Lozano sueña con debut ante Juventus\nMercoledì, 28 Agosto 2019 18:50\n"El partido con Juventus es el que todo jugador quiere disputar", afirmó hoy el delantero mexicano Irving Lozano, quien palpita su posible estreno con la casaca del Napoli el domingo en Turín.\n"Estoy físicamente bien, pero si juego será una decisión del técnico. Yo estoy a disposición", explicó el ex PSV Eindhoven en su presentación oficial como refuerzo del equipo comandado por Carlo Ancelotti.\nNapoli debutó con un triunfo polémico y apasionante en campo de Fiorentina por 4-3 el sábado, cuando Juventus estrenó una vez más su corona de campeón del "Calcio" con un ajustado 1-0 en casa de Parma.\n"Sabemos que Juventus es el equipo a vencer y esta temporada no será la excepción", destacó Lozano tras reconocer que el fútbol italiano es muy competitivo, pero dijo confiar en que se adaptará rápidamente.\n"Decidí venir a este club apenas supe que estaba interesado en mí. Es un gran equipo, con un gran entrenador y me siento feliz que él haya indicado que yo era una prioridad en el mercado de pases", aseguró.\n"Se que puedo mejorar y ayudar al equipo a crecer para darle una alegría a los aficionados", agregó Lozano, que deberá competir por un lugar en el once titular en un equipo con delanteros como Lorenzo Insigne y el belga Dries Mertens.\nEstos últimos dos fueron claves en la victoria en Florencia y parecen inamovibles en el plantel de Ancelotti, donde juegan también el español José María Callejón y el polaco Arkadiusz Milik, actualmente recuperándose de una lesión.\nEn el horizonte aparecen también (y al menos hasta que se cierre el mercado de pases) el argentino Mauro Icardi, sin espacio en Inter, y el español Fernando Llorente, sin equipo tras finalizar su contrato con Tottenham Hotspur.\nPero como Napoli también disputará esta temporada la Champions League, Ancelotti seguramente lo tendrá en cuenta cuando se vea obligado a rotar jugadores para regular esfuerzos a lo largo de la temporada.\n"Este campeonato no es el holandés. Se juega más rápido y tiene más calidad. Tengo que trabajar para adaptarme lo antes posibles siguiendo las indicaciones del entrenador", comparó el delantero "azteca".\nLozano lucirá la casaca número 11 del Napoli y espera algún día llegar a hacer historia en el club que vivió su época dorada en tiempos del argentino Diego Maradona, de reciente paso por el fútbol mexicano como DT de Dorados de Sinaloa.\n"Es un delantero imprevisible", dijo en su momento Ancelotti al destacar las características de juego de "Chucky" Lozano, como alguna vez lo bautizaron porque -confesó- "de niño era un demonio".\nSu promedio de gol en PSV es por demás interesante: 40 en 79 partidos que elevaron su cotización a 42 millones de euros, que fue la cifra que debió pagar Napoli para hacerse de sus servicios. Para devolver semejante esfuerzo, Lozano, de 24 años, promete dedicación y trabajo y se describe como "un jugador veloz y bastante técnico", dispuesto a jugar "en el puesto que indique el mister".\nLozano se entusiasma con la posibilidad de volver a pelear por el "scudetto", que a Napoli se le escapó en tres de las últimas cuatro temporadas por "culpa" de Juventus y aseguró que la única fórmula es "ir partido tras partido".(ANSA).\nMore in this category: « Triunfos de Atalanta y Lazio en debut\tChampions Liverpool comparte grupo con Napoli »\nAbbiamo 812 visitatori e nessun utente online


▬ Gurú de la moda ▬ - Concursos - Actualidad Sims\n▬ Gurú de la moda ▬\nIniciado por Malenx, 31 dic 2017\nPublicado 31 dic 2017 (editado)\nEl concurso es ideal para que tus Sims luzcan su belleza y prendas.\n"Gurú de la moda" es un concurso que permite a Simmers mostrar a sus Sims más bellas con sus mejores prendas. El concurso consta de 1 SOLA RONDA en la cual los concursantes deberán vestir a su Sim y enviarla.\n- El concurso es ANÓNIMO.\n- Los participantes NO están obligados a votar (obviamente no se pueden votar a sí mismos).\n- Sólo se permiten Sims de Los Sims 4\n- Se puede utilizar Photoshop para detalles MÍNIMOS (brillo, contraste,sombras, etc).\n- Solo están permitidas Sims ADULTAS o JÓVENES ADULTAS.\n- NO se permite utilizar creaciones previas.\n- Las Sims deberán estar en una pose y en un ambiente que CONCUERDE con sus PRENDAS.\n- No hay categorías, el estilo es LIBRE.\n- Si vas a participar, recuerda que debes tener 10 POSTS en el foro para mandar tus Sims por mensaje privado.\n- Las fotos que les tomes a tus Sims deben ser en MODO VIVIR y deben de ser 2, una de la CARA y la otra de CUERPO COMPLETO.\n- Deben enviar a sus Sims con NOMBRE , APELLIDO y BIOGRAFÍA.\nLas Sims serán juzgadas por otros Simmers, quienes deberán votar con la siguiente plantilla:\n▬ Voto por: [Nombre de la Sim] [Apellido de la Sim] ▬\nSe pueden agregar motivos del voto.\nLos concursantes serán CINCO para comenzar, si muchos más quieren participar se agrandarán los cupos.\nPueden empezar a anotarse desde hoy, 31/12/2017 hasta 8/1/2018\nEl concurso comienza el 14/1/2018. Pueden mandar sus Sims hasta ese día.\nLa votaciones comienzan ese mismo día (14/1/2018) hasta el 23/1/2018, y ese mismo día se dirá al ganador.\nEl concursante ganador obtendrá una firma y tendrá en ella el título "Sim Gurú de la Moda 2018".\n- Barbara1414 (FOTOS ENTREGADAS)\n- Estefy (FOTOS ENTREGADAS)\n- Simphoria~ (FOTOS ENTREGADAS)\n- Luxy (FOTOS ENTREGADAS)\n- MaríaS23 (FOTOS ENTREGADAS)\n- Wicked Darkness (FOTOS ENTREGADAS)\n- SimmerTeen (SIN ENTREGAR)\n- Saphy (SIN ENTREGAR)\n- Liyah (FOTOS ENTREGADAS)\nEspero que muchos participen y no se olviden, que este concurso es para divertirse más que nada y disfrutar de las creaciones de otros Simmers!\nRecomendaciones para concursantes:\nA la hora de tomar fotos, asegúrate de tener buenos gráficos y si puedes, mods que te ayuden con la iluminación, pero no es necesario. Yo recomiendo NoBlu.\nCrea Sims únicas, que puedan atraer, y no te vayas a lo básico.\nEditado 14 ene 2018 por Malenx\nPublicado 1 ene 2018\nMe anoto!!! Algo que amo es hacer sims y outfits!\nA MaríaS23 and Malenx les gusta esto\nPublicado 2 ene 2018\nhace 1 hora, Barbara1414 said:\nMe anoto! me encanta hacer conjuntos y combinar.\nhace 5 minutos, Estefy said:\nPerdón por el doble-post, pero si quieren pueden empezar a mandar las 2 fotos de sus Sims (cara y cuerpo completo) desde hoy.\nhace 3 horas, Simphoria~ said:\nWicked Darkness 20\nYo me apunto! El estilo de la ropa es casual o tiene que ser algo más chic (que se note que se siguen las tendencias de esta temporada)?\n¡Toc! ¡toc! yo también me apunto!\nTengo la misma duda que @Luxy,el atuendo de la sim debe ser cotidiano pero chic,algo formal estilo gala o depende de la interpretación de cada concursante de lo que sería ser una gurú de la moda?\nA Luxy and Malenx les gusta esto\nPublicado 2 ene 2018 (editado)\nhace 39 minutos, MaríaS23 said:\nhace 46 minutos, Luxy said:\nAnotadas! El estilo, como dijeron, debe ser chic y de algo que esté de moda. Por ejemplo, si la tendencia ahora mismo es usar sombra de ojos con glitter, una gurú de la moda lo usaría Deben mostrar su mejor look, y también como dijo @MaríaS23, cada una interpreta a su manera como se vestiría una gurú de la moda, y se votará la mejor interpretación.\nhace 51 minutos, Wicked Darkness said:\nEditado 2 ene 2018 por Malenx\nTengo una consulta, puede ser una sim que ya tengamos creada o debe ser una sim nueva, porque de verdad me gustaria usar una sim que ya tengo creada ♥\nhace 26 minutos, Wicked Darkness said:\nSi no la publicaste en algún lugar, si podes\nhace 4 minutos, Malenx said:\nEs la que uso en mi foto de perfil y en mi firma, eso cuenta como publicada? :c\nhace 14 minutos, Wicked Darkness said:\nSi querés, podés usarla de modelo pero debes crearle un nuevo outfit, ponerla en una pose diferente y en un ambiente distinto (que concuerde con el outfit y la pose tal como indica el post). No se pueden usar Sims utilizadas en otros concursos/historias/legacys etc...\nMe gustaría participar, puedo!?\nPublicado 3 ene 2018\nhace 3 horas, Wicked Darkness said:\nYo creo que si usas la misma estás en desventaja con el resto de concursantes porque ya sabríamos que sim vas a presentar al concurso XD, pero bueno, tú misma y como te diga @Malenx. A mi por ejemplo me gusta conservar el factor sorpresa, me parece que es parte de lo que hace interesante a los concursos.\nhace 1 hora, SimmerTeen said:\nhace 3 minutos, Luxy said:\nEs verdad que estaría en desventaja. Es más interesante mostrar a Sims nuevos y diferentes al resto, pero es tu decisión, siempre y cuando estés dentro de las reglas podés paticipar, @Wicked Darkness\nPublicado 4 ene 2018\n¿Aún puedo anotarme?\nhace 39 minutos, Saphy said:\nPublicado 4 ene 2018 (editado)\nA concursantes: Si pueden mandarme entre estos días las fotos y biografías se los agradecería mucho, así preparo todo y el 14/1 puedo publicar bien temprano las fotos para que empiece la votación\nEditado 4 ene 2018 por Malenx\nPublicado 6 ene 2018\nNo se olviden de entregar las fotos y la biografía! Tienen hasta el 13/1\n@Simphoria~ @MaríaS23 @SimmerTeen @Saphy @Wicked Darkness\nA Luxy, Barbara1414, Liyah and 1 más les gusta esto


