Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology | Protocol (Translated to Spanish)\nMétodo simple y rápido para obtener alta calidad Tumor ADN de especímenes clínicos patológicos mediante citología de impresión táctil\nExtracción de ADN a partir de material incluidoen parafina para análisis genéticos y epigenéticos…\nEl empleo de la gotita de PCR digital para detectar mutaciones BRAF V600E en embebidos en parafina líneas celulares de referencia estándar fijos-formalina…\nLa metilación del ADN: Bisulfito de modificación análisis…\nIntegración de Procesos húmedo y en seco de banco timiza Targeted secuenciación de próxima generación de baja calidad y biopsias de tumores de baja cantidad…\nObtención de ADN genómico de la alta calidad de los tejidos del tumor es un primer paso esencial para el análisis de alteraciones genéticas mediante la siguiente secuencia de generación. En este artículo presentamos un método simple y rápido para enriquecer las células tumorales y obtener ADN intacto del toque de muestras de citología de impresión.\nEs fundamental para determinar el estado mutacional en cáncer antes de la administración y tratamiento de drogas específicas moleculares específicas para pacientes con cáncer. En el ajuste clínico, tejidos de (FFPE) parafina-encajado formalina-fijos son ampliamente utilizados para las pruebas genéticas. Sin embargo, FFPE ADN generalmente dañado y fragmentado durante el proceso de fijación con formalina. Por lo tanto, FFPE ADN a veces no es adecuado para las pruebas genéticas debido a baja calidad y cantidad de ADN. Aquí presentamos un método de la citología de impresión táctil (TIC) para obtener ADN genómico de las células cancerosas, que puede ser observado bajo el microscopio. Número de células de cáncer y morfología celular puede ser evaluado utilizando a muestras TIC. Además, la extracción de DNA genómico de muestras TIC se puede terminar dentro de dos días. La cantidad total y calidad de ADN TIC obtenidos mediante este método fue mayor que el de ADN FFPE. Este método rápido y simple permite a los investigadores para obtener ADN de calidad para pruebas genéticas (p. ej., análisis de secuenciación de próxima generación, digital PCR y PCR cuantitativo en tiempo real) y para acortar el tiempo de respuesta para informar los resultados.\nÚltima generación tecnología de secuenciación ha proporcionado los investigadores avances significativos en el análisis de información del genoma en las variaciones genéticas, enfermedad mendeliana, predisposición hereditaria y cáncer 1,2,3 . El Atlas de genoma del cáncer (TCGA) y el Consorcio Internacional del genoma del cáncer (ICGC) han seguido la identificación de alteraciones genéticas en algunos tipos de cánceres comunes4. Cientos de genes de la conductor de cáncer esenciales han sido correctamente identificados y algunas de estas moléculas se apunta para drogas desarrollo1,5,6.\nEn el ajuste clínico, muestras FFPE comúnmente se utilizan para diagnosis patológica y moleculares para varias enfermedades, incluyendo cáncer. Sin embargo, durante el proceso de fijación con formalina, ADN-proteína o DNA-DNA Cross-linking ocurre y se induce la fragmentación del ADN. Así, muestras de ADN de FFPE no son siempre adecuadas para análisis genético debido a baja calidad y cantidad de ADN7,8,9. Además, tarda varios días para preparar a las muestras FFPE y habilidad técnica es necesario preparar correctamente las secciones. Por lo tanto, es conveniente desarrollar un método simple y rápido para obtener ADN intacto de alta calidad.\nLa citología es un método alternativo para el diagnóstico patológico. Preparación de la muestra citológica es un más simple, menos costoso y más rápido acercamiento comparado con FFPE preparación10. La técnica TIC se ha realizado sobre los nodos de linfa del centinela y los tejidos marginales de pacientes de cáncer de mama para el diagnóstico rápido intraoperatorio para algunos años11,12. Sin embargo, hay algunos informes que han examinado si el ADN genómico de alta calidad puede extraerse muestras TIC y utilizado para el posterior análisis genético. Las muestras citológicas son comúnmente teñidas con Papanicolaou (Pap) o tinción de Giemsa, y divulgado previamente que la cantidad y calidad del ADN extraído de muestras TIC (especialmente Giemsa-manchada las muestras) son superiores a las muestras obtenidas de FFPE los tejidos13. En comparación con la tinción de Papanicolau, tinción de Giemsa tiene una ventaja que requieren menos procedimientos de tinción. En la tinción de Pap, después las muestras se han fijado y teñido, debe ser montados con montaje medio (e.g., Malinol) para distinguir el contenido de la muestra, tales como las células tumorales, las células normales y células inflamatorias bajo un microscopio. Si la muestra de Pap está preparada sin el paso de montaje, es casi imposible observar las células bajo un microscopio porque la muestra se seca. En comparación, la coloración de Giemsa se observan en el estado seco, por lo tanto, el paso de montaje no es necesario para la rápida evaluación celular. Para microdisección, tinción de Giemsa es más conveniente porque requiere a especímenes secos.\nEn este informe, introducir un método simple y rápido para la preparación de especímenes TIC con la tinción de Giemsa y demuestran que el TIC es una mejor fuente de ADN en comparación con especímenes FFPE.\n1. TIC preparación para evaluación microscópica rápida utilizando vidrio Normal se desliza\nRealizar la preparación de TIC tan pronto como sea posible después de tejido patológico clínico materiales están disponibles. Si muestras TIC no pueden estar preparadas inmediatamente, conserve los materiales de tejido cubiertos con solución salina humedecida gasa estéril y guarde en el refrigerador para prevenir la resequedad de los tejidos.\nPreparar 5 mm3 tejido material como tumores sólidos (p. ej., hígado, pulmón y los tejidos de la mama) clínico obtenido por cirugía o endoscopia.\nSuavemente Limpie el tejido con gasa estéril con suero fisiológico y retirar la sangre, si la superficie del tejido tiene mucha sangre.\nPara muestras microscópicas tales como material de la biopsia, mantenga la muestra humedecida con gasa estéril empapada en suero fisiológico.\nCorte y recorte el tejido normal con un cuchillo de cortar y exponer la superficie de la lesión tumoral, si las masas de tumor no están visibles totalmente.\nToque la superficie del tumor de los especímenes resecados en un portaobjetos de vidrio normal varias veces con las manos enguantadas. Confirmar visualmente que el área tocado está sobre el 80% de lo portaobjetos de vidrio normal.\nSuavemente presione el portaobjetos de cristal normal contra una lámina de membrana de polietileno Polinaftalato de etileno (PEN) y frote suavemente 2 - 3 veces con las manos enguantadas. Confirmar visualmente que las células se transfieren desde el portaobjetos de cristal normal a la diapositiva de la membrana de la pluma.\nSeque el cristal y pluma membrana portaobjetos durante 5 minutos a temperatura ambiente.\nMancha de la corredera de vidrio normal para examen citológico directo. Sumergir el portaobjetos con la solución fijadora para 5 s y luego tinción con Giemsa, coloración de la solución por 15 s.\nEvaluar y la pantalla el contenido del tumor y celularidad en el portaobjetos de vidrio normal con un microscopio para la evaluación rápida. Evaluar las células del tumor basadas en varios criterios; agrandamiento nuclear, cariotipo anormal, abundante cromatina, distribución desigual de las células, ratio de componente nuclear citoplasmática componentes, tamaño y polaridad celular.\n2. preparación de la película de diapositiva la membrana pluma para pruebas genéticas\nSi la celularidad tumoral se muestra más del 60% por la evaluación microscópica rápida (paso 1.8), cortar la película tumor-tocado de pluma membrana diapositivas de extracción de ADN con un cuchillo y con guantes las manos. Transferencia de la película cortada a un tubo de microcentrífuga estéril con un pincette y manos enguantadas.\nSi la celularidad del tumor se determinó como baja (menos del 60% de los contenidos de tumor) por evaluación microscópica rápida (paso 1.8), laser del uso del microdissection de la captura y obtención de muestras de tumor.\nLlevar a cabo para evaluar las células del tumor mediante protocolos de tinción de Giemsa.\nCorte la película de la diapositiva de membrana PEM por microdisección de captura láser apropiado.\nTransferencia de la película cortada a un tubo de microcentrífuga estéril con un pincette y manos enguantadas.\nGuarde el tubo de microcentrífuga de película que contiene a 4 ° C hasta la extracción de ADN (Protocolo puede hacer una pausa aquí).\nRealizar la extracción de ADN de las muestras de tejido TIC o FFPE usando un kit de extracción de ADN de FFPE según las instrucciones del fabricante con modificaciones menores. Un kit equivalente está disponible para el paso de extracción de ADN de FFPE.\nAñadir 180 μl de tampón de lisis del tejido (pH = 8,3) en el tubo de microcentrífuga que contiene la película con una pipeta de 200 μL manual. Añadir 20 μl de proteinasa K con una pipeta de 20 μl manual y mezclar con un vórtex con un mezclador de tipo vórtex a máxima velocidad (aproximadamente 2.500 rpm) durante 5 s.\nIncubar las muestras a 56 ° C durante la noche con una incubadora de aire.\nIncubar las muestras FFPE y TIC a 90 ° C en un bloque de calor para 1 h y 10 min, respectivamente. Girar brevemente por el tubo de microcentrífuga a 1.500 x g durante 5 s a temperatura ambiente con una mini centrífuga.\nAñadir 200 μL de tampón de lisis a la muestra con una pipeta de 200 μl y mezclar completamente por Vortex a máxima velocidad durante 5 s.\nAñada 200 μL de etanol (96-100%) con una pipeta de 200 μl y mezcle bien por Vortex a máxima velocidad durante 5 s. brevemente girar hacia abajo el tubo de microcentrífuga a 1.500 x g durante 5 s a temperatura ambiente con una mini centrífuga.\nCuidadosamente transfiera todo el lisado a la columna de vuelta con una pipeta de 1.000 μl y centrifugar a 6.000 x g durante 1 min a 25 ° C.\nColocar la columna de spin en un tubo de recogida limpio de 2 mL con las manos enguantadas y deseche el tubo de la colección que contiene el flujo a través en una caja de plástico de desecho.\nAñadir 500 μl de tampón de lavado a la columna de vuelta con una pipeta de 1.000 μl y centrifugar a 6.000 x g durante 1 min a 25 ° C.\nDeseche el tubo de la colección que contiene el flujo a través en una caja de plástico de desecho. Colocar la columna de spin en un tubo de microcentrífuga limpio de 1,5 mL con las manos enguantadas y centrifugar a 20.000 x g durante 3 min a 25 ° C para secar la membrana.\nColocar la columna de spin en un tubo de unión de ADN bajo con las manos enguantadas.\nAñadir 40-50 μl de tampón de elución al centro de la membrana con una pipeta 100 μl.\nIncubar a temperatura ambiente durante 5 minutos y centrifugar a 20.000 x g durante 1 min a 25 ° C.\nAlmacenar las muestras de ADN a-20 ° C hasta el siguiente paso (el protocolo puede ser una pausa aquí).\n4. estimación de la calidad del ADN por PCR cuantitativa en tiempo Real\nPreparar la mezcla principal en un tubo de microcentrífuga estéril con una pipeta, como sigue: 10 μl de 2 x en tiempo real PCR Master Mix, 1 μl de 20 x Rnasa P Primer sonda Mix (tamaño de amplicón: 87 bp) y 8 μl de agua estéril libre de nucleasas.\nPreparar la mezcla principal segundo en un tubo de microcentrífuga estéril como sigue: 10 μl de 2 x en tiempo real PCR Master Mix, 1 μl de 20 x Rnasa P Primer sonda Mix (tamaño de amplicón: 268 bp) y 8 μl de agua estéril libre de nucleasas.\nRealizar diluciones seriadas de ADN genómico humano control (suministrado en el kit) 4 veces para una curva estándar de cinco puntos y determinar la absoluta de concentraciones de ADN13.\nAñadir 19 μl de la mezcla principal preparada dos (preparado en el paso 4.1 y 4.2) en pocillos distintos de una placa de reacción de 96 pocillos óptico con una pipeta de 20 μl.\nAñadir 1 μl de ADN FFPE o TIC DNA para separar pozos que contiene la mezcla de reacción con una pipeta de 2 μl. Añadir 1 μl de agua libre de nucleasas en un pozo independiente que contiene la mezcla de reacción para el no control de la plantilla.\nMantenga el lado no adhesivo de una película óptica y retire la protección de copia de seguridad del centro de la película. Suavemente arrastra el aplicador sobre la película y la película del sello sobre la placa de 96 pocillos.\nMezcle suavemente la placa de 96 pozos utilizando un mezclador de placa de 96 pocillos para 10 s a temperatura ambiente a 2.000 rpm. Centrifugar la placa brevemente a 1.000 x g durante 3 min a temperatura ambiente.\nEnergía en el instrumento PCR en tiempo real e Inserte la placa de 96 pocillos. Ejecutar las reacciones de PCR utilizando el siguiente protocolo: 95 ° C por 20 s, seguido por 45 ciclos de 95 ° C para 1 s y 60 ° C durante 20 s. curva de uso"estándar" y "modo rápido".\nEvaluar la fragmentación del ADN con la proporción de ADN (cuantificación relativa; RQ) obtenidos para el amplicon largo (268 bp) para el amplicon corta (87 bp). RQ es el valor medio del valor medio largo el amplicón del amplicón corta13.\n5. preparación de la biblioteca de secuenciación de próxima generación\nPreparar la biblioteca de la secuencia para la siguiente secuencia de generación según las instrucciones del fabricante.\nPreparar la mezcla principal de multiplex PCR en un tubo de microcentrífuga estéril por cada muestra como sigue: 4 μL de 5 x solución de reacción de Multiplex PCR, 4 μL de 5 x piscina primer ≤6 μl TIC o FFPE DNA (1-100 ng) y añadir agua libre de nucleasas hasta 20 μl.\nAgregar la mezcla principal de PCR multiplex a un tubo de PCR y mezcla suavemente golpeando ligeramente el tubo.\nGirar brevemente por el tubo de microcentrífuga a 1.500 x g durante 5 s a temperatura ambiente con una mini centrífuga.\nEjecutar las reacciones de PCR utilizando el siguiente protocolo: 99 ° C por 2 min, seguido de 20 ciclos de 99 ° C por 15 s y 60 ° C durante 4 min y celebración paso 10 ° C. Girar brevemente por el tubo PCR con una mini centrífuga a 1.500 x g durante 5 s a temperatura ambiente.\nNota: Determinar el número de ciclos basados en el número de pares de cartilla.\nAbra la tapa del tubo PCR y añadir 2 μl de la enzima de restricción con una pipeta de 2 μl. Cierre la tapa del tubo de PCR y mezcla suavemente golpeando ligeramente el tubo PCR. Girar brevemente por el tubo PCR con una mini centrífuga a 1.500 x g durante 5 s a temperatura ambiente.\nEjecutar las reacciones de PCR utilizando el siguiente protocolo: 50 ° C durante 10 min, 55 ° C durante 10 min, 60 ° C por 20 min, y celebración paso 10 ° C. Girar brevemente por el tubo PCR con una mini centrífuga a 1.500 x g durante 5 s a temperatura ambiente.\nAñadir a la mezcla principal de ligadura del adaptador en el cada uno bien con los amplicones PCR digerido con una pipeta como sigue: 4 μL de solución de ligadura adaptador, 0.5 μl de código de barras, 0.5 μl de adaptador, 2 μl de agua libre de nucleasas y 2 μl de ADN ligasa. Cierre la tapa del tubo de PCR y mezcla suavemente golpeando. Girar brevemente por el tubo PCR con una mini centrífuga a 1.500 x g durante 5 s a temperatura ambiente.\nEjecutar las reacciones de PCR utilizando el siguiente protocolo: 22 ° C por 30 min, 68 ° C por 5 min, 72 ° C por 5 min, y celebración paso 10 ° C.\nPurificar la biblioteca de secuencia con granos magnéticos según las instrucciones del fabricante.\nTransferir la solución de biblioteca de ligarse por el adaptador en el tubo de 1,5 mL ADN vinculante bajo. Añadir 45 μl de bolas magnéticas en el tubo de baja obligatoria de ADN para la purificación delst 1. Mezcle suavemente golpeando ligeramente el tubo e incubar 5 min a temperatura ambiente.\nColoque el tubo de enlace ADN-low en un magnético para luego incubar durante 2 min a temperatura ambiente hasta que la solución es clara. Descartar cuidadosamente el sobrenadante con una pipeta de 200 μL sin perturbar las bolas magnéticas.\nAñadir 150 μL de etanol al 70% recién preparada con una pipeta de 200 μl y mover el tubo de lado a lado del imán para lavar los granos. Descartar cuidadosamente el sobrenadante sin molestar las bolas magnéticas.\nRepita el paso 5.11 para un segundo lavado.\nGirar brevemente por el tubo con mini centrifugar a 1.500 x g durante 5 s a temperatura ambiente. Coloque el tubo de baja unión DNA en un soporte magnético y deseche cuidadosamente las gotas de etanol con una pipeta de 10 μl.\nAñada 50 μl de TE baja en el tubo de unión baja de ADN que contiene el sedimento de bolas magnéticas para dispersar a los granos. Incubar durante 2 min a temperatura ambiente.\nColoque el tubo de baja unión de ADN en una rejilla magnética e incubar a temperatura ambiente durante 2 minutos hasta que la solución es clara.\nTransferir 50 μl del sobrenadante en el tubo de baja obligatoria de ADN nuevo y añadir 75 μl de bolas magnéticas con una pipeta 100 μL para la purificación de 2nd . Mezcle suavemente golpeando ligeramente el tubo e incubar 5 min a temperatura ambiente.\nColoque el tubo de baja unión de ADN en un magnético para luego incubar durante 2 min a temperatura ambiente hasta que la solución es clara. Descartar cuidadosamente el sobrenadante con una pipeta de 200 μL sin perturbar las bolas magnéticas.\nRepita el paso 5.18 para un segundo lavado.\nGirar brevemente por el tubo con una mini centrífuga a 1.500 x g durante 5 s a temperatura ambiente. Coloque el tubo de baja unión DNA en un soporte magnético y deseche cuidadosamente las gotas de etanol con una pipeta de 10 μl.\nAñadir 50 μl de TE baja en el tubo de unión baja de ADN que contiene el sedimento de bolas magnéticas para dispersar a los granos. Incubar durante 2 min a temperatura ambiente.\nTransferir el 45 μl del sobrenadante que contiene la biblioteca purificada en el tubo de baja obligatoria de ADN nuevo con una pipeta 100 μl.\n6. cuantificar la concentración de la biblioteca mediante PCR cuantitativa en tiempo Real\nDeterminar la concentración de cada biblioteca según las instrucciones13 el fabricante.\nPreparar una solución de 20-fold de la dilución como sigue: se mezclan 2 μl de biblioteca purificada y 38 μl de agua libre de nucleasas en un tubo de unión baja de ADN con una pipeta de 2 μl y 100 μl.\nAlmacenar las bibliotecas sin diluir a-20 ° C hasta el paso 7.3.\nPreparar una solución de 200-fold de la dilución como sigue: mezclar 5 μl de la 20-fold biblioteca de purificada diluida (preparada en el paso 6.1) y 45 μl de agua libre de nucleasas en un tubo de unión baja de ADN.\nPreparar una solución de 2,000-fold de la dilución como sigue: mezclar 5 μl de la 200-fold biblioteca de purificada diluida (preparada en el paso 6.2) y 45 μl de agua libre de nucleasas en un tubo de unión baja de ADN.\nPreparar la mezcla de reacción principal como sigue: mezclar 10 μl de 2 x solución de mezcla principal y 1 μl de 20 x solución de ensayo primer sonda en tubo de microcentrífuga estéril con una pipeta, luego mezclar golpeando suavemente el tubo. Añadir 11 μl de la mezcla principal de reacción en los pocillos de reacción de 96 pocillos óptico.\nAñadir 9 μl de la 2,000-fold biblioteca diluida, 9 μl de cada control estándar o 9 μl de agua libre de nucleasas en cada pocillo con una pipeta de 10 μl.\nMantenga el lado no adhesivo de película óptica y retire la protección de copia de seguridad del centro de la película.\nSuavemente arrastra el aplicador sobre la película y la película del sello sobre la placa de 96 pocillos.\nMezcle suavemente la placa de 96 pozos utilizando un mezclador de placa de 96 pocillos para 10 s a temperatura ambiente.\nCentrifugar la placa brevemente a 1.000 x g durante 3 min a temperatura ambiente.\nEnergía en el instrumento PCR en tiempo real e Inserte la placa de 96 pocillos. Ejecutar las reacciones de PCR utilizando el siguiente protocolo: 50 ° C por 2 min, 95 ° C por 20 s, seguido por 40 ciclos de 95 ° C para 1 s y 60 ° C durante 20 s. curva de uso"estándar" y "modo rápido".\nCalcular la concentración de no diluido biblioteca multiplicando la concentración determinada con qPCR por 2.000.\n7. la siguiente secuencia de generación\nPlan de la condición de funcionamiento y establezca el parámetro de funcionamiento dentro del software.\nHaga clic en [Plan tab] y [plantilla] y seleccione el método de ejecución adecuado.\nSeleccione la aplicación y el tipo de técnica y haga clic en [siguiente].\nSeleccionar el instrumento, kit de preparación de muestras (opcional), tipo de biblioteca kit, kit plantilla, kit de secuenciación base modo de calibración, tipo de chip, control de secuencia (opcional), y el código de barras y haga clic en [siguiente].\nSeleccione complementos y haga clic en [siguiente].\nSeleccione el proyecto y haga clic en [siguiente].\nSeleccione referencia predeterminada y los archivos de la cama de la región específica.\nEscriba el nombre de muestra, seleccione el código de barras y haga clic en [ejecutar Plan].\nPreparación de plantilla y carga en un instrumento automatizado según las instrucciones del fabricante de la viruta. Descongelar el cartucho de reactivo a temperatura ambiente durante 45 minutos antes de su uso.\nDiluir la biblioteca sin diluir con agua libre de nucleasa según la concentración de biblioteca calculado en el paso 6.8 y hacer 20 bibliotecas de pM.\nPreparar una biblioteca combinada para secuenciación y almacén en el hielo.\nAñada 25 μl de la biblioteca combinada con pipeta 100 μL en la parte inferior del tubo de muestra. Utilizar la biblioteca agrupada dentro de 48 h.\nEncendido y abra la tapa del instrumento automatizado.\nColocar chip de secuenciación, adaptador de la viruta, cartucho de enriquecimiento, cartucho de punta, placa de PCR, PCR marco sello, tubo de recuperación, solución del cartucho y cartucho de reactivo a la posición apropiada del instrumento automatizado.\nToque [Set carrera] y [paso a paso] en la pantalla.\nCierre la tapa y presione [Start check] en la pantalla.\nDespués de la plataforma de análisis proceso, toque [siguiente] en la pantalla.\nCompruebe el contenido de la pantalla (tipo kit, chip, chip planes de identificación, identificación de la muestra,), ajustar la hora y toque [OK] en la pantalla.\nDespués de terminar la carga de viruta:\nToque [siguiente] en la pantalla y abra la tapa.\nDescargado el chip de la secuencia del adaptador de la viruta con las manos enguantadas.\nColoque el chip en el contenedor de virutas, rap con parafilm y almacenar a 4 ° C hasta que la reacción de secuenciación.\nQuitar el cartucho de enriquecimiento, placa de PCR, sello marco PCR, tubo de recuperación, solución del cartucho y cartucho de reactivo de la posición apropiada del instrumento automatizado con las manos enguantadas.\nTransferencia de un cartucho de punta de vacío a la posición de desechos de la punta del instrumento automatizado con las manos enguantadas.\nPresione [siguiente] y cierre la tapa.\nPresione [Inicio] y limpie el instrumento automatizado por los rayos ultravioletas durante 4 minutos.\nDisolver una tableta de clorito de sodio en 1.000 mL de agua ultrapura y solución de filtro con una unidad de filtro de flujo de filtro de 0,22 μm.\nEnergía en el instrumento de la secuencia.\nPresione [Clean] y [siguiente] en la pantalla del instrumento de la secuencia.\nLimpie el instrumento de la secuencia con 250 mL de solución de clorito de sodio filtro esterilizado y posteriormente 250 mL de agua ultrapura.\nToque [inicializar] y seleccione el kit de secuenciación apropiada en la pantalla.\nInstalar un cargador gris en el lugar apropiado con las manos enguantadas.\nInicializar el instrumento de la secuencia con la solución de lavado (proporcionado en el kit), la solución de ajuste de pH (contiene 350 μl de hidróxido de sodio 100 mM) y la solución estándar de pH (incluido en el kit).\nAñadir 20 μl de nucleótidos dATP, dGTP, dCTP y dTTP (proporcionado en el kit) en tubos de 50 mL (incluidos en el kit) con una pipeta 100 μl.\nCargar el tubo de 50 mL y el tornillo en el instrumento de la secuencia.\nPresione [siguiente] en la pantalla para iniciar el paso de inicialización, que tarda aproximadamente 25 minutos.\nDespués de completar el paso de inicialización:\nToque [Run] en la pantalla y seleccionar el instrumento de preparación adecuada de la biblioteca.\nEscanear el código de barras bidimensional de la viruta.\nInserte el chip de la secuencia en la posición adecuada.\nCierre la puerta de la abrazadera y el instrumento de chip.\nToque [verificación de Chip], [siguiente] y [OK] en la pantalla para iniciar el funcionamiento de la secuencia.\nDespués de la reacción de secuenciación, transferencia de datos y realizar análisis de datos de la tubería en el servidor de la secuencia13,17.\nLa figura 1 muestra el proceso de preparación de muestras TIC para la extracción de ADN. En particular, el procedimiento toma sólo dos días para obtener ADN genómico de muestras TIC. Se evaluaron los efectos de almacenamiento de tumor antes de la elaboración de diapositivas. Encontramos que las células del tumor fueron atadas en el portaobjetos de cristal cuando muestras de tejido fueron inmediatamente tocadas en la diapositiva, y cuando los tejidos se mantuvieron en solución salina humedecida-gasa estéril durante 1 hora (figura 2). Sin embargo, cuando los tejidos se mantuvieron a temperatura ambiente, las células del tumor no fueron bien atadas a la diapositiva. Muestras preparadas podrían almacenarse a 4 ° C durante tres meses. Por lo tanto, es importante no dejar que las muestras a secar.\nExaminó la utilidad de nuestro método y comparar con ejemplares adquiridos utilizando FFPE. TIC y FFPE muestras se prepararon de 14 muestras de tumor, y nos confirmó que podrían evaluarse tumor contenido y pureza de los especímenes TIC. Después realizamos la coloración de Giemsa, el número de células del tumor y la morfología del tumor se podría evaluar por microscopía. Así fuimos capaces de evaluar regularmente las células del tumor y posteriormente realizar una verificación de calidad de ADN.\nLa calidad y cantidad de ADN fueron estimadas por tiempo real cuantitativo PCR13,14,15. Determinamos las cantidades de ADN absolutas y el valor RQ, que es un indicador del nivel de degradación de la DNA genomic. Los resultados mostraron que un mayor rendimiento de ADN fue alcanzado usando a las muestras TIC en comparación con los especímenes FFPE (tabla 1). Además, los valores RQ de la DNA de TIC fueron significativamente superiores con respecto a de la DNA de FFPE (figura 3, p = 2.3 x 10-8, pruebas de t de Student dos colas). También se evaluaron los valores RQ de la TIC y FFPE ADN extraído de los tipos de tumores diferentes y encontró que el ADN de TIC fue mayor en calidad en comparación con el ADN de FFPE (figura 3). Estos resultados indicaron que el ADN de TIC menos fragmentado que la DNA FFPE.\nA continuación se evaluó si el ADN de TIC podría utilizarse para el análisis de secuenciación de próxima generación. FFPE y TIC ADN fueron preparados del cáncer colorrectal primario y metastásico cáncer hepático Obtenido de un paciente (Figura 4A). Biblioteca preparación y amplificación por PCR se llevaron a cabo mediante el Panel de Hotspot de cáncer y se realizó secuenciación específica posteriormente. Como resultado, APC Q1367 * fue identificado en FFPE y TIC la DNA extraída del sitio 1 (tabla 2). Además, APC S1356 *, G12D KRAS y TP53 M237I fueron detectados en ambos FFPE y TIC ADN había extraído del sitio de 2, 3 y 4 (tabla 2). Estos resultados sugieren que las mutaciones somáticas idénticas fueron identificadas en las muestras pareadas de FFPE y TIC ADN preparadas desde el mismo sitio del tumor ( tabla 2yFigura 4B ). En particular, se detectaron las mismas mutaciones somáticas entre cáncer colorrectal primario (sitio 2, sitio no 1 de) y dos muestras de cáncer de hígado metastásico, lo que sugiere que los clones de tumor del sitio 2 metastatizan al hígado (Figura 4B y tabla 2). Juntos, estos resultados sugieren que el ADN de TIC es de alta calidad y es conveniente para una amplia gama de pruebas genéticas, incluyendo la secuencia de la generación siguiente.\nFigura 1 diagrama esquemático para la obtención de ADN de una preparación de la muestra TIC. El tejido del tumor se toca en el cristal de la diapositiva para preparar la muestra TIC. Después de la evaluación de la morfología del tumor y el contenido bajo un microscopio, el ADN del tumor puede extraerse y utilizado para las pruebas genéticas. Mediante el uso de TIC, el tumor ADN puede obtenerse una muestra patológica clínica dentro de dos días. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 2. Preparación de muestras TIC. Resected especímenes de tumor inmediatamente se tocó un portaobjetos de vidrio normal (panel izquierdo), en solución salina humedecida-gasa estéril durante 1 hora (media) y se mantuvieron a temperatura ambiente durante 1 h (derecha). Muestra #1 fue de carcinoma hepatocelular y muestra #2 fue el cáncer de mama. Imágenes microscópicas fueron capturadas usando una cámara digital montada en un microscopio. Barra de escala: 100 μm. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 3. Control de calidad de ADN estimado por análisis PCR cuantitativo en tiempo real. TIC y FFPE ADN fueron extraídos 14 tejidos del tumor de colon (n = 8), estómago (n = 4) y cáncer del hígado metastásico (n = 2). Comparación de los puntajes de cuantificación relativa entre muestras TIC-Giemsa y el FFPE-él. Valores RQ de TIC ADN fueron significativamente más altos que el de ADN FFPE. Se realizó análisis estadístico entre los dos grupos y p-valores se calcularon por la prueba de t no apareados dos colas de los estudiantes utilizando Excel. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 4. Siguiente generación secuenciación análisis datos utilizando TIC y ADN FFPE. Imágenes microscópicas y macroscópica (A). Imágenes representativas de TIC-Giemsa y tinción de muestras (sitio 3 y 4) del cáncer colorrectal (sitio 1 y 2) y carcinoma metastático de hígado FFPE-HE. Barra de escala en las imágenes macroscópicas: 1 cm, barra de escala en imágenes microscópicas: 100 μm. (B) mapa mostrando la distribución de las mutaciones somáticas de cada sitio del tumor (n = 8). Se detectaron mutaciones idénticas entre muestras apareadas de TIC y FFPE ADN. Valores de fracciones alélicas se indican en la escala de color de la graduación del 1% (rosa claro) 100% (rosa). Columnas grises no demostraron ninguna mutación identificada. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nMuestra Sitio del tumor Corto Largo RQ Corto Largo RQ\nSite1 Colón 1495 1247 0,83 939 349 0.37\nSite2 Colón 991 1057 1.07 556 204 0.37\nDescarga3 Hígado 467 511 1.09 130 39 0.3\nSite4 Hígado 2172 2115 0.97 488 127 0.26\nSite5 Colón 749 598 0,8 529 205 0.39\nSite6 Estómago 330 286 0.86 211 98 0,46\nSite7 Estómago 636 499 0,78 154 84 0.55\nSite8 Estómago 27 27 1.01 135 81 0.6\nSite9 Colón 1986 1611 0.81 476 163 0.34\nSite10 Colón 280 218 0,78 209 83 0.39\nSite11 Colón 1546 575 0.37 366 159 0.43\nSite12 Estómago 1501 1200 0,8 274 132 0.48\n13 Colón 55±6 1404 0,9 326 179 0.55\nSite14 Colón 1565 1210 0.77 680 295 0.43\nTabla 1. Datos de la calidad del ADN. TIC emparejados (n = 14) y FFPE especímenes (n = 14) fueron preparados del colon, el hígado y el cáncer de estómago. Muestras TIC fueron teñidas con Giemsa, y muestras FFPE fueron manchadas con hematoxylin y eosina (HE). Muestras de ADN fueron extraídas y cuantificó por PCR cuantitativa en tiempo real con dos pares de cartilla amplificación locus RNaseP (amplicon largo (268 bp) y amplicon corta (87 bp)). Se calcularon los valores RQ como sigue: el valor medio de amplicones largo dividido valor medio bythe de amplicones corto. SD, desviación estándar. RQ, cuantificación relativa\nNombre de la muestra Ubicación Preparación Símbolo del gene Mutación de Posición Referencia Variante Codificación de Cobertura Fracción alélica\nCáncer colorrectal primario Sitio 1 FFPE APC Q1367 * chr5:112175390 C T c.4099C > T 1999 45%\nCáncer colorrectal primario Sitio 1 TIC APC Q1367 * chr5:112175390 C T c.4099C > T 1011 72%\nCáncer colorrectal primario Sitio 2 FFPE APC S1356 * chr5:112175358 C A c.4067C > A de 1968 77%\nCáncer colorrectal primario Sitio 2 FFPE KRAS G12D chr12:25398284 C T c.35G > A 1993 52%\nCáncer colorrectal primario Sitio 2 FFPE TP53 M237I chr17:7577570 C A c.711G > T 1991 73%\nCáncer colorrectal primario Sitio 2 TIC APC S1356 * chr5:112175358 C A c.4067C > A de 1967 89%\nCáncer colorrectal primario Sitio 2 TIC KRAS G12D chr12:25398284 C T c.35G > A 1994 56%\nCáncer colorrectal primario Sitio 2 TIC TP53 M237I chr17:7577570 C A c.711G > T 1995 86%\nCáncer del hígado metastásico Sitio 3 FFPE APC S1356 * chr5:112175358 C A c.4067C > A 1974 92%\nCáncer del hígado metastásico Sitio 3 FFPE KRAS G12D chr12:25398284 C T c.35G > A 1995 62%\nCáncer del hígado metastásico Sitio 3 FFPE TP53 M237I chr17:7577570 C A c.711G > T 1296 91%\nCáncer del hígado metastásico Sitio 3 TIC APC S1356 * chr5:112175358 C A c.4067C > A de 1964 97%\nCáncer del hígado metastásico Sitio 3 TIC KRAS G12D chr12:25398284 C T c.35G > A 1993 64%\nCáncer del hígado metastásico Sitio 3 TIC TP53 M237I chr17:7577570 C A c.711G > T 1998 95%\nCáncer del hígado metastásico Sitio 4 FFPE APC S1356 * chr5:112175358 C A c.4067C > A de 1965 93%\nCáncer del hígado metastásico Sitio 4 FFPE KRAS G12D chr12:25398284 C T c.35G > A 1992 60%\nCáncer del hígado metastásico Sitio 4 FFPE TP53 M237I chr17:7577570 C A c.711G > T 1993 92%\nCáncer del hígado metastásico Sitio 4 TIC APC S1356 * chr5:112175358 C A c.4067C > A 1960 94%\nCáncer del hígado metastásico Sitio 4 TIC KRAS G12D chr12:25398284 C T c.35G > A 1992 62%\nCáncer del hígado metastásico Sitio 4 TIC TP53 M237I chr17:7577570 C A c.711G > T 1995 95%\nTabla 2. Comparación de mutaciones en pares FFPE y TIC ADN detectado por análisis de secuencias específicas. TIC emparejado y FFPE muestras se prepararon de los cánceres colorrectales primarios 2 (sitio 1 y 2) y 2 cáncer de hígado metastásico (sitio 3 y 4). Secuencia específica se realizó con estas muestras de ADN y las mutaciones somáticas se identificaron. Perfiles de mutación eran idénticos entre muestras apareadas de TIC y FFPE ADN.\nEn este estudio, se presenta un método alternativo para la obtención de tumor ADN de especímenes patológicos clínicos utilizando TIC. Preparación de TIC es muy simple y necesita menos tiempo en comparación con métodos FFPE, sin la necesidad de instrumentos especiales10. Todos los procedimientos de la preparación de TIC para la extracción de ADN se pueden terminar dentro de dos días (figura 1). Este método por lo tanto acorta el tiempo de respuesta para realizar pruebas genéticas. En particular, esto proporciona una ventaja significativa en reducir el número de días requeridos para el análisis molecular. Este tiempo corto nos permite ofrecer inmediatamente una terapia apropiada para pacientes con cáncer progresivo que requieren fármacos molecularmente dirigidos. Así, este método proporciona beneficios para el análisis de alteraciones genéticas en los tumores y la administración de fármacos molecularmente dirigidos para la terapia del cáncer.\nHay algunos puntos clave para el éxito del uso de TIC ADN para análisis genético. Los tejidos del tumor pueden ser necróticos por tratamientos como quimioterapia u otros tratamientos. Por lo tanto, precaución es necesario en la preparación de especímenes de la TIC para evitar muestras de secciones necróticas en el tumor tanto como sea posible. Además, la evaluación microscópica inicial es muy importante para los procedimientos posteriores. Además, prevenir la sequedad de los tejidos del tumor se requiere para la preparación de la muestra de éxito TIC. Si se secan los tejidos del tumor, esto resulta en menos células adjuntas en el portaobjetos de cristal. También será difícil observar la morfología y la celularidad del tumor porque el secado conduce a la degeneración de los tejidos del tumor.\nExisten algunos beneficios potenciales al uso de TIC ADN. En primer lugar, podemos comprobar la celularidad del tumor durante la primera evaluación con microscopia. Si las células normales, tales como linfocitos y células del estroma, fueron abundantes en las muestras de tejido, la contaminación de estas células normales impediría la capacidad de detectar las mutaciones somáticas en las células del tumor. Rápida evaluación microscópica de las muestras puede ayudar a la evaluación de la celularidad del tumor y la valoración de si las muestras de ADN tumoral adecuada fueron obtenidas de las muestras TIC antes de la extracción de ADN. En segundo lugar, nuestros resultados demostraron que el ADN de TIC es alta en calidad y cantidad. FFPE DNA se ha utilizado para la siguiente generación que ordenaba análisis incluyendo específico secuenciación, secuenciación del exoma y genoma secuencia16,17,18,19,20. Archivo de FFPE de ADN se utiliza habitualmente para análisis genético21,22, no obstante FFPE ADN puede ser fragmentado durante la fijación con formol. Esto puede provocar problemas en la amplificación por PCR o la extracción de ADN, provocando una falta de cobertura de secuencia, uniformidad en las regiones de destino y aumentar el riesgo de error de secuencia23,24. Por el contrario, ADN de TIC no está fragmentada, que puede ser debido a la fijación de alcohol que tiene menos influencia en el ácido nucleico. ADN de TIC no está fragmentada como la DNA FFPE, estas muestras será más convenientes para el análisis de secuenciación de próxima generación, PCR en tiempo real y PCR digital. De hecho, previamente demostramos que DNA TIC de un espécimen del tumor puede ser utilizado en el análisis de secuenciación de última generación, un método llamado "TIC-seq", y los resultados podrían capturar precisamente el tumor mutaciones somáticas13. En tercer lugar, esta técnica es aplicable para una amplia gama de materiales. En el presente informe, se utilizan a especímenes quirúrgicos. Además de los tejidos quirúrgicos, nodo de linfa metastático, biopsia bronquial o endoscópica se puede utilizar para la preparación de ADN de TIC.\nEn conclusión, presentamos un método simple y rápido para la preparación de ADN de alta calidad tumor utilizando TIC. Este método ampliará nuevas posibilidades en el campo del análisis genético y ayudar a promover la medicina de precisión en el ajuste clínico.\nAgradecemos a todo el personal médico y auxiliar del hospital y los pacientes para consentir a participar. Agradecemos a Gabrielle blanco lobo, PhD, de Edanz Group (www.edanzediting.com/ac) para la edición de un proyecto de este informe. Este estudio fue apoyado por una subvenciones para proyecto de investigación del genoma de la Prefectura de Yamanashi (Y.H. y M.O.) y una beca de la YASUDA médica Fundación (albergue).


