Contrast-Matching Detergent in Small-Angle Neutron Scattering Experiments for Membrane Protein Structural Analysis and Ab Initio Modeling | Protocol (Translated to Arabic)\nهذا البروتوكول يوضح كيفية الحصول على نموذج منخفضة الدقة منذ البداية وتفاصيل الهيكلية بروتين غشاء solubilized المنظفات في الحل باستخدام تشتت الزاوية الصغير النيوترون مع مطابقة على النقيض من مواد التنظيف.\nالصك ونثر البيولوجية زاوية صغيرة النيوترون في عالية-الجريان "النظائر المفاعل من مختبر أوك ريدج الوطني" مخصصة للتحقيق في المواد البيولوجية، وتجهيز الوقود الحيوي والمواد المستوحاة من السيرة الذاتية تغطي نانومتر إلى جداول طول ميكرومتر. الأساليب المقدمة هنا للتحقيق في الخواص الفيزيائية (أي، حجم وشكل) البروتينات الغشاء (هنا، مياب، حوزتي أسبارتيل إينتراميمبراني من ماريسنيجري ميثانوكوليوس) في إيجاد حلول لتشكيل مذيل المنظفات مناسبة تماما لهذا الصك تشتت النيوترونات زاوية صغيرة، بين أمور أخرى. تقنيات تحديد الخصائص الفيزيائية الأخرى تعيق قدرتهم على معالجة الاشتراكات المنظفات في هيكل معقد البروتين-المنظفات. بالإضافة إلى ذلك، يوفر الوصول إلى "مختبر" بيو-ديوتيريشن قدرات فريدة من نوعها لإعداد الزراعات الواسعة النطاق والتعبير عن البروتينات يسمى الديوتريوم لنثر معزز إشارة من البروتين. لئن كان هذا تقنية لا توفر تفاصيل الهيكلية في الاستبانة، وفجوة المعرفة الهيكلية للبروتينات الغشاء يحتوي على العديد من مجالات البحوث عنونة دون أن يتطلب ذلك القرار قرب الذري. وتشمل هذه المجالات على سبيل المثال، تحديد الدول أوليجوميريك، تشكيل معقدة، التغييرات conformational أثناء اضطراب، وقابلة للطي/تتكشف الأحداث. يمكن سهولة إنجاز هذه التحقيقات من خلال تطبيقات لهذا الأسلوب.\nبروتينات الغشاء تم ترميزها بما يقدر 30 في المائة من جميع الجينات1 وتمثل أغلبية قوية من أهداف للعقاقير الطبية الحديثة. 2 هذه البروتينات تنفيذ مجموعة واسعة من المهام الحيوية الخلوية،3 ولكن على الرغم من وفرة، وأهمية – لا تمثل سوى حوالي 1 في المائة من مجموع هياكل أودعت في "سيقتضي البحوث" للبروتين الهيكلي المعلوماتية الحيوية (ركسب) بنك البيانات. 4 نظراً لطبيعتها مسعور جزئيا، وقد تم التصميم الهيكلي للبروتينات الغشاء زمنياً صعبة جداً. 5 , 6 , 7\nكما يتطلب العديد من التقنيات الفيزيائية الحيوية الجزيئات مونوديسبيرسي في حل للقياس، عزل البروتينات الغشاء من الأغشية الأصلية واستقرار هذه البروتينات في تقليد القابلة لذوبان في الأغشية الأصلية كانت منطقة نشطة للبحث في الآونة الأخيرة العقود. 8 , 9 , 10 هذه التحقيقات أدت إلى تطوير العديد من التجميعات amphiphilic رواية لجعل البروتينات الغشاء، مثل نانوديسكس،11،،من1213 بيسيليس،14،15 وأمفيبولس. 16 , 17 ومع ذلك، استخدام المنظفات المذيلات تظل واحدة من الأساليب الأكثر شيوعاً ووضوحاً لتلبية متطلبات القابلية للذوبان بروتين معين. 18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25 للأسف، لا واحد المنظفات أو السحر مزيج من المنظفات القائم حاليا الذي يفي بجميع بروتينات الغشاء؛ وبالتالي، يجب فحص هذه الشروط تجريبيا للمتطلبات الفريدة لكل البروتين. 26 , 27\nالذاتي تجميع المنظفات في الحل أعلاه تركزها مذيل حرجة لتشكيل هياكل تجميعية تسمى المذيلات. المذيلات تتكون من العديد من مونومرات المنظفات (تتراوح عادة ما بين 20-200) مع سلاسل الألكيل مسعور تشكيل نواة مذيل ومجموعات رأسه ماء مرتبة في طبقة شل مذيل تواجه المذيب مائي. قد سلوك المنظفات وتشكيل مذيل كلاسيكي وصف تشارلز تانفورد في تأثير مسعور،28 والأحجام وأشكال المذيلات من المنظفات المستخدمة عادة في غشاء بروتين الدراسات ووصف استخدام تشتت الزاوية الصغير. 29 , ودرست أيضا 30 منظمة المنظفات حول بروتينات الغشاء، ومن المتوقع تشكيل مجمعات البروتين-المنظفات (PDCs) مع المنظفات الجزيئات المحيطة البروتين في ترتيب يشبه المنظفات أنيق المذيلات. 31\nوأضاف أحد هو ميزة في استخدام المنظفات يمكن التلاعب بخصائص مذيل الناتجة بإدراج مواد التنظيف الأخرى. يحمل العديد من المنظفات خلط مثالية، واختر خصائص من المذيلات المختلطة قد حتى يمكن التنبؤ بها من مكونات ونسبة الاختلاط. 22 ولكن وجود المنظفات يمكن لا تزال تحديات للخصائص الفيزيائية بالمساهمة في الإشارة الإجمالية. على سبيل المثال، إشارة من المنظفات في PDC مع الأشعة السينية وتقنيات تشتت الضوء، لا يمكن تمييزها تقريبا من البروتين. 32 التحقيقات مع واحد-الجسيمات cryo-إلكترون مجهرية (cryo-م) تعتمد عادة على المحاصرين جزيئات (المجمدة)؛ تفاصيل الهيكلية من البروتين هي لا تزال تحجب بعض المنظفات أو تركيزات عالية من المنظفات التي تضيف إلى الخلفية. 33 نهج بديل نحو تفسير هيكل PDC كاملة (بما في ذلك مواد التنظيف) قد بذلت من خلال الطرق الحسابية التي تسعى إلى إعادة بناء المنظفات حول بروتين غشاء معين. 34\nفي حالة تشتت النيوترونات، تنتج ترتيب الأساسية-شل المنظفات في مذيل عامل نموذج الذي يسهم في تشتت ملاحظتها. لحسن الحظ، يمكن تغيير مكونات الحل بأنها لا تساهم في بعثرة الملاحظ الصافية. هذه العملية "على النقيض من مطابقة" يتحقق عن طريق استبدال الديوتريوم للهيدروجين لتحقيق كثافة طول تشتت الذي يتطابق مع الخلفية (المخزن). يجب أن يعتبر خياراً حكيما للمنظفات (مع نظرائهم الديوتيريوم المتاحة) ونسبة الاختلاط. المذيلات المنظفات، يمكن تنفيذ هذا الاستبدال باستخدام مطهر مع نفس مجموعة الرأس لكن بعد سلسلة الكيل الديوتيريوم (د-الذيل بدلاً من ذيل ح). نظراً للمنظفات جيدا مختلطة،35 على المجاميع سوف يكون بكثافة طول تشتت التي هي المرجحة الخلد-الجزء متوسط من العنصرين (ح-ذيول وذيول د). عندما هذا التباين المتوسط يتسق مع رئيس الفريق، يمكن أن يقابل هياكل تجميعية موحدة تماما لإزالة جميع المساهمات لنثر الملاحظة.\nنحن الحاضرين هنا وضع بروتوكول للتعامل مع تباين النيوترون المذيلات المنظفات بدمج جزيئات المنظفات كيميائيا متطابقة مع سلاسل الألكيل يسمى الديوتريوم. 19 , 36 , 37 يسمح هذا التباين المتزامن كاملة مطابقة مذيل الأساسية وشل، وقدرة فريدة على تشتت النيوترونات. 35 , 38 مع هذا المستوى المكرر إلى حد كبير من التفصيل، مطابقة التباين يمكن تمكين الدراسات خلاف ذلك غير مجد للهياكل بروتين الغشاء. بالإضافة إلى ذلك، يمكن توسيع هذا النهج النقيض مطابقة للنظم الأخرى التي تنطوي على مواد التنظيف، مثل البوليمر تبادل ردود الفعل39 والزيت عن الماء المشتتات أو40 أو حتى غيرها من الوكلاء سولوبيليزينج، مثل بيسيليس،41 البوليمرات الإسهامية نانوديسكس أو42 أو كتلة. نهج مماثل 43 ألف كما ورد في هذه المخطوطة، ولكن استخدام أنواع منظفات واحد مع استبدال الديوتريوم الجزئي على مجموعة الألكيل سلسلة و/أو رئيس، صدر مؤخرا. 37 بينما يمكن توقع هذا إلى تحسين توزيع عشوائي للهيدروجين والديوتريوم في جميع أنحاء المنظفات بالمقارنة مع النهج الذي قدم هنا، عدد محدود من الوظائف المتاحة في مواد التنظيف للاستبدال وخطوتين مطلوب توليف المنظفات يطرح تحديات إضافية للنظر فيها.\nالخطوات 1 و 2 من البروتوكول المفصلة أدناه وكثيراً ما تتداخل منذ التجربة الأولى التخطيط يجب أن يتم تقديم اقتراح نوعية. ومع ذلك، يعتبر تقديم الاقتراح هنا كخطوة أولى للتأكيد على أن هذه العملية ينبغي أن تبدأ قبل وقت كاف من تجربة نيوترون. كما تجدر الإشارة إلى أن خطوة أساسية، ينبغي إثبات أنه بهذا الاقتراح، أن يكون توصيف البيوكيميائية والفيزيائية (بما في ذلك الاستقرار والنقاء) من العينة التي تدعم الحاجة إلى دراسات النيوترونات. مناقشة عامة للتشتت النيوتروني زاوية صغيرة (بلا) خارج نطاق هذه المقالة. أ مقدمة موجزة ولكنها شاملة يتوفر في عمل مرجع تم مؤخرا نشر توصيف المواد كوفمان،44 والكتب المدرسية ركزت بيولوجية زاوية صغيرة حلاً شاملا نثر. 45 كذلك تعطي القراءة الموصى بها في جزء المناقشة. تشتت الزاوية الصغيرة يستخدم ناقل نثر ما يسمى Q كالكمية المركزية التي تصف عملية نثر. تستخدم هذه المقالة تعريف مقبول على نطاق واسع Q = 4π سين (θ)/λ، حيث θ هي نصف الزاوية بين الشعاع الوارد ومتناثرة و λ هو الطول الموجي للإشعاع النيوتروني في أنجسترومس. توجد تعاريف أخرى أن استخدام مختلف رموز مثل في ' لناقلات تشتت، والتي قد تختلف من 2π عامل أو بواسطة استخدام نانومتر بدلاً من انغستروم (انظر أيضا المناقشة من الشكل 10).\n1-إعداد وتقديم مرفق النيوترون شعاع الوقت والصك المقترح\nاستشارة على شبكة الإنترنت لتحديد مرافق تشتت النيوترونات التي توفر وصول المستخدم العامة النيوتروني شعاع الوقت، مثل أوك ريدج الوطني المختبرات (رنل). خريطة النيوترون التسهيلات والمعلومات حول النيوترونات البحوث في جميع أنحاء العالم متاح على الإنترنت. 46 أن تدرك أن هذه المرافق قد عادة المكالمات العادية للمقترحات؛ وهذا يحدد عند شعاع في المرة القادمة سوف تكون متاحة. تستخدم النيوترونات لمجموعة متنوعة من التطبيقات؛ ابحث عن زاوية صغيرة النيوترون نثر (SANS) الصكوك، لا سيما تلك التي لديها قدرات للعينات البيولوجية.\nاستخدام الموارد التي توفرها مرافق النيوترون للمساعدة في التنقل عملية تقديم اقتراح وقت شعاع النيوترون. التشاور مع النيوترون تشتت العلماء (NSS) المرتبطة الصك الذي سيتم تطبيق. استعراض للمرفق النيوترون المعلومات الحالية فيما يتعلق بالمواعيد النهائية، يدعو الاقتراح والمشورة لتقديمها؛ أوك ريدج وهذا متاح على الإنترنت. 47 يقدم الاقتراح الوقت شعاع بعد جميع المبادئ التوجيهية لتقديمها نجاح.\nإذا كان البروتين الديوتيريوم المطلوبة (انظر 2.2)، التي غالباً ما تدعمها النيوترون نثر مرافق المختبرات وخبرة مكرسة لإنتاج مواد الديوتيريوم. لطلب الوصول إلى مختبر بيو-ديوتيراتيون (المصرف) في رنل، حدد مصرف لبنان الصك الثاني في النظام المقترح. بينما هو استعراض الاقتراح بلا جدوى ولجنة استعراض علمي، يجري فحص طلبات مصرف لبنان فقط للجدوى. للمساعدة في استعراض جدوى مصرف لبنان، يقدم معلومات المستكملة طلب نموذج48 الذي يصف البروتوكول التعبير البروتين والعائد المقدر (متاح على شبكة الإنترنت).\nبعد نجاح استعراض الأقران لاقتراح وقت الحزم، تأكيد تاريخ منح وقت شعاع قبل التجربة. التأكد من أن جميع تفاصيل عينة والمخزن والصيغ مذكورة بشكل صحيح في الاقتراح المتعلق باستعراض مناسب. أية تغييرات على الخطة التجريبية المقترحة، بما في ذلك التغييرات في تكوين العينة والمخزن المؤقت، تتطلب إخطار مرفق.\nملاحظة: ينبغي أن تناقش التغييرات وقت ممكن مع الاستراتيجية الوطنية للمأوى المخصصة.\n2-تحديد نقاط المباراة التباين النيوترون والتباين اللازم لقياس البروتين\nجمع المعلومات (من معلومات المنتج الخاصة بالمورد، وقواعد البيانات على الإنترنت، ونشر القيم، إلخ) فيما يتعلق بتركيبة الذري ووحدات التخزين لمكونات النظام المنظفات لتكون مطابقة على النقيض. يتم استخدام هذه المعلومات تحديد النيوترون نثر طول الكثافة (SLDs) وذلك على النقيض من نقاط المباراة (CMPs) في الحل، هو أمر حيوي للحصول على الجودة بلا معلومات البيانات والهيكلية لبروتين غشائي من الاهتمام في السياق الحزب الديمقراطي المسيحي. جدول يلخص النقاط تطابق خصائص والتباين البدني للمنظفات التي يشيع استخدامها في الدراسات البيولوجية الفيزيائية للبروتينات الغشاء تضمين (الجدول 1).\nتحديد SLDs النيوترون باستخدام تطبيق ويب المهاد: "وحدات للتحليل من التباين تباين البيانات"49 (50 متاحة على شبكة الإنترنت مجاناً مقابل). ارتباط إلى دليل المستخدم الموجود على الصفحة الرئيسية. الوصول إلى الموقع وقراءة الوثائق المصاحبة. الشكل 1 و الشكل 2 تقديم لمحة عامة عن التباين وحدة الإدخال والإخراج لاثنين من الأمثلة ذات الصلة.\nملاحظة: مواقع أخرى لحساب SLDs متوفرة، مثل تلك التي يحتفظ بها المعهد الوطني للمعايير والتكنولوجيا (NIST) مركز "أبحاث النيوترون". 51\nفتح الوحدة النمطية التباين عن طريق النقر فوق 'التباين' الموجود في جزء التنقل الأيسر. تقديم نص لعنوان مشروع وإدخال التفاصيل أدناه لعنصرين هما (مثلاً المنظفات مجموعة الرأس والذيل) ك 'وحدة فرعية 1' و 'وحدة فرعية 2'.\nأدخل الصيغة الجزيئية لكل عنصر في مربع النص 'الصيغة'.\nملاحظة: أنا الزر 'يجب أن يتم تحديد إطار' "نوع مضمون" ' لإدخال صيغة الجزيئية. بالإضافة إلى ذلك، استخدام حرف 'X' في الصيغة للإشارة إلى ذرات الهيدروجين سهولة تبديل. يمكن إدخال تسلسل البروتين، والجيش الملكي النيبالي، أو الحمض النووي إذا المقابلة 'P'، 'R'، أو أنه ' تحديد أزرار الراديو. في حالة وجود نسخ متعددة من عنصر ضمن وحدة فرعية، يمكن تغيير القيمة ل 'نموليكوليس' تبعاً لذلك. مثال عملي هنا يتعلق بالدهن مثل المنظفات التي تحتوي على اثنين ذيول متطابقة، السماح بصيغة ذيل واحد إدخالها مع نموليكوليس يساوي 2.\nأدخل الحجم في مكعب أنجسترومس لكل عنصر في المربع الموجود أسفل 'حجم (Å3)'. استخدام الصيغة في تانفورد28 لسلاسل الكيل من طول n, Vالذيل = 27.4 + n * 26.9، حساب حجم الذيل التقريبي، أو الحصول على وحدات التخزين الجزيئي من معلومات المنتج المقدمة أو نشر القيم في الأدب.\nأدخل تفاصيل لمكونات المخزن المؤقت. تغيير 'حل عدد الأنواع في المذيب' باستخدام القائمة المنسدلة لإضافة أو إزالة الصفوف لكل مكون من مكونات المخزن المؤقت. وفي حالة تشكيل مذيل المنظفات، تشمل مونومرات المنظفات مجاناً كمكونات منفصلة المخزن المؤقت في تركيز مذيل الحرجة للمنظفات (CMC).\nانقر فوق 'إرسال' لإجراء العمليات الحسابية على النقيض نيوترون وتوليد صفحة نتائج التي يوفر جدول لنقاط المباراة كثافة والتباين طول نثر فضلا عن الصيغ لتحديد هذه المعلمات في أي نسبة مئوية معينة من د2س في المخزن المؤقت. استعراض المعلمات نثر مع إيلاء اهتمام خاص إلى CMPs المكون. إذا نقاط المباراة متشابهة (في حدود 10% د2س) وتركيز مذيل الحرة منخفض، ثم المتوسط CMP يمكن استخدامه لمطابقة التباين مساهمات المنظفات. في معظم الحالات، سوف تختلف CMP المنظفات مجموعة رأس وذيل بأكثر من 10-15%، إنتاج عامل شكل شل الأساسية في البيانات بلا الذي يعتم مباشرة مجموعة من الإشارات ونثر من البروتين وحدها.