ԱՐTSՎԱՆԻԿԻ ՏԵԽՆԻԿԱԿԱՆ Կոյուղու ջրահեռացման նմուշներից քրոնիկական կայունացված քրոմատի մեկուսացում և նկարագրություն: Քր.  Վեցվալենտ քրոմը բարձր լուծելիություն ունի pH- ի բոլոր միջակայքերում, խիստ թունավոր է: Չնայած վեցվալենտ քրոմի խիստ թունավոր ազդեցությանը, շատ մանրէներ զարգանում են քրոմով հարուստ միջավայրում `վեցավալենտ քրոմի չեզոքացման մեխանիզմների առկայության պատճառով, ինչպիսիք են քրոմի բջջային պատի մակերևույթում կլանումը, բջիջների արտանետումը, միջբջջային տարածքում քրոմի կուտակումը, վեցավալենտ Վեցվալենտ քրոմի վերականգնումն ընդունակ է եռալեզու իրականացնել մի շարք աերոբների (Bacillus, Caulobacter, Staphylococcus, Streptomyces, Pediococcus, Pseudomonas, Pyrobaculum, Deinococcus, Thermus, Acidiphilium) և anaerobanumberum Desorgisaris, 3 Բնության մեջ վեցվալենտ քրոմակայուն մանրէների բնական էկոտիպերը ձեւավորվում են ծանր ժայռոտ ապարներում, հանքային կեղտաջրերում, թափոններում, թթուների ճահիճներում, ատոմակայանների կեղտաջրերի արտահոսքներում և այլն [4, 2]:   Հայաստանի Հանրապետությունը հարուստ է տարբեր մետաղների հանքավայրերով, բայց մետաղակայուն, այդ թվում ՝ քրոմակայուն մի շարք մանրէներ, որոնք քիչ են ուսումնասիրված այդ էկոտոպներում:  Հետազոտության նպատակն է մեկուսացնել և նույնացնել Արծվանիկի պոչամբարի քրոմի կայուն բակտերիաները և որոշել և Cr (VI) - ի վերականգնման հնարավորությունը: Նմուշառում և ուսումնասիրության օբյեկտներ Հետազոտության նպատակը Արծվանիկի պոչամբարի թափոնների նմուշից մեկուսացված 5 քրոմատ կայուն բակտերիաներ էին:   Արծվանիկի պոչամբարը գտնվում է Սյունիքի մարզի Արծվանիկ, Սքաքար, Աճանան և Սյունիք համայնքներում:  Այստեղ են թափվում geանգեզուրի պղնձամոլիբդենային կոմբինատի հարուստ ցուցիչ գործարանի պոչամբարները `շուրջ 300 միլիոն տոննա զանգվածով (pH 1011):  Արծվանիկի պոչամբարից նմուշառումը կատարվել է ստերիլ սպաթուլայի միջոցով, որը ստերիլ տարաների մեջ տեղափոխվել է լաբորատորիա:  Պոչամբարի և pH- ի կոորդինատները տեղում որոշվեցին համապատասխանաբար GPS- ի և համակցված pH / EC / TDS / ջերմաստիճանի (HANNA HI98129 / HI98130) չափիչի միջոցով: Քրոմակայուն մանրէների մեկուսացում: Թափոնների նմուշից քրոմի կայունացուցիչների մեկուսացումն իրականացվում է կուտակիչ մշակույթի միջոցով `օգտագործելով R2A (DSMZ 830) միջավայր` քրոմի K2Cr2O7 1-3 մմ վերջի կոնցենտրացիաներով:  Միջին pH- ը NaOH- ի միջոցով կարգավորվեց 9-ի:  Մաքուր մշակույթ ստանալու համար մշակույթի հեղուկը նոսրացավ `նույն ագարի միջավայրի մակերեսին աճելով: Գենոմային ԴՆԹ-ի մեկուսացում 16S ՌՆԹ գեների ուժեղացում (ՌՆԹ): Մեկուսացված մշակույթներից գենոմային ԴՆԹ-ի մեկուսացումը կատարվել է ըստ մանրէների ԴՆԹ-ի մեկուսացման CTAB ուղեցույցի (Բրյախանով, 2012):  Մեկուսացված գենոմիկ ԴՆԹ-ն օգտագործվել է 16S ԴՆԹ-ի հաջորդականությունների 27-1492 հատվածների PCR ուժեղացման համար (ARKTIK ջերմային ցիկլեր):   16SF (5'-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ') և 