En la frontera de Iztapalapa y Nezahualcóyotl | Narrativa y ensayo guatemaltecos\nDr. Otto René Hernández García\nDesde hace 51 días se prendió la alarma entre la frontera de Iztapalapa y Nezahualcóyotl, la zona de mayor contagio en México. Hago constar que la infección por Coronavirus ha sido devastadora en esta zona. Desde hace más de 10 días los contagiados graves aumentan, los amigos fallecidos son cada día más y se espera que la suma aumente. La misión como médico es sumamente difícil, no dejan de solicitar oxígeno los familiares y la angustia en las familias no se puede describir. Vecinos muy cercanos no comprenden la gravedad del COVID 19 y se niegan a trasladar a sus pacientes a los nosocomios. He visitado en sus hogares a pacientes con dificultad respiratoria y nunca en 40 años de práctica profesional y como anestesiólogo había visto semejante cuadro clínico. Invasivo, altamente contagioso y letal.\nComo toda mi vida he practicado la medicina al servicio de los más desposeídos, es un honor estar en estos momentos en esta zona, en el Wuhan mejicano. Espero sobrevivir para contar lo que estoy viviendo. Las familias al saber del fallecimiento de sus seres queridos caen de rodillas incrédulos al tener la noticia. Es sumamente doloroso ver un cuadro como estos, doloroso.\nHoy me preguntaba, asustado, un matrimonio, ¿quién había fallecido frente a mi consultorio?, habían escuchado a un jovencito que el Covid 19 había cargado con el vecino. Y me preguntaron, ¿el Covid, es cierto?, no tuve respuesta inmediata, se me humedecieron los ojos y disimulé un poco, hasta que les pedí cuidarse mucho. Esta pareja ha sufrido extraordinariamente, son sobrevivientes de la guerra del narcotráfico. Les tengo un respeto enorme. Al despedirlos les pedí resguardarse y que se cuidaran mucho.\nMi vecina falleció hoy en la madrugada, el barrio guarda un respetuoso silencio, las sonrisas de los adolescentes están ausentes, se escuchan lamentos lejanos y tristeza. Todo esto me recuerda la Navidad Roja en Jalapa, Nicaragua, en 1983.\nLa grandeza de México, su cultura y su solidaridad es tan grande que no se le puede dejar solo en estos momentos.\nDESDE IZTAPALAPA- NEZAHUALCÓYOTL SABREMOS RESPONDER SOLIDARIAMENTE A MÉXICO.\n11 de de mayo 2020\nAnterior¿Qué cambiará el mundo?, puros cuentos\nSiguienteLos salivazos del marqués Vargas Llosa y fascistas que lo acompañan\nLa resistencia de los cubanos. Marcela Gereda.


