XANIN OXIDASE անհատների շահագործումը Գլխում `ՓՈՐՁԱԳԻՏԱԿԱՆ ԻՍԿԵՄԻԱՊԻԵՄԻՆՆԵՐ` զտիչների տեսքով:   Նախորդ ուսումնասիրության ընթացքում մենք ցույց տվեցինք, որ CO (քսանթին օքսիդազ) արգելակող ալոպուրինոլը կարողացավ կարգավորել լյարդի հյուսվածքում պուրինի կատաբոլիզմը [1] ՝ արգելափակելով բջիջների տարածումը [2]: Ալոպուրինոլի հետ կապված հազվագյուտ անբարենպաստ ռեակցիաները կարող են ճակատագրական լինել:   Նման ռեակցիաների արդյունքում նկատվում է կարմրություն և բորբոքային պրոցեսների խթանում, որոնք զուգորդվում են էոզինոֆիլների, լեյկոցիտների, տենդի, լեյկոցիտոզների, ինչպես նաև երիկամների վնասվածքների զարգացմամբ:   Ալոպուրինոլից առաջացած օքսիպուրինոլն ընդունակ է առաջացնել HLA-B 58 բարդ միացություններ: 1 գենով կոդավորված գենով:  Այս բարդույթը խթանում է իմունային համակարգի պատասխանը պատասխանը նպաստում է T- բջիջների ձեւավորմանը և բացասական կողմնակի ազդեցությունների առաջացմանը [3]: Այդ պատճառով փորձարարական պայմաններում, ինչպիսին կլինիկայում է, անհրաժեշտ է օգտագործել այլ ինհիբիտորներ:  Մեր կողմից հայտնաբերված CO նոր ինհիբիտորը ՝ պիրիդոկինը [4], կարող է լինել լավագույն բաղադրությունը հետխորհրդային պայմաններում, որը չունի կողմնակի բարդություններ, ինչպես արդեն ընդունված է բժշկության մեջ: Օգտագործելով բջջային կուլտուրա, մենք պարզեցինք, որ պիրիդոկինը ի վիճակի է խթանել բջիջների բազմացումը ինչպես նորմալ, այնպես էլ պաթոլոգիական պայմաններում: Մեր աշխատանքում մենք գնահատեցինք պիրիդոկինի նեյրոպրոտեկտիվ հատկությունները պերօքսիդի առկայության դեպքում «in vitro» փորձերում ՝ օգտագործելով սաղմնային մշակույթ, որը պարունակում է նյարդային բջիջներ: Պիրիդոկինի պաշտպանիչ հատկությունները նկատվել են նաև փորձարարական կաթված առնետների մոտ: Մեթոդներ 1. Կենդանիների ցավազրկում, անզգայացում, էվթանազիա Առնետների մեջ ներարկվել է 10 մգ / 100 գ պենտոբարբիտալ:   Ստեղծեք էվթանազիա `օգտագործելով անզգայացնող միջոցների մեծ չափաբաժին: 2. Մարդու առաջնային ուղեղից ստացված բջիջների կուլտուրան: Փորձի համար անհրաժեշտ բոլոր գործողությունները կատարվել են համաձայն Հելսինկյան հռչակագրի:  Մարդու սաղմի հեռացումը կատարվել է ՝ հաշվի առնելով կանանց համաձայնությունը:  Մենք օգտագործել ենք 12 շաբաթական սաղմնային ուղեղ ՝ որպես փորձարարական կենսաբանական հիմք:  Արդյունքում առաջացած ուղեղը մի քանի րոպե տեղադրվում է նեյրոբազալ սննդարար միջավայրում, որը պարունակում է 0,05% շիճուկային ալբոմ: Կենսաբանական փորձարարական հումքը տեղափոխվում է ջերմոստատիկ պայմաններում (t = 4C):  Կենսաբանական հումքը տեղափոխվում է լաբորատորիա և ինկուբացվում է 370 ° C ջերմաստիճանում 20 րոպե լուծույթի մեջ, որը պարունակում է 0,05% շիճուկային ալբումին և 0,13% տրիպսին:   Ուղեղի հյուսվածքը մանրացված է Pasteur pipette- ի օգնությամբ:   15 րոպե ցենտրիֆուգումից հետո ստացված նստվածքը (G = 5000) լուծվում է 1% շիճուկային ալբումին պարունակող նեյրոբազական