\nتقدير التباين بين المنظفات مجموعة الرأس والذيل. عندما لا تكون المنظفات رئيس مجموعة الألكيل سلسلة الذيل و CMPs جيدا المتطابقة، توافر وإدماج مطهر محل الديوتريوم يمكن السماح لنثر كثافة طول لتحديد مكونات التلاعب بها. في معظم الحالات، هذا سيتطلب تشكيل مذيل مختلطة من خلال إدراج المنظفات متطابقة مع سلاسل الألكيل استبدال الديوتريوم. إضافة الديوتريوم يثير كثافة طول نثر الأساسية التي شكلتها ذيول سلسلة الألكيل. في هذه الحالة، نقطة النهاية المرجوة، حيث أنه رئيس مجموعة شل CMP والأساسية سلسلة الألكيل CMP قيم متساوية تقريبا.\nرفع إلى اجتماع الأطراف الأساسية مذيل المنظفات أن يكون مساوياً تقريبا للرهن العقاري شل رئيس الفريق بتحديد نسبة ملائمة من خلط بين ح-ذيول وذيول د الذي يحقق التباين الكامل مطابقة مع المجموعات الرأس. شرطا مسبقاً لهذا التحديد هو المعرفة إلى اجتماع الأطراف لذيل سلسلة الكيل استبدال الديوتريوم. يتوفر نظير متاحة تجارياً إلى n-دوديسيل β-د-مالتوسيدي (DDM) مع جميع الهيدروجين سلسلة الألكيل الاستعاضة عنها بالديوتريوم (d25-DDM). كرر تباين الحسابات المذكورة في الخطوة 2، 1 لذيل قد 'بدلاً من' ح-الذيل '.\nحساب نسبة الخلد ذيل ح د-ذيل المطلوبة لمطابقة التباين مع فريق رئيس اللجنة المعنية بالمفقودين. يمكن أن تساعد الصيغة التالية مع هذا التصميم:\nCMPالرأس = CMPذيل ح * χذيل ح + CMPالذيل د * χد-الذيل\nحيث CMP هو كثافة طول التشتت و χ هو الكسر حجم المكون رئيس المنظفات، ذيل ح، أو د-الذيل. لحلول مخزنة من DDM، تنتج إدماج نسبة 44 في المائة من حيث الوزن (43 في المائة بالخلد) من المنظفات مجموع ك d25-DDM مع سلاسل الألكيل الديوتيريوم-الاستعاضة عن CMP واحد في 48.5 ٪ د2س لمكونات كل من رأس وذيل.\nالنظر في درجة الديوتريوم الاستعاضة عن بروتين غشائي. لقياس الإشارات نثر كافية من البروتين، إلى اجتماع الأطراف للبروتين ينبغي أن يكون على الأقل 15% د2س في الحل بعيداً عن المنظفات CMP وشروط القياس. الإشارة يزيد مع مربع هذا الفرق %. منذ اجتماع الأطراف البروتين غير مسمى يحدث عادة مع ~ 42% د2س في الحل (مشابهة للعديد من المجموعات رئيس المنظفات CMP)، وسم الديوتريوم من البروتين ضروري دائماً تقريبا. 52\n3-التعبير عن وتنقية بروتين غشائي للفائدة\nإعداد متوسطة رطل (مرق ليسوجيني) وتنمو الإشريكيّة القولونية (كولاي) الخلايا التي تأوي متجه إيندوسيبلي تعبير عن تسلسل البروتين الهدف.\nإعداد الحد الأدنى من وسائل الإعلام. أما ح2س أو س د2، حل 7.0 غرام/لتر (NH4)2حتى4، ز 5.25/L Na2هبو4، 1.6 غرام/لتر خ2ص4، وسترات الهيدروجين ثنائي الأمونيوم 0.50 جرام/لتر، والغليسيرول 5.0 غرام/لتر، 1.0 مل/لتر من 20% w/v مجسو 4·7H2س، و 1.0 مل/لتر من المعادن النزرة Holme (0.50 غرام/لتر كاكل2·2H2س، 0.098 غ/لتر كوكل2، 0.102 غرام/لتر CuSO4، 16.7 غرام/لتر فيكل3·6H2س، 0.114 g/L منسو4· ح2س و 22.3 غرام/لتر Na2EDTA·2H2س و 0.112 غرام/لتر زنسو4· ح2س). 53 , 54\nإعداد الحلول مخزون المضادات الحيوية المناسبة استخدام ح2س أو2د. ب.\nتعد حلاً أسهم الأيزوبروبيل-β-د-1-ثيوجالاكتوبيرانوسيدي باستخدام ح2س أو د2o.\nالعقيمة-تصفية جميع الحلول إلى جافة، وحاويات معقمة تستخدم فراغ أعلى زجاجة والمحاقن مرشحات مع حجم مسام 0.22 ميكرون.\nالتكيف مع خلايا كولاي يسمى الديوتريوم متوسطة قبل الصعود ل overexpression بروتين الديوتيريوم.\nتطعيم 3 مل متوسطة رطل مع مستعمرة معزولة من صفيحة أجار ليسوجيني مرق (رطل) أو خلايا من مخزون والغليسيرول مجمدة. تنمو الخلايا في 37 درجة مئوية في حاضنة تهز 250 لفة في الدقيقة أو خفض درجة الحرارة إلى 30 درجة مئوية أو أقل لتجنب فرط ثقافة عند حضانة بين عشية وضحاها.\nملاحظة: يمكن أن تختلف إجراءات التكيف. 55 , 56 , 57\nوبمجرد ثقافة رطل نمت كثافة بصرية في 600 نانومتر (OD600) ~ 1، تمييع 01:20 في 3 مل ح2س الحد الأدنى المتوسط وتنمو ل التطوير التنظيمي600 من ~ 1. كرر في 01:20 تخفيف استخدام متوسط الحد الأدنى الذي يحتوي على 50 و 75 و 100% د2س (أو ما يصل إلى2س د النسبة المئوية المطلوبة).\nملاحظة: يتم زيادة المحتوى "د"2س، وستنخفض معدلات النمو. قد تم الإبلاغ عن العلاقة بين نسبة2س د في استبدال الوسائط والديوتريوم النمو في البروتين في الأدب. 58 , 59 , 60\nيستمر تزايد الثقافة في مفاعل حيوي زيادة عائد كتلة الخلية الديوتيريوم (الشكل 3).\nملاحظة: وقد استعرضت إجراءات خطوة بخطوة لتشغيل مفاعل حيوي في أماكن أخرى. 61 , 62 , 63 , 64\nالحصاد والخلايا كولاي لتنقية البروتين واستخراج الغشاء\nبيليه الخلايا باستخدام الطرد المركزي في ~ 6,000 x ز ل ~ 30-45 دقيقة في 4 درجات مئوية.\nتنعيم بيليه الخلية التي نقع في المخزن المؤقت على الجليد ل ~ 30 دقيقة. ثم، ريسوسبيند برفق بيليه الخلية في المخزن المؤقت قبل بيبيتينج برفق مع بيبيت مصلية، أو لطيف هزاز في 2D الروك، إلى تركيز نهائي ~ 1 ز الخلية الرطب الجماهيري/10 مل المخزن المؤقت.\nملاحظة: مخزن مؤقت لمثال 50 ملم حبيس (حمض-(2-hydroxyethyl)-1-بيبيرازينيثانيسولفونيك 4)، ودرجة الحموضة 7.5، 200 ملم كلوريد الصوديوم تستكمل مع قرص مثبط البروتياز.\nحراكه الخلايا مع ثلاثة يمر الخالطون الضغط العالي في هذه المبادرة 10,000 حين تقشعر لها اﻷبدان التدفق إلى الخارج.\nملاحظة: اعتماداً على المستوى المطلوب، قد يكون تحلل الأساليب الأخرى المستخدمة (مثلاً، حسب الصحافة الفرنسية أو سونيكيشن).\nبيليه خلية الحطام بالطرد المركزي في ز x ~ 4,000-5,000 لمدة 15 دقيقة في 4 درجات مئوية. كرر هذه الخطوة حتى يتم توضيح المادة طافية.\nأولتراسينتريفوجي (~ 150,000 س ز لمدة 30-45 دقيقة) المادة طافية من الخطوة السابقة، الذي يحتوي الذوبان والغشاء الكسور. بيليه بعد تنبيذ فائق يحتوي على كسر الغشاء.\nريسوسبيند بيليه الغشاء في الخالطون دونس كبيرة وعزل الكسر الغشاء مرة أخرى عن طريق تنبيذ فائق (الخطوة 3.3.5). كرر هذه الخطوة مرة واحدة على الأقل لإزالة البروتينات فضفاضة ملزمة.\nجعل الأغشية هزاز لطيف ل ~ 30 دقيقة في 4 درجات مئوية في المخزن مؤقت الذي يحتوي على مواد تنظيف مناسبة لتنقية. Solubilization الظاهر عند التعليق يتحول من غائم إلى شفاف. إزالة المواد غير قابلة للذوبان بواسطة تنبيذ فائق (~ 150,000 س ز لمدة 30-45 دقيقة).\nملاحظة: مخزن مؤقت لمثال 50 مم هيبيس، درجة الحموضة 7.5، 500 ملم كلوريد الصوديوم، ايميدازول عيار 20 ملم و 4% (w/v) DDM لتنقية قبل ني2 + التقارب اللوني.\nتنقية البروتين بعد بروتوكول سبق أن وضعت لأشكال البروتونية.\nملاحظة: انظر نينغ وآخرون لبروتوكول تنقية مثال لمعلم هيكساهيستيديني م. ماريسنيجري JR1 إينتراميمبراني أسبارتيل البروتياز (د-مياب). كان العائد النهائي 65 ~ 1 مغ من الديوتيريوم من نمو ثقافة الخلايا الديوتيريوم 5 لتر، التي استخدمت في التجربة بلا (الشكل 4).\nتبادل البروتين المنقي في "المخزن المؤقت للصرف النهائي" لمطابقة التباين.\nإعداد 200 مل من "مخزن الصرف النهائي" يحتوي على المزيج الصحيح للتباين مطابقة، مثلاً،20 مم حبيس، درجة الحموضة 7.5، 250 ملم كلوريد الصوديوم، و 0.05% إجمالي DDM (0.028% DDM و 0.022% d25-DDM) في 49% D2o.\nحجته عمود حجم استبعاد مع > 2 أحجام العمود (CV) "من المخزن المؤقت الصرف النهائي" في 3.5.1 باستخدام نظام سريع بروتين سائل لوني (فبلك).\nبعد الحقن العينة، تشغيل العمود وعزل الكسور المقابلة لبروتين الفائدة.\nتركيز البروتين إلى التركيز النهائي المطلوب (2-5 ملغ/مل).\nملاحظة: حجم ~ 300 ميكروليتر مطلوب لملء ومبومو كوارتز أسطواني 1 مم المستخدمة لبلا.\nنحتفظ قاسمة للمخزن المؤقت مطابقة لبلا خلفية الطرح.\nملاحظة: يمكن أن تؤخذ قاسمة مباشرة من المخزن المؤقت إعداد، أو من الناحية المثالية من كسر شطف نظيفة في نهاية تشغيل فبلك.\n4-التحضيرات النهائية لشعاع الوقت وجمع بلا بيانات\nبعد أن تم قبول هذا الاقتراح وتمت الموافقة على الوصول إلى الموقع، استكمال كل ما يلزم من التدريب قبل الوقت المعين شعاع. هذا وتشمل prearrival، المستندة إلى ويب التدريب فضلا عن المختبر الإشعاعي، في الموقع، والتدريب الخاصة بالصك.\nملاحظة: الاحتياجات التدريبية قد تملي وصول مقدما لأول مرة للمستخدمين. يتوفر مزيد من المعلومات على الإنترنت. 66\nتحميل عينات ومخازن لجمع البيانات.\nملاحظة: لمحة عامة عن بعثرة البيولوجية زاوية صغيرة النيوترون (بيو-بلا) صك عينة بيئة المنطقة ويرد في الشكل 5.\nتحميل عينات والمخازن المؤقتة إلى خلايا الكوارتز. وتتوفر خلايا الكوارتز من عالم الصك أو مرفق. استخدام هلام-تحميل نصائح للوصول فتح معظم نماذج الخلايا ضيقة.\nالتأكد من أن يتم إغلاق مصراع شعاع، ثم نهج مجال البيئة عينة ومكان الخلايا الكوارتز في المغير عينة. سجل موقف مغير عينة لكل خلية العينة.\nالتحقق من المنطقة وضمان مسار الشعاع خالية من العرقلة، ثم ترك مجال البيئة عينة وفتح مصراع شعاع.\nملاحظة: بعناية اتبع كل مرفق القواعد واللوائح واطاعة كافة منشورات، والنصيحة من العلماء الصك. قد لا تكون إزالتها من الشعاع عينات والتلاعب بعد التعرض للشعاع دون الاحتياطات الخاصة التالية. التشاور مع الإشعاعية مراقبة فني (RCT) قبل هذه الإجراءات.\nتنفيذ الجدول المسح الضوئي لجمع البيانات آليا\nوتعمل الأداة من خلال عنصر تحكم مخصص البرمجيات على أساس ابفيف، "مطياف أداة مراقبة البيئة" (التوابل). اتبع الإرشادات لعملية الصك المقدمة من "العلماء تشتت النيوترونات". لمحة عامة عن windows عملية مسح الجدول يرد في الشكل 6.\nبعد إدخال المعلومات المطلوبة في المجالات المناسبة، تنفيذ الجدول المسح الضوئي وسوف تبدأ عملية جمع بيانات آليا. رصد التقدم المحرز عن طريق علامة التبويب '"مركز مسح الجدول"'.\n5-تقليل بلا بيانات من صورة ثنائية الأبعاد للأرض د 1\nتحديد كل ملف بيانات العينة والمخزن المؤقت من الأرقام المسجلة المسح الضوئي. سيتم تعيين كل قياس عدد مسح فريدة من نوعها. تعتبر هذه المعلومات مفيدة خلال الحد من البيانات التعرف على كل زوج المخزن المؤقت وعينه مقابلة.\nاستخدام برنامج مانتيدبلوت وبرنامج نصي بايثون للحد\nوترد النيوترون "تشتت المستخدمين" مع تفاصيل الحساب الوصول إلى البيانات الخاصة بهم على "الكتلة التحليل البعيد". 67 الدخول إلى "الكتلة التحليل البعيد" وتنفيذ "مانتيدبلوت" من سطر الأوامر. يتم توفير رقم 7 و رقم 8 لمساعدة هذه الخطوات.\nالحصول على "برنامج نصي الحد المستخدم" من "عالم نثر النيوترون" (وعادة ما يحدث هذا خلال التجربة)؛ هذا البرنامج النصي هو أساس بيثون وسيحتوي كل المعايرة اللازمة وتسويات التحجيم تقليل صورة نثر 2D في مؤامرة د 1 من شدة متناثرة كدالة تشتت الزاوية، I(Q).\nفتح "البرنامج النصي الحد المستخدم" المتوفرة في مانتيدبلوت ووضع أرقام المسح المقابلة أو تحديد الهوية لأزواج عينة والمخزن المؤقت في القائمة المناسبة.\nتنفيذ البرنامج النصي لتوليد البيانات انخفاض كملف نص أربعة أعمدة (ترتيب العمود هو فاء، I(Q)، I(Q) خطأ، خطأ س) في الموقع المحدد. الحق انقر فوق مساحة عمل مناسبة في مانتيدبلوت وحدد "مؤامرة مع الأخطاء..." لإجراء دراسة أولية لنثر التشكيلات الجانبية.\n6-تحليل البيانات للمعلمات الهيكلية تشتت الجسيمات\nنقل ملف البيانات انخفاض من التحليل server إلى كمبيوتر محلي باستخدام نقل الملفات FTP آمنة. يمكن إجراء ذلك باستخدام برامج مثل FileZilla أو CyberDuck. وترد إرشادات إضافية وتفاصيل الاتصال بنظام ملفات الملقم تحليل صفحة تسجيل الدخول analysis.sns.gov.\nتنزيل أتساس البرمجيات جناح65،68 (جناح أتساس كله). 69 البرامج الفردية70 متاحة أيضا على الإنترنت لتحليل البيانات بلا، إلا وهي تحديد المعلمات الهيكلية ونماذج منذ البداية .\nملاحظة: وتتوفر العديد من الخيارات لبلا تحليل البيانات من بيوماكروموليكوليس. 45\nاستخدام بريموس71 لرسم البيانات، المخزن المؤقت التحجيم والطرح، وتحليل جينر.\nشن أتساس '"تحليل البيانات ساس"' التطبيق وتحميل البيانات انخفاض الملفات المقابلة للزوج عينة والمخزن المؤقت.\nلتغيير حجم المخزن المؤقت بشكل صحيح, حدد نطاق بيانات في عالية Q (Q > 0.5-1) حيث كل ملامح متشابهة وشقة، وانقر فوق الزر 'النطاق' الموجودة ضمن 'عمليات' علامة التبويب. سيتم تطبيق عامل مقياس للمخزن المؤقت مثل ينبغي أن تتداخل هاتان المنطقتان مسطحة. استخدم تنبيه: ينبغي أن يكون هناك سببا معقولاً مادية التي تبرر زيادة كثافة المخزن المؤقت ليطابق النموذج. إذا كان التباين كبيرا، استشر عالمة صك للنهج صالحة للطرح الخلفية. 44 , 45 , 72\nزيادة نطاق البيانات لعرض كافة النقاط. انقر فوق 'طرح' للقيام بهذه العملية. انقر بالزر الأيمن في مكان آخر مطروح المخزن المؤقت في وسيلة الإيضاح وحفظ هذا الملف للتحليل اللاحق. ويوجز الشكل 9 استخدام علامة التبويب 'العمليات'.\nإجراء تحليل جينر عينة طرح المخزن المؤقت للبيانات باستخدام علامة التبويب 'تحليل' تطبيق '"تحليل البيانات ساس"'.\nتأكد من تحديد الملف الصحيح في القائمة وانقر فوق 'دائرة نصف قطرها Gyration'. محاولة الآلي لأداء جينر تناسب ستقدم عن طريق النقر فوق الزر 'أوتورج'.\nتوسيع نطاق البيانات المستخدمة لتشمل كافة البيانات منخفضة-Q والبدء في تضييق نطاق البيانات بأخذ النقاط العالية-Q حتى Qmax * صز الحد أدناه 1.3. استخدام قطعة المخلفات للتحقق من أن البيانات الخطية في نطاق صالح. جينر تناسب غلة تقريبي Rg ، و0 تشتت الجسيمات.\nإجراء تعديلات صغيرة على احتواء المنطقة ورصد حساسية هذه القيم إلى نطاق البيانات المستخدمة في الاحتواء. يوضح الشكل 10A استخدام الأداة 'دائرة نصف قطرها Gyration'.