La Sabiduria de Guruji: junio 2012\nLa memoria te puede entristecer o te puede iluminar. La meditación puede traer ese cambio en tu memoria: dejar ir lo trivial para reconocer tu naturaleza infinita.\nAferrarse a lo limitado y trivial\n¿Cuántas veces tu mente está revolviendo esos recuerdos desagradables?\n"Me dijo esto y aquello…"\n" ¡Ella era tan arrogante!"\n" ¡Me hicieron esto!"\nRecordar todas estas cosas triviales, es vivir en la ignorancia.\nLas causas de la ignorancia y de las ataduras mentales son:\nExperiencias limitantes y triviales\nOlvidarse de la Infinitud\n¿Cómo resolver la carencia y sobreponerse a los recuerdos dolorosos?\nComprendiendo claramente que todo en el mundo es transitorio.\nComprender que los eventos pasados ya no son más reales y aceptar esos eventos\nPracticar el desapego y estar centrado\nIncrementar tu prana a través de la meditación y de pranayamas\nRecordar tu verdadero Ser y estar al servicio de las personas.\nDe manso a valiente y de mendigo a comandante\nA través de la meditación y cuando vuelvas a tener la memoria de "Quien soy":\nToda tu inseguridad desaparecerá\nCaminarás con el espíritu elevado\nSentirás que eres el hijo de Dios y que todo el mundo está allí para ti\nTe darás cuenta que eres el niño de la inmortalidad y que no tendrás final (Amruthasya putra)\nSurgirá una valentía genuina en ti. Y esto ocurrirá en el momento en que estés ante la presencia de un Gurú.\nUna vez, había un mendigo que se la pasaba mendigando dinero de la gente. El pertenecía a una familia Real y por alguna razón, se había olvidado de que era un Príncipe.\nUn día, uno de los soldados del Rey encontró al Príncipe y le recordó lo que había sido diciéndole: "Tú eres un Príncipe. El Rey te está buscando."\nEn el preciso momento en que el Príncipe recordó lo que había sido, sus acciones, sus maneras, la forma de caminar, de hablar, de pensar y su comportamiento tuvieron una rápida transformación.\nLa misma persona que mendigaba por una taza de té, se convirtió –instantáneamente- en un comandante con osadía para interrogar a la gente.\nExpándete hacia el Infinito a través de la Meditación\nLa memoria de tu verdadero Ser te libera\nLa memoria de los eventos pasados y las preocupaciones por el mundo, disminuyen la Infinitud de tu Ser\nCuando la gente se ilumina, ellos dicen: "Me acuerdo". ¡Ellos han recordado su verdadera naturaleza!\nDespués de escuchar a casi 700 versos del Bhagavad Gita, y después de hacer innumerables preguntas, Arjuna le dice al Señor Krishna:Smritir labdva karishye vachanam tava", que quiere decir: "He recordado ahora. Ahora me he dado cuenta de mi verdadera naturaleza y haré lo que tu digas".\nArjuna no le agradece al Señor Krishna. ¡Esto significa que todo está allí en tu memoria!\nLa infinitud está escondida en cada átomo. La memoria puede iluminarte. Cual sea tu deseo o lo que sea que necesites, todo lo que es correcto, necesario y bueno, sucederá. Este conocimiento te traerá paz y entusiasmo.\n¡Sólo necesitas afinar tu memoria con meditación!!\nPublicado por respiro a las 20:38 0 comentarios\nPublicado por respiro a las 14:49 0 comentarios\nPublicado por respiro a las 16:41 0 comentarios\nPublicado por respiro a las 20:59 0 comentarios


noticias archivos - Oportunidad única\nTransferencia De Noticias Hsv\nTransfermarkt Hamburguesa Sv Inicialmente cedido hasta final de temporada, pero el equipo francés de primera división tiene una opción de compra. El club de tercera división SV Meppen ha fichado al jugador ofensivo Mike Feigenspan. El jugador de 26 años firmó un contrato de seis meses más una opción, como anunciaron los Emslander. En el … Read more Transferencia De Noticias Hsv\nCategories noticias Tags noticias, transferencia Leave a comment\nTt Foro De Noticias\nviaje Martin Schröder analiza por qué la gente está encantada rápidamente y qué papel juega el papel en esto. Los resultados en el sociólogo asombran. La crítica en los individuos de TF, a la que también pertenezco, esencialmente solo informó el resumen del foro de discusión. Si ha estado en el TF durante muchos años, … Read more Tt Foro De Noticias\nCategories noticias Tags foro, noticias Leave a comment\nProtestas en todo Kazajstán ¿Qué sucede exactamente cada vez que los paracaidistas europeos comienzan a segar y recortar a mujeres y niños kazajos? ¿O tal vez cuando un helicóptero de la armada europea se dañó en un lugar muy densamente en auge? Tal función puede expandir típicamente la crítica y agregar a las dimensiones que … Read more Últimas Noticias De Kazajstán\nCategories noticias Tags kazajstan, noticias, ultimas Leave a comment\nVer Noticias De Carbono\nCuota Sgl Co2 Últimamente, los comerciantes compensaron unos pocos EUR. quince para su papel convencional. Los datos de SGL Carbon se encuentran actualmente dentro del área constructiva en la bolsa de valores. Experto en fibra de carbono: sgl Co2 De nuevo en el además La fuente de información en tiempo real de Guidants Information le … Read more Ver Noticias De Carbono\nCategories noticias Tags carbono, noticias Leave a comment\nVw Emden Noticias\nVW crecer Emden Es por eso que solo los motores de combustión reales salieron de las líneas de producción en marzo. Lo que es más importante, la continua escasez de semiconductores obligó a VW a detener la producción. Esto debería evitar tiempos de espera aún más prolongados para los híbridos enchufables. Pero los empleados de … Read more Vw Emden Noticias\nCategories noticias Tags emden, noticias Leave a comment\nPresentador De Noticias Rtl\nPinar Atalay regula medios rtl Inteligente, positivo y pensando realmente en las buenas noticias primero, esta es una forma en que los visitantes de #RTL aprenden Charlotte ahora Maihoff, quien recientemente puede haber sido una parte permanente del equipo de #moderación que involucra a «RTL Aktuell» desde septiembre 2010 2017. Agosto de 2021, la periodista … Read more Presentador De Noticias Rtl\nCategories noticias Tags noticias, presentador Leave a comment\nRadio Erft Noticias\nPara tu Rin Luz de los visitantes de Atze Al final de los siete días, la batería de trabajo funciona por debajo de la masa. Tema principal En el período previo a las elecciones expresas en Renania del Norte-Westfalia, todos entrevistamos a los mejores políticos en las reuniones a las que se les diagnosticó la … Read more Radio Erft Noticias\nCategories noticias Tags erft, noticias, radio Leave a comment\nRed De Noticias Pi\nDewiki > Ver Completamente incorrecto Basado en la exploración del Frankfurter Rundschau y el Süddeutsche Zeitung, el trabajo de las agrupaciones cercanas siempre es diseñar técnicas para impactar en las personas dentro del alma con el blog. De acuerdo con esta táctica, las situaciones de debate y las conferencias sobre el Islam se dañarán, los … Read more Red De Noticias Pi\nCategories noticias Tags noticias Leave a comment\nRems Murr Noticias\nFijado será básico insistir desde… Enderbach contiene 85 habitantes junto con un par de instalaciones y el otro complejo. Por lo general, la aldea de la cual es propiedad de Alfdorf que busca colocar el árbol de mayo, la fiesta inicial durante un par de años. Por lo general, el idioma A como el alemán … Read more Rems Murr Noticias\nCategories noticias Tags murr, noticias, rems Leave a comment\nSala Noticias Policia\nÉchange En el punto sobre urgente Inicialmente, ella o él fueron trasladados al centro médico en un helicóptero de socorro. Se produjeron interferencias considerables en el curso particular de Silberhöhe. Los visitantes parecían salvarse de los desvíos. El fraude particular de su Krad KTM dejado en el lugar de Burgstrasse dentro de Échange se describió … Read more Sala Noticias Policia\nCategories noticias Tags noticias, policia, sala Leave a comment


Ofertas Northweek Gafas De Sol Nino | Descuentos y promociones\nNorthweek Gafas De Sol Nino | Los mejores precios y ofertas\nEn esta página encontrará la lista de los mejores Northweek Gafas De Sol Nino con ficha técnica, reseñas emitidas por personas que ya han comprado el producto, información sobre el precio actual y ofertas activas.\nMejor Northweek Gafas De Sol Nino\nOFFERTAMejor Northweek Gafas De Sol Nino\nGafas De Sol Nuevas Gafas De Ciclismo Polarizadas Gafas De Ciclismo De Bicicleta De Montaña Gafas De Ciclismo para Deportes Al Aire Libre Gafas De Sol Uv400 Jfu1\nAtributo óptico de las lentes: UV400 polarizado. Altura de la lente: 52 mm. Color del marco: Multi. Ancho de la lente: 135 mm. 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La expoventa de nacimientos del Fonart estará abierta hasta enero Aleph Multimedios\nInicio Arte y CulturaExposiciones\tLa expoventa de nacimientos del Fonart estará abierta hasta enero\nCIUDAD DE MÉXICO.- El Fondo Nacional para el Fomento de las Artesanías (Fonart) llevará a cabo la inauguración de la expoventa de nacimientos mexicanos, el próximo miércoles 18 de diciembre. Dichos nacimientos participaron en el XXIII Concurso Nacional de Nacimientos Mexicanos, como parte de las actividades en la Tienda-Museo Patriotismo.\nLa muestra estará integrada por una selección de 50 piezas, de las 218 que fueron registradas para el certamen, de diversas ramas artesanales como textiles, fibras vegetales, pintura popular, barro, madera, papel y cartón elaboradas por artesanos de diferentes estados del país, en línea con los ejes de trabajo de la Secretaría de Cultura, que reconocen la riqueza y diversidad cultural hay en México.\nA éste convocan Secretarías de Cultura y Bienestar; Fonart; Citibanamex, Compromiso Social, a través de Fomento Cultural Banamex, con el apoyo del Fondo Nacional para la Cultura y las Artes (Fonca) y el Gobierno del Estado de Querétaro, a través de la Casa Queretana de las Artesanías, otorgó un millón de pesos en premios entregados el pasado 28 de noviembre en la ciudad de Querétaro.\nLa expoventa permanecerá hasta el 26 de enero 2020 y podrá visitarse en los horarios de la tienda, de lunes a domingo, en la ubicada en Av. Patriotismo 691, Col. Mixcoac. CP 03910, alcaldía Benito Juárez, Ciudad de México (Con información de Prensa de la Secretaría de Cultura).\nexpoventa de nacimientosFONARTFondo Nacional para el Fomento de las Artesaníasnacimientos


Sesiones 2037 - Nde Ramirez + Pol Nada + Yacaré Valija\nPullman S/N $150 $15 $165\nCargo por Servicio: (i) La suma de Pesos quince ($15), por cada Entrada que sea vendida a través del Sistema para el sector “Platea”; (ii) la suma de Pesos quince ($15), por cada Entrada que sea vendida a través del Sistema para el sector “Pullman S/N”. El Cargo por Servicio se adiciona al Precio de cada Entrada, y será cobrado directamente por TuEntrada.com a los adquirentes de las Entradas. El servicio de venta telefónica, tiene un costo adicional de $130 por compra. El costo de este servicio es por el asesoramiento y ayuda en la compra de las entradas. Ud puede comprar por internet sin este costo.\nNde Ramirez + Pol Nada + Yacaré Valija\nContinúan las sesiones en Caras y Caretas 2037, a partir de Febrero se abre el año de Sesiones en Caras y Caretas 2037, ciclo que se irá desarrollando durante todo el año y que tiene como protagonistas a quienes le dan vida a la escena musical de Buenos Aires, y por el cual ya pasaron 33 bandas y artistas independientes. Sesiones 2037, un ciclo para descubrir a los músicos más activos, inquietos, movedizos, soñadores y exploradores del momento.