Masashi Kishimoto ha vuelto para manejar a Naruto y su mundo\nTras el anuncio sorpresa de los últimos días, finalmente nos encontramos ante el primer capítulo de Boruto: Naruto the Next Generations escrito íntegramente por Kishimoto. ¿Qué pensó por el joven ninja y los demás durante esta difícil batalla?\nComo es habitual, el capítulo 52 de Boruto se abre con una página a color que nos permite echar un vistazo muy detenido al nuevo Modo Barión de Naruto. El Hokage ha liberado un chakra excepcional, pero como explica el Zorro, la duración de esta forma es muy limitada, incluso el pensamiento o movimiento más pequeño debe evitarse. La batalla con Isshiki comienza y Naruto se revela superior de inmediato. Sus movimientos son simples, pero la velocidad de ejecución está en otro nivel.\nSasuke aprovecha la oportunidad para alejar a Boruto, incapaz de moverse. Mientras tanto, en Konoha, Amado, Kawaki y los demás siguen en el refugio y la discusión se centra en el brazo que el Hokage le dio al niño. Esto está conectado a Naruto gracias a su chakra, y Kawaki siente que de repente se está debilitando.\nMientras tanto, Naruto logra resistir varios ataques de Isshiki Otsutsuki , incluso aquellos que hasta hace poco habían puesto a Sasuke y su Sharingan en grandes dificultades. Pero en algún momento el Hokage tiene que rendirse ya que el poder se desvanece junto con su chakra. Pero como dice el Zorro, debes concentrarte solo en golpearlo de manera muy simple, ya que ahora es una competencia ver quién agota primero su fuerza vital.\nPero el efecto secreto del modo Barión de Naruto se vuelve claro cuando Isshiki comienza a escupir sangre. Con solo tocarlo, la nueva forma entra en vigor, agotando su vida útil que ha bajado de 20 horas a 30 minutos. A medida que avanza la pelea, esto aumenta a 10 minutos. Isshiki está acorralado, pero un golpe de suerte le permite localizar a Kawaki a través del chakra de Naruto, convocándolo al área. Sasuke y Naruto están alarmados, pero Boruto, que antes estaba inconsciente, de repente se despierta mostrando un Byakugan. Boruto regresará el próximo mes con el capítulo 53.\nItachi Uchiha es uno de los personajes más misteriosos de Naruto. A medida que pasó el tiempo, finalmente se reveló los oscuros secretos de su pasado