16SR (5'GAAAGGAGGTGATCCAGCC-3') ունիվերսալ օլիգոնուկլեոտիդային պրայմերներ օգտագործվել են բակտերիալ 16S RNA վերարտադրելու համար:   25 մկլ վերջնական արձագանքման խառնուրդը բաղկացած էր 5-100 նն ԴՆԹ-ից, 2.5 մկգ 10x բութարից, 0.8 մմ ԴՆԹ-ից, յուրաքանչյուր պրայմերի 0.5 մկմ (10 մմ վերջնական ծավալ), 0.5 Մ Salsa ԴՆԹ պոլիմերազից (Նիդեռլանդներ):  PCR- ն սկսեց նախնական փոխարկումով 95˚C, 5 րոպե, շարունակվեց 30 անընդմեջ ցիկլեր. Փոխակերպում (94 բն C, 3 րոպե), այբբենարան այրում (54 ˚C, 30 վայրկյան), շղթայի սինթեզ (72 ˚C, 1 րոպե) ,  Ռեակցիան ավարտվում է վերջնական շղթաների սինթեզով 72 ° C ջերմաստիճանում 10 րոպե, 4 ° C ջերմաստիճանում:   Արդյունքում առաջացած ամպլիկոնները ներկայացվել են 1% ագարոզայի գելում `եթիդիում բրոմիդի հետ ներկելով: Հաջորդականացում և ֆիլոգենետիկ վերլուծություն: Բակտերիալ 16S RNA ամպլիկոնների հաջորդականությունը կատարեց Մակրոգենը (Հյուսիսային Կորեա):  ԴՆԹ-ի հաջորդականության արդյունքում ստացված տվյալները վերլուծվել են «BioEdit 7.2.6» ծրագրաշարի միջոցով:  16S RNA հաջորդականությունները համեմատվել և համեմատվել են GenBank- ի այլ 16S RNA հաջորդականությունների հետ `օգտագործելով NCBI- ի տեղական գծի որոնման գործիքը (« BLAST »):   Ֆիլոգենետիկ վերլուծության համար անհրաժեշտ տոհմը և ֆիլոգենետիկ ծառը կառուցվել է օգտագործելով ClustalW և հարակից նուկլեոտիդների միաձուլման մեթոդը MEGA 7-ում [5]: Մշակաբույսերի աճը տարբեր ջերմաստիճանի և pH պայմաններում: Տարբեր մանրէային ջերմաստիճաններում, տարբեր pH տարբեր արժեքներով, մեկուսացված շտամները աճեցվել են համապատասխան սննդարար միջավայրում (R2A) 25˚C, 30˚C, 37˚C և 55˚C կամ R2A պարենային միջավայրերում ՝ pH արժեքներով 6 -12 Մշակույթների աճի ինտենսիվությունը որոշվեց 1-3 օր հետո օպտիկական խտությամբ (λ = 595 նմ, KFK-3- «ZOMZ»): Cr (VI) նվազագույն արգելակիչ կոնցենտրացիաների որոշում (CR) CR (VI) վերականգնման կարողության որոշում: Քրոմի (VI) նվազագույն արգելակիչ կոնցենտրացիաների որոշումը մեկուսացված քրոմակայուն մանրէների համար իրականացվել է R2A միջավայրում, որը պարունակում է 1-250 մմ Cr (VI) 37 ° C ջերմաստիճանում մանրէների աճից հետո 1-7 օրվա ընթացքում:  Որոշելու համար, որ մեկուսացված շտամները վեցվալենտ քրոմը վերականգնեն, բակտերիաները նախամշակվել են 0,5-2 մմ Cr (VI) հեղուկ R2A հեղուկ միջավայրում 37 ° C (150 ° C) 24 ժամվա ընթացքում:  Աճելուց հետո մշակույթի հեղուկը 5 րոպե ցենտրիֆուգացվեց 13500 rpm- ով, որից հետո ավելցուկի մեջ Cr (VI) կոնցենտրացիան չափվեց կոլորիմետրիկ մեթոդով [6]: Քրոմատակայուն մանրէների մեկուսացում և նույնականացում: Արծվի պոչամբարի նմուշներից կայուն, լորձաթաղանթ, կլոր, հարթ ալիքային եզրերով մեկուսացվել են քրոմակայուն, սպիտակ թափանցիկ aerobic, catalase-oxidase- դրական դրական մանրէներ:  Ըստ Գրամի, մեկուսացված մշակույթները ձողաձև, էնդոսպոր արտադրող բջիջներ են, որոնք ներկված են էնդոկրինով: Մեկուսացված բացիլերը բացահայտելու համար մեկուսացվել է գենոմային ԴՆԹ-ն, որն օգտագործվել է որպես 16S RNA գեների PCR ուժեղացման ձևանմուշ:  16S RNA գենի ամպլիտուտները հաջորդականացվեցին, և ստացված նուկլեոտիդային հաջորդականությունները մշակելուց հետո դրանք համեմատվեցին այլ GenBank 16S RNA հաջորդականությունների հետ `օգտագործելով NCBI- ի Տեղական խմբաքանակի որոնման գործիքը (BLAST):  Արդյունքները ամփոփված են Աղյուսակ 1-ում: 16 S RNA- ի մշակույթ Երկարություն (nz) Ֆիլոգենետիկ վերարտադրություն, կուտակման թիվ Նմանություն Աղյուսակ 1. Մշակույթների նույնականացում 16S ՌՆԹ ԴՆԹ-ի հաջորդականությունների BLAST վերլուծության միջոցով: Արդյունքները ցույց են տալիս NA3-1, NA3-2, NA4 և NA6 շտամների նմանությունը (98-99%) Bacillus pumilus- ի և 99% NA7 շտամի նմանությունը Bacillus nealsonii- ի:   Մեկուսացված շտամների ֆիլոգենետիկ ծառը կառուցվել է մեկուսացված շտամների տոհմը որոշելու համար `օգտագործելով GenBank սեռի Bacillus այլ անդամների 16S ԴՆԹ հաջորդականությունները (Նկար 1): Escherichia coli- ն օգտագործվել է որպես հեռավոր տեսակ `արմատային ֆիլոգենետիկ ծառ ստանալու համար | NC_018658 | 16S ՌՆԹ լարվածության հաջորդականությունը: Գծապատկեր 1. Սերտորեն առնչվող շտամների ֆիլոգենետիկ ծառ ՝ համաձայն 16TRNA գենի վերլուծության:  Սանդղակը համապատասխանում է յուրաքանչյուր 100 նուկլեոտիդում 2 նուկլեոտիդների տարբերությանը:  Թվերը ցույց տվեցին ճյուղավորման ճշգրտության հուսալիությունը, որը որոշվեց «Bootstrap» վերլուծության միջոցով: Չնայած BLAST վերլուծության արդյունքները ցույց են տալիս NA3-1, NA3-2, NA4, NA6, NA6 և NA7 շտամների նմանությունը B. pumilus- ին և B. nealsonii- ին, ֆիլոգենետիկ ծառում միայն NA4 շտամը մոտ է B. pumilus- ին:  Theառի մեջ NA3-1 շտամը գտնվում է մեկ մասնաճյուղում `B. safensis- ով, NA3-2- ը և NA6- ը` B.altitudinis- ով, և NA7- ը `B. շրջանաձեւերով:   Տվյալների անհամապատասխանությունը թույլ է տալիս NA3-1, NA3-2, NA6 և NA7 շտամները համարվել որպես Bacillus սեռի նոր տեսակներ կամ ենթատեսակներ:   Նշված վարկածը հաստատելու համար անհրաժեշտ է ավելի խորը ուսումնասիրություններ կատարել: Որոշ Bacillus մանրէներ, ինչպիսիք են B. brevis- ը (մեկուսացված է Ութար Պրադեշի Ունաո շրջանի կաշվե գործարանից), B. cereus և B. pumilus, 6], B. subtilis և B. sphaericus (մեկուսացված ածխի հանքաքարերից Հնդկաստանի Անդաման շրջանի Ուտար Պրադեշ նահանգի և օձային հողերը [9, 10]) բնութագրվել են քրոմատի բարձր կայունությամբ ՝ քրոմատը վերականգնելու ունակությամբ: Արծվանիկի պոչամբարի նմուշից մեկուսացված հինգ քրոմապատ դիմացկունների համար որոշվել են առավելագույն ջերմաստիճանը և pH- ի արժեքները:  Արդյունքները ցույց են տալիս, որ բոլոր շտամները mesophilic են, ընդունակ են աճել 25-37 ° C ջերմաստիճանում, բայց ցույց են տալիս առավելագույն աճ 37 ° C ջերմաստիճանում:  Բոլոր շտամները կարողացան աճել pH արժեքների լայն տիրույթում (6-12), բայց