Delta del Mekong | Agencia de Viaje, Viajes a Vietnam, Tailandia, Laos, Camboya, Myanmar\nEl delta del Mekong, a menudo se refiere a Vietnam como la cesta de arroz, es el mayor cultivo de arroz en la región del país, los suelos aluviales ricos que producen tres cosechas al año. A pesar de ser una región predominantemente rural, el delta del Mekong es una de las zonas más densamente pobladas de Vietnam y la mayoría de las tierras están cultivadas. Otros productos incluyen coco, caña de azúcar, frutas y pescado.\nLas principales ciudades del delta son My Tho, Vinh Long, Can Tho y Chau Doc. Conducción al sur de la Ciudad Ho Chi Minh, My Tho es la primera gran ciudad del delta del Mekong para llegar. Su proximidad a la ciudad de Ho Chi Minh ha realizado el destino más popular en busca de un sabor auténtico de la vida del delta. Aquí los visitantes pueden tomar una Sampan a lo largo de los cursos de agua y visitar los huertos de frutas tropicales.\nEl otro destino popular es Vinh Long, otro 65 kilometros profundizado en el delta. Se trata de las islas en el río Mekong en lugar de la propia ciudad que es el punto culminante de un viaje a Vinh Long. La mayoría de las islas se dan a lo largo de huertos frutales y los puentes de madera elaborados a partir de los troncos de palmas de coco o bambú y conocidos como el puente de mono. Una mañana temprana visita los alrededores del mercado flotante de Cai Be el que ofrece grandes oportunidades fotográficas como todo tipo de productos se comercializa a partir de las embarcaciones. Para hace más fácil la compra en los barcos se suspende una muestra de lo que venden desde lo alto de un largo palo. En el camino de regreso a Vinh Long, es posible detenerse a visitar los talleres de ribera pequeños, herreros entre ellos y los encargados de ataúd!\nHace poco más de 30 kilometros y un paseo en ferry lejos de Vinh Long es Can Tho, el centro comercial bullicioso del delta del Mekong. Can Tho es una de las ciudades más atractivas del delta, pero como en el resto del delta del Mekong los mejores lugares está sobre agua. El mercado flotante más grande del delta es el de Cai Rang, es de 6 kilometros de Can Tho y bien vale la pena una visita temprana en la mañana. Para un viaje memorable en barca por el hotel de Victoria Can Tho opera el amanecer y el atardecer cruceros por el río Hau, un renovado tradicionales de arroz de barcazas. Una vista espectacular fuera de la ciudad es la jardín de cigüeña de Thot Not donde cientos de garcetas, garzas y cormoranes se reúnen en las copas de los árboles percha a finales de la tarde.\nChau Doc, situado al pie de la montaña Sam en la frontera con Camboya, tiene una ciudad fronteriza verdadera se sienten a la misma. Este ocupado el pueblo de Cham, camboyano y las comunidades de origen étnico chino y los estilos arquitectónicos distintivos de cada comunidad se puede ver en sus lugares de culto en torno a la ciudad. Un paseo en barco por el río es la mejor manera de ver el inusual piscifactorías flotantes, con casas de madera debajo de las plumas suspendidas cuando los peces vivos se mantienen. La montaña Sam de Chau Doc es el hogar de docenas de templos y santuarios y es un lugar popular de peregrinación para personas de origen étnico chino, así como vietnamita.\nDesactiva la costa oriental del delta en el Golfo de Tailandia, Camboya más cerca que Vietnam, es la isla de Phu Quoc. Una isla montañosa que todavía se encuentra principalmente forestales, Phu Quoc ha sido bendecida con algunas playas bellas de arena blanca y mar azul claro. La isla es famosa en todo Vietnam para la producción de pimiento negro y su salsa de pescado, que dice ser la mejor en el país. Varios pequeños balnearios han abierto en los últimos años en Phu Quoc y está conectado por un vuelo diario a la Ciudad Ho Chi Minh.\nAunque no forma parte del delta del Mekong, Con Dao es otra isla en la costa sur de Vietnam. Con Dao sirvió de isla de cárcel para los presos políticos durante la época colonial francesa, cuando era conocida como Poulo Condore, y en años posteriores el régimen de Saigón encarceló los opositores del régimen en el infame células conocidas como las “jaulas de tigre”. La antigua prisión de los edificios están todavía en pie y están abiertas al público como es un pequeño museo de la isla de rastreo de la historia. Además de tener una historia interesante, Con Dao es también una isla de gran belleza natural con bosques de las colinas, playas desiertas de arena y los grandes arrecifes de coral para hacer un excelente buceo.


Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor | Protocol (Translated to Spanish)\nAnastasis es técnicamente difícil de detectar en vivo porque las células que se han invertido el proceso de muerte celular pueden ser morfológicamente indistinguibles de las células sanas normales. Aquí se describen los protocolos para la detección y seguimiento de las células que se someten a la anastasis en animales vivos mediante nuestro sistema de biosensor desarrollado recientemente en vivo CaspaseTracker.\nAnastasis (griego para "elevar a la vida") es un fenómeno de recuperación celular recientemente descubierto por el que mueren las células puede revertir procesos de muerte celular de fase que se asumen generalmente para ser intrínsecamente irreversible. Promoción de anastasis podría en principio rescate o preservación lesionado las células que son difíciles de reemplazar como cardiomiocitos o neuronas, facilitando la recuperación del tejido. Por el contrario, supresión de la anastasis en células de cáncer, que experimenta apoptosis después de terapias contra el cáncer, puede asegurar la muerte de la célula de cáncer y reducir las posibilidades de recurrencia. Sin embargo, estos estudios se han visto obstaculizados por la falta de herramientas para el seguimiento del destino de las células que experimentan la anastasis en animales vivos. El desafío es identificar las células que se han invertido el proceso de muerte celular a pesar de su aspecto morfológico normal después de la recuperación. Para superar esta dificultad, hemos desarrollado Drosophila y mamíferos CaspaseTracker sistemas de biosensores que pueden identificar y rastrear permanentemente anastática células in vitro o en vivo. Aquí, presentamos en vivo los protocolos para la generación y uso del sistema CaspaseTracker doble biosensor para detectar y rastrear anastasis en Drosophila melanogaster después de la exposición transitoria a los estímulos de la muerte de la célula. Si bien biosensores convencionales y protocolos pueden etiquetar las células activamente en la muerte celular apoptótica, el biosensor CaspaseTracker puede etiquetar permanentemente las células que se han recuperado después de la activación de la caspasa - un rasgo distintivo de la etapa tardía de apoptosis, y al mismo tiempo identificar procesos apoptóticos activo. Este biosensor también puede seguir la recuperación de las células que otras formas de muerte celular que directa o indirectamente afectadas actividad caspasa. Por lo tanto, este protocolo nos permite seguir continuamente el destino de estas células y su progenie, facilitar futuros estudios de las funciones biológicas, mecanismos moleculares, las consecuencias fisiológicas y patológicas e implicaciones terapéuticas de Anastasis. También discutimos los controles adecuados para distinguir las células que se someten a anastasis que mostrar no apoptótica caspasa actividad in vivo.\nPrograman la muerte celular, como la apoptosis, juega un papel esencial en el desarrollo embrionario y la homeostasis normal al eliminar no deseadas, heridas o peligrosas células en organismos multicelulares1,2,3. La pérdida del equilibrio entre la muerte celular y la supervivencia puede conducir a consecuencias fatales como cáncer, insuficiencia cardíaca, autoinmunidad y degeneración4,5,6,7,8. Desencadena la activación de caspasas ha sido considerada tradicionalmente como el "punto de no retorno" en apoptosis9,10,11, que verdugo demolición celular rápida y masiva12, 13,14,15,16. Desafiando este dogma general, hemos demostrado que cultivos de células primarias muertos y las células cancerosas pueden recuperar no sólo después de la activación de caspasas, pero importante también siguientes de la célula características distintivas de la muerte como membrana del plasma blebbing, contracción de la célula, la fragmentación mitocondrial, liberación mitocondrial del citocromo c al citosol, nuclear y condensación de la cromatina, daños en el ADN, fragmentación nuclear, la célula superficial exposición de fosfatidilserina (PS) y la formación de cuerpos apoptóticos 17 , 18 , 19 , 20 , 21. proponemos que anastasis es un fenómeno de recuperación de células intrínsecas, como la muerte de las células pueden recuperar después de la eliminación de la célula muerte estímulos17,18,19,20, 21. acuñó el término "Anastasis" (Αναστάσης)18, que significa "levantamiento a la vida" en griego, para describir este fenómeno de recuperación inesperada de la célula. Nuestra observación de anastasis es apoyado por estudios independientes recientes que revelan también la recuperación de las células después de fosfatidilserina externalización22,23,24, limitado mitocondrial externa permeabilización de membrana25, activación de linaje mixto como quinasa (MLKL) y de contracción celular26.\nCaracterización de los mecanismos de regulación de la anastasis tendrá consecuencias fisiológicas, patológicas y terapéuticas cambian paradigmas. Anastasis podría representar un mecanismo previamente desconocido citoprotector para rescatar o preservar importantes postmitotic células y tejidos que son difíciles de reemplazar y posiblemente cuenta de reversión de la insuficiencia cardíaca, ventricular descarga con ventrículo izquierdo ayudar a los dispositivos (VAD)27,28, recuperación de células fotorreceptoras después de la exposición transitoria de excesiva luz29,30,31, o reparación de las neuronas después de lesión de cerebro32. Si es así, promover la anastasis podría mejorar la recuperación de células y tejidos. Por el contrario, anastasis podría ser una táctica de escape inesperado utilizada por las células cancerosas a sobrevivir la terapia de inducción de muerte celular, causando cáncer recurrencia17,18. Por lo tanto, supresión de la anastasis al morir las células de cáncer durante y después de tratamiento contra el cáncer podría ser una nueva estrategia terapéutica para curar el cáncer mediante la prevención de sus recaídas.\nDurante el proceso de anastasis, hemos encontrado que algunas células recuperadas adquirieron permanentes alteraciones genéticas y experimentaron la transformación oncogénica, probablemente debido a daños en el ADN que se incurra durante apoptosis18,20,21 . Invertir el proceso de muerte de las células dañadas de ADN podría ser un mecanismo de tumorigénesis, potencialmente subyacente a la observación que se repite la lesión tisular aumenta el riesgo de cáncer en una variedad de tejidos, tales como crónicas lesiones térmicas en el esófago inducida por por el consumo de bebidas muy calientes33,34,35, daño hepático por alcoholismo36,37, evolución del tumor después de genotóxicos cáncer terapia38, 39,40y el desarrollo de nuevos cánceres de los tejidos normales que surgen durante los intervalos entre los ciclos de terapia contra el cáncer41,42,43,44 . Si es true, dirigidos a anastasis podrían prevenir o detener el desarrollo del cáncer y la progresión. Hemos encontrado que inducido por hambre morir células de germen se someten a anastasis en re-fed Drosophila19. Si anastasis se produce en las células germinales con daño en el ADN, puede ser cuenta para la observación de que prolongado estrés ambiental promueve el desarrollo de enfermedades genéticas. Por ejemplo, las hambrunas contribuyen al desarrollo de enfermedades heredables transgeneracionales como la diabetes y enfermedades coronarias del corazón45. Por lo tanto, comprensión anastasis podría conducir a estrategias para la prevención de enfermedades hereditarias causadas por este mecanismo potencial de desarrollo.\nPara aprovechar el descubrimiento de anastasis y dirigirla para desarrollar terapias innovadoras, es esencial para el estudio de la causa y la consecuencia de la anastasis en animales vivos. Sin embargo, es técnicamente difícil para identificar y rastrear anastática células en vivo, porque las células que recuperados del proceso de muerte celular aparecen morfológicamente indistinguibles de las células sanas normales, y no es ningún biomarcador de anastasis identificado sin embargo17,18,21. Para abordar estos problemas, hemos desarrollado recientemente un nuevo en vivo caspasa biosensor designado "CaspaseTracker"19, para identificar y rastrear las células que sobreviven apoptosis después de la activación de caspasas de19,46, el sello de apoptosis10,14. Distinción de los biosensores de caspasas "tiempo real" como SCAT12,47, Apoliner48, CA-GFP49, ApoAlert18,50, C3AIs51 iCasper52 que detecta actividad caspasa, el biosensor CaspaseTracker además cuenta con la capacidad para etiquetar permanentemente las células esa actividad caspasa expresa incluso transitoriamente. Por lo tanto, el biosensor CaspaseTracker permite seguimiento a largo plazo de anastasis después de reversión de caspase-mediada la célula muerte proceso in vivo.\n1) preparación del CaspaseTracker Biosensor vuela\nAnestesiar a moscas con CO2y utilizar un pincel para transferir hembras vírgenes de 7 a 10 caspase sensibles Gal4 (DQVD)19 y 7 a 10 G-Trace53 Gal4 reportero joven macho vuela (o viceversa) en la misma cubeta con mosca comida y pasta de levadura fresca.\nNota: Cruz de moscas Gal4 caspasa-sensible (DQVD) y G-Trace produce moscas de progenie de CaspaseTracker. Cruz de caspasa -ensensible (DQVA)19 Gal4 y moscas G rastro proporcionará control negativo vuela (ver discusión). Levadura fresca pasta sirve como fuente de proteína para mejorar la producción de huevos, por lo aumenta el número de progenie. Seleccionar hembras vírgenes y varón joven vuela según sus fenotipos54.\nIncubar las moscas a 18 grados centígrados (oC) en la Cruz por 3 a 7 días y luego se transfieren las moscas a un nuevo vial para configurar una nueva cruz a 18 ° C. Seguir a incubar el frasco original en 18 ° C hasta que la progenie vuela eclose.\nNota: Transferencia de las moscas de padres nuevos viales para evitar hacinamiento de progenie en el vial original. Padre de moscas pueden producir progenie con alimentos frescos y la pasta de levadura en los primeros 2 a 3 interruptores, y entonces la productividad disminuirá significativamente con el tiempo. Criar moscas 18 ° C puede reducir la señal inespecífica de biosensor CaspaseTracker (ver discusión).\nSeleccionar progenie vuela con fenotipos correcta54 para los siguientes experimentos.\nNota: Los transgenes de Gal4 y G-Trace caspase sensibles aquí se encuentran en el segundo cromosoma, equilibrado con balanceador de CyO. Seleccione la progenie no rizado ala (sin CyO), que tanto los transgenes de caspasa-Gal4 y G-Trace.\n2) aplicación de la inducción de muerte celular transitoria a las moscas CaspaseTracker Biosensor\nLa transferencia de 10 a 20 recién eclosed mujer vuela a un nuevo frasco con mosca alimentos frescos y pasta de levadura fresca por 1 día a 18 ° C para permitir la producción de huevos de la cámara por Oogénesis.\nNota: Mantener a la hembra con las moscas macho podría mejorar la producción de la cámara de huevos.\nPara inducir a huevo las cámaras sufren apoptosis por shock frío, transferencia la hembra vuela a nuevo frasco vacío, que se coloca en-7 ° C por 1 h.\nNota: shock frío lesiona las células por inducción de plasma membrana ruptura55,56.\nPara inducir el huevo las cámaras sufren apoptosis por inanición de proteína, transferencia de las moscas hembra a un nuevo frasco con alimentos del agar de sacarosa y 1% de 8% a 18 ° C durante 3 días.\nNota: Hambre de proteínas (alimentos sin proteínas) puede activar cámaras de huevo para experimentar apoptosis57,58,59 y autofagia60,61. Interruptor vuela a un nuevo frasco con alimentos de agar de sacarosa y 1% 8% todos los días para mantener condiciones óptimas de la sucrosa alimentos mosca.\nTransferir las moscas estresadas a un nuevo frasco con mosca alimentos frescos y pasta de levadura fresca durante 3 días a 18 ° C para que puedan recuperar. Diseccionar la hambrienta y las moscas de hambre-se recuperó para obtener cámaras de huevo en los ovarios como descrito62.\nNota: Para diseccionar Drosophila para obtener ovarios, anestesiar a moscas con CO2, use 2 pares de pinzas para quitar cabeza de mosca y utilice las pinzas para sacar la base del abdomen para eliminar los ovarios de las moscas.\n3) fijación y tinción de huevo disecada salas para la proyección de imagen\nTransferencia de las cámaras de huevo disecada junto con alrededor de 0,5 mL fosfato tamponada salino (PBS) a tubos de centrífuga de 1 mL. Permita que los huevos a establecerse.\nNota: Cubrir las puntas de pipeta de plástico con 1% albúmina de suero bovino (BSA) disuelto en agua o en PBS para evitar que las cámaras de huevo para pegar en la superficie de plástico de las puntas. Realizar los siguientes procedimientos en oscuridad para evitar el fotoblanqueo de proteína fluorescente roja (RFP, también conocido como DsRed) y proteína fluorescente verde (GFP) en la cámara del huevo.\nRetirar el PBS mediante pipeteo y luego paraformaldehído al de 4% de 0, 5 mL de PBS para fijar las cámaras de huevo a temperatura ambiente en oscuridad durante 20 a 30 minutos.\nNota: Aplicar rotación suave en este y los siguientes pasos de incubación.\nRetire el paraformaldehido mediante pipeteo y luego se lava la cámara del huevo con 0.5 mL de SAFT (PBS + 0.1% Tritón X-100) para 3 veces.\nNota: La fijación prolongada podría reducir las señales de RFP y GFP.\nIncubar las cámaras huevo con SAFT para 1 a 2 h a temperatura ambiente o durante la noche a 4 ° C con rotación suave a permeabilizar las cámaras de huevo.\nNota: Saft también puede evitar cámaras de huevo se adhiera a la superficie de plástico revestida de BSA no.\nQuitar el SAFT mediante pipeteo y luego 0,5 mL de 10 μg/mL de colorante Hoechst nuclear azul en SAFT para cámaras de huevo de 1 a 2 h a temperatura ambiente para tinción de núcleo.\nNOTE1: Evitar la incubación prolongada con tinte nuclear como esto aumentará la señal inespecífica.\nNota 2: Enfoque alternativo para teñir el núcleo sin Hoechst es agregar 200 μL anti blanqueo montaje agente DAPI (ver materiales) e incubar durante la noche63, antes de montar los tejidos en vidrio cubreobjetos, como se describe en el protocolo de 3.8.\nNota 3: realizar la tinción y los siguientes procedimientos en oscuridad para evitar el fotoblanqueo.\nQuitar el tinte nuclear mediante pipeteo y luego aplicar 0.5 mL SAFT para lavar las cámaras de huevo en los tubos de centrífuga de 1 mL por 3 veces, con 10 a 20 min de incubación con rotación suave entre cada paso de lavado.\nQuitar todos SAFT con pipeta fina y luego aplicar 200 agente de montaje anti blanqueo μL (ver materiales) al incubar las cámaras de huevo a temperatura ambiente durante 3 horas o durante la noche a 4 ° C hasta que las cámaras de huevo se hunden hasta el fondo del tubo.\nNota: los tejidos que han absorbido completamente el agente de montaje se hunden hasta el fondo del tubo.\nMontaje de las cámaras de huevo manchado transfiriendo con 200 μL anti-blanqueo montaje agente sobre un portaobjeto previamente limpiado para la proyección de imagen mediante pipeteo, cubrir los compartimientos del huevo con un cubreobjetos de vidrio previamente limpiado de 20 x 20 mm y sellado de cubreobjetos en portaobjetos de vidrio, poniendo esmalte de uñas en el borde de la hoja de cubierta.\nNOTE1: Limpieza previa de la diapositiva de cristal y cubreobjetos con el agua o el 70% de etanol.\nNota 2: Aplicar vaselina entre el portaobjetos de cristal y el cubreobjetos para evitar la destrucción de los compartimientos de huevo al súper.\nImagen de las cámaras de huevo usando fluorescencia o microscopio confocal, usando un 20 x, NA 0.8 objetivo Plan-Apochromat, con excitación luz longitud de onda 405 nm para la tinción nuclear (detectar emisión ~ 461 nm), 561 nm para (señal RFP (actividad caspasa recientes o en curso) detectar emisión ~ 590 nm) y 488 nm para señal GFP (más allá de la actividad de caspasa) (detectar emisión ~ 518nm).\nNota: Vea nuestros protocolos publicados para la microscopia20,64.\nMicroscopía Celular en time-lapse es un método confiable para tracto anastasis en células cultivadas20, es difícil identificar que las células han sufrido anastasis en animales, porque las células recuperadas aparecen morfológicamente indistinguibles a las células sanas normales no han procurado la muerte celular. Por ejemplo, las células de cáncer de cérvix humano HeLa Mostrar características morfológicas de la apoptosis1,2,14, como la contracción celular, condensación nuclear y membrana del plasma blebbing en respuesta a la muerte celular estímulo de 1μm estaurosporina17 (figura 1A, figura 1B i-ii). Después de retirar el estímulo de muerte celular e incubación en medio fresco, las células moribundas revertir el proceso de muerte celular por anastasis17,18, como lo indica recuperación morfológica (figura 1B iii-iv), seguida de proliferación (figura 1B v-vi). Nuestros estudios anteriores también han utilizado biosensores caspasa "tiempo real", como ApoAlert (NES-DEVD-YFP-NLS) para demostrar la inversión de apoptosis después de la activación de caspasa18,20. Este biosensor se localiza en el citosol de las células sanas (figura 1, D 1 ). Sobre la activación de caspasas por la célula muerte estímulo 3,7% de etanol, este biosensor basado en YFP es hendida por caspasas y translocado al núcleo, donde se acumula y la fluorescencia nuclear resultante de su etiqueta YFP identifica células con en curso actividad de caspasa (figura 1 C, 1 D ii-iii). Las células de morir también Mostrar características morfológicas de la apoptosis durante la inducción de etanol1,14,18,20, tales como la fragmentación de las mitocondrias tubulares, nucleares condensación, contracción de la célula y membrana del plasma blebbing (figura 1 ii-iii). Curiosamente, después del retiro del estímulo de muerte celular, las células del mismo pueden recuperar y recuperar la morfología normal (figura 1 iv-viii). En particular, la fluorescencia nuclear de ApoAlert (biosensor hendido) se ha ido dentro de 1 hora en las células recuperadas (figura 1 iv-viii), posiblemente debido a procesos similares que eliminen componentes dañados en anastática células18 , como exfoliados caspasa-3, PARP ICAD generados durante la apoptosis. Por lo tanto, una nueva estrategia es necesaria para el seguimiento de anastasis sobre un marco de tiempo más largo, especialmente en vivo.\nPara seguir el destino de las células anastática, hemos desarrollado el sistema mamífero del biosensor de CaspaseTracker, que etiquetas permanentemente las células después de ser troceados por la actividad de caspasa verdugo. Este biosensor se compone de una rtTA caspase sensibles (transactivator de tetraciclina controlado inverso) y un reportero basadas en Cre-LoxP rtTA actividad (figura 2A-B). En las células sanas con ninguna actividad de caspasa, el transactivator rtTA65 está anclado a la membrana plasmática ancla (Lyn11)66,67, señal de exclusión del núcleo (NES) de mapa quinasa quinasa (MAPKK)68, y receptor de estrógeno variante (ERT2)69 por caspasa escindibles enlazadores de70 (DEVD) deriva de PARP (figura 2A, 2B). Como rtTA atada no se translocan desde el citosol al núcleo, puede activar el reportero rtTA. Sin embargo, después de la activación en respuesta a un estímulo de muerte celular, caspasas hienden a los enlazadores DEVD, liberando la rtTA a translocan al núcleo (figura 2B). Una vez en el núcleo, la rtTA se une al elemento de respuesta a tet (TRE) y desencadena la expresión transitoria del recombinase de Cre, que conduce a un evento de recombinación irreversible que elimina el cassette del codón de parada entre el promotor de la CAG y las secuencias de codificación para proteína fluorescente roja (DsRed). Esto resulta en una expresión permanente de DsRed (figura 2B), que sirve como marcador fluorescente permanente de aquellas células que pueden permanecer vivos después de que han experimentado actividad de caspasa, así como de su progenie (figura 2).