El Departamento de Justicia investiga vídeos de CIA destruidos\nReuters 09.12.2007 - 10:49h\nBAQUBA, Irak (Reuters) - Siete policías iraquíes murieron el miércoles y nueve personas resultaron heridas cuando un atacante suicida embistió con su coche contra una patrulla policial al norte de Bagdad, informaron fuentes.\n'El Departamento de Justicia y la CIA anunciaron hoy que la División de Seguridad Nacional del Departamento de Justicia inició una investigación preliminar junto con la Oficina del Inspector General de la CIA respecto a la destrucción de las cintas de interrogatorios', dijo en una declaración el portavoz del Departamento de Justicia Brian Roehrkasse.\nUna investigación preliminar está orientada a reunir información inicial para decidir si hay suficientes motivos para lanzar una investigación completa.\n'Recibo con beneplácito esta investigación y la CIA cooperará completamente con ella', dijo en una declaración el director de la CIA, Michael Hayden. 'La recibo como una oportunidad para responder preguntas que han surgido por la destrucción en 2005 de las cintas de vídeo'.\nLa investigación se da a conocer sólo días después de que Hayden reconociese que la CIA hizo y destruyó cintas de vídeo donde se documentaban interrogatorios a sospechosos de terrorismo en unos procedimientos que usaban técnicas que los críticos han denunciado como tortura.\nEstados Unidos ha sido ampliamente criticado por sus aliados europeos y grupos de derechos humanos por usar métodos como uno el que hace creer a los prisioneros que se están ahogando.\nHayden escribió a los empleados en un carta que las grabaciones fueron hechas en 2002, dentro de un programa secreto de detenciones e interrogatorios que comenzó con el arresto del supuesto lugarteniente de Al Qaeda Abu Zubaydah.\nLas grabaciones fueron discontinuadas más adelante ese año y las cintas se destruyeron en 2005, explicó.\nEn la carta, el responsable de la CIA dijo que las cintas fueron destruidas porque podrían representar un riesgo de seguridad ya que los interrogadores podrían ser identificados.\nLos demócratas, que actualmente controlan el Congreso, denunciaron que hubo encubrimiento y exigieron investigaciones por la destrucción de las cintas.\nEl presidente estadounidense George W. Bush, quien ha dicho en reiteradas ocasiones que Estados Unidos no tortura, no recuerda que le hubieran hablado de las grabaciones o de su destrucción, dijo la Casa Blanca.\nEl diario The New York Times publicó el sábado que responsables de la Casa Blanca y del Departamento de Estado, así como importantes congresistas, advirtieron a la CIA en 2003 de que no destruyera las cintas, con cientos de horas de grabaciones.\nSiete policías iraquíes murieron el miércoles y nueve personas resultaron heridas cuando un atacante suicida embistió con su coche contra una patrulla policial al norte de Bagdad, informaron fuentes. En la imagen entregada el 8 de noviembre, unos soldados iraquíes participan en la operación Cortina de Acero en la localidad de Qusayba, cerca de la frontera siria. REUTERS/Cpl. Neill A. Sevelius/USMC/Handout (Reuters)\nUn coche bomba mata a siete policías iraquíes en Baquba


