inclui o Louco Por Pés! A Rede Sexo!\nPorém, no fetiche total, as cenas são de dominação com podolatria! Se você curte pés femininos com mais ação, com dor, humilhação e masoquismo, o Fetiche Total é seu lugar especial! Venha conhecer!\nMeu amigo e minha esposa putinha!\nPublicado em 12/01/2013 por redesexo\nConhecemos esse cara aqui no Chulezinho!\nAs fotos são em agradecimento ao blog por nos proporcionar sempre momentos de tanto tesão!\nFico louco de tesão vendo minha puta fodendo com outro cara usando um salto alto! Nada nesse mundo pode ser mais bonito! Ta afim? Quer ser meu “amigo” ?


Nova Enguine 2D\npor glauberzin Seg Mar 28, 2016 6:13 pm\nEstava navegando no google e achei essa notícia, resolvi compartilhar com vcs.\nAlém de tudo isso, Defold exporta seu jogo para seis plataformas: iOS, Android, HTML5, Mac OS X, Windows e Linux. Para baixar e usar a Defold é necessário utilizar uma conta Google para logar no site e criar os projetos.\nA Defold funciona com uma integração entre o site e a engine, o que permite gerenciar o projeto, acesso para equipe e até dados de uso do jogo (analytics) pelo site.\nComentário do site GAME DEVELOPER:\nRe: Nova Enguine 2D\npor Kincy Ter Mar 29, 2016 11:36 am\nIncrível, que ótima notícia, muito obrigado por compartilhar!\npor Valentine Ter Mar 29, 2016 12:01 pm\nParece ser uma ótima alternativa pra quem quer criar jogos pra Android e outras plataformas.\nData/hora atual: Sex Jun 18, 2021 12:12 pm