\nPara probar el biosensor CaspaseTracker mamífero, introducido en células HeLa por transfección transitoria, trataron las células con un estímulo de muerte celular (staurosporina 1μm) y controlar recuperación de las células por microscopía confocal en time-lapse de la célula ya que tenemos descrito20. Doxiciclina (concentración final de 1μg/mL), que es esencial para permitir rtTA actividad65,71, se añadió al medio de cultivo celular para encender el biosensor durante todo el experimento. En respuesta al estímulo de muerte celular, las células tratadas muestran características distintivas de la apoptosis, incluyendo la contracción de la célula y la membrana del plasma blebbing como esperado (Figura 2D i-iii). Después de retirar el estímulo de muerte celular, enjuague la célula capa de una vez y agregar medio de cultivo fresco, anastasis se observan las células moribundas, como indicado por su regreso a una morfología normal (Figura 2D iv-vii). De diagnóstico, sólo recuperaron células express el DsRed marcador fluorescente durante y después de anastasis (Figura 2D iv-vii), distinguiéndolos de las células no recuperado (Figura 2D iv-vii) y las células del control no exponerse al estímulo de muerte celular (Figura 2E). Esto demuestra la aplicación y utilidad de lo mamífero CaspaseTracker como una novela nueva herramienta para la identificación y etiquetado permanentemente las células anastática de la activación de caspasas y proporciona una manera de rastrear y estudiar su destino a largo plazo.\nPara detectar y rastrear anastasis en animales vivos, animales transgénicos de biosensor CaspaseTracker son necesarios. Por lo tanto, primero utilizamos Drosophila melanogaster como un sistema modelo19, porque como es un importante Organismo genéticamente manejable para el estudio del desarrollo animal y enfermedades humanas72,73,74 ,75. Como modifica el biosensor CaspaseTracker mamífero, Drosophila dual biosensor puede identificar y distinguir "reciente/en curso" de "más allá" de la actividad caspasa. Este biosensor doble se compone de un caspase sensibles Gal419y el reportero de Gal4 G-Trace53 (Figura 3A). En las células sin actividad de caspasa, el factor Gal4 de la transcripción de la levadura es atado a un dominio de anclaje (mCD8) membrana plasmática a través de un enlazador escindibles de caspasa (DQVD) derivado de DIAP1 (figura 3B), teniendo una mutación 21NN/GV22 para evitar la degradación de Gal4 por la regla de N-final con hendidura caspase el vinculador afterAsp2076, y una mutación de D135R para suprimir la función inhibitoria de la caspasa drICE en el dominio de BIR177. Como Gal4 atada no se translocan a núcleo sin escote por caspasas para liberarlo, el reportero de Gal4 G rastro permanece inactivo en las células que no de la actividad de caspasa19. Sobre la activación de caspasas, sin embargo, caspasas activadas desdoblan al vinculador DQVD, liberando Gal4 que translocan en el núcleo para activar el rastro G reportero (Figura 3A)19. Gal4 se une a específicos arriba activar secuencias (UAS) para activar la transcripción transitoria y expresión de la RFP, que luego sirve como un reportero fluorescente de la actividad de caspasa reciente o actual hasta la Gal4 (caspasa) actividad se detiene y luego proteína RFP degradados. Gal4 desencadena también expresión del recombinase FLP del transgén, conduce a un evento de recombinación que quita el cassette del codón de parada entre un promotor ubiquitina (Ubi) y una secuencia de codificación para GFP dirigida por el núcleo (nucGFP). Esto resulta en una expresión permanente de nucGFP, que sirve de marcador permanente de aquellas células que han experimentado actividad caspasa y siguen vivos.\nPara probar la Drosophila CaspaseTracker biosensores para la detección de apoptosis y anastasis en vivo, CaspaseTracker vuela de mujer fueron sometidos a estrés fisiológico (figura 3), tales como choque de frío19, que pueden eficientemente muerte de la célula de disparo, incluyendo apoptosis, como se indica por la activación de caspasas, condensación nuclear y celular contracción19,78y también necrosis debido al enfriamiento que causa la pérdida de la integridad de la membrana y salida de citoplásmico contenido55,56. Como era de esperar, CaspaseTracker no se ha activado en el huevo cámaras de moscas control donde no era muerte celular relacionados con el estrés inducido (figura 3D). Por el contrario, las cámaras de huevos de moscas tensionados un día después del choque frío demostraron no sólo contracción de la célula apoptótica característico y condensación nuclear, pero también RFP y GFP expresión, indicando la presencia de los últimos o en curso (RFP +) y últimos (GFP +) caspasa actividad (figura 3E). Sin embargo, a los 3 días después de regresar las moscas estrés a condiciones normales no destacando, GFP, pero sin RFP, expresión fue detectada en las cámaras de huevo recuperado (figura 3F). Esto indica que cámaras de huevo que habían manifestado actividad caspasa después de estrés fueron capaces de superar el proceso de muerte celular y sobrevivir.\nPara más prueba de reversibilidad del proceso de muerte celular en huevo cámaras19, CaspaseTracker moscas hembra fueron tensionados por inanición proteína después alimentadas sacarosa al 8% de agar al 1% durante 3 días. Estudios previos demostraron que hambre de proteínas puede desencadenar apoptosis caspase-mediado y autofagia de los tejidos somáticos y las células germinales, incluyendo huevo cámaras57,60,61. Como era de esperar, CaspaseTracker fue activado en cámaras de huevos después de 3 días de hambre de proteínas (figura 3). Las cámaras de huevo muerte exhiben morfologías apoptóticas y expresión de las RFP y GFP biosensor marcadores, indicando recientes o en curso (RFP +) y actividad de caspasa (GFP +) (figura 3). Para demostrar que CaspaseTracker puede rastrear las células recuperadas que experimentaron previamente la activación de caspasas después de un estímulo de muerte, las moscas hambrientos fueron transferidas a la mosca que contienen proteínas normales de los alimentos. Como era de esperar, las cámaras de huevos recuperados de estas moscas nuevamente alimentadas carecen del reportero de caspasa transitoria de RFP, indicando que no hay actividad de caspasa recientes o en curso (figura 3 H). Sin embargo, las cámaras del huevo en las moscas después de aliviar el estrés por volver a la alimentación normal muestra el reportero de caspasa GFP (figura 3 H), lo que indica que las células en estas cámaras de huevo habían invertido el proceso de muerte celular iniciada en un punto después de activación de caspasas. Verificación de que la actividad de biosensor de CaspaseTracker es accionada por la caspasa se obtuvo mediante la sustitución de la secuencia de escote DQVD con la secuencia de DQVA, que caspase es incapaz de unirse y que abolir la actividad de biosensores (figura 3B, 3I ).\nDespués de la CaspaseTracker Drosophila recuperado de inanición de proteína, encontramos que múltiples tipos de células en la cámara del huevo, como las células somáticas (folículo) y células germinales (células de la enfermera y ovocitos), aparece sólo GFP y RFP no (figura 3J )19, que indica que estas células pueden sufrir anastasis después de la activación de caspasas. Curiosamente, el GFP también etiqueta las células en el germarium (figura 3J)19, que contiene células madre, junto con sus cámaras de huevo asociado en la misma cadena de ovariole. Por lo tanto, estas cámaras de huevo GFP-positivas puedan haber sido derivadas de células que se han recuperado del proceso de muerte celular después de la activación de caspasas. Lo importante, la hembra hambrienta y volver a fed vuela endecha huevos fértiles que pueden producir GFP-expresando progenie moscas19, sugiriendo que potencialmente las células reversible proceso de muerte celular después de la activación de caspasas puede recuperar su función aparentemente normal. Se necesitan estudios futuros para determinar si moscas de progenie que sobreviven como consecuencia de la anastasis presentan secuelas permanentes.\nFigura 1 . Recuperación de HeLa células después de la inducción de muerte celular.\n(A) diagrama esquemático del enfoque para inducir la muerte celular y posteriormente permitir morir las células para recuperarse después del retiro del inductor de la muerte de la célula.\n(B) célula en time-lapse DIC microscopía de células sanas de HeLa (), el mismo grupo de células después de tratar con 1μm de estaurosporina (ii) y luego se lava y más se incubaron con medio de cultivo fresco para remover la estaurosporina ( III-vi). Flecha blanca indica una división celular.\n(C) esquema de la proteína de la fusión de biosensor de caspasa NES-DEVD-YFP-NLS y la localización subcelular de YFP durante la inducción de muerte celular y después anastasis.\nMicroscopia confocal de la célula en time-lapse (D) HeLa células expresando la proteína de la fusión del biosensor de caspasa NES-DEVD-YFP-NLS antes (), durante la exposición a 3.7% etanol (ii - iii) y después de extracción de etanol del medio de cultivo (iv - viii). Aquí se muestran imágenes del biosensor caspasa sólo (fluorescencia verde, fila superior); combina imágenes del núcleo tinción de Hoechst (fluorescencia azul) y mitocondrias (fluorescencia roja) (fila media), e imágenes en la fila del medio más combinan con imágenes DIC (fila inferior). Flechas blancas en fila superior indican nuclear localizada YFP. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 2 . Sistema de biosensor de mamíferos CaspaseTracker.\n(A) esquema de lo caspase sensibles rtTA.\n(B) esquema del mamífero sistema biosensor CaspaseTracker rtTA.\n(C) diagrama de flujo del uso del CaspaseTracker rtTA biosensor para detectar anastasis. Triángulo rojo/amarillo (inductor de muerte celular se aplican) y verde/azul (inductor de lavado apagado) los símbolos son como en la figura 1A.\n(D) microscopía confocal de células vivas Time-lapse de un racimo de células HeLa expresando el biosensor de rtTA CaspaseTracker mamífero antes de () y durante la exposición a 1μm estaurosporina (ii - iii) y después de retirar estaurosporina de medio de cultivo (iv - vii). Imágenes combinadas de DIC y DsRed señales. Las flechas indican la celda 1 (amarillo) y 2 (verde) de la célula.\n(E) microscopia confocal de células vivas Time-lapse de las células HeLa de biosensor expresando sin tratar. Imágenes combinadas de DIC y DsRed señales. Las flechas blancas indican células divisorias.\nDoxiciclina (1ug/mL) estuvo presente en el medio a lo largo de los experimentos que se muestra en los paneles (D) y (E). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 3 . Drosophila Sistema biosensor dual de CaspaseTracker. (Aprobado con el permiso de Tang et al., científica de informes de 2015 9:9015 19 ).\n(A) esquema del sistema biosensor Drosophila CaspaseTracker Gal4.\n(B) esquema de la caspasa-sensible (DQVD) y el control de caspasa-insensible (DQVA) Gal4.\n(C) esquema de ovario del Drosophila y diagrama de flujo para muerte de la célula-inducción en moscas de 1 día de edad, seguido por la recuperación de 3 días en condiciones normales. Imagen de Drosophila proporcionada por Darren Obbard.\nImagen representativa de confocal (D), de cámaras de huevos desde el ovario de una mosca hembra biosensor alimentados con alimento normal volar durante 6 días (sin tratamiento).