սննդարար միջավայրում, այս գործընթացը կրկնվում է երեք անգամ: Վերջնական բջջային մասը ցանվում է 35 մմ մանր ափսեներում, որոնք նախապես պատված են պոլի-լ-լիզինի (Sigma) լուծույթով, որը պարունակում է նաև 0,09% Na2HPO4, 1% գլյուկոզա, 0,04% KCl, 0,06% KH2PO4, 0,4 % MgSO 7H20 և 0.001% ջենտամիցին սուլֆատ:   Մեկ օր անց միջավայրը ճառագայթվում է նոր նյարդաբազային միջավայրով, որը պարունակում է 2% B27 (Gipco):  Բջիջների քանակը հաշվարկվել է 7-րդ օրը: 3. Բջիջները տրիպան կապույտով ներկելը: Բջջային կախոցը լուծարվում է HBSS միջավայրում:  0.2 մլ բջջային կասեցման լուծույթին ավելացնել 0.3 մլ HBSS, 0.5 մլ 0.1% տրիպան կապույտ:   Բջիջները ներկվում են ներկում հինգ րոպե, որից հետո մոտ մեկ μl բջջային ներկ պարունակող կախոցը տեղափոխվում է հեմատոցիտոմետր (Գորյայի պալատ):  Այս պայմաններում մեռած բջիջները կապույտ են ներկում:  Հարկ է նշել, որ 1 սմ 3 բջիջի մակերեսը համապատասխանում է 0,1 μl լուծույթի, այսինքն ՝ 1 սմ 3 ծավալում բջիջների քանակը հաշվելով ՝ կարելի է խոսել մեկ μl լուծույթի բջիջների քանակի մասին [6]: 4. Բրեդֆորդի մեթոդով սպիտակուցների քանակական քանակի լուծարում Կումասի ադամանդը (G -250) (100 մգ) լուծարել 50 մլ 95% էթանոլի մեջ, ավելացնել 100 մլ 85% (կշիռ և ծավալ) ֆոսֆորական թթու, ապա ավելացնել ավելի շատ ջուր ընդհանուր ծավալին: , հասնում է 1000 մլ-ի, որից հետո մենք զտվում ենք թափոններով # 1 (watman # 1):  Ինկուբացիան 20 րոպե:   Հետո, օգտագործելով Carry 80 (Agilent Technologies, ԱՄՆ) սպեկտրաֆոտոմետրը, մենք օգտագործում ենք 590 նմ ալիքի երկարություն `կենսաբանական լուծույթում սպիտակուցի կոնցենտրացիան որոշելու համար: 5. hydրածնի պերօքսիդի պատճառած ուղեղի վնասվածքի մոդելը 3% ջրածնի պերօքսիդի լուծույթը ներարկվել է ներմկանային եղանակով 5 մկլ-ով `սահմանափակ, կետային կռանիոտոմիայից հետո:   Ներարկումն իրականացվելու է գլխուղեղի հետևյալ կոորդինատներում. 2 մմ հետևից ՝ բրեգմայից, 3 մմ կողային ՝ միջին գծից, 2 մմ ՝ գանգի ներքին մակերեսից ներքև:   Ներարկումն իրականացվելու է ստերեոտոքսիկ շրջանակի միջոցով: 27 համարի ասեղը, որի կեռը սրված է 30 աստիճանից ցածր, նշված դիրքում իջեցվել է ուղեղի պարենխիմա:  Ներարկումից հետո ասեղը մնաց ուղեղի մեջ 2 րոպե, որից հետո այն դանդաղ հանվեց:  Վիրահատությունից հետո փոսը փակվել է ոսկրային մոմով, կտրվելը, իսկ կենդանին վերադարձվել է վանդակը:   Կենդանին կկարողանա օգտագործել անվճար ջուր և կեր:   Ազատ ջուր և սնունդ օգտագործելու ունակություն:   Արյան-ուղեղի արգելքի վնասման աստիճանը որոշվել է Էվանս կապույտ ներկի միջոցով, որը կիրառվել է 4 մգ / կգ դեղաչափով և կենդանիներին տրվել է փորձի ավարտից 2 ժամ անց (Oie, Ono et all , 2007): 6. Վիճակագրական վերլուծություն Բոլոր տվյալներն արտահայտվում են որպես միջին ± SEM:  Վիճակագրական ճշգրտությունը վերլուծվել է ՝ օգտագործելով «ՎԱՐՅԱՆՆԵՐԻ ՄԵԿ ՈՒAYԻ ՎԵՐԼՈՒՈՒԹՅՈՒՆ (ANOVA)»:  Տվյալները վիճակագրորեն հավաստի են