\nالحصول على وظيفة التوزيع الاحتمالي (P(r)) في جنوم. 73 سيتم استخدام ملف الإخراج التي تم إنشاؤها هنا كمدخل أساسها عملية النمذجة.\nبدء "معالج توزيع المسافة" ضمن علامة التبويب 'تحليل' الحصول على حسن صالح للبيانات أمر ضروري للحصول على نموذج جودة. لمزيد من المعلومات حول كيفية الحصول على دقة يناسب، يرجى الاطلاع على استعراض74 من بوتنام، et al.\nملاحظة: البرنامج "جنوم" يوفر معلومات إضافية حول الملاءمة تتجاوز "معالج توزيع المسافة". يوضح الشكل 10B الاستخدام السليم للأداة '"توزيع المسافة"'، و الرقم 11 ويوضح بعض الأخطاء الشائعة التي تواجه.\nتحديد Dmax، المسافة القصوى interatomic داخل الجزيء.\nتقدير قيمة ل Dmax بإلغاء تحديد المربع لإجبار رماكس = 0 وإدخال قيمة كبيرة ل Dmax (150، على سبيل المثال). العاشر-التقاطع الأول في مؤامرة P(r) غلة هذا التقدير.\nالتغييرات التزايدية إلى هذه القيمة Dmax ومجموعة من البيانات المستخدمة أو عدد النقاط المستخدمة في الملاءمة لتحسين غنوم يصلح للبيانات ومنحني P(r) الناجمة عن ذلك.\nمواصلة صقل تناسب غنوم وحفظ ملفات الإخراج غنوم مع معلمات مناسبة جيدة للاحقة منذ البداية خطوات النمذجة.\nمحاكاة بلا ملامح من نماذج PDB عالية الدقة باستخدام برنامج كريسون. 75\nافتح البرنامج وحدد الخيار '0'. حدد اسم ملف PDB في المستعرض الملف المنبثقة. اضغط enter لقبول الإعدادات الافتراضية، باستثناء تعيين سلسلة ديوتيريشن الكسور وجزء صغير من د2س في المذيب لتحقيق معالم التباين السليم.\nيصلح هذا النموذج إلى مجموعة البيانات تجريبية بإدخال 'ص' واختيار ملف البيانات في المستعرض الملف المنبثقة. قبول القيم الافتراضية المتبقية، وسيتم كتابة ملفات الإخراج في موقع ملف PDB. الملف '.fit' يحتوي على معلومات التشكيل الجانبي نثر المتوقعة من النموذج الثلاثي الأبعاد ذات الدقة العالية.\n7-إنشاء نماذج Ab منذ البداية من بلا بيانات.\nملاحظة: داميف76 ودامين77 داخل جناح البرمجيات أتساس يتم استخدامها لإعادة بناء ذرة دمية نماذج (السدود) باستخدام عملية محاكاة انلينغ من غنوم الإخراج، الذي يحتوي على البيانات P(r)، أو معلومات حول الاحتمال أو التردد إينتيراتوميك المسافات داخل تشتت الجسيمات. يمكن تشغيل هذه البرامج في الوضع الدفعي أو على ملقم ويب على الإنترنت أتساس.\nبدء تشغيل "معالج الشكل" بريموس من الزر 'داميف' في التبويب 'تحليل' من '"تحليل البيانات ساس"'، واستخدام تحديد يدوي للمعلمات. ويتضح في الشكل 12مدخلات للمعالج.\nتعريف النطاق جينر من الاحتواء (الخطوة 6.3.2) والمضي قدما إلى الخطوة التالية باستخدام أزرار التنقل. تعريف قيم تناسب من الأرض P(r) (الخطوة 6.4)، والمضي قدما إلى الخطوة التالية.\nوتوفر معلمات أساسه عملية النمذجة. أدخل بادئة لأسماء الإخراج النموذجي (مثلاً، سانسينفيلوبي)، اختر أما النمذجة وضع 'سريعة' أو 'بطيئة'، قم بإدخال قيمة لعدد نماذج (17 الموصى بدلالة إحصائية)، وحدد من الخيارات المتاحة للجسيمات التماثل، أنيسوميتري، ومقياس الزاوي (إذا كانت معروفة). ضمان أن المربعات يتم فحص نماذج متوسط مع دامافير وصقل النموذج النهائي مع دامين.\nبدء العملية باستخدام الزر 'الالتزام'. بمجرد اكتمال العملية، عرض وحفظ دليل العمل.\nملاحظة: عملية النمذجة نموذجية واحدة، صغير البروتين يمكن أن يستغرق بضع ساعات مع كمبيوتر شخصي نموذجية. يتم تخزين الملفات في الدلائل المؤقتة حتى حفظه.\nتراكب وركب النهائي بلا المغلف مع نموذج الاستبانة ذات صلة باستخدام سوبكومب داخل أتساس. وضع نسخة من النموذج PDB الاستبانة إلى أن يكون مناسباً للظرف بلا في دليل العمل. تنفيذ سوبكومب من سطر الأوامر باستخدام أسماء ملفات PDB كوسيطتين مع هيكل قالب سرد أولاً: $ سوبكومب HiRes.pdb SANSEnvelope.pdb\nملاحظة: سيتم كتابة اسم الملف الثاني سرد كملف جديد مع "r" إلحاق إلى نهاية وبعد الإحداثيات الجديدة لاستعلاء على بنية القالب.\nتصور أساسه نموذج نتائج استخدام بيمول (pymol.org)، برنامج عرض رسومات ثلاثية الأبعاد جزيئية. الرقم 13 يوفر لمحة عامة عن عمليات بيمول.\nملاحظة: وهناك نشر المبادئ التوجيهية للنمذجة الهيكلية للبيانات تشتت الزاوية الصغير من الجزيئات الحيوية في الحل. 78\nبدء تشغيل التطبيق بيمول وفتح ملفات.pdb تناظر 3D بلا المغلف والانحياز سوبكومب بنية عالية الدقة ليتم عرضه.\nتصور المغلف بلا التي تمثل هذا النموذج كسطح. انقر فوق في 'الموجود بجانب نموذج وحدد' إظهار: ك: السطح '.\nتصور بنية العمود الفقري البروتين ذات الدقة العالية التي تمثل هذا النموذج كرسم كاريكاتوري. حدد في 'الزر الموجود بجانب هذا النموذج وحدد' إظهار: ك: الكرتون '. عرض السلسلة كقوس قزح من N-إلى ج-المحطة عن طريق تحديد الزر 'ج' و '"من سلسلة": تشينبووس.\nتعديل شفافية تمثيل السطحية للوضوح. من شريط القوائم 'الإعداد'، حدد 'الشفافية» سطح» 40%'.\nجعل خلفية بيضاء وغير مبهمة. من شريط القائمة 'عرض'، حدد 'خلفية»' وتحديد 'معتمة' إلغاء تحديد هذا الخيار و 'أبيض' بمناسبة هذا اللون للخلفية.\nملاحظة: يمكن الاطلاع على عمليات إضافية واستخدامات بيمول في PyMolWiki.org.\nينبغي أن تنقل شعاع الوقت وصك مقترح وضوح كافة المعلومات اللازمة للجنة الاستعراض حيث أنه يمكن إجراء تقييم صحيح للتجربة المقترحة. الاتصالات مع استراتيجية الأمن القومي يقترح العالية للمستخدمين عديمي الخبرة. استراتيجية الأمن القومي تقييم الجدوى الأولية وتقديم الاقتراح دليل للتأكيد على جدوى وسلامة وإمكانات العلم عالية التأثير. ينبغي أن تتضمن المعلومات المقدمة في الاقتراح معلومات خلفية وسياق لأهمية البحوث؛ المعرفة التي من المتوقع أن يكون المكتسبة، وكيف يؤثر ذلك الفهم الحالي في ما يتصل مجال العلوم؛ وصف العمل وعينات، والأساليب، والإجراءات التي سيتم اتباعها؛ وكذلك، إذا كان ذلك ممكناً، الإنتاجية السابقة للفريق في المرفق، بما في ذلك المنشورات ذات الصلة ونتائج. موارد مفيدة، مثل قوالب اقتراح ونصائح لإعداد الاقتراح، تتوفر للمستخدمين عبر "المدخل المستخدم العلوم النيوترونية" (neutrons.ornl.gov/users).\nتجربة التخطيط هو عملية دينامية التي غالباً ما تبدأ خلال المراحل الأولية لتقديم الاقتراح، ولكن قد لا يكون تصور تماما حتى قبل التجربة. ومع ذلك، نضع في اعتبارنا أن أي التغييرات التي تنحرف كثيرا عن الوصف الوارد في الاقتراح (بما في ذلك إدخال تغييرات على شروط المخزن المؤقت أو تكوين عينة) يجب أن توافق عليها المرفق قبل البدء التجربة.\nويفترض هذا البروتوكول أن أسلوب للتعبير عن وتنقية بروتين غشائي من الفائدة في المذيلات المنظفات في الحل وقد ثبت بنجاح. وفي هذه الحالة، هو بروتين غشائي من اهتمام حوزتي أسبارتيل إينتراميمبراني (IAP)، بروتوكول تنقية المنشأة، وقد حددت مسبقاً لتكون قابلة للذوبان والنشطة في المخزن المؤقت الذي يحتوي على المذيلات DDM.\nهنا، علينا أن نبدي حسابات التباين النيوترون باستخدام نشارة: وحدة التباين لإيجاد حل للبروتين الأكاديميات في مطابقة التباين مختلطة DDM/المذيلات d25-DDM. كان أولاً تحديد درجة الاختلاط بين المنظفات اثنين اللازمة لتحقيق توافق على النقيض تام من مذيل الاستراتيجية المبينة في هذه الوثيقة. كانت النتيجة النهائية لتحديد التباين النسبي لكل مكون والخلفية (نسبة2س2الباب ح) اللازمة التباين-مباراة بعثرة من المنظفات الصناعية من أجل مراقبة بعثرة البروتين فقط.\nيوضح الشكل 1 من مدخلات مناسبة للوحدة النمطية "مهاد التباين" والناتج لحساب التباين DDM المنظفات مجموعة الرأس والذيل كمفارز 1 و 2، على التوالي. الصيغة المستخدمة للفريق الرئيسي هو ج12ح14س7س11 بحجم 3483، وصيغة ذيل سلسلة الألكيل يرد وصفها ج12ح25 بحجم 3503.\nومن الواضح من إخراج وحدة التباين أن DDM المجموعة رأس وذيل نثر مختلفة الطول الكثافة، وسيتبع ذلك التباين بين هذين العنصرين. ل DDM، المجموعات رئيس لها CMP في 49% د2س بينما ذيول سلسلة الألكيل CMP في 2% د2س، مع بهم CMP المتوسط التي وقعت في 22% D2o. ولذلك، سيكون هدف الخطوة التالية لتصميم مذيل مختلطة تتضمن سلاسل الألكيل الديوتيريوم-الاستعاضة عن زيادة CMP متوسط من ذيول المنظفات لمطابقة CMP المجموعات الرأس. وأعيد حساب التباين مطهر المستبدلة، DDM مع ذيل الكامل الديوتيريوم (d25-DDM)، وبالمثل يؤدي في المقابل بين المجموعة رأس وذيل. ومع ذلك، على النقيض من قيم ح-الذيول وذيول د تختلف اختلافاً كبيرا. نذكر بأن المنظفات خلائط معروفة لإنتاج المذيلات المختلطة جيدا في الحل،22 وبالتالي ينبغي إنتاج مزيج من هذه ح ود-ذيول في صميم مذيل المساواة SLD متوسط لرئيس مجموعة شل، العائد من مذيل بمفرده CMP. نظراً لرئيس الفريق المشترك إلى DDM و d25-DDM، تتمثل الاستراتيجية في إيجاد خليط من هذه المنظفات التي تنتج قيمة متوسط تباين من ذيول المختلط الذي يطابق على النقيض المجموعات الرأس.\nالهدف المتوسط CMP ذيول المنظفات أن الجماعات مالتوسيدي الرأس، أو 49% D2o. يجب أن يكون معروفا لتقدير نسبة خلط CMP متوسط لكل مكون من مكونات ح-الذيل والذيل د. وهذه القيم لبعض المنظفات الشائعة والمتوفرة تجارياً الديوتريوم المسمى النظراء وترد في الجدول 1. باستخدام هذه القيم CMP DDM و d25-DDM، الكسر الخلد ذيول ح وذيول د يرضي المعادلة المنصوص عليها في الخطوة 2، 2 χد-ذيول = 0.43.\nيوضح الشكل 2 إسهاما أكثر تقدما "التباين مهاد" الوحدة النمطية التي يمكن استخدامها للتأكد من ظروف المباراة النهائية مذيل متباينة تباين وتحديد درجة ديوتيريشن اللازمة على البروتين. هنا، وحدة فرعية 1 يشير إلى مذيل مختلطة مطابقة التباين مع 2 من مكونات و DDM و d25-DDM، بينما يشير وحدة فرعية 2 بحوزتي أسبارتيل إينتراميمبراني ماريسنيجري م. JR1 (مياب) قدمها في تسلسل الأحماض الأمينية. تم رفع تحالف اليسار الديمقراطي البروتين بالتعبير في وسائط النمو الديوتيريوم تؤتي اجتماع الأطراف للبروتين في المخزن المؤقت الذي يحتوي على2~ 92% D o. وتقترح درجة الفصل بين المباراة نقطة البروتين في 92% د2س وشرط القياس (48.5 ٪ د2س) سيتم الحصول على تلك الإشارات ونثر كافية من البروتين.\nإنتاج ممياب د أجريت مع الخلايا 2 رشيد كولاي إيواء متجه pET22b-ممياب. متوسط الحد الأدنى مع الجلسرين غير المسماة في 90% د2س وقد اختيرت المتوسطة النمو. بعد التكيف إلى متوسط الحد الأدنى 90% د2س، وكان حجم الثقافة تحجيم تصل إلى 400 مل ويستخدم لتطعيم 3.6 L الطازجة 90% د2س المتوسطة الدنيا في سفينة مفاعل حيوي ل 5.5.\nويوفر الشكل 3 تتبع القيم العملية أثناء زراعة دفعة بنك الاحتياطي الفيدرالي. وقت التطعيم، كان نقطة تعيين درجة حرارة 30 درجة مئوية، والأوكسجين الذائب (DO) تعيين نقطة 100%، والانفعالات مجموعة وأشير إلى 200 لفة في الدقيقة، وكان معدل تدفق الهواء المضغوط 4 لتر في الدقيقة. وعقدت درجة الحموضة أعلاه نقطة مجموعة من 6.9 باستخدام حل 10% w/v من هيدروكسيد الصوديوم في 90% D2سين مرة سبايك أشارت بدأ نضوب والغليسيرول الأولية 5 غرام/لتر، تغذية (30% w/v والغليسيرول، 0.2% مجسو4 في 90% D2O)، التي استمرت طوال الزراعة. بعد حوالي 7 ساعات من التغذية، وخفضت درجة الحرارة الثقافة إلى 18 درجة مئوية والايزوبروبيل-β-د-1-ثيوجالاكتوبيرانوسيدي تمت إضافة إلى تركيز نهائي من 1 مم. عند حصاد الثقافة، تم جمع حوالي 145 غرام من الوزن الرطب للصق الخلايا عن طريق الطرد المركزي (6,000 س ز لمدة 45 دقيقة)\nوشرع تنقية مياب د أما بالنسبة للانزيم البروتونية إلا أن الغلة إنزيم كان أقل بكثير، ونقاء النهائي كان أقل نوعا ما من نموذجي. من 5 لتر، ~ 20 ز الأغشية الرطبة كانت معزولة، وجميعها كانت solubilized في DDM لتنقية وتحميلها على ني2 + تقارب العمود الأول. لتعظيم العائد تنقية، تضعف التدفق عن طريق الكسر وإعادة تشغيل في العمود ني2 + تقارب. وكرر هذا الإجراء لمرة ثالثة قبل التلميع العينة مياب د تتركز حجم الاستبعاد اللوني (الشكل 4).\nيصور الشكل 5 خلية عينة كوارتز والإعداد مغير العينة ذات الصلة به. بيئات عينة يديرها الحيوية-بلا فريق العمليات والاستراتيجية الوطنية للمأوى. ويمكن ترتيب مجموعة متنوعة من بيئات مختلفة لإجراء القياسات مع التحكم في درجة الحرارة والرطوبة التحكم وتراجع الميكانيكية، ارتفاع درجة الحرارة والضغط المتواصل، بين أمور أخرى.\nالشكل 6 يوضح بيو-بلا عمليات وتنفيذ الجدول الآلي بالأشعة. يتم تكوين الجدول المسح الضوئي لتكون بديهية وسهلة الاستعمال. ضمن علامة التبويب الأولى (تحميل العينات)، يتم توفير معلومات حول تبديل عينة والإعداد، مثل تحديد العينات في كل موضع في المغير عينة وسمك الخلية، ونوع العينة (شعاع مفتوحة، عينة، الخلفية، إلخ). ويمكن تطبيق علامات بيانات التعريف الإضافية هنا أيضا. على علامة التبويب التالية (خطة التجربة)، يتم تعريف التكوين الصك وأي من المعلمات المرتبطة (مثل التحكم في درجة الحرارة). هذه الخطوة يتم ترتيبه من قبل دوائر الأمن القومي في بداية التجربة. يجب إدخال المستخدم ببساطة مرات القياس لكل عينة (بالثواني). علامة التبويب النهائي (تنفيذ مسح) يقدم ملخصاً لبيانات مسح الجدول ويسمح الفحص الآلي ليتم تنفيذها.\nبعد أن يتم تسجيل الصور نثر 2D، يجب أن تخفض هذه البيانات لمؤامرة د 1 من الكثافة مقابل Q-وظيفة من زاوية التشتت. خلال الحد من البيانات، يتم أيضا تطبيق تصحيحات الصورة مثل الأقنعة الواقية من الحساسية بكسل والطرح الخلفية المظلمة. صمم برنامج مانتيدبلوت لتفسير الحيوية الخام-بلا بيانات الصك. استراتيجية الأمن القومي عموما ستساعد في الحد واسترداد البيانات النهائية في نهاية التجربة.