Al parecer no hay vuelta de hoja. En los próximos días se aprobarán, si las estrellas se alinean, una reforma a la Ley Electoral y de Partidos Políticos –LEPP–. Esta reforma ha sido fuertemente solicitada en las manifestaciones, parece ser una de las vías para reencausar la situación política y transformar la crisis en oportunidad de cambio.\nEn estos días han sucedido varias cosas que van, poco a poco, abriendo el camino para que eso suceda. La ventana de oportunidad está abierta y no durará mucho tiempo.\nEl Congreso de la República instaló el miércoles cuatro mesas de trabajo para discutir reformas sobre: Ley Electoral, Contrataciones del Estado, sector Justicia y servicio civil. Las mesas iniciaron con mal pie. Varios de los asistentes se sintieron muy molestos con la actitud de algunos diputados.\nLos inconformes interpretan que los diputados están interesados en que las mesas sirvan como una táctica dilatoria para no aprobar las reformas. Lamentables experiencias alimentan ese sentir. Algunos diputados, incluso están pensando en que la efervescencia de las manifestaciones disminuirá durante los próximos días. Eso liberará la presión política y las reformas no se aprobarán.\nPor otro lado, en estos días, la Fundación Esquipulas organizó un Foro Público para discutir sobre las perspectivas de la reforma electoral en el país. Representantes de diversas instituciones brindaron importantísimos elementos que deben ser considerados en el actual proceso de reforma electoral. Daniel Zovatto, experto internacional que participó en la actividad, enfatizó en que la reforma debe llevarla a cabo el Congreso de la República, por mandato legal, pero que el contenido de la agenda debe salir del Tribunal Supremo Electoral –TSE– con insumos del sector académico y de la ciudadanía, en sintonía con las mesas que han convocado en legislativo.\nPor ello, creo que antes de que las manifestaciones lleguen a las puertas del Congreso de la República, los diputados deberán considerar los aportes y las propuestas que ya están presentadas, como es el caso de la que entregó el jueves pasado el TSE, y trabajar arduamente para aprobar la reforma electoral, lo más pronto posible.\nAfortunadamente, existen muchas coincidencias y acuerdos entre varios actores de la sociedad no solo en los temas y la dirección de las reformas, sino también en que sea el TSE que lidere el proceso. La mesa de reforma electoral no arranca de cero. A estas alturas del partido, cuando por años se han estudiado y discutido reformas electorales, hay muchas propuestas que pueden ser incorporadas en una reforma integral. En este sentido, los diputados tienen la oportunidad de recibir los aportes, conocerlos y aprobarlos.\nLas cartas están sobre la mesa, ¿habrá reforma electoral? ¿Qué opina usted? @josecsa2 #ReformaElectoralYA


La Web Del Yuyo: Ya está disponible el TWRP Recovery para el Sony Xperia XZ.\nLo primero que debemos hacer es descargarnos la última versión disponible del archivo de imagen del Recovery TWRP desde su web oficial de descargas en el siguiente botón.\nEl modo mas fiable de instalación sin necesidad de tener acceso administrativo (root) en el dispositivo, es el método de Fastboot. Para ello, son necesarias 2 condiciones fundamentales:\nNecesita instalar en el ordenador las herramientas adb y fastboot del SDK de Android. Una manera de hacerlo en Windows esta explicado en este post. Si usan GNU-Linux solo tiene que instalarlas (android-tools-adb y android-tools-fastboot) desde el Gestor de software o el Gestor de paquetes Synaptic.\nSi usan Windows en el ordenador van a necesitar además los controladores (drivers) adb. Habitualmente están disponibles en la web del fabricante o pueden usar un controlador genérico como Universal ADB drivers.\n1.- En el dispositivo, vaya a Ajustes/ Acerca del teléfono y busque "Número de compilación", pinche 7 veces para activar "Las Opciones de desarrollo". Retrocede a los Ajustes y entra en Opciones de desarrollo y ahora debemos habilitar la Depuración USB.\n2.- Conecte el teléfono con el PC mediante el cabe USB, y desde su ordenador, abra una Terminal o Símbolo del sistema (consola) y escribimos el siguiente comando:\n3.- Ahora cogemos el archivo descargado del recovery y le cambiamos el nombre [twrp-3.0.2-0-kagura.img] a [twrp.img] sin los corchetes. Si el archivo está en el Escritorio es mejor, ya que solo debemos arrastrarlo dentro de la Terminal y escribimos el siguiente comando:\nTecleamos Enter y en unos segundos el Recovery se instalará. Ahora debemos estar atentos, pues si se inicia el dispositivo antes de acceder al TWRP, puede borrarse el Recovery y reemplazarlo por el original de Sony.\nAl entrar al TWRP, éste parchea la ROM Stock de fábrica para evitar que se sustituya por el Recovery original del dispositivo. Ya podemos utilizarlo y sacarle partido en lo que querramos. Suerte!!!


Cortinas en lugar de puertas – Materiales para la renovación de la casa\nQueda preciosa en cualquier lugar. Ver más sobre Alternativa de puerta de armario, Tratamientos de ventanas de . Mira, te gusta este modo de colgar una cortina.\nLas cortinas no solo se usan en ventanas, tambien se ven glamorosas como puertas. Las otras cortinas para puertas son mas juveniles, unas lindas cortinas de. Dejamos los armarios sin puertas para sustituirlos por unas bonitas cortinas. Si por ejemplo, en lugar de sustituir las puertas por las cortinas las quitamos del todo conseguiremos también ligereza, aunque también un .\nCortinas en lugar de puertas en el Morales Meseguer. Los pacientes se quejan de la falta de intimidad. Unas cortinas pueden ser la . Para las puertas con cortinas decántate por telas resistentes, ¡tendrán mucha más.\nLa cortina con alzapaños INGMARIE hará de tu estancia un lugar más . Fotografía de Hotel Baywatch Morrocoy, Tucacas: En vez de puertas en vidrio templado instalaron cortinas. Las ventanas te piden cortinas. Por eso aquí te hemos preparado una selección de . Ideas increibles de decoracion con cortinas con barra de rama natural diy.\nPuertas de grandes dimensiones. Pero, dónde puedo utilizar una cortina? En cualquier lugar se puede utilizar una cortina. Es la clásica ventana de piso antiguo con dos puertas batientes. Elige ahora el lugar en el que colocarás los soportes.\nEs preferible hacer un diseño de decoración de ventanas sin cortinas que. Presupuesto cortinas puerta, tenemos más de 1presupuestos para cortinas puerta ONLINE. Te enseñamos cómo instalar una barra de cortina sin hacer agujeros ni en la pare ni en el techo ni en la caja. Hay una gran variedad de modelos de cortinas para puertas, y se puede elegir. Simplemente se deben usar las cortinas con la medida exacta del lugar en el . Más de 1fotos de cortinas para la cocina.\nNo solo es muy peligroso tener una barra de madera en un lugar donde es muy fácil que una chispa se . Usa cortinas para cubrir los estantes de metal. Imitación de ventanas en la puerta de tu cochera. Una gran opción para climatizar tu local comercial es instalar una cortina de aire. En primer lugar, aportan el conocido efecto de “puerta abierta”, con esto se . Comprar cortinas de aire de varias marcas. Tiene que instalar una cortina de aire en su lugar de trabajo?\nMosquiteras puerta: 209x1cms por 11. Básicamente las cortinas de aire son elementos que, instalados sobre la puerta del local, crean una corriente de aire caliente descendente, . Estores para puertas baratos. Pantaleón me insiste en que las puertas, esas olvidadas, forman parte de.\nPrevious Post: Cortinas colgantes para puertas\nNext Post: Laminas metalicas


Los 6 comportamientos que conducen al fracaso en el mundo digital | Planeta Web\nLa clave del mundo digital es lograr resultados a partir de una inversión controlada de recursos. Ahora bien, apegarse a un guión con vehemencia, que se enfrasque únicamente en lo que sucede al interior de la empresa, tampoco es garantía de éxito, puesto que hay muchas otras variables que son incontrolables y que afectan los resultados que se obtienen en los escenarios digitales. Eso sí, hacerlo lo acercará más al resultado, y dejar de hacerlo definitivamente lo alejará.\nEl secreto está entonces en asimilar la información disponible, reaccionar correctamente a los cambios intempestivos del entorno y promover algunos comportamientos que permitan un mejor desempeño. Eso precisamente es lo que nos proponemos en esta publicación.\n¿Qué ideas o actitudes se deben evitar para poder conseguir objetivos en el mundo digital?\nLas primeras ideas o actitudes que debemos combatir —de las que ya hablamos—, son: la improvisación y el desconocimiento. Nada bueno sale de este par. Ambas, en especial la segunda, nos hacen tomar malas decisiones y producen un desperdicio de tiempo y recursos irrecuperables. Para combatirlas, debemos alinear a la organización, entregarle información y definir procedimientos; pero, también, debemos empoderarla y llenarla de confianza. Es por esto que se hace primordial erradicar lo nocivo y fomentar lo positivo. En esta publicación, queremos presentar seis comportamientos comunes y peligrosos que debemos eliminar, porque hacen fracasar a las compañías en el mundo digital.\n1. Preocuparse en exceso por la cantidad de seguidores que tiene la empresa en las redes sociales\nNunca dejaremos de insistir: el número de seguidores dice poco del esfuerzo y consume muchos recursos. Si usted no logra sacudirse de este comportamiento vanidoso —porque eso es lo que es, un deseo feroz de popularidad, que bajo la lupa de la eficiencia es inapropiado—, tomará malas decisiones de inversión, gastará más de la cuenta en aumentar la audiencia y forzará al equipo para que se concentre en la búsqueda de alcance, a cualquier precio. Y todo esto irá en detrimento del objetivo principal: mejorar la interacción, para ganar cercanía.\nCrear una comunidad, de un tamaño acorde con el producto o servicio ofrecido, es la finalidad de cualquier presencia social. Con una comunidad bien construida se logra involucramiento y retroalimentación, dos activos muy valiosos para cualquier negocio. Es por esto que el tamaño pasa a un segundo plano y el relacionamiento absorbe la atención y los recursos.\n2. Obsesionarse por lograr la primera posición en la página de resultados del buscador\nEsta obsesión es otra de las actitudes nocivas que se enquistan en la cabeza de algunos gestores digitales. Una de las actividades que más consume recursos es la optimización para motores de búsqueda —SEO, sigla de search engine optimization—, porque requiere tres tipos de tareas: tecnológicas, de contenido y de popularidad. Las primeras tienen que ver con el desarrollo y diseño del sitio web; por lo tanto, necesitan de personas capacitadas para ejecutarlas. Las segundas son aquellas destinadas a la creación y perfeccionamiento de todo lo que se publica en el sitio web. Y las últimas, se hacen cargo del aumento y visibilidad del sitio web. Para mejorar la posición, se necesita de un gran esfuerzo en esas tres áreas, y eso solo significa una cosa: inversión desbordada de recursos.\nPero, hasta aquí no queda claro: ¿por qué es nociva esa obsesión? Pues bien, es nociva porque, en la actualidad, lograr la posición no garantiza el clic —que es el objetivo final de ese esfuerzo—. Son muchos los casos de organizaciones que con posiciones inferiores consiguen una mejor tasa de clic, lo que significa que con una inversión menor lograron un mayor tráfico desde una palabra clave en particular. Por ende, están logrando el resultado y comprometiendo menos recursos. Dejar de enfocarse en la posición, para centrarse en el clic, debe ser la actitud predominante en el equipo de trabajo.\n3. Publicar de forma excesiva en las redes sociales\nComencemos a desmontar ese mito que afirma que: para ser más visible en las redes sociales se deben publicar mucho contenido. Eso es falso. Las redes sociales más populares del planeta —Facebook, Instagram y Twitter— implementaron algoritmos de ordenamiento en su línea de tiempo desde hace mucho tiempo. Esos algoritmos se basan en los niveles de interacción de cada publicación para determinar qué tan relevante es el contenido de la compañía para el consumidor. En palabras simples, aparecer en la línea de tiempo de un usuario es un resultado, que será favorable si ese usuario se relaciona con los contenidos que publico. Al aclarar este punto, salta a la vista que publicar más lo único que hace es dificultarnos el sostenimiento de las tasas de interacción; en consecuencia, nos resta visibilidad.\nLos community manager exitosos han entendido que es mejor publicar menos contenidos de mayor calidad, que atrapen a los seguidores y que motiven la interacción, que publicar muchos contenidos de baja calidad. Es más fácil crear cuatro contenidos irresistibles en una semana, que siete. Es más probable lograr altas tasas de interacción, que aumenten la visibilidad del negocio, con cuatro contenidos, que con siete.\n4. Crear procesos tediosos y extensos para la aprobación de cualquier acción\nSi tenemos que elegir el peor de los comportamientos, ese que más daño le hace a una presencia digital, definitivamente elegiríamos este. Los escenarios digitales necesitan versatilidad y capacidad de reacción para poder alcanzar el éxito. Al saturar los procesos con trabas, con talanqueras que entorpezcan el trabajo del equipo, lo único que obtendremos es la reducción de la capacidad de acción y reacción.\nCualquier procesos de preaprobación de las acciones o de validación de los contenidos y respuestas antes de ser emitidas, atentan contra la eficiencia del equipo y la actividad digital de la empresa. No estamos diciendo con esto que no deben existir procesos, claro que sí deben existir. En lo que insistimos, es en que estos deben ser simples.\n5. Limitar la experimentación en el equipo digital\nUna de las consecuencias que deja el tener procesos tediosos y extensos que describimos en el punto anterior es precisamente la que enunciamos en este punto: limita la creatividad, las libertades y la experimentación. La actividad digital de una organización, para ser exitosa, necesita de una alta dosis de prueba-error. El camino de la experimentación es una buena ruta que deja enseñanzas, oportunidades y fortalezas.\nPermitirle al equipo probar cosas nuevas es muy nutritivo para sus integrantes y la compañía. Patrocinar la experimentación motiva la optimización, el desarrollo de competencias y habilidades y la innovación. Permitirse iniciar proyectos novedosos o alterar las acciones rutinarias, perderle el miedo al error y arriesgarse es bueno. Lo prudente pocas veces es revolucionario.\n6. Apegarse a las acciones que funcionaron en el pasado, impidiendo la evolución\nLas buenas estrategias digitales son aquellas que maduran con el pasar de los días. Las sobresalientes son esas que evolucionan a la par de la audiencia. Mantenerse en la zona de confort —apegándose a las acciones a las que se acostumbraron los miembros del equipo y la audiencia—, no le traerá mejores resultados. Por el contrario, al volverse cotidianas dejarán de ser sorpresivas y seductoras para la comunidad.\nAbrir la puerta a la creatividad e innovación, liberar al equipo y darle herramientas para que se reinvente todos los días, es lo que se espera de un líder digital. Para impactar positivamente a la audiencia con una estrategia digital se necesita atrevimiento.