\n(E) imagen confocal representativa de cámaras de huevo desde el ovario de una mosca de frío sorprendido biosensor femenino coloca en-7 ° C por 1 h y luego cambiado a condición normal de la cultura para 1 día (Shock frío, CS).\n(F) como el panel E excepto las moscas shock frío fueron cambiados a la condición de la cultura normal durante 3 días (recuperada después de CS).\n(G) imagen confocal representativa de huevo cámaras desde el ovario de un biosensor hembra hambrienta operan alimentados con 8% de sacarosa en 1% de agar sin proteínas durante 3 días (subalimentada).\n(H) como el panel G excepto las moscas tratadas fueron cambiados a la alimentación normal volar durante 3 días después del tratamiento de hambre de proteínas (re-alimentado).\n() Como panel G excepto que muestra el hambre de caspasa enmoscas de mujer biosensor sensible CaspaseTracker (DQVA), que sirvió como control negativo.\n(J) imagen confocal representativa de cámaras de huevos de una hembra hambrienta y volver a fed Drosophila. Las flechas indican nuclear GFP expresión en las células de la enfermera (negro), (blanco) de ovocitos y las células del folículo (amarillas) de compartimientos del huevo y en el germarium (verde). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 4 . Implicaciones fisiológicas, patológicas y terapéuticas de anastasis. (Aprobado con el permiso de Tang et al., F1000Res 2017, 6:43 21 ). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nEl sistema de doble biosensor CaspaseTracker es una novedosa y exclusiva herramienta que permite la detección de los últimos o actividad caspasa continua y seguimiento de las células que se han invertido muerte celular procesan y sobrevivieron después de experimentar actividad caspasa en vivo. Mientras que la actividad de caspasas ha asumido tradicionalmente como una característica distintiva de la apoptosis, cada vez más estudios revelan que no apoptótica caspasa actividad juega un papel potencial en funciones diversas células normales, tales como la regulación de la actividad neuronal79, 80, aprendizaje y memoria81,82,83,84, supresión de necroptotic célula muerte85,86, spermatid individualización87, 88,89, de proliferación celular90y destino celular patrones91procesamiento microARN. Además de apoptosis y anastasis, el sistema de biosensor de CaspaseTracker por lo tanto puede detectar no apoptótica caspasa actividad, que está presente en el cerebro y lóbulos ópticos, cardias, tripa, Malpighi túbulos, tráquea, músculos y otros tejidos de Drosophila19,46,64. Esta señal del biosensor también podría representar la actividad anastática o durante el desarrollo embrionario o la homeostasis normal de estos tejidos. Para estudiar la anastasis después de estrés ambiental induce muerte de la célula transitoria en animales vivos, es fundamental elegir los tejidos con células que no exhiben actividad de caspasa biosensor bajo condiciones fisiológicas normales, pero que puede ser inducida a caspasa activación por la inducción de muerte celular transitoria. Cámaras de huevo son ideales para este propósito, porque no tienen típicamente ninguna actividad de la caspasa de germarium a etapa 10 durante la ovogénesis58,59,92.\nExponer hembra Drosophila a estrés ambiental transitorias, tales como proteína hambre y frío choque, puede eficientemente desencadenar la activación de caspasas y muerte celular en el huevo cámaras19,57,58, 78. Pasos críticos en el protocolo incluyen evitar la inducción de muerte celular prolongada a las moscas. Las condiciones optimizadas de inanición de proteína (8% de sacarosa en agar al 1% durante 3 días) y el choque frío (1 h a-7 oC) a las moscas hembra pueden desencadenar el proceso de muerte celular caspase-activado en cámaras de huevo y permitirles recuperar después las moscas estrés vuelven a condición normal19. El tratamiento prolongado con un estímulo de muerte celular puede desencadenar más cámaras de huevo para someterse al proceso de muerte celular, pero la tasa de recuperación es también reducida, probablemente porque las cámaras de huevo muere experimentan daño masivo más allá de reparación.\nEs un paso crítico adicional en este protocolo para reducir la señal de fondo CaspaseTracker en cámaras de huevo por cruzar, criar y mantener que el CaspaseTracker vuela a baja temperatura, como 18 oC. Mientras que la mayoría de las cámaras de huevo de óptimo cría moscas no muestra actividad de caspasa el germarium etapa 10 durante la ovogénesis58, alrededor del 1% de cámaras de huevo podría exhibir actividad de caspasa biosensor sin inducción de muerte celular19 . Esto puede reflejar el índice de desgaste normal debido a los errores innatos o puede ser provocado involuntariamente durante la Oogénesis por condiciones normales de laboratorio. Como Gal4 muestra menos actividad de moscas en baja temperatura93, criar moscas a 18 oC y no a temperatura ambiente, puede reducir la señal endógena que activa el sistema CaspaseTracker. Por otra parte, cambiar moscas a una temperatura más alta, como 29 oC, puede aumentar la sensibilidad del sistema de CaspaseTracker, debido al incremento en la actividad de Gal493y potencialmente otro endógeno dependiente de la temperatura enzimática actividades.\nEs importante distinguir las células de CaspaseTracker-positivas que se someten a proceso de muerte celular o anastasis de células que exhiben no apoptótica caspasa actividad. Células apoptóticas expresan RFP (marcador transitorio para la actividad de la caspasa en curso o recientes) y a menudo GFP (fabricante permanente para la actividad de caspasa pasada) en el tratamiento de inducción de apoptosis, como mueren las células tienen actividad caspasa curso eso Gal4 activado hiende, que luego activa el transitorio (Gal4 dependiente de actividad RFP) y permanente (Gal4 activa FLPase-FRT mediada por GFP) Reporteros del sistema G-Trace. Apoptosis de estas células puede confirmarse por morfológica y bioquímica punzones a como condensación nuclear detectada por tinción con colorantes nucleares14,19,58y hendidura caspase detectados por immunostaining19,94. Las células que ya han experimentado el anastasis Mostrar la permanente expresión de GFP por el evento de recombinación mediada por el FLPase del sistema G-Trace. Estas células no expresan RFP como no tienen ninguna actividad caspasa ni otras señas de identidad de apoptosis19. Estas células también presentan morfología nuclear normal. Las células tienen no apoptótica caspasa actividad muestran a menudo expresión de RFP y de GFP, y también tienen una morfología nuclear normal19.\nPuede ser difícil distinguir las células que anastasis de aquellas células que habían pasado no apoptótica caspasa actividad, porque ambos Mostrar sólo GFP y ningún sello de la muerte celular. Por lo tanto, experimentos de control de cuidado debe ser incluido19. Por ejemplo, para estudiar la anastasis en cámaras de huevo, es esencial examinar la expresión de GFP en tensiona-recuperada moscas y moscas no tensionado (control negativo). Recuperado moscas deben mostrar células GFP-expresando más que moscas unstressed, si anastasis ha ocurrido después de la activación de caspasas. También es importante distinguir las señales fluorescentes CaspaseTracker de auto-fluorescencia inespecífica, como observado en la cutícula, pigmentos y cuerpos grasos19. Hemos generado control negativo biosensor moscas por mutando el sitio de la hendidura caspase del biosensor (DQVD) a una secuencia no escindibles (DQVA) y en consecuencia por el biosensor de control no responde a la actividad de caspasa19. La señal detectada en el caspase sensible (DQVD) pero no en las moscas de biosensor de control negativo (DQVA) es la señal de interés, provocada por la actividad de caspasa, en lugar de auto fluorescencia.\nNuestro actual Drosophila dual CaspaseTracker biosensor puede identificar las células con actividad de caspasa "reciente" por la expresión de RFP y las células con actividad de caspasa "pasado" por la expresión de GFP19. Tomamos nota de que la RFP no es un indicador de actividad de caspasa "tiempo real", ya que tiene unas horas de tiempo de reacción para Gal4 impulsar la expresión de RFP en respuesta a la actividad de la caspasa. Para agregar una función de "tiempo real", el Drosophila CaspaseTracker biosensor puede ser combinado con el recientemente desarrollado iCasper biosensor52, un "tiempo real" y "oscuro a brillante" en vivo biosensor que sólo muestra su señal far-red cuando es hendida por caspasas.\nAdemás de apoptosis, CaspaseTracker podría también ser activado en tipos alternativos de la muerte celular como las células pueden cambiar vías de muerte celular durante su curso que directa o indirectamente involucra la activación de caspasas, como autofagia después hambre95,96, necrosis de la membrana del plasma inducida por shock frío ruptura19,55,56,78y necroptosis inducidas por staurosporina97, 98. Nuestros estudios actuales y anteriores demostraron que los biosensores de CaspaseTracker pueden etiquetar las células de estas célula muerte inducciones en vitro o en vivo17,18,19 , 20 , 21. como estas inducciones de la muerte de la célula solo pueden activar simultáneamente múltiples vías de muerte celular en las células del mismo, la recuperación de estos mueren células sugiere que anastasis es un fenómeno de recuperación general de la célula que puede revertir la muerte de diferentes células procesos de apoptosis, autofagia, necrosis y necroptosis, individualmente o al mismo tiempo.\nEl biosensor en vivo CaspaseTracker facilitará la búsqueda de funciones todavía desconocidas, los mecanismos y las implicaciones terapéuticas de la anastasis ()figura 4)21. Para revelar la firma molecular del anastasis, realizamos estudios de microarrays de expresión curso a tiempo entero genoma gen para analizar las células hepáticas primarias de ratón durante la revocación de la apoptosis inducida por el etanol y curiosamente, encontraron cambios llamativos en transcripción de genes implicados en múltiples vías incluyendo pro supervivencia, antioxidación, respuesta de daño de ADN, modificación de histonas, angiogénesis, migración celular y transformación18,21. Este hallazgo es apoyado por nuestro estudio de validación de la recuperación de las células cancerosas humanas de hígado HepG2 de apoptosis18,21y también un estudio reciente de la secuencia de RNA independiente de células HeLa en recuperación de apoptosis99. Curiosamente, para arriba-regulación de algunos factores de pro-supervivencia encuentra en las células anastática se observan también en la reversión de la insuficiencia cardiaca, progresión del tumor y cáncer recurrencia101,de100,102, sugiriendo la potencial participación de anastasis. Para estudiar las potencialidades fisiológicas, patológicas y terapéuticas de la anastasis, es importante identificar las células anastática y rastrear su destino en pequeños animales, como este permitirá estudios mecanísticos y terapéuticos. Nuestro Drosophila y mamíferos CaspaseTracker biosensores serán herramientas útiles para probar las contribuciones potenciales de la anastasis en el desarrollo normal, homeostasis, recuperación de tejido, evolución del tumor, recurrencia del cáncer y metástasis. Hallazgo de estos estudios aumentará nuestra comprensión de la función natural de anastasis y ofrecen un potencial para identificar revolucionario nuevos enfoques terapéuticos para enfermedades intratables por mediar la muerte celular y la supervivencia a través de control anastasis.\nAgradecemos a Darren Obbard Drosophila imagen en Figura 3 y en manuscrito video; J. Marie Hardwick, Wade Gibson y Heather M. Lamb para la valiosa discusión de este manuscrito. Este trabajo fue apoyado por un Sir Edward Youde Memorial Fellowship (H.L.T.), Dr. Walter Szeto Memorial Scholarship (H.L.T.), Fulbright concede 007-2009 (H.L.T.), beca de la Fundación de investigación de Ciencias de la vida (H.L.T.) y NCI K22 otorga CA204458 (H.L.T.). Ho Tang Lam era un Shurl y Kay Curci Foundation Fellow de la Fundación de investigación de Ciencias de la vida (2014-2017).