\nالشكل 7 لمحة الكتلة التحليل البعيد بالوصول إلى مانتيدبلوت وإطار البرنامج النصي يستخدم للحد من البيانات. البيانات الخام موجوداً في المجموعة تحليل البعيد (analysis.sns.gov) عن طريق مصادقة المستخدم أوكامس/إكسكامس. بعد تسجيل الدخول إلى سطح المكتب البعيد، يمكن إطلاق البرنامج مانتيدبلوت من إطار المحطة طرفية ببساطة تنفيذ 'مانتيدبلوت' تحت أي مسار. فتح "إطار البرنامج النصي" في مانتيدبلوت وتحرير "البرنامج النصي للحد المستخدم" حسب توجيهات استراتيجية الأمن القومي. تنفيذ البرنامج النصي هذا سيقوم بإنشاء ملفات البيانات المخفضة، التي يمكن ثم نقلها إلى جهاز محلي للتحليل باستخدام FTP آمنة.\nالشكل 8 يوضح التآمر وعرض البيانات بعد تنفيذ البيانات "المستخدم النصي تخفيض" سوف تظهر في نافذة مساحات العمل. بشكل افتراضي، سيكون البيانات المدمجة النهائية _f لاحقة الملحقة. انقر بزر الماوس سيتيح "الطيف مؤامرة" مع الأخطاء ليتم تحديده وبيانات رسم. يتم الوصول إلى تفضيلات العرض عن طريق تحديد تفضيلات من شريط القائمة 'عرض'. تنسيق المحاور والتآمر النطاق الوصول إليها بسهولة بواسطة النقر المزدوج المحاور. يجب أن تظهر ملامح نثر المخازن المؤقتة، التي تحتوي على لا تشتت الجسيمات ذات حجم كبير كخط ثابت نسبيا (كثافة ثابتة). للعينات، وينبغي أن تراعي كثافة في انخفاض نثر زوايا (Q) مع تحلل أسي على خلفية مسطحة غير متماسكة.\nالرقم 9 يوفر لمحة عامة عن الطرح السليم المخزن المؤقت باستخدام حزمة برامج تحليل البيانات SAS (أو بريموسقت) عقب اختزال البيانات. في كثير من الأحيان الخلفية غير متماسكة (كثافة في عالية-Q) قليلاً غير متطابقة بين العينة والمخزن المؤقت. للطرح الصحيح، ينبغي أن تتداخل مع البيانات في هذه المنطقة. تصحيح مقياس ينطبق عامل مقياس كثافة البيانات الذي ينتج بيانات متداخلة، ويمكن أن يؤديها في الطرح. إذا كان عامل مقياس النتائج في المخزن المؤقت لبيانات النقاط بكثافة أكبر من النقاط المقابلة في العينة، هذه النقاط ستكون سلبية ولا المقدمة في مؤامرة سجل. إذا كانت القيم السلبية في الملف المخزن المؤقت طرح وفيرة، إجراء تخفيض طفيف في معامل حجم المخزن المؤقت وتنفيذ الطرح مرة أخرى.\nيوفر الشكل 10 الأعراف المثال "جينر بريموس" و "المعالجات توزيع المسافة". ويوفر تحليلاً جوينير تقديراً أولياً لدائرة نصف قطرها الجسيمات gyration من البيانات ونثر زاوية منخفضة. بيانات نقترب من الصفر، ينبغي أن تكون منطقة خطية موجودة في البيانات. تركيب الخط في هذه المنطقة يسمح Rز يجب تحديد من المنحدر وأنا0 استقراء من التقاطع كثافة في Q = 0. اتجاها تصاعدياً في البيانات مع اقتراب Q صفر يشير إلى التجميع في العينة، بينما الاتجاهات النزولية عادة ما يدل على ريبولسيونس إينتيربارتيكلي. هذه الاتجاهات أكثر وضوحاً عندما يتم توزيع البواقي غير العشوائية. الحد الأعلى جينر صالح لجسيمات كروي مقيد بسبب ('s < 1.3ز ف * R ' يستخدم بدلاً من سؤال في البرنامج أتساس).\nRز يحدد مياب د من هذه تناسب جينر كان 15.4 ± 1.1 Å حيث قدرت أنا0 0.580 ± 0.001.\nيسمح معالج توزيع المسافة إجراء تغييرات منهجية لمعلمات P(r) صالح. منحنى P(r) تحويل فورييه غير مباشرة المنحنى يصلح للبيانات التجريبية. ولذلك، من الضروري للتحقق من أن يصلح في اللوحة اليمنى يعكس بدقة البيانات التجريبية. للاحتواء هو موضح في هذا المثال، Dmax 46 تم الحصول عليها.\nويوضح الشكل 11 الأخطاء الشائعة في اختيار Dmax. Dmax مصطنع الكبيرة التي غالباً ما تكون الأسباب القيم P(r) لتصبح السلبية الدالة P(r) يتذبذب حول المحور س. Dmax مصطنع صغيرة يؤدي إلى منحنى P(r) مبتوراً الانتقال مفاجئ إلى رماكس = 0.\nأولى الخطوات في "معالج الشكل بريموس" متطابقة إلى جينر والمعالجات توزيع المسافة. متى قدمت هذه المعلومات للحصول على نوبات جيدة للبيانات التجريبية، يتم تكوين الإعداد النموذجي منذ البداية .\nويوضح الرقم 12 من مدخلات مناسبة "معالج الشكل بريموس". هنا، تجريبية بلا بيانات للأكاديميات وزودت بمقياس في أنجسترومس، وأعطيت بادئة الملف المتوقعة من "سانسينفيلوبي". وطلب مجموعة من نماذج الذرة الدمية الأولى 17 إلى يتم إنشاؤها باستخدام وضع نموذج "سريع" مع لا التماثل (P1) تطبق ولا أنيسوميتري المحدد. مجموعة نماذج 17 سوف يكون الانحياز، بلغ متوسط، وتصفيتها مع دامافير، ونموذج متوسط المكررة باستخدام دامين. التفتيش على بادئة-damsel.log نص الوثيقة ملخصاً لمعيار الاختيار وأي التخلص من المجموعة من النماذج. نموذج المكرر النهائية المكتوبة بوصفها سانسينفيلوبي-1.pdb.\nنموذج البرنامج يستخدم سوبكومب للقيام استعلاء المغلف بلا مع نموذج عالي الدقة، مع فقط اثنان PDB بنية الملفات كمدخل. بشكل افتراضي، يتم إلحاق اسم الملف إعادة توجيه وفرضه "r".\nمرة واحدة بلا المغلف وبنية عالية الدقة وقد تم فرضه، ويمكن تصور هذه النماذج باستخدام الرسومات الجزيئية أي برنامج عرض. النتائج من بيمول هي مناسبة لنشر صور عالية الجودة ويمكن استخدامها لتأكيد النتائج الفيزيائية الحيوية المتصلة بالتحقيق في الهيكلية. هنا، علينا أن نظهر بضع عمليات بيمول الأساسية المستخدمة لتقديم تمثيلات ثلاثية الأبعاد ووجهات النظر لهياكل فرضه الناتجة عن ذلك.\nالرقم 13 يوفر لمحة عامة عن عملية التصور بيمول. متى تم فتح ملفات PDB هيكل في بيمول، يجب أن تكون النماذج مرئية في إطار عارض بيمول. تغيير البيانات من كل نموذج باستخدام في ' الزر الموجود بجوار كل اسم ملف. استخدام تمثيل سطحية للمغلف بلا وتمثيل الكرتون للبروتين العمود الفقري من طراز عالي الدقة. حدد نظام ألوان مناسبة من الخيارات المتاحة تحت الزر 'ج'. لسلاسل البروتين، ويوفر تلوين "تشينبوو" تدرج لون من N-إلى ج-المحطة للمساعدة في تفسير. يتم تطبيق الشفافية على تمثيل السطحية للسماح لتصور أفضل لهيكل البروتين داخل المغلف. لنشر الصور، ينصح بخلفية بيضاء. بمجرد تطبيق قوائم الانتظار هذه التصور، يمكن دراسة هياكل ثلاثية الأبعاد. يمكن أن يؤديها التلاعب من منظور وجزيء التناوب/الترجمة بالنقر والسحب في الهيكل.\nرقم 1. استخدام "التباين مهاد" للوحدة النمطية لتحديد معلمات التباين لمكونات دوديسيل مالتوسيدي (DDM)- تظهر قيم الإدخال في الشاشة على اليسار مع الإخراج اللاحقة إلى اليمين. يتم الوصول إلى الصفحة إدخال وحدة التباين بواسطة النقر فوق 'التباين' (دائرة خضراء) من الملاحة القائمة على الجانب الأيسر من كل شاشة. مناطق الإدخال لعنوان المشروع ومكونات المخزن المؤقت، والوحدات الفرعية 1 و 2 هي وصفت على هذا النحو. إخراج الصفحات تحتوي على خصائص الجسيمات الهامة المعلومات والتباين لوصف النظام. الجداول ذات الصلة والمحسوبة مطابقة النقاط قد تم محاصر في أورانج للوضوح. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nرقم 2. استخدام "التباين مهاد" للوحدة النمطية لتحديد معلمات التباين لمكونات المجمع البروتين-المنظفات الغشاء. في هذه الحالة، قد أعطيت الإدخال لوصف نظام PDC عموما في حل مخزنة بشكل مؤقت. وصف وحدة فرعية 1 النقيض يقابل مختلطة تتألف من DDM مع 43% بالخلد ك d25 DDM مذيل. ويصف وحدة فرعية 2 بروتين غشائي، مع تسلسل الأحماض الأمينية للإدخال مياب كالصيغة. على مستوى ديوتيريشن (دائرة خضراء) يصف درجة البروتين من استبدال الديوتريوم، وله تأثير مباشر على اليسار ومحسوب نقطة المباراة التي سوف يقدر للبروتين. وتبين النتائج (المربع البرتقالي) أن المباراة نقطة للمنظفات مختلطة سوف تحدث في 48.5 ٪ د2س، بينما يحدث نقطة المباراة البروتين ~ 90% D2سين في الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالشكل 3. إعداد عينة – تتبع مفاعل حيوي. القيم العملية المعروضة هي درجة الحرارة تعيين نقطة (خط برتقالي) والأوكسجين الذائب (DO) تعيين نقطة (الخط الأزرق) والانفعالات تعيين نقطة (الخط الأحمر)، ومعدل تدفق الهواء المضغوط (الخط الوردي). وكان استخدام مضخة 1 (الخط الأخضر) لمراقبة درجة الحموضة. سبايك الساعة 18:40 يشير إلى نضوب والغليسيرول الأولى وكانت تستخدم للبدء في إطعام والغليسيرول الحل عن طريق مضخة 2 (خط أسود). المحور س ترمز إلى ساعات. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالشكل 4. نموذج إعداد – توصيف فبلك والحزب الديمقراطي الصربي صفحة العينة. Chromatogram الاستبعاد الحجم النهائي مداكويليبراتيد-ممياب مع 20 مم هيبيس، درجة الحموضة 7.5، 250 ملم كلوريد الصوديوم، 48.5 ٪ د2س و 0.05% إجمالي DDM، الذي هو 44% (w/v) ذيل الديوتيريوم d25-DDM. داخلي: الحزب الديمقراطي الصربي صفحة التحليل مع أخذ تلطيخ. الكسور المجمعة المسماة A، B، وكان يستخدم المنطقة جيم "ب" في التجربة بلا. ومن علامة الوزن الجزيئي المشروح كاتشين. صورة مستنسخة بإذن من ناينغ et al. 65 الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالرقم 5. نموذج جمع البيانات – بانجو الكوارتز إعداد الخلايا وأوتوسامبلير. (أ) يظهر خلية بانجو كوارتز فارغة يستريح ضد كتلة أوتوسامبلير. خلايا مليئة بعينه وإدراجها في أحد المواقع المتاحة 15. (ب) شنت كتلة عينة وراء محدد فتحه (غير معروضة) بين "موسع أنبوب شعاع" ونافذة السيليكون عند مدخل الخزان كاشف. خراطيم توصيل إلى حمام مائي درجة الحرارة التي تسيطر، والقنوات في جميع أنحاء كتلة العينة توفير تنظيم درجة الحرارة في مواقف عينة. يشير السهم إلى اتجاه شعاع النيوترون. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالشكل 6. جمع البيانات – لمحة عامة عن عمليات التوابل ومسح الجدول. عمليات التفحص الجدول يتم الوصول إليها من الزر '"مسح الجدول"' على القائمة برنامج حاسوبي لمراقبة صك التوابل في أقصى اليسار. الأسهم الخضراء تدل على علامة التبويب النشطة في الجزء العلوي من الشاشة، وصناديق البرتقال تسليط الضوء على المناطق في الجدول لمدخلات المستخدم النشط. (أ) علامة التبويب الأولى لمسح الجدول يستخدم لتوفير معلومات حول تبديل عينة وعينه خلية المواقف. تقديم تسميات وسمك العينة، وأنواع العينة لكل موقف يستخدم في المغير عينة. التحقق من مربع '"القيام بمسح"' سيتم إضافة الصف المطابق إلى قائمة انتظار الجدول المسح الضوئي. (ب) في علامة التبويب الثانية، يتم تسجيل تفاصيل حول أداة تكوين وقياس الوقت لكل عينة (بالثواني). تكوينات صك تم تكوينها مسبقاً "عالم تشتت النيوترونات" والمقدمة إلى المستخدمين استناداً إلى التفاصيل الواردة في شعاع الوقت والصك المقترح. يمكن إضافة معلمات إضافية لعنصر التحكم الصك، مثل القدرة على تحديد درجة الحرارة سيتبوينتس وتعقد مرات، طوال انتظار القياس. (ج) علامة التبويب النهائي يوفر لمحة عامة عن القياسات لكل صف في الجدول. إذا كانت هناك حاجة إلى إدخال أي تغييرات، يتم بدء الفحص الآلي بواسطة النقر فوق الزر '"تنفيذ مسح"'. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nرقم 7. اختزال البيانات – لمحة عامة عن عمليات مانتيدبلوت والحد من البرنامج النصي. برنامج مانتيدبلوت موجوداً في المجموعة تحليل بكتابة "مانتيدبلوت" في موجه الأوامر المحطة طرفية في أي خدمة active directory (يتم إضافة دائرة صفراء والسهم للتأكيد). بمجرد فتح البرنامج، الوصول إلى نافذة البرنامج النصي (مثبت بزر علامة باللون الأخضر) وفتح البرنامج النصي يقدمها "عالم تشتت النيوترونات". اتبع الإرشادات المتوفرة في البرنامج النصي، الذي ينبغي أن لا تتطلب سوى أرقام المسح الضوئي لكل عينة والمخزن المؤقت لإدخالها في قائمة للحد من الآلي، فضلا عن مسح الأرقام للخلية الفارغة للطرح وشعاع فارغة للإرسال وشعاع مركز التصميم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالرقم 8. تحليل البيانات – Plotting للبيانات باستخدام مانتيدبلوت. بيانات يتم الرجوع إليها بوصفها 'مساحات' في مانتيدبلوت. سيتم ملء منطقة مساحة العمل مع أسماء الملفات كما أنتج البرنامج النصي من الحد من المستخدم. يمكن رسم البيانات مساحة العمل لمجموعات البيانات د 1 بزر الماوس الأيمن فوق مساحة العمل، وتحديد "مؤامرة الطيف مع الأخطاء...". يمكن إضافة بيانات إضافية لهذه المؤامرة الحالية ببساطة سحب وإسقاط مساحات العمل. يمكن إجراء تنسيق إطار الأرض (مثل سجل تسجيل قطع الأراضي) بتحديد 'تفضيلات' من شريط القائمة 'عرض'، أو بالنقر نقراً مزدوجاً فوق تسميات المحور. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالرقم 9. تحليل البيانات – البرامج أتساس: العمليات الأساسية والطرح المخزن المؤقت. يوفر التطبيق بريموسقت (تحليل البيانات ساس) التصور للطرح الخلفية المناسبة (المخزن). الملف المخزن المؤقت يجب أن يكون قياس للطرح مثل بيانات تتداخل في عالية-Q (حيث نثر شقة نتيجة الإشارات المتبقية من خلفية غير المتماسكة). عندما يتم تحديد هذا النطاق عالية-Q البيانات، سيتم تطبيق العملية مقياس عامل مقياس إلى ملف بيانات أقل في الجدول الذي ينتج التداخل في منطقة محددة. بعد القياس، يمكن طرح الملف المخزن المؤقت تسفر عن الشخصية صافي تشتت الجسيمات. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالرقم 10. تحليل البيانات – تصميم (توزيع المسافة) جينر و P(r). (أ) يستخدم معالج جينر بريموس لإجراء تحليل جينر، تقديم تقديرات أولية لانا0 و Rg. نوع الجسيمات ونطاق البيانات لتناسب تستخدم لتعريف مناسباً. مؤامرة الاحتواء والمتخلفات المقابلة تظهر إلى اليسار، بينما شروط جوينير (أنا0 و Rز)، يتم توفير حدودز ف * R، ونوعية تناسب الخطي كإخراج في منطقة تتسم بالمربع البرتقالي. (ب) بريموس المسافة التوزيع يستخدم معالج للقيام بتحليل توزيع المسافة، توفير المنحنى P(r) الذي يعرف احتمال interatomic المسافات داخل تشتت الجسيمات ويشمل Dmax أو الحد الأقصى إينتيراتوميك المسافة. المعلمات التي أشارت إلى جانب المربع البرتقالي يمكن أن يحقق بشكل منهجي لتحديد دالة توزيع مسافة مناسبة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nرقم 11. نتائج غير سليمة من خلال تحليل توزيع المسافة. يجب أن تنتج Dmax محدد بشكل صحيح منحنى P(r) قمم مع اضمحلال تدريجي للصفر. Dmax القيم التي تكون كبيرة جداً سوف يرجح أن تنتج القيم السالبة P(r) أو ذبذبات قرب المحور السيني في قيم عالية ر Dmax القيم التي صغيرة بشكل مصطنع غالباً ما يسفر عن المنحنيات P(r) حيث يظهر الحد الأعلى مبتوراً. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالرقم 12. النمذجة – منذ البداية إعداد نموذج باستخدام "معالج الشكل بريموس". وترد منذ البداية النمذجة المعلمات في إطار إدخال واحد. يتم توفير بادئة لأسماء الملفات الإخراج مع خيارات أخرى لمعالجة متوفرة. الصلب الداخلي يمكن أن يكون سريع (الخرز أكبر مع التبريد أسرع) أو بطيئة (حبات صغيرة مع التبريد أبطأ). يجب أن يكون عدد التكرار ذات حجم كاف للنظر في إمكانية تكرار نتائج ميزات طراز. يمكن تقديم التماثل الجسيمات وأنيسوميتري، إذا كانت معروفة. وينبغي أن تتوافق مع الحجم الزاوي لوحدات البيانات المقاسة. دامافير المتوسط سوف محاذاة ومتوسط كل ذرة دمية نماذج ثم قم بتطبيق معيار اختيار الذي يستبعد أي نماذج الخارجة. سوف تكون نواة الذرة الثابتة من طراز متوسط زيادة المكررة باستخدام دامين إذا تم تحديد هذا الخيار. ينبغي أن يمثل هذا النموذج المكرر المغلف منخفضة الدقة 3D التجريبي بلا الشخصية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالشكل 13. التصور – المغلف "بلا التجريبية" وتراكب مع نموذج الاستبانة باستخدام بيمول. بعد فتح ملفات PDB هيكل في بيمول، تظهر نماذج في عارض بيمول. يتم سرد النماذج النشطة في الجدول إلى اليمين، جنبا إلى جنب مع أزرار الإجراءات التي يمكن استخدامها للتعامل مع هذا النموذج وتمثيلها. وتقدم العمليات الأساسية لتصور هذه النماذج التي تسمح لمناطق هيكل الاتفاق (أو عدم تطابق) بين المغلف بلا وعالية الاستبانة التعرف. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-\nالجدول 1. الخصائص الفيزيائية للمنظفات التي يشيع استخدامها في غشاء بروتين التحقيقات. اضغط هنا لتحميل هذا الملف.\nالبيولوجيا الهيكلية الباحثين الاستفادة من التقنيات الهيكلية التكميلية مثل نثر الحل للحصول على تفاصيل البيوكيميائية والهيكلية (مثل الشكل والحجم الكلي) من الجزيئات الحيوية في الحل. بلا أسلوب جاذبية خاصة لتحديد هياكل منخفضة الدقة من بروتينات الغشاء، وتركيز أساسية لعلم الأحياء الهيكلية الحديثة والكيمياء الحيوية. بلا يتطلب كميات من البروتينات المنقاة مماثلة لتلك المحاكمات بلورية (1 ملغ في عينة). توافر عالية النقاء الديوتيريوم المنظفات ذات الصلة بدراسات البروتين غشاء التجارية مؤخرا توسيع يجعل الوصول إليها وسيلة التعامل مع هذا المحتوى لبلا تجارب مجمعات البروتين-المنظفات غشاء، الهيدروجين/الديوتريوم السماح إشارة البروتين بتسجيلها مباشرة. عندما تكون ناجحة، يمكن حساب مغلف جزيئية منذ البداية إلى نموذج من البيانات التي تم جمعها على مدى ساعات عدة فقط. وهكذا، غشاء بروتين المعلوماتيين، وبيوفيسيسيستس، وعلماء الأحياء الهيكلية يمكن سهولة الاستفادة من بلا للحصول على نماذج ثلاثية الأبعاد الأولية مطمعا بروتينات الغشاء في الحل، وهياكل في المجمع مع ربط الشركاء أو ركائز، والنماذج التي تم الحصول عليها بها بلا يمكن استخدامها لبيانات الحيود التدريجي. الاستخدام الروتيني لبلا تميز البروتينات الغشاء تحويلية لميدان الكيمياء الحيوية بروتين الغشاء وآثار متتالية من وظيفة الهيكل الأساسي لاكتشاف المخدرات والتنمية. يجعل ميزة إضافية لتباين النيوترونات مطابقة مع استبدال الديوتريوم بلا تقنية قيمة لدراسة البروتين-بروتين، والبروتين-الحمض النووي، أو المجمعات الجزيئية البيولوجية الأخرى، التي يمكن سهولة التلاعب في مضمونها الهيدروجين/الديوتريوم.\nللحصول على تفاصيل إضافية حول تصميم أداة تشتت الزاوية الصغير ونظرية، ينصح ملاحظات التالية: الحيوية-بلا أداة "عالية الجريان النظائر المفاعل من مختبر أوك ريدج الوطني"، نثر79 زاوية صغيرة ل علم الأحياء الهيكلي – توسيع الحدود مع تجنب المزالق،72 والدراسات ونثر زاوية صغيرة من الجزيئات البيولوجية في الحل. 80 يمكن أيضا مناقشة "عالم تشتت النيوترونات" الحالية صك تكوينات والمعلمات الأمثل لنظام معين. على سبيل المثال، البيانات في Q السفلي (ودالة تشتت الزاوية والنيوترون الطول الموجي) عموما المطلوب لنظم أكبر. تكوين الأداة الأكثر شيوعاً في الحيوية-بلا يوفر سدقيقة من 0.003-1 وهي مناسبة لأكبر مجمعات البروتين تصل إلى مئات كاتشين. محلول يحتوي على mg ~ 3 مل-1 من بروتين غشائي الحجم التقريبي كاتشين 30 (مونومر) في المذيلات مطابقة التباين مع 48.5 ٪ د2س في الحل يتطلب وقتاً قياس نموذجي حوالي 8 ساعات للعينة، والمخزن وخلية فارغة (24 ساعات = مجموع 1 يوم). يمكن تغيير أداة قياس مرات على شرط معين على النقيض تقريبا وفقا للمنتج من الكتلة الجزيئية تشتت الجسيمات وتركيز. ومع ذلك، يجب أن يقاس تشتت الجسيمات تحت ظروف غير التفاعل، بما في ذلك أي تجميع البروتين غير محددة، مما يضع حد أعلى عملية على تركيز العينة. قياسات استغرقت ساعة واحدة تضع حدوداً على الاستقرار في بعض البروتينات. لحسن الحظ، بلا قياسات يمكن القيام به بشكل روتيني في درجات حرارة مبردة تحسين وقت الحياة البروتين، وشعاع العاملين للنيوترونات الطاقة المنخفضة لا تسبب أي أضرار الإشعاع أثناء أخذ القياس.\nوترد لمحة عامة عن هذه العملية وتحديد العديد من العوامل الرئيسية نحو تسجيل ناجحة من تشتت النيوترونات من عينة يقاس عند نقطة المباراة على النقيض من مواد التنظيف في هذه المخطوطة. ويشمل ذلك خطوة حاسمة نحو الحصول على مطابقة كاملة للمنظفات الصناعية الإجمالية بتصميم خليط مسحوق الغسيل مع تباين نيوترون موحدة بين فريق رئيس المنظفات ومكونات سلسلة الألكيل. القياسات في هذه المباراة المنظفات نقطة واحدة توفير ملف تعريف نثر تعزى إلى بروتين غشائي فقط للفائدة وسمحت منذ البداية مغلف يمثل بروتين غشائي يتم بناؤها من البيانات. تحليل البيانات و أساسه النمذجة البروتوكولات أيضا إثبات المعلومات المحتملة التي تم الحصول عليها من هذه التحقيقات، التي يمكن أن تهدف إلى معالجة الهيكل العام، والتغيرات كونفورماشونال، أوليجوميريك الدول، بين أمور أخرى. حد واحد أن حتى الآن سوى قلة المنظفات القليلة المتاحة تجارياً مع استبدال الديوتريوم. 19\nبينما بيرديوتيريشن قد لا يكون ضروريا، في هذه الحالة ينبغي أن يكون الهدف تحقيق نسبة بروتين مع > تصنيف الديوتريوم 65% في البروتين. بدلاً من ذلك، إذا المنظفات بشكل انتقائي-الديوتيريوم تتوفر مجموعات الرأس والذيول، والرهن العقاري مذيل المنظفات يحدث قرب 100% د2س، ثم تباين كافي من البروتين يمكن أن يتحقق دون الحاجة إلى وسم الديوتريوم. تحديد مستوى ديوتيريشن المناسبة من البروتين لتحقيق نثر كافية عندما يقاس عند نقطة المباراة على النقيض من مواد التنظيف. وهناك العديد من التحديات المرتبطة بغشاء بروتين التعبير وتنقية،81 التي ما زالت خارج نطاق هذه المقالة. ولسوء الحظ، مستويات عالية من ديوتيريشن ليست حاليا (بعد) الممكنة لنظم حقيقية النواة. وفي حين أننا ندرك أن هذا حد لبعض البروتينات حقيقية النواة، قد معظم بروتينات الغشاء أورثولوجس البكتيرية التي هذا الأسلوب مناسبة.\nيتم التعاقد مع المؤلف ساي عبدالله Pingali وكيفن ل. فايس، فولكر س. الحضرية وريان جيم أوليفر عن طريق UT-Battelle مع "وزارة الطاقة الأميركية" لدعم البرنامج المستخدم العلوم النيوترونية والحيوية-بلا صك في "مختبر أوك ريدج الوطني" المستخدمة في هذه المقالة.\nهذه المخطوطة قد تم شارك في تأليف UT-Battelle، شركة ذات مسؤولية محدودة، وبموجب العقد دي-AC05-00OR22725 مع لنا الطاقة (وزارة). وتحتفظ حكومة الولايات المتحدة والناشر، بقبول المادة للنشر، تعترف بأن حكومة الولايات المتحدة يحتفظ بترخيص وحدك، المدفوع، ولا رجعة فيه، في جميع أنحاء العالم لنشر أو استنساخ النموذج المنشور من هذه المخطوطة، أو السماح الآخرين للقيام بذلك، لأغراض حكومة الولايات المتحدة. ستوفر دو وصول الجمهور إلى نتائج هذه البحوث التي ترعاها الحكومة الاتحادية وفقا "خطة" وزارة الطاقة وصول الجمهور. 82\nمكتب البيولوجية، والبحوث البيئية ودعم البحوث في مركز رنل للبيولوجيا الجزيئية الهيكلية (كسمب) والحيوية-بلا استخدام مرافق دعم "شعبة المرافق المستخدم العلمي"، "مكتب العلوم الأساسية في الطاقة"، و "الإدارة الأميركية" للطاقة. حظي بدعم الأعمال الإنشائية على بروتينات الغشاء في مختبر ليبرمان من المعاهد الوطنية للصحة (DK091357، GM095638) وجبهة الخلاص الوطني (0845445).


أفضل 7 طرق لإصلاح خطأ اختفاء دفتر ملاحظات OneNote على Windows | أحلى هاوم\nلقد مر Microsoft OneNote بعدد من التحديثات. ومع ذلك ، يشكو المستخدمون من فقدان دفاتر الملاحظات والأقسام والملاحظات الفردية في كثير من الأحيان. أبلغ العديد من المستخدمين عن فقد ملاحظاتهم أو اختفاء دفاتر ملاحظات كاملة على كمبيوتر يعمل بنظام Windows. سنوضح لك ما يجب القيام به عند اختفاء دفاتر ملاحظات OneNote على جهاز الكمبيوتر الشخصي الذي يعمل بنظام Windows.\nقد يكون خطأ مزامنة بسيطًا أو ربما تم إغلاق دفتر الملاحظات المعني ولم يعد متاحًا. جزء من المشكلة هو أن Microsoft لديها إصدارات متعددة من OneNote ، مما يجعل من الصعب تتبع الأشياء أو حتى استكشاف مشكلات مثل هذه وإصلاحها.\n1. فتح دفتر ملاحظات المغلق\n2. خطأ في المزامنة\n3. النسخ الاحتياطي لـ ONENOTE على الكمبيوتر\n4. تحقق من سلة المهملات للملاحظات المحذوفة\n5. تحقق على OneDrive\n6. تحقق من موقع ONENOTE\n7. فتح عبر OneDrive\nملاحظة في كتاب\nيمكنك إغلاق دفتر ملاحظات في OneNote لإلغاء تشويش الواجهة. تختفي دفاتر الملاحظات المغلقة عن الأنظار ، ولا تختفي من الوجود ، وربما لهذا السبب لا يمكنك مشاهدتها.\nالخطوة 1: انقر فوق السهم المتجه لأسفل في الجزء الأيسر من النافذة للكشف عن قائمة بأجهزة الكمبيوتر المحمولة المفتوحة حاليًا.\nخطوة 2: انقر فوق المزيد من أجهزة الكمبيوتر المحمولة للعثور على الدفاتر المغلقة.\nالخطوة 3: حدد دفتر الملاحظات الذي تريد فتحها ثم انقر فوق الزر فتح في الأسفل.\nقد يستغرق تنزيل البيانات ومزامنتها بضع دقائق ، لكنك لن تفقد أي بيانات إذا كان بإمكانك عرض دفتر الملاحظات. هذا مخصص لإصدار OneNote for Windows ، لكن واجهة المستخدم مختلفة قليلاً عن OneNote (المعروف سابقًا باسم OneNote 2016).\nتعتمد Microsoft على OneDrive لحفظ ومزامنة دفاتر الملاحظات والمقاطع والملاحظات في OneNote عبر الأجهزة. أغلق التطبيق وأعد فتحه. يبدأ OneNote المزامنة في كل مرة تفتح فيها التطبيق.\nيمكنك المزامنة يدويًا بالنقر فوق أيقونة السحابة. تشير علامة الاختيار إلى اكتمال المزامنة.\nبالنسبة إلى OneNote (2016) ، انقر فوق أيقونة المزامنة المدمجة داخل زر دفتر الملاحظات للكشف عن نافذة منبثقة. لديك المزيد من التحكم هنا ويمكنك مزامنة دفاتر الملاحظات الفردية. يمكنك أيضًا العثور عليه ضمن ملف> حالة المزامنة.\nلا توجد طريقة لتخزين الملاحظات محليًا في OneNote for Windows حتى الآن. يستخدم OneDrive لتخزين الملاحظات. ومع ذلك ، لا يزال OneNote يسمح لك بتخزين الملاحظات محليًا وفي السحابة ، وعند حذفها ، هناك طريقة لاستردادها.\nالخطوة 1: افتح ملف> معلومات وانقر على فتح النسخ الاحتياطية. سيؤدي ذلك إلى فتح مجلد محلي على جهاز الكمبيوتر الخاص بك حيث ستلاحظ وجود مجلد منفصل لكل دفتر ملاحظات قمت بإنشائه.\nاقرأ أيضا: كيفية التمهيد إلى الوضع الآمن في Windows 10\nالخطوة 2: حدد دفتر ملاحظات وانقر فوق فتح أو يمكنك التعمق أكثر للعثور على أقسام داخل دفتر ملاحظات.\nيتم نقل أي ملاحظة تقوم بحذفها إلى OneNote Recycle ، حيث ستبقى لمدة 60 يومًا. بعد ذلك ، سيحذف التطبيق تمامًا. تختلف الخطوات قليلاً لكلا الإصدارين من OneNote.\nبالنسبة إلى OneNote for Windows\nستجد الملاحظات المحذوفة ضمن علامة التبويب عرض عند النقر فوق الزر الملاحظات المحذوفة.\nبالنسبة إلى OneNote\nضمن علامة التبويب “المحفوظات” ، ستلاحظ زر “سلة محذوفات دفتر الملاحظات”.\nستظهر جميع الصفحات والملاحظات المحذوفة هناك. سيقوم OneNote بتخزينها لمدة 60 يومًا.\nافتح صفحة OneDrive الرئيسية وفي مجلد المستندات أو دفاتر الملاحظات ، ستجد دفاتر الملاحظات والمقاطع والملاحظات في OneNote. قد تظل الملاحظات ودفاتر الملاحظات المحذوفة في مجلد سلة المحذوفات. هل تحقق هناك أيضا. انقر بزر الماوس الأيمن فوق دفتر الملاحظات لاستعادة العناصر المحذوفة.\nافتح الصفحة الرئيسية لتطبيق الويب OneNote ، وتحقق مما إذا كان يمكنك تحديد موقع دفتر الملاحظات أو الملاحظات المفقودة هناك. يعمل تطبيق الويب تمامًا مثل تطبيق OneNote for Windows ، ولكن يجب أن تكون أي ملاحظات ودفتر ملاحظات قمت بإنشائه في OneNote هنا.\nاقرأ أيضا: أفضل 8 طرق لإصلاح اختفاء الرموز من سطح المكتب على Windows 10 و 11\nفي بعض الأحيان ، بسبب أخطاء المزامنة ، ستلاحظ أن الملاحظات مرئية في OneDrive على الويب ولكن ليس داخل تطبيق OneNote على جهاز الكمبيوتر الذي يعمل بنظام Windows. في مثل هذه الحالات ، افتح حساب OneDrive في المستعرض المفضل لديك ، وحدد موقع دفتر ملاحظات OneNote المفقود ، وانقر بزر الماوس الأيمن فوقه ، وحدد فتح في OneNote لفتحه على تطبيق OneNote لسطح المكتب على جهاز الكمبيوتر الخاص بك.\nيوجد خيار آخر يسمى Open in OneNote Online والذي سيفتح تطبيق OneNote في علامة تبويب جديدة على الويب. بمجرد فتح دفتر الملاحظات / الملاحظة في التطبيق المثبت ، ستتم مزامنته ، ويمكنك بعد ذلك فتحه لاحقًا مباشرة من هناك.\nغالبًا ما تكون حوادث الحذف أو خطأ المزامنة هو المشكلة ، ولكن قد تكون هناك مشكلات أخرى. يجب عليك أيضًا محاولة البحث عنها للتحقق مما إذا قمت أنت أو أي شخص آخر لديه حق الوصول إلى جهاز الكمبيوتر الخاص بك بنقل الملاحظة إلى موقع مختلف عن طريق الخطأ. الفرص منخفضة لكنها تستحق المحاولة.\nOneNote ليس تطبيق تدوين الملاحظات الوحيد المتاح. تعمل تطبيقات مثل Notion على تغيير اللعبة بإنتاجية معيارية حيث يكون لدى المستخدمين الكثير من التنسيقات والمرونة.


حازم محمود عبده محمد عبدربه يوم الاصدار: 2017-10-28\nحجر الزاوية للشركات الصغيرة (Sonar6) الحصول على تحليلات, الأهداف, والتعلم. يمكن تقديم المتطلبات التعليمية الخاضعة للتنظيم من الجماهير فرقت تكون اصول التداول مسألة حاسمة للشركات الصغيرة والمتوسطة المتنامية. يستمد هذه القدرة يخلق اقتراح قيمة أقوى بكثير لمبيعات SMB حجر الزاوية في. هذا وقد حضر اللقاء كل من السادة.\nالاختلاف الهبوطي المخفي - مؤشر MACD. من اهم الميزات التي ولاحظناها خلال استعراضنا لموقع 24 option هو حساب التداول التجريبي المجاني الذي تقدمه الشركة لمدة فترة محدودة.. إلا أن هذه الميزة تبقى ، كما توفر للمتداولين من إلغاء او ابطال تداولاتهم حتى فترة 5 دقائق قبل وقت الانتهاء كما أننا كنا راضين أيضاً عن مركز مصادر الخيارات الثنائية الغني الذي توفره الشركة، والذي يتضمن موسوعة كاملة تحوي على كل مصطلحات التداول، ومكتبة منوعة من المواد التعليمية.\nتاريخ مؤشر ستاندرد أند بوروز 500. عندما تريد ان تشترى او تبيع فى الفوركس فانه يكون عن طريق (lot) وهناك انواع منه والتاجر يختار اى حجم حسب حجم حسابه ومدى استراتيجيته فى العمل فهناك حجم (standard ) ويكون بقيمة $100,000.\nقد يكون من الخير للشركتين أن تنضما إلى بعضهما البعض، وتصبحا يداً واحدة، فبهذا اصول التداول الاتحاد يصبح لدى جوجل ملكية اجتماعية رفيعة المستوى تعوضه عن Google+ وBuzz وWave Flops. بعد أيام من مؤتمر دربان لمناهضة العنصرية، وهو مؤتمر عزلت فيه أميركا و”إسرائيل” نتيجة إلحاح المنظمات غير الحكومية على ضرورة إعادة الاعتبار للقرار 3379، بعد أيام من ذلك المؤتمر كانت الأحداث الجرمية في أميركا، وابتدأ الرئيس بوش خوض معاركه العسكرية العدوانية بحجة محاربة الإرهاب.\nيقوم اللاعبون في اللعبة بالتحكم في شخصية تُعرف ب Courier 6 في مدينة New Vegas. وهي لعبة أكشن ومليئة بالإثارة وقد حازت على جائزة “RPG of the Year” في عام 2011 ضمن جوائز Golden Joystick Award، وقد بيعت من اللعبة ما يزيد عن أحد عشر مليون نسخة على مُستوى العالم، خمسة منها كانت بحلول الثامن من نوفمبر التالي لشهر إصدارها. استراتيجية النهر: فإنه يساعد على تحديد الاتجاه ومجرد الذهاب طويلة أمب؛ وفقا لذلك على المدى القصير. تا-سك هو لدينا التحليل الفني الأصلي مجموعة تطوير البرمجيات التي تدعم جميع الأصلي وأحدث المؤشرات الفنية بحيث يمكن أفضل الفوركس الأنظمة الميكانيكية بناء في الوقت الحقيقي.\nأدوات التداول :اصول التداول\nطرق الدفع بينومو للإيداعات غير اصول التداول د السحوبات.\nيمكن أن يكون السبريد ثابتًا أو متغيرًا ويتناسب مع حجم صفقتك. عندما يكون متغيراً، فإنه يختلف مع تقلبات السوق و من وسيط إلى آخر. على سبيل المثال, زوج العملات الأكثر تداولاً هو اليورو مقابل الدولار الأمريكي (EURUSD)، وهذا هو السبب في أن السبريد عليه أقل من باقي ازواج العملات. >> هل أنت مبتدئ ولا تعرف كيف يتم التداول عبر الانترنت ؟ هذه فرصتك للتطبيق العملي دون مخاطرة.\nالحساب السبريد من العمولة تنفيذ Min. Deposit Islamic 1.2 pips لا شيء Instant USD 100 تفاصيل الحساب Professional 0.9 pips لا شيء Instant USD 100 تفاصيل الحساب Retail 0.9 pips لا شيء Instant USD 100 تفاصيل الحساب. سيخبرك تجار خيارات ثنائية بتنويع صفقاتك. لا تعمل مع وسيط لا يسمح لك باختيار صفقاتك وفقًا لاحتياجاتك الخاصة. كلما قل عدد الأصول المتاحة لديك ، كلما قمت بتقليل أرباحك المحتملة. هذا جزء أساسي من أساسيات الخيارات الثنائية.\nافضل نظام تداول افتراضي في 2021 2019-02-12\nالخيارات الثنائية opteck 2017-12-9\nالتحليل الحراري الوزني (TGA) 2020-04-28\nتقييم شركة TradeSmarter 2018-09-17\nالدورات الفيديوية عن الخيارات الثنائية 2020-06-22\nثبت طرق لكسب المال على الخيارات الثنائية 2017-10-26\nتبادل خيارات تداول هامش التغيير 2020-03-14


تعرفوا الى طرق علاج السّعال الليلي عند الأطفال . - الطب العربي البديل\nتعرفوا الى طرق علاج السّعال الليلي عند الأطفال .\nتاريخ النشر: 04/02/2022 - عدد القراءات: 2183\nالسّعال عند الأطفال يُعتبر السعال رد فعل طبيعي للجسم يعمل على تنظيف مجرى الهواء من المخاط والمُهيجات؛ مثل: الغبار أو الدخان، ونادراً ما تكون علامة على شيء خطير، وغالباً ما يكون السعال عند الأطفال بسيطاً ولا يحتاج إلى أي تدخل علاجي، ومع ذلك هنالك بعض الحالات التي قد تتطلب تدخل طبي، مثل: حالات السعال التي لا تخف حدتها أبداً، والحالات التي يرافقها الصفير، وغيرها، ومن الجدير بالذكر، أنّه يجب على الأهل إيلاء السعال أهمية خاصةً، في حال كان يحدث في الليل، أو بعد التمارين، أو خلال موسم الحساسية.\nعلاج السّعال عند الأطفال :-\n· منع الجفاف: وذلك بإعطاء حاجته من حليب الأم، أو الحليب الصناعي، وأمّا بالنسبة للأطفال الأكبر سناً، فمن الممكن استخدام الماء أو العصائر المخلوطة مع الماء، حيث تساعد السوائل الجسم على محاربة المرض، وتُبقي الممرات الهوائية رطبة وسليمة.\n· تخفيف الاحتقان: من الممكن تخفيف المخاط من أنف الطفل المُصاب، باستخدام بعض قطرات الأنف الملحية، التي يُمكن شراءها دون الحاجة إلى وصفة طبية من الصيدلية، أو إزالة المخاط من أنف الطفل باستخدام أداة شفط الأنف.\n· تسهيل التنفس: وذلك باستخدام جهاز مُرطّب، لإضافة الرطوبة إلى الهواء، حيث يُساعد ذلك على منع جفاف ممرات الهواء لدى الطفل، وتخفيف المخاط، وبالتالي التخفيف من السعال، ومن الممكن أيضاً تعريض الطفل لبخار ماء دافئ.\n· مساعدة الطفل على أخذ قسط من الراحة: إذ يجب تهدئة الطفل قدر الإمكان، وتجنيبه المواد المهيجة، مثل؛ دخان السجائر.\n· تهدئة وتلطيف الحلق: من الممكن استخدام العسل، فللعسل خصائص تُساعد على تهدئة الحلق، حيث إنّه يحتوي على خصائص مضادة للجراثيم، وقد يُساعد على مكافحة العدوى، ولكن تجدر الإشارة إلى أنّ العسل لا يُعتبر آمناً للأطفال، الذين تقل أعمارهم عن سنة واحدة، فمن الممكن أن يؤدي تناوله، لخطر الإصابة بالتسمم الممباري .\nطرق علاج المُسبب لسعال الأطفال:-\n- علاج نزلات البرد: والذي يُعالج عن طريق إراحة الطفل وإعطائه السوائل، فائدة للأدوية التي لا تحتاج إلى وصفة طبية في علاج مثل هذه الحالات، بل إنّ هنالك عدد .\n- علاج العدوى البكتيرية: ويكون العلاج في هذه الحالة باستخدام المضادات الحيوية.\n- علاج صعوبة التنفس: وذلك باستخدام أنواع من الأدوية التي يتم استنشاقها، ولكن في حال كان هناك شكّ بوجود جسم غريب في مجرى التنفس، فقد يتطلب الأمر استخدام منظار للشعب الهوائية لإزالته.\n- علاج ارتجاع المريء: هنالك عدة أنواع من الأدوية التي تُعطى بعدة طرق، اعتماداً على شدة الأعراض، ومضاعفات الارتجاع الحمضي في المريء.\nأسباب السعال عند الأطفال ما يلي :-\n1-التهاب القُصيبات: يحدث ذلك عندما تصاب القُصيبات الهوائية بالفيروس، وتصبح هذه الممرات الهوائية ملتهبة ومن ثم تنتفخ، وتمتلأ بالمُخاط مما يجعل التنفس أمراً صعباً، ويُصيب في أغلب الأحيان الرضع والأطفال الصغار.\n2- الخانوق: حالة تُسببها عدوى فيروسية، تؤدي إلى انتفاخ أنسجة الحنجرة والقصبة الهوائية، وهذا الانتفاخ يجعل مجرى الهواء أضيق، لذلك يصعب على الطفل التنفس، ويُصاب بالسُعال الشديد ويصدر صوتاً عالياً يُشبه الصرير.\n3- السعال الديكي: وهي عدوى تنفسية تصيب الجهاز التنفسي، وتتميز بسعال شديد، يتبعه نبرة عالية من الشهيق، تبدو مشابهة لصوت الديك.\n4- التليف الكيسي: في بعض الأحيان يمكن أن يكون السعال المستمر عند الطفل، علامة على وجود حالة خطيرة طويلة الأمد، مثل؛ التليف الكيسي .\nعلاج السّعال الليلي عند الأطفال\nالسّعال الليلي عند الأطفال


ألمانيا تجرّم تصوير ما تحت تنانير النساء\nعاجل.. إصابة 280 ألف تلميذ فى أمريكا بفيروس كورونا\nالملك سلمان ناعياً أمير الكويت: له فى نفسى مكانة عظيمة\nالعرابي: أمير الكويت ظل حريصا على رأب الصدع في البيت الخليجي\nالسبت 4 يوليو 2020 - 1:02 م\nأصدر البرلمان الألماني (البوندستاغ)، الجمعة، قرارا يقضي بتجريم التصوير السري تحت ملابس النساء اللواتي يلبسن تنانير قصيرة بعقوبة قد تصل لمدة سنتين في السجن أو غرامة مالية.\nالقرار الذي يدخل حيز التفيذ في الخريف المقبل، بحسب وسائل إعلام ألمانية، يشمل كذلك منع تصوير ضحايا الحوادث.\nوقالت وزيرة العدل الألمانية كريستين لامبرشت تعليقا على القرار، إن فعل تصوير الأجزاء الحميمة تحت الملابس لا ينتهك فقط الحقوق الشخصية للنساء، ولكنه أيضاً اعتداء على حقهن في ”تقرير المصير الجنسي“، بحسب ما نقل عنها برنامج ”تاغس شاو“.\nوشددت وزيرة العدل الألمانية على أن ”التصوير تحت ثياب المرأة يعتبر اعتداء فجاً على خصوصية جسدها“.\nوقبل صدور القرار كان التصوير الخفي تحت التنانير أو الثياب يعد فقط مخالفة بسيطة يتم تغريم صاحبها بمبلغ مالي ضئيل، وهو ما لم يكن كافيا لردع المتلصصين والفضوليين.\nوقال متحدث باسم الحزب الاشتراكي الديمقراطي (المشارك في الائتلاف الحكومي) يوهانس فيشنر، إنه بهذا القرار تكون ألمانيا قد أغلقت فجوة قانونية كبيرة، إذ تم تشديد العقوبة لمن يقوم بهذا الفعل“، الذي يتنافى كذلك مع القيم الاجتماعية السائدة في البلاد.\nوكانت قضية التصوير تحت الملابس قد برزت على الساحة في منتصف العام الماضي بعد اتهام رجل بتصوير ما تحت تنانير وفساتين أكثر من 550 سيدة في مدريد.\nوأثارت هذه القضية غضباً عارماً في العالم بعد انتشار هذه الظاهرة في دول كثيرة وعدم تجريمها إلا في دول قليلة من بينها فنلندا ونيوزيلاندا والهند وسكوتلاندا.\nوبدأت جهود تجريم هذا الفعل في ألمانيا بالطالبة هنا زايدل وصديقتها إيدا زاسنبرغ، اللتين قامتا بحملة جمع توقيعات للمطالبة بتغيير قانون العقوبات في هذا الشأن.\nوقالت زايدل في حوار مع ”دويتشه فيله“ في آب/ أغسطس الماضي ”ليس من المعروف أين سينتهي المطاف بهذه الصور غير اللائقة، فقد تظهر على مواقع إباحية أو في منتديات على شبكة الإنترنت“.\nوشمل القرار تجريم القيام بتصوير ضحايا الحوادث، إذ نقلت وسائل إعلام ألمانية عن وزيرة العدل قولها إن من يقوم بتصوير مصابي أو قتلى الحوادث بهدف الفضول والبحث عن الإثارة يقوم بانتهاك جميع الأخلاقيات، مشيرة إلى أن الدافع لصدور هذا القرار هو ضرورة حماية أفراد وعائلات الضحايا من ألم رؤية صور فقيدهم منتشرة في كل مكان.\nوقبل صدور هذا القرار كان القانون يحمي فقط خصوصية مصابي الحوادث وليس من لقوا مصرعهم.\nمرتضى منصور: مؤتمر صحفي السبت لفضح مسؤولي الأولمبية\nتامر أمين: الشيطان تملك قلوب الأسرة الحاكمة فى قطر\nاتفرج.. شوبير يفجر مفاجأة مُدوية عن مدرب الأهلي الجديد


انطلاق أسبوع المطاعم في هونغ كونغ ربيع 2020\nالصفحة الرئيسية » النشرات الصحفية » انطلاق أسبوع المطاعم في هونغ كونغ ربيع 2020\nيتم تقديم "أسبوع مطاعم هونغ كونغ لربيع 2020" بشكل مشترك من قبل DiningCity وبطاقة HSBC الائتمانية ، من 27 فبراير إلى 8 مارس 2020.\nأسبوع هونغ كونغ للمطاعم مخصص للاحتفال بالطعام الرائع ، حيث يقدم للرواد تجارب متميزة وصفقات مذهلة في أفضل المطاعم. مما يجعلها واحدة من أكثر فعاليات تناول الطعام المتوقعة لهذا العام.\nانغمس في روعة تناول الطعام لمدة 11 يومًا في أكثر من 130 مطعمًا من الدرجة الأولى ، بما في ذلك المطاعم الحائزة على نجمة ميشلان ومنافذ تناول الطعام داخل فنادق الخمس نجوم (The Shangri-La، The ريتز كارلتون هونج كونجوانتركونتيننتال والمزيد).\nمطاعم حائزة على نجمة ميشلان\nتا في - مطعم مبتكر حائز على نجمتين ميشلان\nصن تونج لوك - مطعم صيني حائز على نجمتين ميشلان\nمينغ كورت - مطعم صيني حائز على نجمة واحدة ميشلان\nريش بواسطة الين دوكاس - مطعم فرنسي حائز على نجمة واحدة ميشلان ، إنتركونتيننتال هونج كونج\nيات تونغ هين - مطعم صيني حائز على نجمة واحدة ميشلان\nابيور - مطعم فرنسي حائز على نجمة واحدة ميشلان\nمطاعم دخول جديدة\nالصمت - جإيزاكايا معاصرة مع موسيقى الجاز والمطبخ الياباني\nمدام فو - المطبخ الكانتوني المعاصر في تاي كوون\nTMK - Temakeria و Handroll و Sake Bar\nالقرابة - مفهوم المزرعة إلى المائدة بنكهات ميشلان\nجراد البحر الأحمر - مشهور عالميا مطعم جورميه للمأكولات البحرية\nمورتون شيكاغو - الحائز على جائزة ستيك هاوس يطل على ميناء فيكتوريا\nمعمل سيتشوان - مطبخ سيتشوان تذوق الطعام التجريبي\nمطاعم منتظرة للغاية\nتاي بان - المطبخ الأوروبي الحديث المعاصر / إصدار الفائز لعام 2019\nFoFo بواسطة El Willy - المطبخ الإسباني المعاصر / إصدار الفائز لعام 2019\nICHU - مطعم بيرو المعاصر / إصدار الفائز لعام 2019\nالسيد براون - جريل اند سموك هاوس\nذخيرة - مطعم فيوجن إيطالي ياباني / نسخة وينر لعام 2019\nخفقان - ابتكارات فرنسية- يابانية للطعام\n"أسبوع مطعم هونج كونج أصبح أحد أكثر فعاليات تناول الطعام المتوقعة لهذا العام بالنسبة لفنون الطهي. نحن فخورون ومتحمسون لمنح رواد المطعم الفرصة لاكتشاف مطاعم جديدة والحصول على تجارب جديدة ومثيرة من خلال هذا الحدث ، "كما يقول أونو شريورز ، مؤسس DiningCity. "لدينا قائمة تضم أكثر من 130 مطعمًا مشاركًا هذا العام. نأمل في مواصلة توسيع خياراتنا للرواد وزيادة تنوع أسبوع المطاعم. سنستكشف أيضًا فرص التعاون مع المطاعم والفئات التي تحظى بشعبية في الأسواق المحلية ، مما يوفر للرواد مجموعة أكثر استهدافًا من الخيارات. نأمل أن يستمتع المزيد من رواد المطعم بهذه الوليمة اللذيذة من تجارب تناول الطعام والوجبات الشهية ".\nيقول السيد جاك لي (الرئيس التنفيذي لشركة Wolfgang's SteakHouse): "لقد شاركنا في أسبوع مطاعم هونغ كونغ مرات لا تحصى ، وكسبنا ولاء المزيد من العملاء من خلال هذا الحدث. أعتقد أن هذا الحدث له علاقة مباشرة بنجاح Wolfgang's SteakHouse. ومن الجدير بالذكر أيضًا أن أسبوع المطاعم يعد أمرًا رائعًا لرواد المطعم لتجربة مطاعم عالية الجودة بسعر معقول. هذا ليس مثيرًا للعشاء فحسب ، بل بالنسبة لنا أيضًا. بصفتنا مشغلين للمطعم ، يتعين علينا الاستمرار في جعل الأمور مثيرة للضيوف ، لذلك سيقدرون جهودنا في المقابل ".\nمالك كيبيك لطائرة إيرباص 220\nتحتفل سياحة جزر البهاما بإطلاق رحلة طيران يونايتد إيرلاينز بدون توقف من دنفر إلى ناسو