Traiga los elementos de su Operations Dashboard a la nueva actualización\nOperations Dashboard es una aplicación web configurable que se incluye con su suscripción a ArcGIS Online. Los Dashboards ofrecen vistas flexibles y atractivas de sus datos para proporcionar información clave para la toma de decisiones de un vistazo. Tras el lanzamiento inicial dentro de ArcGIS Online en diciembre de 2017, Operations Dashboard se actualizó este mes con algunas capacidades nuevas y emocionantes. Esta publicación captura mis funciones favoritas que se han introducido.\nSelección en Gráficos\nLos Dashboards se componen de elementos tales como mapas, listas, medidores, indicadores y tablas que dan vida a sus datos. Los elementos dentro de su Dashboard lo mantienen informado cuando cambian sus datos, pero también puede configurar elementos para comunicarse entre sí para mejorar la interactividad a través de las acciones del Dashboard.\nJunto a los mapas y selectores, los gráficos ahora pueden ser una fuente de acciones, tanto para gráficos circulares como seriales. Puede seleccionar un único punto de datos, o múltiples puntos de datos en sus gráficos, y tener sus acciones de activación de selección en otros elementos como mapas o listas.\nElemento de contenido incrustado\nEl nuevo elemento de contenido integrado facilita la inserción de documentos, imágenes y video en su Dashboard. El contenido incrustado se puede configurar como estático, con respecto a la URL, en cuyo caso todo lo que necesita proporcionar es la URL directa. Por lo tanto, si desea mostrar información meteorológica, un video de YouTube o incluso una aplicación o formulario de encuesta, simplemente ingrese la URL como un documento para incrustarlo.\nTambién puede insertar contenido por características. Esto significa que la información de atributos de cada característica se puede usar para construir dinámicamente una URL en tiempo de ejecución. Esta es una gran manera de mostrar contenido de páginas web externas que se basan en una clave común, compartida en un atributo de función (como imágenes de cámaras CCTV, por ejemplo). Al incrustar funciones, el contenido incrustado puede ser el objetivo de una acción, como la selección en un mapa o lista.\nAquí está mi tablero con imágenes CCTV incrustadas y un informe meteorológico:\nModo de función para medidores e indicadores\nHasta ahora, solo podía configurar un medidor o indicador para usar una estadística, como un promedio o suma. Con esta versión, ahora puede conducir el tipo de valor, así como los valores mínimo y máximo, directamente desde los atributos de una función.\nCompartir contenido premium en Dashboards\nArcGIS viene con capas de mapas listas para usar que requieren una cuenta de suscripción de la organización para acceder. Parte del contenido de la suscripción, el contenido premium, también consumirá créditos. Puede incluir contenido de suscripción en su Dashboard, proporcionar un acceso sin interrupciones y, si es necesario, limitar la cantidad de solicitudes que puede recibir para administrar los costos.\nNuevos iconos de SVG\nAl agregar un ícono a su indicador o medidor, encontrará que Operations Dashboard tiene más de 100 íconos nuevos en la colección. Por supuesto, puede continuar agregando sus propios iconos también. ¡Y puede usar un icono de SVG como el logotipo dentro del elemento de encabezado también!\nSin etiqueta de datos\nEs posible que su visualización no tenga datos para mostrar. Tal vez está impulsado por una capa vacía en espera de que se agreguen datos desde aplicaciones de campo como Colector, o el elemento es el destino de una selección dentro de otro elemento. Si el elemento carece de datos, Dashboard llenará el espacio vacío con una etiqueta "Sin datos". Ahora puede proporcionar su propio texto que tenga sentido para sus usuarios y, potencialmente, le dé instrucciones sobre cómo poblar el elemento con datos.\nAdemás de estas nuevas características, las Acciones ya no son un botón separado del resto de la experiencia de configuración. Ahora están disponibles en una experiencia de configuración unificada para que sean más fáciles de encontrar y administrar. Una lista completa de las nuevas características introducidas en abril de 2018 se puede encontrar aquí.\nLea el artículo original | Para más información sobre Operation Dashboard ¡escríbanos! un ejecutivo de SIGSA lo está esperando | Visítanos en www.sigsa.info\nActualización ArcGIS Esri GIS Operation Dashboard SIG SIGSA


Hambre de justicia, #diadelvoluntariado - Paperblog\nVivimos tiempos de zozobra. Oímos y leemos y constatamos por doquier la necesidad de apretarnos los cinturones. ¿Qué vamos a poder compartir con [email protected] si no es a cambio de un beneficio evidente e inmediato?\nPero en medio de la tiniebla y la incertidumbre, lucen miles de luces, pequeñas, que quieren sembrar el mundo de esperanza. Es por eso que, en este Día Internacional del Voluntariado por el Desarrollo Económico y Social, quiero acercarme a la labor de miles de [email protected] a lo largo y ancho del mundo que ofrecen lo más valioso que tienen, su tiempo (en el que volcar sus conocimientos, capacidades, aptitudes y energías) para trasnformar la realidad de quienes no han tenido tanta suerte.\nY lo hago con el ejemplo de la propuesta de la campaña por el Derecho a la alimentación URGENTE, porque aunque las grandes decisiones y las soluciones al problema del hambre corresponden a los que toman las decisiones políticas y económicas en el ámbito nacional e internacional () hay quien se cuestiona, ya sea de forma personal o de forma asociada, ¿podemos tomar parte de alguna manera en esta lucha? ¿Podemos hacer algo a nivel personal? Es importante que cada quien descubra a qué se siente llamado en el esfuerzo colectivo para promover el derecho humano a la alimentación de todos los seres humanos.