Mostremos nuestros SantaBarbara. - Página 253\nMensajepor posit » 05 Nov 2019 20:59\nMensajepor alcotan78 » 06 Nov 2019 13:20\nYo he introducido en alguna ocasión el cartucho directamente en la recámara y no me ha supuesto ningún impedimento la uña extractora.\nMensajepor gumersindo » 06 Nov 2019 14:39\nMensajepor hornet » 07 Nov 2019 21:57\ngumersindo escribió: Es cuestión de insistir\nhasta partir,la uña o doblar el fleje?\nMensajepor Flinte » 08 Nov 2019 17:23\nEso depende del ajuste de la uña estractora, unas veces se hace sin problemas otras cuesta un poco, mucho o hasta resulta imposible.\nNo se trata sólo de pulir, eso es bastante fácil, tambien hay que tener en cuenta la curvatura interior de la uña, a veces escasa, o los puntos de contacto de la parte superior del fleje, donde está la uña, con la cabeza del cerrojo y/o la acción, que si no hay espacio suficiente impiden la flexión para abrazar la ranura del cartucho. Cualquier buen armero avezado en M98 debería saber solucionarlo en poco tiempo y con facilidad, aunque quizás esto último sea lo más complicado.\nMensajepor SicariuS » 10 Nov 2019 22:33\nAlguien le ha puesto cargador extraíble a una de estas joyas???\nAndo pensando en poner uno en mi cetmeton pero estoy bastante perdido\nMensajepor Flinte » 11 Nov 2019 11:24\nNo es complicado, solo quitar la tapa original y poner el cargador. Como es monohilera sólo entran 3 cartuchos.\nEste que puedes comprar en Brownells es el más económico que conozco\nhttps://www.brownells.es/epages/Iberica ... rchButton=\nsi quieres uno alemán, casi se triplica el precio\nEn eGun, de segunda mano puede salir a buen precio, ahora mismo tienes dos de Tornado en subasta. Hay que registrarse para poder pujar.\nEl de Brownells es copia del Tornado alemán.\nAunque si quieres más capacidad siempre puedes colocar éste de ¡20 cartuchos y totalmente legal! Aunque seguro que te mirarán raro...\nhttps://www.brownells.es/MAUSER-98-MAGA ... -341000007\nOpciones hay, saludos\nMensajepor Flinte » 11 Nov 2019 11:27\nPerdón, olvidé el enlace a eGun\nhttps://www.egun.de/market/list_items.ph ... n+&quick=1\nMensajepor SicariuS » 11 Nov 2019 14:26\nMuchas gracias compañero. Solo una pregunta.\nEstos cargadores entiendo entran en el guardamontes original sustituyendo a la tapa de la teja elevadora. No????\nUfffff el de 20 es feo con ganas. No sé qué pinta la cadenita esa por ahí colgando...\nHabía visto el de Voere que sustituyes guardamontes original por uno adaptado para cargador extraíble\nSi no me equivoco. Estos cargadores que me has pasado convierten el alojamiento munición de doble hilera a monohilera????\nMensajepor Flinte » 11 Nov 2019 17:13\nCorrecto, sin alterar nada del original o sustituir partes como el Voere, encajan en el alojamiento de la tapa del almacén.\nLo de la cadenita es muy sencillo, como el cargador no es tal sino un almacén extendido no tiene labios que abracen la munición, si lo cargas fuera de su alojamiento saltarían los cartuchos si no los sujetas, la cadena tiene un pasador que evita que esto ocurra y se desparrame la munición mientras lo colocas en su sitio\nSi está instalado en el arma no hay problema vas cargando por la ventana de alimentación/expulsión de la misma manera que con la tapa normal.\nEfectivamente, los cargadores son monohilera y sólo entrán 3 cartuchos. Al meter el cargador disminuye la anchura del almacen y no caben al tresbolillo. Con un cargador que sobresaliera un par de centímetros se hubiera solucionado pero yo, si lo hay, no lo conozco, o no es tan fácil la solución.\nUsuarios navegando por este Foro: gericou y 26 invitados


Certificado Proficiency Cambridge - Elduaien\nDudas certificado C2 Proficiency de Cambridge\n25/10/2019 Cambridge. Cursos y certificados\nEn Elduaien siempre animamos a nuestros/as alumnos/as a ir un paso más allá y conseguir el certificado C2 Proficiency de Cambridge. Porque Proficiency en inglés significa «dominio» y nuestro objetivo, como Academia de Idiomas, es que nuestros y nuestras alumnas se conviertan en expertos en el inglés.\nA continuación, os dejamos otra serie de preguntas y dudas respecto al C2 Proficiency:\n¿Es lo mismo el C2 Proficiency que el C2?\nEl C2 es el nivel más alto de inglés en la escala del MCER. El C2 Proficiency es un certificado oficial de Cambridge Assessment English que acredita que has alcanzado ese nivel en inglés.\nLas titulaciones de Cambridge están reconocidas a nivel mundial por miles de entidades, universidades y organizaciones líderes en sus sectores.\n¿Para que sirve obtener el certificado de Cambridge C2 Proficiency?\nPodrás estudiar programas internacionales de posgrado y de doctorado.\nPodrás negociar de manera efectiva frente a un equipo directivo de una empresa internacional.\nComprenderás las principales ideas de un texto complejo.\nPodrás hablar sobre asuntos complejos o delicados, abordando con fluidez cuestiones problemáticas.\n¿Cuál es la estructura del examen del C2 Proficiency?\nComprensión de lectura y uso de la lengua:\nContenido: 4 partes/30preguntas\nExpresión oral: 3 partes\n¿Qué certificados de Cambridge tengo que tener para presentarme al examen y obtener el C2 Proficiency?\nNo es un requisito imprescindible tener certificaciones como el B1 Preliminary (PET), B2 First o C1 Advanced, pero es aconsejable saber antes de presentarte al examen para obtener la certificación C2 Proficiency que dominas el idioma inglés a nivel C2. Asimismo, para preparar el examen y conocer su formato conviene asistir a algún curso de preparación y, si además tienes experiencia por tener otro certificado de Cambridge en su formato, tiempo etc, siempre será más fácil para ti el examen del C2 y así asegurarte un aprobado sin nervios.\n¿Si suspendo el Certificado C2 Proficiency podría conseguir el C1 Advanced?\nSi suspendes de Certificado de Cambridge C2 Proficiency lo que sí obtendrás es un certificado oficial de Cambridge donde se acredita que tu nivel corresponde al C1 Advanced siempre y cuando obtengas una puntación mínima de 180 puntos en la Cambridge English Scale.\nTengo el certificado C1 Advanced. ¿Qué tengo que hacer para obtener el C2 Proficiency?\nLa ventaja que tienes es conocer los exámenes, su formato, sus tiempos, por lo que ya llevas un paso ganado.\nComo hiciste para prepararte el Certificado C1 Advanced lo recomendable es asistir a clases de inglés para obtener el nivel C2 y poder presentarte al examen C2 Proficiency con total confianza en ti mismo.\nCon certificado C2 Proficiency, obtendrás la titulación de Cambridge Assessment English correspondiente al nivel más alto que puedes alcanzar y demostrarás al mundo que dominas el inglés de manera excepcional.\nNo hay ningún plazo estipulado para ninguno de los exámenes de ninguna de todas las certificaciones de Cambridge.\nCada uno/a puede presentarse al examen cuando lo estime oportuno y mejor si te lo recomiendan tus profesores. Hay convocatorias a los distintos niveles a lo largo del año, no dudes en preguntarnos o comprobar en nuestra web las fechas que tenemos previstas.\nRecuerda que hasta el 30 de octubre tenemos abierto el plazo de matriculación para hacer los siguientes exámenes de Cambridge. Todos son para el mes de diciembre: B1 Preliminary (PET), B2 First, C1 Advanced y C2 Proficiency.\n¡Obtén tu certificado Cambridge antes de acabar el año!