أول روبوت يجسد شخصية الفرسان في اليابان\nمن طرف المتيم في الخميس مايو 06, 2010 12:04 am\nأطلق في اليابان أول روبوت يجسد شخصية محاربي الساموراي أو طبقة الفرسان التي قامت بدور كبير في تاريخ اليابان.\nوأطلق صانع الروبوت اسم كورودو بوشي على الروبوت الجديد وهو يجسد كل ما عرف عن الساموراي أو الفرسان الذين أحصى التاريخ الياباني المكتوب والشفهي بطولاتهم وتقاليدهم وأسلوب الحياة الصارم الذي فرضوه على أنفسهم والمجتمع المحيط بهم .\nويعتبر الروبوت تجسيد حركي مميز يعكس المكانة المتقدمة التي بلغتها صناعة الروبوتات خاصة في جوانبه المتصلة بالواقع الياباني المعاصر إضافة إلى استلهام الماضي والاحتفاء به على نحو لا نصادفه في أي بلد آخر في العالم ذلك لان اليابان اختارت ومنذ انطلاقة نهضتها ألا تضحي بالتقاليد والتراث بل أعادت توظيفهما في مشروعها النهضوي .\nوأنتج الروبوت في مدينة تضم أكبر عدد من الشركات والأفراد المتخصصين في صناعة الروبوتات غير بعيد عن تخصصها الأصلي في صناعة لعب الأطفال.\nوأوضح التقرير أن اليابانيين نجحوا في كسر الفجوة بين صناعة الروبوتات وألعاب الأطفال في زمن وجيز وتحولت صناعة الروبوتات إلى تخصص دقيق يخدم الطب والهندسة والصناعة أسوة بالترفيه والتسلية.\nرد: أول روبوت يجسد شخصية الفرسان في اليابان\nمن طرف لوليتا في الخميس مايو 06, 2010 1:28 am


"ممارسات في السلطة".. وزير الدفاع الأمريكي السابق يفند الفشل الأمريكي في قيادة العالم | جريدة الرؤية العمانية\nجيتس يرسم إستراتيجية جديدة لإعادة التوازن العالمي عبر قيادة تؤمن بالتحالفات\n23 يونيو 2020 . الساعة 22:02 بتوقيت مسقط\nيُقدِّم روبرت م. جيتس وزير الدفاع الأمريكي السابق في الفترة من 2006-2011، رؤية عميقة وصريحة تتسم بالشمولية، لجميع ممارسات الرؤساء الأمريكيين في عالم ما بعد الحرب الباردة، ومظاهرها، وكيف مارستها من أجل تحقيق الخير أو الشر.\nوفي كتابه المعنون "ممارسات في السلطة.. الإخفاقات الأمريكية والنجاحات ومسار جديد لما بعد الحرب الباردة"، يرى جيتس أن التصور العالمي للولايات المتحدة تحول تدريجيًّا من الزعامة الدولية المهيمنة إلى كيان غير منظم، وعلى ما يبدو غير راغب في ارتداء عباءة القيادة أو غير قادر على حكم نفسه بفعالية.\nويُجادل روبرت جيتس بأنَّ هذا التحول هو نتيجة فشل القادة السياسيين في فهم تعقيد القوة الأمريكية، وتوسعها، وحدودها. ويوضح أن الممارسة الناجحة للسلطة لا تقتصر على استخدام القوة العسكرية أو القدرة على الإكراه أو الخضوع، بل يجب أن تشمل أيضًا الدبلوماسية والاقتصاد والاتصالات الإستراتيجية والمساعدة الإنمائية والاستخبارات والتكنولوجيا والأيديولوجيا والإنترنت؛ من خلال تحليل التحديات المحددة التي واجهتها الحكومة الأمريكية في فترة ما بعد الحرب الباردة مثل الأزمات في إيران والعراق وأفغانستان وكوريا الشمالية وسوريا وليبيا والعلاقة مع روسيا والصين...وغيرها. ويفكك جيتس الطرق التي استخدم بها القادة أدوات القوة المتاحة لهم، فأصدر أحكاما صريحة على أداء الرؤساء السابقين وكبار مستشاريهم، بفضل ما يملكه من معرفة مباشرة وكواليس صناعة السياسة. لذا؛ يُجادل جيتس بأن الأمن القومي الأمريكي في المستقبل سيتطلب التعلم من دروس الماضي، وإعادة خلق تلك القدرات التي أهدرت بسبب سوء استخدام السلطة.\nويبدو الكتاب تقليديا؛ إذ يبدأ بقائمة بجميع الأدوات التي يمكن لصانعي سياسات الأمن القومي الاعتماد عليها، بدءا من القوة العسكرية والعقوبات الاقتصادية إلى الدبلوماسية والمساعدات الخارجية وما بعدها، وتنتهي بنصيحة حكيمة.\nوما يجعل هذا الكتاب مميزا، أنه يتضمن 12 دراسة حالة حول كيفية استخدام الإدارات الأمريكية الستة الأخيرة لهذه الأدوات، في إدارة تحديات الأمن بعد الحرب الباردة بما في ذلك الصين وروسيا والعراق وإيران وكوريا الشمالية...وغيرها.\nوعادة تكتسب المعلومات المألوفة لمحة جديدة واهتمامًا عندما يرويها شخص كان في الغرفة التي شهدت كافة الأحداث. ويقول جيتس ما يعتقده، لكنه يرفض أن يسدد لكماته النقدية. ونتيجة لذلك، يقدم الكتاب في مجلد واحد أكثر السجلات المتاحة دقة لسياسة الأمن الأمريكية الأخيرة، والنقد الأكثر حدة لهذه السياسة والأكثر عقلانية أيضا لما يجب أن يتحقق في المستقبل.\nويعرض جيتيس التحديات التي يجب أن يواجهها صانعو السياسات، وقائمة خيارات السياسة التي اختاروا منها، وأسباب اختيارهم كما فعلوا، وتقييمه بأثر رجعي لتلك الخيارات. لهجته حكيمة وغير حزبية، وهو يصنف جميع الإدارات بشكل عادل وفقًا لمعايير الكفاءة المهنية (على الرغم من أنه من الواضح أن لديه نقطة ضعف لبوش والقضايا مع أوباما). ويدحض المؤلف العديد من الهجمات المألوفة من خلال شرح كيف أن اللاعبين المشاركين قاموا فعلاً بأفضل ما يمكنهم باستخدام الموارد المتاحة لهم. ومع ذلك، في كثير من الأحيان، ينتقد بشدة مَنْ داخل موقع القيادة، ويدعمهم من خلال الإشارة إلى مسارات بديلة للعمل كان يمكن لصانعي السياسة أن يختاروها؛ بما في ذلك العديد من التوصيات التي أوصى بها في الوقت الحقيقي. هذه الحقائق المعاكسة دائمًا ما تكون مثيرة للاهتمام ومقنعة في كثير من الأحيان، مع مناقشات مكثفة بشكل خاص للعراق وليبيا وكوسوفو.\nويرى جيتيس أن الإدارات الأمريكية المتعاقبة أهدرت المكانة ورأس المال السياسي المحلي من خلال العديد من أخطاء التفويض والإغفال، مما أوجد فرصًا للصين الصاعدة والقوى الأخرى لكسب أرضية متزايدة. ويصر وزير الدفاع الأمريكي السابق على أنه لا يجب أن يترك الأمر ليمضي على هذا النحو. وبالفعل، فإن ما يبرز تدريجيًّا من الكتاب هو الخطوط العريضة لنهج بديل للسياسة الخارجية والأمن القومي، أولا من خلال خط كان يمكن لواشنطن أن تتبناه من قبل، والآخر يجب أن تفكر جديا في اعتماده الآن. فجيتس هو المثال المعاصر الرائد لـ"الأممية المحافظة"، وهي مدرسة موقرة للسياسة الخارجية الأمريكية تعود إلى أكثر من قرن. فمثل الأمميين الليبراليين، يفضل جيتس القيادة الأمريكية العالمية القوية والتعاون الوثيق مع الحلفاء والشركاء لحماية المصالح المشتركة وتعزيزها. لكنه يسخر من فكرة أن واشنطن يمكنها تحويل دول أخرى ضد إرادتها أو في ظل ظروف أقل من المثالية، كما يسخر من أولئك الذين يكلفون بالمهام العسكرية العظيمة التي لا يمكن إنجازها.\nومن خلال هذا الكتاب، يمكن قراءة تكذيب واضح لفكرة أن مؤسسة السياسة الخارجية الأمريكية هي "صقر" متشائم بلا عقل، ومحاصر في التفكير الجمعي، وغير قادر على الإصلاح الإبداعي. إذ إنَّ روبرت جيتس مثال حي على مسؤول أمريكي رفيع المستوى يوصي بثورة سياسية جذرية وعملية في آن واحد، ويتبنَّى نهجا واعدا للإستراتيجية التي يمكن لأي إدارة مستقبلية أن تتبناه.\n"إيكونومست": العالم يفتقر لقيادة عالمية حقيقية في عصر "التخاذل الأمريكي"


تاريخ النشر April 13, 2021 07:47\nالمصارف “تفتّت” ما بقي في الحسابات… بالعمولات\nالكاتب: جويل الفغالي - نداء الوطن\nلم يعِ القطاع المصرفي بعد، أن السياسة التي يتبعها أنهت مستقبله في لبنان، وأن الشعب فقد الثقة به، بعدما بددت المصارف أمواله وأساءت التصرف بالأمانة. بل نراهم مستمرين بـ”سلب” أموال المودعين وممارسة أبشع الإجراءات التعسّفية بحقهم، وكأن القطاع المصرفي لم يخسر حوالى 86 مليار دولار بحسب دراسة “لازارد”.\nبعدما فقدت المصارف تمويلها الأساسي المتأتي من إقراض الدولة والقطاعات الإنتاجية والأفراد، إستحالت اليوم “صندقجية” تنحصر عملياتها على تسهيل إتمام السحوبات النقدية والبحث عن مصادر تمويل نفقاتها. من هنا، بدأت معظم المصارف بفرض شروط عشوائية وغير قانونية على عملائها وكأنها الآمر الناهي في هذا القطاع، من دون إفساح المجال للعميل بالرفض أو الإعتراض على ممارساتها الوقحة. فلم تترك طريقة إلا واعتمدتها لنهش كل ما تبقى من أموال مودعيها. حتى أن بطاقات السحب المدينة التي كانت تقدمها مجاناً أصبحت مدفوعة الثمن باللولار والدولار حسب نوع الحساب، وذلك بعدما امتنعت عن تقديم الخدمات على الصندوق وأجبرت عملاءها على السحب من الصرافات الآلية بواسطة البطاقات.\nكل مصرف “فاتح على حسابو”\n“لم تتوقف المصارف في البحث عن سبل وطرق تضمن بقاءها في الأسواق، فنراها مستمرة بفرض شروط وعمولات عشوائية على حسابات المودعين بهدف تمويل مصاريفها ونفقاتها”، يقول عضو رابطة المودعين المحامي فؤاد دبس. و”ما يعزز استمرار هذه الممارسات غير القانونية هو غياب القضاء والبرلمان ولجنة الرقابة على المصارف، الأمر الذي يجعل المصارف الطرف الأقوى”، فتتقاضى البنوك على السحوبات الدولارية الفريش عمولات ورسوماً متعدّدة، وكل مصرف “يغني على ليلاه”. إذ تختلف هذه العمولات بين مصرف وآخر، وهذا بعض منها: بنك سوسيتيه جنرال SGBL يقتطع 6 دولارات من كل 1000 دولار على السحوبات من حسابات الدولار الطازج Fresh account. والإعتماد اللبناني Credit Libanais يقتطع 7 دولارات من كل 1000 دولار، وفرنسا بنك Fransabank يقتطع 8 دولارات من كل 1000 دولار. هذه الإقتطاعات تضاف الى جانب العمولات الشهرية التي يتقاضاها المصرف على حسابات “الفريش” والتي بدورها تختلف أيضاً بين مصرف وآخر، فيُحسم 2 دولار شهرياً من حساب العميل في كل من بنك عوده، “سوسيتيه جنرال” والإعتماد اللبناني. و 2.5 دولار شهرياً عمولة بنك مد Bank Med والإعتماد المصرفي Credit Bank. و5 دولارات شهرياً للحسابات المودعة في بنك “ليبانو فرنسيز” Libano Française و فرنسبنك. “وهكذا تعمد المصارف إلى سلب أموال العملاء عن طريق فرض “خوّة” وعمولات عشوائية غير مبررة”، بحسب دبس. “فمند يومين، إتصل أحد العملاء لدى بلوم بنك، متفاجئاً بارتفاع العمولة الشهرية إلى 6 دولارات بعدما كان يحسم 2 دولار شهرياً. هذا بالإضافة إلى العمولات التي يتقاضاها المصرف مع كل عملية سحب أو إيداع، كلها غير مذكورة بالإتفاقية الأساسية”.\nكما وتتقاضى المصارف عمولات ورسوماً بالدولار على التحويلات، وهي تختلف أيضاً بين مصرف وآخر وتتراوح بين 10 و15 دولاراً للتحويلات الواردة من الخارج. فيتقاضى كل من بنك الإعتماد اللبناني وفرنسبنك 10 دولارات على كل حوالة، ويتقاضى الإعتماد المصرفي و”سوسيتيه جنرال” 15 دولاراً على الحوالة الواحدة. أما بالنسبة للتحويلات الصادرة فهي لا تتجاوز الـ50 دولاراً لدى معظم المصارف، وهو مبلغ عال جداً ويعادل الحد الأدنى للأجور.\nالبطاقات المجانية أصبحت مدفوعة الثمن\nأمّا بطاقات السحب من الصرافات الآلية التي أصبحت إلزامية فلم تعد مجانية. والمصارف التي كانت تتنافس في ما بينها على بيع هذه البطاقات مجاناً وتعبئتها بمبالغ تتراوح بين 3 و10 مرات الراتب الشهري، وتصدر لكل حساب بطاقة، فقد اضافت عليها بطاقة “الفريش دولار” وأصبحت تتقاضى ثمنها بالدولار النقدي عند اصدارها أو حتى تجديدها. فيبلغ متوسط سعر البطاقة الواحدة 300 ألف ليرة في غالبية المصارف. وذلك الى جانب الرسوم الشهرية والسنوية التي يتقاضاها البنك على البطاقة، ورسوم تجديدها والعمولات في حال التلف أو الضياع. فأصبح سعر فتح حساب مصرفي مكلفاً جداً ويتخطى الواقع.\nالممارسات الوقحة… إلى متى؟\n“منذ القديم والمصارف تفرض رسوماً وعمولات على المودعين، وهذا أمر طبيعي، و”لكن كانت تُفرض بطريقة منطقية”، يقول دبس. “أما اليوم فارتفعت هذه الرسوم بشكل غير طبيعي وغير منطقي، وبطريقة لا تتأقلم مع الوضع الإقتصادي والمالي الحالي. وهي تفعل هذا “لتخلّص نفسها” ولترسخ فكرة “النظام المصرفي الناجح”، إذ بعد انتهاء الأزمة، حيث سيكون 90% من الشعب اللبناني قد سحب أمواله من المصارف، ستعيد الأموال المتبقية للشعب وكأنه لم يحصل شيء، متحججة بتعثر الحكومة التي كانت تعيق عملها”. كما لا يستبعد دبس تواطؤ بعض الشركات مع المصارف على حساب الموظف أو العميل، “فعمولة الـ5% التي فرضها IBL بنك على مجموع الرواتب المحولة إلى حساب الموظفين تطرح الكثير من علامات الإستفهام، فلو أن الشركات تهتم لمصلحة الموظف، لما كانت ستوافق على هذه العمولة!”.\nالمصارف إذاً، تمارس أبشع العمليات الإبتزازية على العملاء، خصوصاً بعد إحتجاز ودائعهم وفرض سقوف على سحوباتهم، ومنعهم من فتح حسابات جديدة في مصارف أخرى أو نقل حساباتهم من مصرف لآخر. وهي تفعل هذا مطمئنة البال أنه في النهاية ليس أمام العميل سوى الرضوخ. فهم مهما إعترضوا سيعودون مرغمين على القبول بسبب غياب البديل. ويؤكد دبس أن رابطة المودعين لن توقف عملها لو مهما واجهت من صعوبات، فهي مستمرة بالدفاع عن حقوق المودعين وتوجيه الإنذارات للمصارف المخالفة، مضيفاً أن “الدعاوى القضائية المرفوعة في الخارج ضد مصارف لبنانية، تسلك طريقها نحو الهدف المرسوم بعدما فقدنا الثقة بقدرة القضاء اللبناني على محاكمة المصارف وأصحابها في لبنان”.\n17:49 ماذا جاء في التقرير اليومي لوزارة الصحة حول كورونا...