Nissan Frontier 2022: nuevo diseño, caracteristicas, debut, precio (+imagenes y videos) - Gossip Vehiculos\n“Una ambulancia venía en contra vía” autoridades se pronuncian tras terrible…\nMurió Florence Ngwu quien tras choque quedó atrapada entre dos autos…\nQuién era la mujer que murió en el accidente entre dos…\nRevaluarán la licencia de conducir del actor argentino Luciano Castro por…\nIngeniero ucraniano convirtió su camioneta en un “lanzamisiles” para derribar más…\nInsólito – Transportó un colchón en una vespa (+Video viral)\nInicio Marcas de Autos Nissan Nissan Frontier 2022: nuevo diseño, caracteristicas, debut, precio (+imagenes y videos)\nEl rival de Toyota Tacoma y Ford Ranger finalmente obtiene un rediseño competitivo.\nEl Nissan Frontier 2021 es antiguo en los años de la automoción y llegó al mercado al final del primer mandato de George W. Bush como presidente. Desde entonces, el segmento de las pickup medianas ha cambiado más que la política estadounidense, y sus participantes se desempeñan cada vez más como automóviles familiares suburbanos, así como camiones de trabajo y todoterreno. En ese primer papel, la vieja camioneta luchó, pero no se preocupe: la Nissan Frontier 2022 rediseñada finalmente está aquí.\nLas actualizaciones van más allá de un nuevo estilo nítido y un interior atractivo. Junto a esos cambios profundos, hay un nuevo conjunto de características de seguridad y tecnología, que integran advertencia de colisión frontal estándar, conectividad Apple CarPlay y Android Auto, y más. Un V6 estándar de 3.8 litros y una transmisión automática de nueve velocidades envían 310 caballos de fuerza y 281 libras-pie (231 kilovatios y 381 newton-metros) a la parte trasera o a las cuatro ruedas, según la configuración. Recuerde, ese motor llegó en 2020, lo que le dio a la Frontier de la generación anterior la única actualización significativa durante su producción de 17 años.\nPrecios de la Nissan Frontier\nEstilo nuevo y moderno\nImagenes en el interior de la Nissan Frontier 2022\nCarga y espacio\nListo para todoterreno\nEconomia en combustible\nImagenes de la Nissan Frontier 2022\nVideo de la Nissan Frontier 2022\nUltimas noticias de la Nissan Frontier\nPro-4X $37,490 (est)\nNissan ofrece la Frontier 2022 en varios niveles de equipamiento diferentes, con la opción de tracción trasera o en las cuatro ruedas y cabina extendida o doble.\nNissan dice que la Frontier 2022 se inspira en la legendaria camioneta compacta Hardbody que comercializó entre 1986 y 1997. No estamos seguros de ver de qué están hablando, excepto quizás los guardabarros delanteros acampanados y fornidos de la nueva camioneta. Incluso sin el supuesto vínculo retro, la camioneta 2022 tiene un aspecto distintivo de Nissan, gracias a la forma de la parrilla delantera y la línea de cintura levantada que unen a la Frontier con su hermano mayor, el Titan . Al igual que la Armada 2021 renovada , la Frontier hace uso de un diseño de faro con muescas con acentos LED en forma de tornillo de banco.\nLa camioneta que se ve aquí, un modelo Pro-4X, presenta un parachoques delantero de gran espacio libre con barras verticales inusuales donde se encuentra con los pasos de rueda, lo que nos lleva a hacer algunas comparaciones con la Chevrolet Silverado 1500 actual . Esos guardabarros delanteros antes mencionados dan paso a revestimientos de puertas tipo Titan y guardabarros traseros que sobresalen donde la caja se encuentra con la cabina, terminando en luces traseras en forma de C que se hacen eco un poco del diseño de los faros. Un portón trasero estampado con un sutil spoiler de cola de pato y la marca denominativa “FRONTIER” invitan a más inspiración Titan.\nLa Frontier 2022 se aleja enormemente de su predecesora, por lo que nos sorprende un poco saber que hace uso del chasis básico y la estructura de la cabina de la vieja camioneta. Eso es evidente en la forma del parabrisas, el techo y la ventana trasera, así como en las aberturas de las puertas. Sin embargo, los estilistas de Nissan obviamente fueron muy cuidadosos para asegurarse de que casi cada pulgada cuadrada de láminas de metal y vidrio sean diferentes de la camioneta saliente: la nueva se ve mucho más contemporánea y atractiva.\nMirando la tabla de especificaciones, los huesos compartidos se vuelven más evidentes. King Cab (jerga de Nissan para “extendida”) y camiones de cama corta de cabina doble viajan en una distancia entre ejes de 126.0 pulgadas, un aumento de solo 0.1 pulgadas en relación con 2021. Mientras tanto, la distancia entre ejes de 139.8 pulgadas de la caja larga de la cabina doble es 0.1 pulgadas más corto que antes. Con 210.2 pulgadas de largo, la camioneta estándar 2022 es 4.7 pulgadas más grande de parachoques a parachoques; lo mismo puede decirse de la longitud de 224.1 pulgadas de la caja larga de la cabina doble 2022. El ancho también es de 0.2 pulgadas, hasta 73.0 incluso.\nDebajo de su nuevo estilo tecno-chic hay un interior igualmente nuevo que apunta directamente a la cabina de Toyota Tacoma 2021 de estilo exuberante , particularmente dados los detalles en rojo lava que aparecen generosamente en el Pro-4X. Una estructura en forma de viga alberga el grupo de instrumentos, aparentemente cortando la consola central antes de emerger como un panel de fascia cosido frente al pasajero. Las salidas de HVAC idénticas para los ocupantes de los asientos delanteros y una bitácora de control de clima flanqueada por una toma de 12 voltios y el selector de tracción en las cuatro ruedas crean una simetría visual y un diseño atractivo.\nLa Frontier vendrá de serie con una pantalla de infoentretenimiento de 8.0 pulgadas, la pantalla estándar más grande que se ofrece de cualquier fabricante de camionetas; solo la pantalla base de tamaño idéntico de la Titan la iguala. Además, la camioneta de tamaño mediano ofrecerá una pantalla de 9.0 pulgadas, lo que le otorgará esa importante distinción de mejor en su clase. Apple CarPlay y Android Auto serán estándar, al igual que un puerto USB-A y USB-C en la parte delantera. Un cargador inalámbrico, un punto de acceso Wi-Fi y un monitor de vista envolvente serán opcionales. Nissan dice que la consola central es casi dos veces más grande que la mayoría de las camionetas medianas, con 4.0 litros, mientras que los bolsillos adicionales en las puertas traseras también mejoran el almacenamiento de cosas.\nSi bien el exterior es una desviación drástica del viejo camión, la cabina se ve un poco más similar: la forma de los paneles de las puertas, por ejemplo, es un riff casi exacto del tema que hemos visto desde 2005. Y los plásticos duros parecen como abundan en la nueva camioneta, incluida la parte superior del tablero, la guantera, los paneles de las puertas y la consola central. El plástico acolchado solo se ve en los apoyabrazos, el tablero del tablero y las manijas de agarre montadas en la consola, si lo creemos. Pero la Chevrolet Colorado, la Ford Ranger 2021 y la Toyota Tacoma también cuentan con interiores con especificaciones de Rubbermaid, por lo que la Frontier debería ser al menos competitiva en su clase.\nAdemás de algunos componentes estructurales, la Frontier 2022 también incluye un tren motriz de transferencia, un V6 estándar de 3.8 litros presentado el año pasado. Al ofrecer una potencia líder en su clase y un par motor más que suficiente, el V6 debería ser una buena opción para los compradores de camionetas, y su transmisión automática de nueve velocidades hace un buen trabajo al seleccionar la marcha adecuada para el trabajo. En nuestra prueba de la Frontier Pro-4X 2020 , descubrimos que el motor V6 era más manejable que el V6 de 3.5 litros sibilante de la Toyota Tacoma o el 3.6 litros de alta tensión que se encuentra en la Chevrolet Colorado , los cuales requieren mucho más revoluciones para ganar impulso.\nDesafortunadamente, su motor ronco no genera grandes números de remolque o carga útil para la Frontier 2022. Nissan dice que el mediano puede transportar hasta 1,610 libras de carga útil o remolcar hasta 6,720 libras. La Tacoma, por ejemplo, puede cargar 1,620 libras de cosas en la caja y remolcar un remolque de 6,800 libras, mientras que la Ranger puede remolcar 7,500 libras y transportar 1,920 libras. El Chevy Colorado a gasolina remolca 7,000 libras, mientras que su diesel disponible sube la apuesta a 7,700. Sin embargo, la Frontier supera a su competidor Bow Tie en carga útil: la Colorado solo puede transportar 1,569 libras. También supera al Honda Ridgeline en ambas métricas.\nNissan Frontier 2022 Chevrolet Colorado 2021 Ford Ranger 2021 2021 GMC Canyon Honda Ridgeline 2021 Toyota Tacoma 2021\nRemolque máximo 6,720 libras 7,000 libras (gasolina), 7,700 libras (diesel) 7.500 libras 7,000 libras (gasolina), 7,700 libras (diesel) 5,000 libras 6,800 libras\nCarga útil máxima 1,610 libras 1,550 libras 1,920 libras N / A 1,583 libras 1,620 libras\nAyudar a modernizar las características de manejo algo imprecisas de la vieja Frontier es el trabajo de una barra estabilizadora delantera más grande y una nueva barra estabilizadora trasera, con parachoques de rebote de uretano exclusivos en su clase que mejoran el rendimiento de la amortiguación en caminos con baches o en curvas. Nissan dice que la Frontier 2022 también tiene montajes de cabina hidráulicos, que reducen las vibraciones y la dureza en un 80 por ciento. Una configuración de dirección hidráulica de piñón y cremallera reajustada brinda una relación 16 por ciento más rápida, lo que mejora la respuesta del timón.\nA diferencia de su predecesora escasamente equipada, la Nissan Frontier 2022 incluye varias funciones avanzadas de seguridad y asistencia al conductor. La advertencia de colisión frontal es estándar, mientras que el frenado automático de emergencia y el control de crucero inteligente son opcionales. Completamente cargado, el paquete de tecnología Nissan Safety Shield 360 de la Frontier también incluye advertencia de cambio de carril, monitoreo de punto ciego y frenado de emergencia automático trasero exclusivo en su clase. La tecnología Nissan Pro-Pilot Assist no está disponible, lo que significa que no hay centrado de carril o control de crucero vinculado a la navegación, pero por lo demás, la nueva Frontier es una gran mejora con respecto a su predecesora.\nAún así, la Frontier básica está por detrás de la Ranger, que ofrece un estándar de monitoreo de colisión y frenado de emergencia automático, y Tacoma, que también incluye crucero adaptativo sin costo. Sin embargo, el Frontier es más avanzado que el Chevrolet Colorado y el GMC Canyon 2021, ninguno de los cuales incluye ningún tipo de advertencia de colisión o características de intervención en sus modelos base. De hecho, el frenado automático de emergencia y el crucero adaptativo no están disponibles en ninguna de las ofertas de camionetas medianas de GM, ni siquiera en la Canyon Denali de lujo.\nAl igual que su predecesor y el Titan más grande, el Nissan Frontier 2022 volverá a contar con una variante Pro-4X resistente y elegante. Junto con los detalles interiores y exteriores de Lava Orange, el Pro-4X tiene un diferencial trasero de bloqueo electrónico, placas de protección debajo de la carrocería y amortiguadores Bilstein especialmente afinados. El modelo 2022 también agregará un modo Off-Road para la cámara de 360 grados, que se activa a bajas velocidades cuando la caja de transferencia está en 4-Low. La cámara orientada hacia adelante ayuda al conductor a detectar obstáculos en el camino, evitando daños y raspaduras.\nSi se parece en algo a la camioneta saliente, la Nissan Frontier 2022 debería ofrecer una sorprendente capacidad todoterreno. De hecho, el rendimiento de la suspensión de la Pro-4X 2020 en terreno accidentado es igual al de la Toyota Tacoma TRD Pro , más cara , debido en particular a esos Bilsteins bien afinados. Esperamos que Nissan se haya ido lo suficientemente bien, porque el Frontier es una joya escondida entre los todoterreno de fábrica.\nLa Nissan Frontier 2022 vendrá en cuatro versiones diferentes (S, SV, Pro-4X y Pro-X), dos estilos de cabina y dos longitudes de caja. La camioneta King Cab se ofrece con tracción en dos y cuatro ruedas en los modelos S o SV, combinados exclusivamente con una caja de 6.1 pies. La cabina doble vendrá con tracción en dos o cuatro ruedas en las versiones S y SV, mientras que la tracción en las cuatro ruedas será estándar en el Pro-4X. Como sugiere su nombre, la cabina doble del Pro-X ofrece muchas de las actualizaciones de estilo del Pro-4X, pero con tracción en dos ruedas. Y la cabina de tripulación de la Frontier SV ofrecerá una cama de 5.0 o 6.1 pies; todos los otros cuatro puertas obtienen la caja corta solamente.\nCreemos que la Frontier 2022 debería lograr clasificaciones de economía de combustible similares a su predecesora : 18 millas por galón en ciudad, 24 en carretera y 20 combinadas con tracción en dos ruedas y 17 en ciudad, 23 en carretera y 19 combinadas con tracción en las cuatro ruedas. Sin embargo, no se ha anunciado nada oficial con respecto a la eficiencia o los precios. En ese frente, esperamos que la nueva Frontier ofrezca un equilibrio convincente de valor y características, con precios que suban solo ligeramente a partir de 2021. Planee gastar alrededor de $ 28,000 en una S King Cab básica con tracción en dos ruedas, que aumentará a $ 40,000 aproximadamente. para una cabina doble Pro-4X.\nLa Nissan Frontier 2022 llegará a los concesionarios este verano.\nNissan adelantó producción del 400Z durante el debut del Pathfinder-Frontier\nPrecios y versiones de equipamiento de Nissan NP300 pick-up y Frontier 2021 en México\nNissan Frontier King Cab 2021: características, ventajas y desventajas (+Fotos y Video)\nNissan Frontier 2021 para E.E.U.U. hace aparición en video de Navara\nRevelan teaser del Nissan Frontier 2021 pero no es el que tú crees\nArtículo anteriorHay más personas comprando la Toyota Land Cruiser ahora que será descontinuada\nArtículo siguienteArgentina se asocia con China para la producción de autos eléctricos\nImágenes espía del interior del Nissan Altima Facelift 2023 en Estados Unidos\ngloria - mayo 10, 2022 0\nLos vehículos Chevrolet Silverado con transmisión automática de algunos años, llegaron al mercado automotriz con problemas en este importante componente que interviene en un...\nVida útil de un amortiguador\nAmortiguadores Monroe ¿Son buenos?\nQué pasa si se rompe una rótula del coche\ngloria - mayo 8, 2022 0\nEl mercado automotor chino resulta amplio con sus diversas fábricas de automóviles chinos, unas más recientes en el mercado que otras, pero, en definitiva...\nNoticias de Autos6157\nMarcas de Autos1671\nNoticias de coches en Europa1511\nVideos y Noticias Virales de Autos1467


Aguado presenta un nuevo logo de metro con los colores del arcoíris en la estación de Metro de Chueca – Teleganes\nActualidad Campañas Economía Social Transportes\n29 junio, 2020 29 junio, 2020 Alejandro Mangas Díaz\t0 comentarios\tchueca, metro de madrid, teleganés, transporte público, transportes\nEl nuevo logotipo permanecerá para siempre en el acceso a la estación como símbolo de diversidad y tolerancia\nLa iniciativa forma parte de la campaña Metro somos todos, que pone en valor la pluralidad, el respeto y la libertad\nLa Comunidad de Madrid ha teñido de arcoíris el pórtico de la estación de Chueca de Metro de Madrid, con motivo del Orgullo LGTBI.\nEl vicepresidente, consejero de Deportes, Transparencia y portavoz del Gobierno regional, Ignacio Aguado, y el consejero de Transportes, Movilidad e Infraestructuras y presidente de Metro, Ángel Garrido, han presentado el tradicional logo de Metro pintado a mano con los colores del arcoíris y han anunciado que permanecerá para siempre en este acceso como símbolo de diversidad.\nLa tematización del pórtico de Chueca forma parte de la campaña Metro somos todos, cuyo objetivo es destacar el papel del suburbano como un medio de transporte libre, respetuoso, acogedor y referente de la diversidad.\nLa campaña se difundirá en los perfiles de redes sociales de la compañía, así como en Canal Metro.\nDurante el acto, al que han asistido representantes de las principales asociaciones que trabajan a favor del colectivo LGTBI en la Comunidad de Madrid, Garrido ha subrayado que la estación de Chueca será la única de toda la red que tenga un rombo diferente con una banderola propia.\n“Es nuestra forma de reconocer a las personas que han dado visibilidad al colectivo LGTBI, al barrio que nos ha enseñado el valor de la tolerancia”, ha afirmado.\n← Javier Avilés se estrenó como goleador con el primer equipo\nEl embarcadero del parque de El Retiro reabre esta semana con nuevas medidas de seguridad →\nTotal de visitas: 2.147.443