Comunicaciones Congreso Internacional de Museos Universitarios\nInicio / Eventos / Congreso Internacional de Museos Universitarios /\nSe aceptarán resúmenes para ser presentados como comunicación oral o póster. El comité científico seleccionará las exposiciones orales entre las propuestas. Las conferencias serán accesibles vía streaming.\nLos póster tendrán unas dimensiones máximas de 85 cm de ancho x 120 cm de alto.\nNormas de publicación de las comunicaciones orales y posters\nFecha límite de presentación de resumenes\n30/10/2014 Aceptación de propuestas\n09/01/2015 Fecha límite para el envío de las comunicaciones para su publicación\nHugues Dreyssé. Diversidad y riqueza de los museos y colecciones universitarias: intereses renovados\nHugues Dreyssé es doctor en físicas por la Universidad de Estrasburgo. De 1981 a 1988 fue profesor titular en la Universidad de Mulhouse. De 1988 a 1993 fue profesor en la Universidad de Nancy y desde 1993 es catedrático en la Universidad de Estrasburgo, donde actualmente ocupa también el cargo de Vice-Presidente de Recursos Humanos. Sus líneas de investigación han sido la física teórica del estado sólido y las nanociencias. Además de esta actividad se encuentra muy comprometido con la difusión de la ciencia desde hace más de 20 años. En la actualidad es el director del Jardín de las Ciencias que se encarga de los museos y de los programas de acercamiento de la ciencia al público en la Universidad de Estrasburgo. Desde 2010 es el presidente de UMAC (Comité Internacional para las Colecciones y Museos Universitarios). Entre los premios recibidos destaca el Grand Prix Emile Blute - Paul Doisteau de l’Information Scientifique, otorgado por la Academia Francesa de las Ciencias en 2002.\nMarta Lourenço. Museos y colecciones universitarias como infraestructuras estratégicas de investigación en ciencias y humanidades\nMarta C. Lourenço es licenciada en Físicas por la Universidad de Lisboa, posee un Máster en Museología por dicha universidad y un doctorado en Museología e Historia de la Tecnología (CNAM, París). Desde 2006 ha desarrollado su labor investigadora en los museos de la Universidad de Lisboa y sus líneas de investigación, docencia y tareas de consultoría incluyen las colecciones universitarias, la historia de las colecciones y el patrimonio científico. Es investigadora principal de PRISC (Infraestructura portuguesa de investigación sobre colecciones científicas) incluida en la hoja de ruta nacional de infraestructuras estratégicas de investigación; miembro investigador de CIUHCT (Centro de investigación Interuniversitario para la Ciencia y la Tecnología) de la Universidad de Lisboa y del CDHT (Centre d’histoire des techniques et de l’environement) Conservatoire National des Arts et Métiers, Paris. Es la vicepresidenta de UNIVERSEUM, miembro del Grupo de Historia de la Física (European Physical Society) y de la Comisión de Instrumentos Científicos (International Union for the History and Philosophy of Science). Desde 2014 es Directora General de los Museos de la Universidad de Lisboa.\nGestión y difusión de los museos y colecciones universitarias\nModeradora: Mª Ángeles Querol Fernández (Universidad Complutense de Madrid)\nParticipantes: Ana Carro Rosell (Asociación Española de Museólogos), Alfredo Baratas Díaz (Universidad Complutense de Madrid), Sébastien Soubiran (Universidad de Estrasburgo)\nValor histórico, artístico y documental de los museos y colecciones universitarias\nModerador: José Javier Campos Bueno (Universidad Complutense de Madrid)\nParticipantes: Jesús Urrea Fernández (Universidad de Valladolid), María Fernanda Morón de Castro (Universidad de Sevilla), Nathalie Nyst (Universidad Libre de Bruselas)\nLos museos y colecciones universitarias como fuente de conocimiento e investigación\nModerador: Benjamín Calvo Pérez (Universidad Politécnica de Madrid)\nParticipantes: Manuel Romana García (Universidad Politécnica de Madrid), Marta C. Lourenço (Universidad de Lisboa), Antonio González Bueno (Universidad Complutense de Madrid)


El director que marcó a una generación | Alan Park... | Página12\nAlan Parker (1944-2020) fue un cineasta ecléctico y popular\nEl director que marcó a una generación\nEl cineasta británico murió ayer a los 76 años, "tras una larga enfermedad", informaron sus familiares. Fue el realizador de películas tremendamente exitosas como "Expreso de medianoche", "Fama", "The Wall" y la polémica "Evita".\nParker había debutado en el cine como guionista de "Melody" (1971).\nArgentina todavía no terminaba de despertarse de la pesadilla que significaron los siete años de dictadura militar y las elecciones que consagraron a Raúl Alfonsín como el padre de la renacida democracia eran una ventana por la que de golpe entraría el aire fresco. Una mañana de aquellas, Buenos Aires amaneció invadida por los afiches que anunciaban el estreno de la película The Wall. En ellos se veía un rostro retorcido, fantasmal, que se desfiguraba en un grito de dolor sobre el diagrama básico de una pared de ladrillos blanca. Visto desde el siglo XXI ese diseño puede parecer cándido, pero por entonces, cuando el país todavía se encontraba adormecido por el horror, se convirtió en una exhibición que representaba a otros miles de gritos contenidos entre otras paredes: las de los centros clandestinos de detención que buena parte de los argentinos aún desconocía y que otra parte prefería seguir negando.\nLa llegada de The Wall a los cines fue un acontecimiento que, igual que en todo el mundo, llamó la atención no solo sobre la ya famosa banda británica de rock progresivo Pink Floyd, en cuyo disco conceptual homónimo está basada la película, sino que puso en la boca de todos el nombre de su director, el también inglés Alan Parker. En especial en las de los jóvenes de aquella década, en la que ahí nomás tendría lugar una explosión integral de la cultura juvenil que llegaría a definir su propia época. El film de Parker fue un elemento vital en ese caldo de cultivo, el de una sociedad que se preparaba para reaprender qué cosa es la libertad.\nSin embargo no se puede decir que para entonces Parker –quien falleció ayer a los 76 tras padecer “una larga enfermedad”, según consigna el comunicado publicado por su familia— fuera un desconocido. Tres años antes se había estrenado en las salas locales su segundo largometraje, el impactante Expreso de medianoche (1979). Fue el 25 de diciembre de 1979 y es difícil imaginar una película menos navideña. Se trata de la historia real de Billy Hayes, un estadounidense que en 1970 se fue de viaje a Turquía y tuvo la pésima idea de querer llevarse como souvenir unas cuantas libras de hachís ocultas bajo la ropa. El film realiza un registro explícito y detallado del calvario físico, psicológico, emocional y jurídico que tuvo que soportar Hayes por tomar la decisión equivocada en el peor momento y en el peor lugar. Expreso de medianoche está basada en el libro del propio Hayes, con un guión escrito por un joven Oliver Stone y fue un espaldarazo para esa promesa fallida que fue el actor Brad Davis, que había contraído HIV el mismo año del estreno y que falleció en 1991, a los 41 años. En cambio Hayes sigue vivo. En 2007 volvió a Turquía, donde se disculpó públicamente por la imagen negativa y estereotipada con que la película basada en su libro retrata al pueblo turco.\nIgual que Stone, Parker había debutado en el cine como guionista de la deliciosa Melody (1971), una comedia dramática de iniciación dirigida por Waris Hussein que narra el apasionado e inocente romance entre Melody y Daniel, dos adolescentes que en la Inglaterra post Beatles le anuncian a sus familias que quieren casarse. Pero no cuando sean grandes, sino ahora, ya mismo. Ante las negativas paternas, que incluyen por supuesto algunos golpes, los chicos toman la decisión de escaparse juntos, dando lugar a una secuencia final verdaderamente icónica. A pesar de la ternura que desborda la historia, el guión incluye algunas escenas que retratan la violencia que los niños recibían en aquella época de forma cotidiana, no solo en sus hogares sino también en el marco de las instituciones educativas. Un imaginario al que Parker volvió a recurrir en The Wall.\nUno de los géneros que más abordó el cineasta británico a lo largo de su filmografía es el musical (ver nota aparte ), presente en cinco de sus 14 largometrajes. Entre ellos, además de la citada ópera rock compuesta por Pink Floyd, deben citarse Fama (1980), cuya popularidad hizo que su universo se desplegara en una serie televisiva que sumó seis temporadas, y Camino a la fama (The Commitments, 1991). Pero también Evita (1996), basada en el controvertido musical creado por Andrew Lloyd Weber y Tim Rice, que fue rodada en Argentina con la cantante Maddona encarnado a Eva Perón. Y por supuesto, su ópera prima Bugsy Malone (1976).\nComo en Melody, en esta última Parker vuelve a abordar un universo infantil, pero esta vez con una intención mucho más lúdica. Se trata de una historia de gangsters que contiene todos los elementos que definen la identidad del género, pero protagonizada por un brillante elenco de niños actores y armas que disparan bombas de crema. El casting incluye en un papel protagónico a Jodie Foster, quien con solo 13 años ya había interpretado más de 35 papeles en cine y televisión, incluyendo la prostituta adolescente de Taxi Driver (Martin Scorsese, 1976). Foster tenía una experiencia tan tremenda que el propio cineasta llegó a decir que si él se hubiera enfermado durante el rodaje, “la niña podría haberse hecho cargo de todo tranquilamente”. Se cuenta que Parker dirigió con mano firme a aquel reparto infantil, cuyo promedio de edad era de 12 años, y que en ocasiones algunos de los pequeños actores y actrices terminaban llorando, llevados al límite en busca de dar con el tono necesario de alguna escena. Bugsy Malone recibió una nominación a los Oscar por su banda de sonido, compuesta por Paul Williams, aunque en todas las canciones los protagonistas fueron doblados por cantantes adultos.\nLos ’70 habían terminado bien para Parker, recibiendo su primera nominación a un Oscar por su trabajo en Expreso de medianoche. Y los 80 siguieron por el mismo camino. Fama se convirtió en un éxito que marcó tendencia, dando lugar a los musicales ultra pop como Flashdance (Adrian Layne, 1983), Footloose (Herbert Ross, 1984) o Dirty Dancing (Emile Ardolino, 1987), que se volvieron parte habitual del paisaje cinematográfico de la década. En 1982, cuatro meses antes de que The Wall causara impacto en el Festival de Cannes, también se estrenó el drama Dónde hay cenizas, protagonizado por Diane Keaton y Albert Finney.\nDos años más tarde llegó Birdy: Alas de libertad, historia de la amistad entre dos jóvenes que regresan de la Guerra de Vietnam, pero uno de ellos comienza a perder la razón, tomado por la obsesión de querer convertirse en pájaro. Protagonizada por Matthew Modine (a quien los más jóvenes reconocerán por su oscuro papel en las dos primeras temporadas de Stranger Things) y Nicolas Cage, Alas de libertad también comparte elementos con el universo de The Wall, como el alegato anti bélico, el abordaje de la alienación y la violenta representación de los servicios de salud mental. Detalles que por entonces le permitieron a los espectadores tender puentes familiares entre ambas películas.\nEn 1987 se estrenó Corazón satánico, título local que invierte el sentido del original, Angel Heart. Se trataba de un thriller policial con elementos sobrenaturales en el que el detective privado Harry Angel, protagonizado por Mickey Rourke en su época dorada, es contratado por el misterioso Louis Cyphere (Robert De Niro), para investigar la desaparición de un cantante. Parker ha dicho que la interpretación de De Niro (que el actor supuestamente basó en su amigo Scorsese) era tan diabólicamente realista que él prefería no estar presente en el set durante sus escenas, dejando que el actor se dirigiera a sí mismo.\nLa consagración definitiva llegó con el estreno de la descarnada Mississippi en llamas (Mississipi Burning, 1988), drama policial basado en hechos reales que aborda el racismo en el sur de los Estados Unidos en la década del ‘50. La película fue nominada a siete premios Oscar, incluyendo el de Mejor Director, Mejor Actor (Gene Hackman), Mejor Actriz de Reparto (Frances McDormand), ganando solamente el de Mejor Fotografía, que se llevó Peter Biziou, con quien Parker había trabajado en sus primeros cortometrajes (Footsteps y Our Cissy, ambos de 1974), en Bugsy Malone, The Wall y con quien volvería a trabajar en Cuerpos perfectos (The Road to Wellville, 1994).\nMississippi en llamas está basada en el asesinato de los activistas por los derechos de la comunidad negra a manos del Ku Klux Klan y la posterior investigación que realizaron los agentes del FBI. La película realiza un retrato crudo de la sociedad estadounidense, sin evitar dramáticas escenas explícitas que Parker manejaba con maestría. Un solo ejemplo alcanza para dimensionar la brutalidad del film. Tras ver el breve montaje con el que presentaron su trabajo en la película durante la gala de entrega de los Oscars, la mayoría de ellas cargadas de escenas violentas, Hackman decidió que ya no quería participar de películas donde la violencia tuviera un rol destacado. Así rechazó ser parte de El silencio de los inocentes (Jonnathan Demme, 1991) y casi le costó el papel de Sheriff en Los imperdonables (1992), que aceptó a regañadientes tras ser convencido por Clint Eastwood y que le valió su segundo Oscar.\nEn los ‘90 su trabajo se hizo más espaciado, sobre todo en la segunda mitad del período. En Come See the Paradise (1990) Parker vuelve, a partir de un guion propio, sobre una de sus obsesiones: la guerra. Enseguida llegaría el éxito de Camino a la fama y la mencionada Cuerpos perfectos, donde aborda en tono de comedia la figura del doctor John Harvey Kellog, creador de los famosos copos de maíz, interpretado por Anthony Hopkins. La década cerraría con el drama Las cenizas de Angela (1999). Desde entonces Parker solo volvería a filmar en 2003 otro drama basado en hechos reales, La vida de David Gale, donde Kevin Spacey interpreta a un condenado a muerte. Su muerte priva al cine de un artista que supo cuándo debía ser elegante, apasionado, tierno o visceral, y difícilmente se equivocó. No es poca cosa.\nNicolás Kreplak: "Con estos valores, otros países del mundo se colapsaron"El funcionario provincial advirtió sobre el riesgo de fomentar más aperturas\nTrabajadores de Vicentín reclamaron por el pago de sus sueldosProtestaron frente a la casa de Padoan\nUna ballena murió varada en una playa de Santa Clara del MarTenía 15 metros de largo y era de la familia de los cachalotes