شراء كعكة ديكور توبر عبر الإنترنت - شراء كعكة ديكور توبر بخصم على AliExpress\nعروض ترويجية ساخنة في كعكة ديكور توبر\nأخبار رائعة! أنت في المكان الصحيح لأجل كعكة ديكور توبر. الآن تعلم بالفعل بأنك، مهما كان ما تبحث عنه، ستجده بالتأكيد على AliExpress. لدينا حرفيًا آلاف المنتجات الرائعة في جميع الفئات. سواء كنت تبحث عن الملصقات الفاخرة أو المشتريات بأسعار مميزة أو بأسعار الجملة الاقتصادية، فإن AliExpress لديه كل هذا.\nAliExpress يسعى دائمًا لتوفير الأفضل من حيث الاختيار والجودة والسعر. كل يوم ستجد العروض الجديدة عبر الإنترنت فقط وخصومات المتاجر والفرص لتوفير المزيد من خلال جمع القسائم. ولكن ربما عليك التصرف بسرعة لأن المنتجات مثل هذا كعكة ديكور توبر الأفضل أحيانًا تنفد بسرعة كبيرة. فكر كيف سيغار أصدقاؤك عندما تخبرهم بأنك حصلت على كعكة ديكور توبر على AliExpress. من خلال الأسعار المخفضة وأسعار الشحن المنخفضة وخيارات المجموعات المحلية، يمكنك توفير المزيد والمزيد.\nإذا كنت لا تزال مترددًا بشأن كعكة ديكور توبر وتفكر في اختيار منتج مشابه، فإن AliExpress مكان رائع لمقارنة الأسعار والبائعين. سوف نساعدك لاتخاذ قرار بشأن جدارة الإصدار الفاخر بدفع المزيد أو عما إذا كنت ستحصل على صفقة مساوية من خلال شراء المنتج الرخيص. وإذا كنت تريد فقط تدليل نفسك والصرف ببذخ على الإصدار الأغلى، فإن AliExpress ستحرص دائمًا على حصولك على أفضل سعر مقابل أموالك، وحتى إخبارك بالموعد الذي يستحسن فيه أن تنتظر بدء العرض الترويجي، والتوفيرات التي يمكنك توقعها.\nوإذا كنت جديدًا على AliExpress، فسوف نطلعك على سر. قبل أن تنقر فوق "شراء الآن" مباشرة في المعاملة، انتظر لحظة للتحقق من وجود قسائم - وسوف توفر المزيد والمزيد. اكتشف قسائم المتاجر أو قسائم AliExpress، أو اجمع القسائم كل يوم من خلال لعب الألعاب على تطبيق AliExpress. ولأن معظم البائعين لدينا يوفرون الشحن المجاني - نعتقد بأنك ستتفق معنا بأنك تحصل على كعكة ديكور توبر بأحد أفضل الأسعار عبر الإنترنت.\nwedding cake topper bride groom baby\nكعكة مثلي الجنس\nكعكة توبر ل الكلب\nالباليه عيد ميلاد كعكة توبر\nمخصص خيال الزفاف كعكة توبر\nغاي توبر الزفاف\nكعكة توبر سعيد أي وقت مضى بعد\nأفضل أبي ever توبر\nكعكة توبر الأسرة فتاة\nالصبي كعكة توبر الأسرة\nأفضل أبي ever كعكة\nيونيكورن القرن لتزيين\nكعكة توبر إلكتروني k\n100 كعكة توبر\nمخصص كعكة توبر شحن\nكعكة تصميم فتاة\nبالون كعكة التوصيل\nالاكريليك توبر الأبيض\nخبز مع الحب كعكة\nأفضل هو بعد\nالنوم الدب توبر\nتوبر عيد الميلاد\nالميلاد توبر سعيد\n1 كعكة توبر\nتوبر لحضور حفل زفاف كعكة الأسرة\n21st كعكة توبر\nكعكة توبر عصا\nكعكة العلم توبر\nبيلا طفلة الأميرة


نتيجة مباراة الاتفاق والحزم بث مباشر اليوم 21-05-2022 في الدوري السعودي\n, مشاهدة مباراة الاتفاق و الحزم al hazm vs al ettifaq بث مباشر اليوم وذلك ضمن القاء المؤجل في المرحلة السابعة و العشرين من بطولة دوري كاس الامير محمد بن سلمان في استاد الامير محمد بن فهد, نضرب لكم موعد المباراة في تمام الساعة السابعة بتوقيت الرياض, .\nالاتفاق في حاجة ماسة للهروب من الهبوط ، حيث يحتل المركز الرابع عشر في تصنيف الأمير محمد بن سلمان برصيد 27 نقطة ، ويتأخر بنقطة واحدة عن منافسه الباطن الذي يحتل المركز قبل الأخير ، وهي فرصة للحصول على. من هذا الوضع الصعب ، استغرق الأمر المزيد من الانتصارات في المراحل الثلاث المتبقية.\nوستلتقي مباراة الاتفاق والحزم اليوم في اللقاء المؤجل من إياب الإياب السابعة والعشرين من الدوري السعودي للمحترفين في تمام الساعة السادسة مساءاً بتوقيت القاهرة ، الثامنة مساءاً بأبوظبي. والساعة السابعة مساءاً بتوقيت مكة المكرمة ، وسوف تشاهدونها على قناة SSC Sports HD 5.\nخطوط الدفاع: فهد غازي ، سعيد الربيعي ، عبدالله الخطيب ، سنونسي هوساوي.\nلاعب وسط: فيليب كيش وعلي هزازي وإبراهيم مهانشي ونعيم السليطي ومحمد الكويكيبي.\nخط الهجوم: كويسون.\nالأقسام مشاهدة مباراة الاتفاق اليوم مشاهدة مباراة الحزم اليوم


كان الوطن هو القضية\nنشر في: 31 يوليو ,2013: 12:00 ص GST آخر تحديث: 31 يوليو ,2013: 08:14 ص GST\nكانت الأزمة في مصر، تتجاوز حدود السياسة والقواعد المستقرة للحكم والمعارضة، والأغلبية والأقلية، إلى منطقة حرجة تتعلق بالوطن وهويته .\nوكان شعور الغضب العام، نابعاً من إدراك تراه العين، بالسعي لتغيير طبيعة الدولة المصرية، ترافقه ممارسات غياب مفهوم الدولة، في عقول الذين أمسكوا في أيديهم بزمام الحكم . فالدولة كمفهوم، لها قواعد تقوم عليها، ومن دونها يكون ما هو موجود، قائم على أرض رخوة، لا تتحمله ولا توفر له الثبات والاستقرار .\nهذه القواعد هي التي نقلت المجتمعات الإنسانية، من حياة الهمجية البدائية، التي تناطح فيها الجماعات بمنطق القوة والغلبة، وإن كل جماعة بدائية تؤمن بأن من حقها أن تأخذ كل شيء، ولا تتنازل عن أي شيء . وكان صراع هذه المجموعات من البشر مع بعضها، هو صورة ناطقة ومن دون أي اختلاف مع صراعها مع الحيوانات البرية التي تصطادها لتوفر الغذاء والاحتياجات المعيشية لأفرادها .\nمن ثم قامت الدولة - حسب تعريف علم السياسة - كتجمع يربط الناس ببعضهم على أساس قاعدة أخلاقية، تمثل فلسفتهم، لما هو خير لهم جميعاً، ولما يضمن استمرار الحياة، والأمان والتقدم .\nوتم الانتقال من البدائية الهمجية إلى صيغة الدولة، بمقتضى عقد اجتماعي يخضع له الجميع، محوره القانون . أي أن ما يوفر للدولة مقوماتها، هو مفهوم دولة القانون التي تتوازن فيها السلطات، وتنتعش فيها الحريات .\nمن هنا، ولدت الأزمة الأخيرة في مصر . التي كانت تدفع إليها مجموعة من العناصر، في مقدمتها عنصران رئيسان، أولهما نقص كفاءة الحكم . والثاني أن النظام كان يحكمه عقلاً وسلوكاً، فكر أيديولوجي . وهي صفة تدفع بالدولة بعيداً عن الزمن وما يجري فيه من تطورات . وليس خافياً على أحد أن الأيديولوجية، كمبدأ يحرك السياسات، قد سقطت من إدارة شؤون الدول، منذ التغييرات الهائلة في النظام الدولي، عقب سقوط الأنظمة الشمولية في أوروبا الشرقية عام 1989 .\nونتيجة لهذين العنصرين، ظهر بشكل واضح افتقاد الحكم، للمقومات الأساسية لإدارة الدولة . فهو يرأس نظاماً منغلقاً على ذاته، يحيط نفسه بأسوار تعزله عن المجتمع . ولهذا تتابعت تصرفاته المنغلقة على فكره الأيديولوجي، الذي لا يعبر عن الوطن بكامله التي تزيد من عزلته من إعلان دستوري يحصن سلطاته، إلى دخوله في خصومة مع مختلف مؤسسات الدولة . منها ما اتخذ صورة الخصومة الصريحة مثلما جرى مع القضاء، والصحافة، والإعلام، ومنها ما كان التعبير عنها متوارياً، مثل تصريحات لبعض قيادات الجماعة ضد الجيش، والشرطة، وإذا وجدوا رد فعل غاضب، سارعوا بالتنصل مما قاله واحد منهم، وتعللوا بأن هذا رأيه الشخصي .\nونتجت عن فقدانهم المعرفة بمفهوم الدولة، تصرفات عبثية، لا علاقة لها بالعمل السياسي انعكست في عدم امتلاك النظام استراتيجية للسياسة الخارجية، أو مجلس أمن قومي حسب المعايير العلمية والدولية، حتى إنهم عندما شكلوا مجلس أمن قومي، بناء على صياغة الجمعية التأسيسية لنص في الدستور، فقد جاء تكوين المجلس بحشد وزراء وكبار مسؤولين في عضويته، متجاهلين أن مجلس الأمن القومي يتكون من أصحاب الخبرة والفكر المتخصص .\nوكانت النتيجة إدارة سيئة، لمختلف قضايا السياسة الخارجية، وهو ما ظهر في إدارة قضية مياه النيل، وأزمة سد النهضة الإثيوبي، والإساءة للعلاقات مع معظم الدول العربية، التي تمثل مجتمعة مع مصر، انتماءً قومياً واحداً .\nبل إن عبثية التصرفات النابعة من العنصرين المشار إليهما، وصلت إلى حد توجيه عبارات مسيئة للأزهر، من على ألسنة قيادات منهم . وهي المؤسسة التي تمثل بالنسبة للعالم الإسلامي، المنارة التي يتطلعون إليها بكل الاعتزاز، ولاتزال بعثاتهم تفد إلى مصر لتعلم أصول الدين الإسلامي .\nثم كان افتقادهم أي رؤية لمشروع للتنمية الاقتصادية، يستثمر موارد وإمكانات مصر، محنة أخرى أنزلوها بالوطن، وزاد منها إصرارهم على عدم الالتفات إلى العلماء وأصحاب الخبرات، ممن لديهم العلم والخبرة لصياغة مشروع للتنمية يقود مصر إلى التقدم والازدهار . وذلك لأنهم خاضعون تنظيمياً لفكرة التمكين للجماعة من الدولة، فعهدوا بهذه المهام لمن ينتمون لهم أيديولوجياً، مما أدخلنا في متاهات يجرنا إليها ناقصو الكفاءة، والفكر الأيديولوجي الذي يحلق بهم في آفاق الخيال، والحلم بدولة الخلافة التي يتحدثون عنها، غافلين عن حقيقتين جوهريتين من حقائق العصر، وهما التنافسية التي أدركت معناها مختلف الدول التي عرفت أن مفاتيح التقدم هي التنافس مع غيرها لكي تتفوق، وتحقق إنجازات تنفرد بها . والحقيقة الثانية أن المصلحة الوطنية هي التي تقود السياسات قبل أي شيء، وهو ما يحول في زمن تحكمه الواقعية السياسية، دون تقبل أي شعب، أن يشاركه شعب آخر اقتسام ما حققه من تقدم وثراء وازدهار .\nفنحن في عصر ثورة المعلومات، الذي تحكمه قوانين وقواعد وسياسات، تختلف عما كان متبعاً في سنوات مضت . وأن من يتجاهل هذه التحولات في المفاهيم السياسية والاقتصادية، وفي التغير في المزاج النفسي والاجتماعي للشعوب، إنما يلقي بنفسه في عالم الأوهام .\nإن ما حدث في مصر أخيراً، هو عودة للخطة التي انطلقت فيها ثورة 25 يناير ،2011 يومها رأى المصريون أمام عيونهم أملاً في إعادة بناء مصر قوية، ناهضة داخلياً، وتحتل مكانتها التي تستحقها خارجياً .\nوحين جرى بعد الثمانية عشر يوماً الأولى من الثورة، تمزيق للتوافق المجتمعي، واقتحام الميدان - كرمز- من عناصر بعضها كان معارضاً للثورة، وبعضها كان متردداً في اللحاق بها، فقد سعى من لديهم القدرة التنظيمية إلى اختطاف ثمرة الثورة قبل نضجها، فتراجعت الآمال وحلت مع سياسات النظام، قطيعة بين الحكم والمعارضة، بل ومع المجتمع عامة، عندئذ انبثقت من وسط سحابات الإحباط الكثيفة، بارقة أمل بثها جيل جديد من الشباب حمل اسم “حركة تمرد”، استطاع أن يحرك الملايين، الذين خرجوا إلى الميادين والشوارع في اللحظة نفسها، في جميع مدن وقرى مصر، لاستعادة زمام الموقف، إلى أيدي المصريين، حفاظاً على الوطن وهويته، وكان الوطن هو القضية .\n*نقلاً عن "الخليج" الإماراتية.


الجنة ألعاب إطلاق\nرمي الكرات ورقة\nتبدأ مع الشريعة\nرمي السكاكين / محاور\nبدء من الغذاء\nإطلاق اليتي الرياضة\nYetisports ألعاب إطلاق.\n"اليتي الرياضة" هو عبارة عن سلسلة من المباريات التي وضعتها Hilgert كريس التي تدور حول الشخصية الرئيسية منذ ويقابل جيدا من عشاق الرياضة اليتي. لتوضيح الوضع قليلا عن هذه الشخصية التي قد تبدو موضع شك، "اليتي الرياضة" ليست سلسلة من الألعاب المعروفة من قبل دائرة صغيرة من الأصدقاء فقط، لأنه لا يمكن النظر فيه الحقيقي "مؤسسة على شبكة الإنترنت."\nأول لعبة رياضة اليتي بعنوان "الجزء 1 - رمي بينغو" ظهرت في عام 2004 (في ذلك الوقت كان هناك عدد مستخدمي الانترنت حول 90o لمليون في جميع أنحاء العالم، كان لها الأسر الفرنسية الإنترنت (2) الذي كان نصفها اتصالات "النطاق العريض"). حتى الآن بالفعل في عام 2004 هذه اللعبة نجاحا كبيرا تبرره هذه اللعبة في متناول جدا (انقر على اليسار لإسقاط البطريق، ثم في الثانية لتصل)، الرسومات التي يتم التعامل مع لعبة فلاش، الادمان جدا والجانب حيث أن هذه هي لعبة "درجة عالية" (أفضل درجة) مصحوبة في كثير من المواقع والقدرة على المشاركة رصيده. خمنت هذا هو نوع من لعبة بسيطة في أي واحد لا يمكن أن يساعد اللعب لدقائق لنشر درجاتك على شبكة الانترنت لتفاخر لأصدقائه أنه لن تكون على قدم تقدم.\nالحلقة الأولى من "الجزء 1 - رمي بينغو".\nتم تحويلها بسرعة هذا الإصدار الأول الذي صدر في يناير 2004 إلى إصدارات غير رسمية عديدة. من بينها، إصدارات متنافس (مع أقل خطورة لإرسال البطاريق أدناه)، والتي وضعتها "باول" الأكثر شهرة واحد الذي هو ملطخ بالدم في النسخة التي البطاريق تنفجر عندما ضرب (تم استبدال بك الخفافيش من قبل النادي مع المسامير)، ومن المتوقع بعد ذلك رئيس الطيور الفقراء ويرافقه سفك الدماء. ويمكن أيضا أن ترتد التعدين تحسين الأداء الخاص بك.\nفي سلسلة الحلقات الجديدة ثم استضافت بانتظام من قبل السفر اليتي في جميع أنحاء العالم في مغامرات مختلفة لهذه اللعبة. في هذا المعنى، علما بأن الحلقات 2 و 6 و 7 و 9 و 11 وتبرز أنه على الرغم من أنها مباراة من المهارة مع "أعلى نتيجة" الهدف، فإنها لا تندرج في إطار منطقي شن والمسافة.\nصورة ثاني حلقة من "Yetisports.\nاليوم، الملحمة "اليتي الرياضة" تسلم 12 مباراة الرئيسي، مع كل اللعب الخاصة بها. العديد من المتغيرات التي من الإصدارات الرسمية "ديلوكس" والإصدارات تحريرها (خاصة في عيد الميلاد على سبيل المثال) رفع تدريجيا سلسلة بمناسبة 20 مباراة. يمكن أن نلاحظ أيضا أن دخول "اليتي الرياضة" هو أكثر من 7 ملايين النتائج في معظم محركات البحث على شبكة الإنترنت.\nأي مستقبل لهذه السلسلة؟\nمسلسل "اليتي الرياضة" وقد اتخذت في الآونة الأخيرة منعطفا جديدا، في الواقع، تم تطوير العديد من التطبيقات (على حد سواء التعديلات للهواتف الذكية / الرفوف وportages بسيط)، ويوجد حاليا للبيع في الأسواق الرئيسية للالعاب اون لاين . وهكذا تم الافراج عن هذه الملحمة جزئيا من "ترفيهية" لها.\nغير هادفة للربح الجانب، يمكن أن نلاحظ أن الطلب على الانترنت "اليتي الرياضة" ظهرت على الشبكات الاجتماعية في العالم الرائدة ويعطيها الأمل الساطع للإفراج عنهم.\nأن يختتم هذا العدد من "Yetisports" سلسلة لا ننسى أن إعادة / اكتشاف مباريات في فئة مخصصة لهم في Launchvolt.com!\nفي الحلقة الأولى من "الرياضة اليتي" تقول انها على الحجر إلى اليسار من نقش اليتي: "1978 Reihnold + اليتي"، إشارة إلى متسلق الجبال راينهولد ميسنر، الذي قال في 1980s لديها شهدت اليتي خلال رحلة استكشافية في التبت. لدينا Yetisports ألعاب\nوصلات خارجية : رمي ألعاب