Policía: “Hemos resuelto el caso de violación en grupo de la joven de 16 años en Eilat” – Radio JAI\nEl caso de la violación en grupo de una chica de 16 años en el Hotel Red Sea en Eilat se resolvió y se ha abordado o contactado a todos los sospechosos, anunció la policía de Israel el jueves por la noche.\n“Se consideró que el testimonio de la víctima era creíble y se encontraron pruebas de cumplimiento”, dijo la policía.\nEl equipo de investigación encontró y rastreó a un total de 17 sospechosos relacionados con el violento asunto, de los cuales 14 están actualmente detenidos. Un total de 10 de los sospechosos arrestados eran menores de edad, mientras que los cuatro restantes eran legalmente adultos. Tres de los detenidos fueron puestos en libertad bajo custodia policial en condiciones restrictivas.\nUno de los principales sospechosos dijo a los miembros de la prensa a primera hora de la tarde que no participó en la violación, sino que intentó ayudar a la víctima. “Llegará un momento en que la verdad saldrá a la luz”, dijo.\nEl sospechoso luego admitió haber documentado el acto brutal, aunque procedió a negar haber participado en la agresión sexual en sí. Su arresto se extendió por seis días, al igual que el arresto de otros dos sospechosos.\nDespués de aproximadamente dos semanas de investigación, el equipo policial que había estado trabajando en el caso, compuesto por más de 20 investigadores, afirmó haber encontrado la verdad.\nLa víctima, que está gravemente dañada mentalmente por el asunto, está siendo acompañada de cerca por un investigador juvenil. Ella, así como la amiga con la que había viajado a Eilat, están recibiendo una “red de seguridad” de la policía.\n“La Radio es magia, ilusión, fantasía. Podés hacer soñar a cualquiera”


Reparación de lavadoras en Corbalán • Teruel • Reparar & Arreglar\nReparar lavadoras en Corbalán (Teruel)\nSi necesitas reparar tu lavadora en Corbalán te ofrecemos la posibilidad de contactar con un técnico especialista en la reparación de lavadoras.\nNuestros técnicos se acercarán a su domicilio en Corbalán (Teruel) o el lugar donde se haya producido la avería para que puedan arreglar su electrodoméstico lo antes posible y poder volver a tener el electrodoméstico funcionando con normalidad y no te repercuta en tu vida diaria.\nAl estar ubicados en Corbalán (Teruel) podemos adaptarnos al horario que mejor te venga para que podamos acércanos a arreglar tu lavadora cuando mejor te venga y así evitar que tengas que trastocar tu día a día (pedir horas en el trabajo, coger el día o pedir a un familiar o amigo que atienda al técnico).\nNuestros técnicos de Corbalán (Teruel) son especialistas en la reparación de todas las marcas:\nEn nuestro servicio técnico de reparación y arreglo de lavadoras en Corbalán dispone de las siguientes piezas:\nSe debe tener en cuenta que existe la posibilidad que no tengamos alguna de las piezas en Corbalán (Teruel) y debamos solicitarla al servicio técnico de la marca correspondiente. El tiempo de entrega de la pieza que podamos necesitar para arreglar la lavadora va a depender del fabricante.\nEn nuestro servicio técnico en Corbalán trabajamos con piezas originales para que la reparación sea de calidad y que no vuelvas a tener ninguna avería en tu electrodoméstico.\n¿Eres una empresa de reparación de lavadoras en Corbalán?\nSi eres una empresa de reparación de lavadoras u otros electrodomésticos en Corbalán o una localidad cercana y ofreces servicio en esta región, y quieres aparecer en nuestra web y conseguir nuevos clientes, no dudes en ponerte en contacto con nosotros.


Pueblo : NOMEOLVIDES: Los restos de Patricia descansarán ahora junto a los de su esposo y compañero\nLos restos de Patricia descansarán ahora junto a los de su esposo y compañero\nBerisso.- Los restos mortales de Patricia Dillon, secuestrada y desaparecida durante la última dictadura militar, serán inhumados mañana en el cementerio local, anunció hoy la intendencia. La ceremonia se llevará a cabo en el Cementerio Parque en el Cuerpo 2, Nicho 139, Frente C del predio de la calle 18 y 156, precisó hoy la municipalidad a través de un comunicado. “Los restos -añadió- descansarán junto a los de su esposo, Luis Alberto Ciancio, quien también fue secuestrado y asesinado por\nla dictadura, y del que en el año 2009 identificaron sus restos”.\nCiancio, estudiante avanzado de arquitectura, fue el primer desaparecido identificado de Berisso, quien fue secuestrado a los 25 años de edad. El parte de prensa destacó que “los restos de Dillon fueron identificados mediante estudios de ADN, debido al trabajo del Equipo Argentino de Antropología Forense hallados a principios de la década del ’90 en el cementerio de Boulogne en el partido de San Isidro”.\nGabriel Ciancio, hermano de Luis, dijo hoy que “para la familia se cerró un círculo, porque encontramos a los chicos, pero ahora se abre uno nuevo, el de la búsqueda de los culpables y el de la justicia”. En cuanto al homenaje de mañana, Ricardo Ciancio manifestó su gratitud por el reconocimiento público que va a recibir Dillon. “Es un acto difícil de sobrellevar, se podría haber hecho en silencio pero es bueno que se difunda, es importante para todos que se sepa el terror que se vivió en la época de la represión”, expresó.\nLa Municipalidad de Berisso sostuvo hoy que en el gobierno local “se trabaja fuertemente en la promoción y en mantener viva la memoria colectiva”. “En esta oportunidad –resaltó- se acompaña a la familia celebrando el hallazgo, pero también con la esperanza y necesidad de que los culpables sean juzgados y castigados por estos crímenes de lesa humanidad”.\nPublicado por Casapueblos - AEDD en 0:29\nEtiquetas: aedd, apropiación menores, campaña de apoyo a juicios, casapueblos, detenidos desaparecidos, genocidas, genocidio, recuperacion memoria genocidio, sobrevivientes


Moreno da por ‘capítulo cerrado’ el cruce de comentarios con Correa | Confirmado.net\nInicio Sociedad Moreno da por ‘capítulo cerrado’ el cruce de comentarios con Correa\nMoreno da por ‘capítulo cerrado’ el cruce de comentarios con Correa\nEl presidente Lenín Moreno dijo a los legisladores oficialistas que independientemente de los roces que puedan haber existido dentro de las filas de la agrupación, él traía un mensaje de unidad. Que los comentarios hechos y recibidos con su antecesor, Rafael Correa, son ahora un capítulo cerrado.\n“Me ha asombrado que cierto tipo de comentarios hayan comenzado en Twitter, cuando la línea directa estaba establecida. Al principio respondí con guante blanco, no fui correspondido y ese… y yo netamente manifesté lo que creía en ese momento, mí verdad”, indicó el Mandatario.\nAsimismo aclaró que “bajo ninguna circunstancia, las diferencias que puede haber entre dos compañeros, independiente de que sean los líderes de un movimiento, no pueden afectar al movimiento, debe permanecer unido”.\nArtículo anterior13 de julio día mundial del sarcoma\nArtículo siguienteSiria y contraterrorismo encabezarán agenda Trump-Macron


PAC para MiPymes – CEPBA | Confederación Económica de la Provincia de Buenos Aires\nPAC para MiPymes\nPAC Asistencia técnica en Calidad de Alimentos\n(Cierre de la convocatoria: 30 de septiembre de 2020)\nDestinos elegibles: Implementación de Buenas Prácticas de Manufactura en las plantas de producción de alimentos; Análisis de peligros y puntos críticos de control (HACCP); Implementación y documentación de un sistema de gestión de inocuidad de alimentos; Implementación de normas de inocuidad y aseguramiento de la calidad cuyo objetivo sea la posterior certificación; Certificación de normas para la exportación por entidades certificadoras.\nEl aporte no reembolsable (ANR) será como máximo de hasta la suma de PESOS QUINIENTOS MIL ($500.000) para asistencia técnica e inversiones asociadas. Del total de ANR solo el TREINTA PORCIENTO (30%) podrán ser compras asociadas y hasta el SESENTA POR CIENTO (60%) del Monto de la Adquisición. Ejemplo de compras asociadas: detector de metales, cortinas de pvc higiénicas, entre otros. El aporte TOTAL del PROGRAMA será del SETENTA por ciento (70%) del monto total de los Proyectos sin IVA. Dicho impuesto estará a cargo de la Beneficiaria.\n(Cierre de la convocatoria: 25 de septiembre de 2020)\nBusca apoyar el desarrollo de las PyMEs industriales argentinas, mediante asistencia técnica en el diseño de productos, estrategias de comunicación y protección de derechos de autor posibilitando, entre otros aspectos: i) mejorar el diseño y la calidad de productos y servicios; ii) mejorar la productividad de los procesos, iii) preservar los derechos de autoría sobre producciones originales; y IV) generar estrategias de comunicación. El aporte no reembolsable (ANR) será de hasta la suma máxima de PESOS CUATROCIENTOS CINCUENTA MIL ($450.000) para asistencia técnica. En caso de tratarse de compras asociadas el aporte del programa no podrá ser mayor al TREINTA POR CIENTO (30%) del total del ANR total y hasta el SESENTA POR CIENTO (60%) del Monto de la Adquisición. El aporte TOTAL del PROGRAMA podrá ser hasta el SETENTA por ciento (70%) del monto total de los Proyectos sin IVA, el que estará a cargo de la Beneficiaria.\nOrientado al fomento de actividades de asistencia técnica destinadas a promover la eficiencia energética en las Micro, Pequeñas y Medianas Empresas, en adelante MiPyMEs, con el fin de generar ahorro en el consumo energético, incrementando la productividad, la seguridad energética, y reduciendo el impacto ambiental.\nEl aporte no reembolsable (ANR) será siempre para los objetivos específicos de la convocatoria y según los mismos, de la siguiente manera:\n– la elaboración de diagnósticos energéticos con análisis de preinversión hasta un máximo de PESOS DOSCIENTOS MIL ($200.000).\n– la implementación de una o más etapas del Sistema de Gestión de la Energía (SGEn) hasta un máximo de PESOS TRESCIENTOS MIL ($300.000).\n– la implementación de una o más etapas del SGEn, incluyendo inversiones en EFICIENCIA ENERGÉTICA (EE) para la adquisición de herramientas y/o equipos hasta un máximo de PESOS TRESCIENTOS CINCUENTA MIL ($350.000). En este caso, el gasto en este rubro no podrá ser mayor al TREINTA POR CIENTO (30%) del ANR total y hasta el SESENTA POR CIENTO (60%) del Monto de la Adquisición.\nEl aporte TOTAL del PROGRAMA podrá ser hasta el OCHENTA por ciento (80%) del monto total de los Proyectos sin IVA. Dicho impuesto estará a cargo de la Beneficiaria.\nPara participar en esta modalidad, cada EMPRESA deberá seleccionar a una Unidad de Transformación Digital (UTD), la que tendrá la responsabilidad de asistir en la elaboración del pre-diagnóstico, la formulación del Proyecto y que coordinará la ejecución de las actividades pautadas, atendiendo al cumplimiento de las mismas en lo relacionado con su función técnico- profesional.\nLas UTD deberán además asistirlas en la identificación de las soluciones tecnológicas que más se adecúen a las necesidades planteadas en el Proyecto y deberán elaborar un informe final detallando el proceso de asistencia técnica, los resultados e impactos obtenidos, el cuál deberá ser presentado por TAD con firma conjunta de la EMPRESA y UTD.\nEl aporte no reembolsable (ANR) será de hasta la suma máxima de PESOS SEISCIENTOS MIL ($600.000) por Proyecto. En caso de realizar adquisiciones el aporte del programa no podrá ser mayor al TREINTA POR CIENTO (30%) del total del ANR aprobado y hasta el SESENTA POR CIENTO (60%) del Monto de la Adquisición. El aporte del PROGRAMA podrá ser hasta el SETENTA por ciento (70%) del monto total de los Proyectos sin IVA. Dicho impuesto estará a cargo de la Beneficiaria.\nVer Resolución 79/20


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