Bacillus sp. NA3-1 առավելագույն աճն արտահայտվում է pH 8-ում, B. pumilus NA4 շտամում `pH 8-9, Bacillus sp. NA6 և NA7 շտամներ. PH 9 և Bacillus sp. NA3-2 լարվածություն pH 9-10-ով: Cr (VI) նվազագույն արգելակիչ կոնցենտրացիաների որոշում (MAC) և մանրէներից քրոմատի վերականգնման ունակություն: Արծվանիկի պոչամբարի նմուշից մեկուսացված կայուն քրոմատ կայուն bacilli- ի Cr (VI) նվազագույն արգելակիչ Cr (VI) որոշելու համար մանրէներն աճեցվել են 1-250 մմ քրոմատային միջավայրում `առավելագույն աճի ջերմաստիճանում (37 ° C) և pH (pH 9) ,  Արդյունքները ցույց են տալիս, որ Bacillus sp. Մեկուսացված պոչամբարի թափոններից: NA3-2, NA6 և B. pumilusNA4 շտամների համար Cr (VI) նվազագույն արգելակիչ կոնցենտրացիան 2.5 մմ է, Bacillus sp. NA3-1 շտամի համար `9,2 մմ, և Bacillus sp. NA7 շտամի համար `250 մմ: Մի շարք գիտնականներ ցույց են տվել, որ Cr (VI) նվազագույն արգելակիչ կոնցենտրացիաները B. brevis, B. cereus, B. pumilus և B. subtilis- ի համար համապատասխանաբար 180 մկգ / մլ, 30 մմ, 1000 մկգ / մլ և 900 են: մգ / լ [610]:   Bacillus sp. NA7 շտամը ցուցաբերում է բարձր դիմադրություն թունավոր քրոմի բարձր կոնցենտրացիաների նկատմամբ ՝ նկարագրված bacilli- ի համեմատ: Գրականությունից հայտնի է, որ քրոմատային իոններին մանրէների կայունությունը կարող է պայմանավորված լինել քրոմատ-ռեդուկտազային ակտիվությամբ:  Cr (VI) վերականգնումը կարող է տեղի ունենալ ինչպես aerobic, այնպես էլlanobaric պայմաններում ՝ կապված բջջային թաղանթի կամ բջիջներում լուծվող ֆրակցիայի հետ [2]: Առավել քրոմատիկորեն կայուն Bacillus sp. NA7 շտամ, աերոբիկ պայմաններում վերջին վեցվալենտ քրոմի վերականգնման կարողությունը: Հետևաբար, այս մանրէը նախօրոք աճեցվել է 0.5-2 մմ Cr (VI) հեղուկ միջավայրում, որը պարունակել է R2A 37 ° C ջերմաստիճանում 24 ժամվա ընթացքում, որից հետո չափվել են մանրէների կախոցի օպտիկական խտությունը և մնացորդում քրոմատային իոնների կոնցենտրացիան: կոլորիմետրիկ մեթոդով: յ: n: ւ: o: թ: ւ: o: տ: խ: n: ա k: ա k: ի: տ: p: Oh: մ: n: քրոմատ ԼԱՎ: ի: տ: ա մ: o: r: q: n: ի: ա դ: r: o: ց: ա n: M: յ: n: ա ի: ց: ա r: տ: n: ե: ց: n: o: k: Քրոմատի սկզբնական կոնցենտրացիան (մՄ) սննդի միջավայրում Նկար 2. B. pumilus NA7 շտամի աճ Cr Cr (VI) վերականգնողական կարողությունը սննդարար միջավայրում: Արդյունքները ցույց են տալիս, որ սննդարար միջավայրում Cr (VI) կոնցենտրացիաների ավելացումը ճնշում է ինչպես բակտերիաների աճին, այնպես էլ քրոմատառադուկտազի ակտիվությանը (Նկար 2):  Այսպիսով, Bacillus sp. NA7 շտամը վերականգնվում է մինչև 50% քրոմատ ՝ 24 ժամվա ընթացքում, միջավայրում 0,5 մմ քրոմատի սկզբնական կոնցենտրացիայի դեպքում, և 1% և 2 մմ 36% և 25%: Mangayarkas- ը և մյուսները մեկուսացրել են B. chromate կայուն շտամը B. Subtilis և նկարագրել դրա քրոմատային ռեդուկտազի ակտիվությունը [11]:  Նրանք ցույց տվեցին, որ 144 ժամ մշակումից հետո B. subtilis շտամը կարողացավ հեռացնել 71%, 62% և 27% վեցվալենտ քրոմը 0,1, 0,5 և 1 μM քրոմատ պարունակող միջավայրից [11]:   Պաուլ և Պաուլը մեկուսացրեց Անդաման Հնդկաստանի քրոմով աղտոտված հողերը և նկարագրեց մոտ 34 քրոմատակայուն մանրեային շտամներ, որոնք ունակ են aerobic պայմաններում վերականգնել տարբեր աստիճանի վեցվալենտ քրոմ երեքվալենտ: Այսպիսով, B. sphaericus- ն իր 48 ժամվա ընթացքում կարող է աճել> 80% Cr (VI), երբ աճում է մինչև 800 մգ / լ քրոմատ պարունակող միջավայրում: Bacillus sphaericus- ը մեկուսացվել է անդամ տարածաշրջանի օձային հողերից, որը 48 ժամվա ընթացքում վերականգնում է վեցվալենտ քրոմի ավելի քան 60% -ը 20 մգ / լ քրոմի լուծույթում:   Cr (VI) վերականգնելու ունակությունը նկարագրվել է նաև տարբեր շրջանների մի շարք մեկուսացված տակառներում:   Այսպիսով, B. brevis, B. cereus, B. pumilus և B. subtilis տեսակները ի վիճակի են հեռացնել քրոմի 75-80% թունավոր կոնցենտրացիաները միջինում 0,1-1 մմ Cr (VI) սկզբնական կոնցենտրացիաներում: Այսպիսով, համեմատելով գրականության տվյալների հետ, կարելի է եզրակացնել, որ Bacillus sp. NA7 շտամը խոստումնալից է քրոմատով աղտոտված միջավայրի կենսազտման գործընթացում կիրառման առումով: Աղտոտված հողից և հանքարդյունաբերությունից / մետաղագործական պինդ թափոններից վեցվալենտ քրոմի ԳՐԱԿԱՆՈՒԹՅՈՒՆ:  ANies, DH & Silver S. (խմբ.) Metանր մետաղների մոլեկուլային մանրէաբանություն: Բեռլին, Հայդելբերգ: Քրոմատի կենսազերծում:  Cr (VI) ազդեցության թերմոդինամիկական վերլուծությունը սուլֆատի վրա Heանր մետաղների մանրէաբանության միկրոկենսաբանության մենագրությունների մենագրության մեջ:   Springer Berlin Heidelberg, [5] Tamura K., Stecher G., Peterson D., Filipski A., Kumar S., MEGA6:   MolecularEvolutionary Genetics վերլուծություն 6.0 տարբերակ, Mol Biol Evol.  Հատոր 12. Միացյալ Նահանգներ, 2013 թ., Աբրահամյան NELLIARTSVANIK TECHNIQUE նմուշի արդյունահանում և նկարագրություն `թափանցիկ քրոմապատ կայունացվող քրոմատի 16-ը, հիմնաբառեր. ։

Արծվանիկի  պոչամբարը  Հայաստանի  ամենամեծ  պոչամբարներից  է,  որտեղ  թափվում են կենդանի օրգանիզմների համար թունավոր տարբեր մետաղներ և այլ  միացություններ։
   Ներկայացված  աշխատանքի  նպատակը  քրոմատ  կայուն  մանրէների մեկուսացումը, նույնականացումը և դրանց Cr(VI)-ը վերականգնելու ունակության որոշումն է։
  Արծվանիկի պոչամբարի նմուշից մեկուսացվել և նույնականացվել են  են Bacillus sp. (NA3-1, NA3-2, NA6 և NA7) և B. pumilus (NA4) տեսակների պատկանող  քրոմատ կայուն ալկալոֆիլ մանրէներ։
  Ցույց է տրվել բացիլների ունակությունն աճի  ջերմաստիճանային (25-55° C) և pH-ի (6-12) լայն տիրույթում և կայունությունը Cr(VI)  բարձր  կոնցենտրացիաների  (2.5-250  մՄ)  պայմաններում։
   Առավել  բարձր  կայունություն  դրսևորել  է  Bacillus  sp.  NA7  շտամը,  որի  համար  նվազագույն  արգելակող  կոնցետրացիան կազմել է 250 մՄ։
  Հաստատվել է Bacillus sp. NA7 շտամի քրոմատ  ռեդուկտազային ակտիվությունը։