համարվել, երբ p <0,05: Հաշվարկները կարող են իրականացվել «Sigma Stat» կամ «Graphprism» ծրագրերի միջոցով: Ստացված տվյալները 1. Մշակույթում «in vitro» բջիջների հաշվարկը Սննդարար միջավայրում ջրածնի պերօքսիդ ավելացնելուց հետո մարդու ուղեղի առաջնային սաղմնային մշակույթը պահպանվեց 7 օրվա ընթացքում:   Յոթերորդ օրվա ընթացքում մշակույթի միջավայրին ավելացվել է 3% ջրածնի պերօքսիդ. բջջային կուլտուրան պահպանվել է 24 ժամվա ընթացքում:  Հաշվարկվել է մանրադիտակի դաշտում չներկված բջիջների քանակը:  Մանրադիտակի ուսումնասիրությունների ընթացքում բոլոր պայմանները պահպանվել են նույնը: մանրադիտակի սեղանի բարձրությունը, լույսի ուժգնությունը և այլն:   Վերահսկիչ խմբի (2680.00 ± 45.34) համեմատ, գերօքսիդացված մշակույթի դաշտում բջիջների քանակը զգալիորեն կրճատվել է (1631.89 ± 111.77) (Նկար 1 Ա):  Ալոպուրինոլի ավելացումը պերօքսիդից 15 րոպե առաջ (1852,38 ± 94,79) և 15 րոպե հետո (1950,38 ± 33,67) հետո զգալիորեն և կայունորեն մեծացնում է այդ ցուցանիշները:   Հետաքրքիր է, որ պիրիդոկինի ավելացումը շրջակա միջավայրին նպաստում է նաև բջիջների կենսունակությանը:   Ավելին, պերօքսիդից հետո վերջինիս ավելացումը շրջակա միջավայրում ցույց է տալիս ավելի ուժեղ պաշտպանություն (2392.38 ± 104.01), (p <0,05), քան դրանից հետո (2106,88 79,64):   Այսպիսով, բջջային մշակույթի սննդանյութերի մշակման միջավայրում ջրածնի պերօքսիդի ավելացումը կտրուկ նվազեցնում է բջիջների քանակը `համեմատած վերահսկիչ խմբի հետ:   Նախկինում ավելացված պիրիդոկինը, ինչպես ջրածնի պերօքսիդից հետո, ունի նեյրոպրոտեկտիվ հատկություններ և օգնում է պահպանել վերջիններս: Գծապատկեր 1. Մշակույթի միջավայրում ջրածնի պերօքսիդի ավելացումից հետո «in vitro» բջիջների քանակի հաշվարկ:  Փորձերի ընթացքում օգտագործվել է Boeco մանրադիտակ ՝ լրացուցիչ փուլային հակապատկերային ոսպնյակների համակարգի հետ համատեղ (Գերմանիա, 60x1,25x40 խոշորացում):  Բջիջներն աճեցվել են պոլիլիզինով ծածկված ապակու վրա:  Մենք օգտագործել ենք neurobasal / B27- ը որպես սննդարար լուծույթ կամ միջավայր:  Պատկերները վերլուծվել են «Pixcavator 4» ծրագրի միջոցով:  A. բջջային մշակույթի մանրանկարներ, որտեղ նշանը համապատասխանում է 10 նանոմետրի:  Բ. 7-րդ օրվա ընթացքում հաշվարկված բջիջների քանակը:  Վերջնական հաշվարկների համար օգտագործվել է «T-student»: 2. Մահացած բջիջների քանակի հաշվարկը պերօքսիդի ազդեցությունից 24 ժամ անց 24 ժամ տևած սթրեսից հետո մենք հաշվարկեցինք մահացած բջիջների քանակը ՝ դրանք կապույտ ներկելով: Hydրածնի պերօքսիդը կտրուկ ավելացրեց մեռած բջիջների քանակը (740,33 ± 86,16) համեմատ վերահսկող խմբի (245,90 ± 31,72), (p <0,05), (Նկար 2):   Ալոպուրինոլի ավելացումը պերօքսիդից առաջ (556,78 ± 16,17), ինչպես նաև պերօքսիդից հետո (536,70 ± 49,79) նվազեցրեց բջիջների մահը:  Պիրիդոկինի ավելացումը պերօքսիդից առաջ (231,50 ± 53,77) շատ ավելի արդյունավետ էր (630,22 ± 71,84) (p <0,05, ԱՆՈՎԱ ՄԵԿ ՈՒAY):   Բջիջները ներկվել են 0,04% տրիպան կապույտ ներկով, և վերջիններիս քանակը հաշվարկվել է նույն քանակությամբ `նույն« Pixcavator 4 »ծրագրի միջոցով: Ըստ փորձարարական տվյալների, ջրածնի պերօքսիդից առաջ ալոպուրինոլի օգտագործումը, ինչպես նաև պերօքսիդից հետո շրջակա միջավայրին նապիրիդոկինի ավելացումը կանխում է բջիջների մահը: Ալոպուրինոլի և պիրիդոկինի համար in vivo փորձերի փորձարկում Իշեմիկ կաթվածը, ինչպես նաև հեմոռագիկ կարող են սրվել մի շարք լրացուցիչ մեխանիզմներով, ներառյալ ազատ ռադիկալների ձևավորումը, ինչպիսին է հեմոգլոբինի արտանետումը: Մեր փորձերի ընթացքում մենք մոդելավորել ենք ինսուլտի ժամանակ ազատ ռադիկալների ձևավորման փուլը:   Այդ նպատակով մենք կատարեցինք ջրածնի պերօքսիդի ներուղեղային ներարկում:   Լաբորատոր սպիտակ առնետների ներարկումից հետո պիրիդոքսին ներարկվելով ներարկվելով ներարկվել է, մյուս խմբերը ալոպուրինոլ են ստացել խմելու ջրի միջոցով 12-ից 6 օր:  Տասներկու օր անց կենդանիներին ներարկեցին «Էվանս Բլու» ներկ, վերջիններս գլխատվեցին ներսրտային պերֆուզիայից հետո, ներկն արդյունահանվեց ուղեղի պարենխիմայից:  Կենդանիների միայն տասնյոթ տոկոսը վերապրեց պիրիդոկինի մեծ չափաբաժինները:  Պիրիդոկինի ցածր դոզանները, ինչպիսին է նալոպուրինոլը, կանխում էին կենդանիների մահացությունը:   Ավելին, ալոպուրինոլը, ինչպես նապիրիդոքսինի ցածր դոզան, կանխում էր հեմատոենսեֆաֆալոպաթիան և Էվանս Կապույտը ներկերի թափանցելիությունը ուղեղի պարենխիմայի նկատմամբ (Նկար 3): Նկար 3. Էվանսը Առնետի պարենխիմայի կապույտ ներթափանցումը:  Ա. Displayուցադրել պատկերներ, որոնք ցույց են տալիս յուրաքանչյուր խմբի հատուկ ներկանյութերի թափանցելիությունը գլխուղեղի պարենխիմային:  Բ. «Էվանս Կապույտ» ներկի քանակի որոշում `վերահաշվարկված 1 գ գործվածքների վրա: Եզրակացություններ քննարկում Տվյալների քննարկում Այսպիսով, մենք եկանք այն եզրակացության, որ բջջային մշակույթի սննդարար միջավայրում ջրածնի պերօքսիդի ավելացումը կտրուկ նվազեցնում է բջիջների քանակը ՝ համեմատած վերահսկիչ խմբի հետ:   Բացի այդ, պիրիդոկինը, ինչպես ջրածնի պերօքսիդից հետո, ունի նեյրոպրոտեկտիվ հատկություններ ՝ նպաստելով վերջինիս քանակի պահպանմանը: Փորձը ցույց է տվել, որ ջրածնի պերօքսիդից առաջ ալոպուրինոլի օգտագործումը, ինչպես նաև պերօքսիդից հետո շրջակա միջավայրին նապիրիդոկինի ավելացումը կանխում է բջիջների մահը: In vivo թեստերը հաստատեցին մեր նախորդ փորձերի ընթացքում ստացված տվյալները:   Պիրիդոկինը, հսկիչ խմբի համեմատ, կանխում է արյան ուղեղի արգելքի վնասվածքների առաջացումը և «Էվանս Բլու» ալբոմային համալիրի ներթափանցումը ուղեղի պարենխիմայում: Գրականության կարգավորում: Բնական գիտությունների էլեկտրոնային ամսագիր, 2013. 2 (21):  էջ 17-21. Մշակույթ: Կենտրոնական նյարդային համակարգի գործակալները բժշկական քիմիայում, 2013. 13 (2):  էջ 108-13.3. Նամականիշ, LK, RO Day և J. Yun, Allopurinol գերզգայունություն:  ուսումնասիրելով պատճառը և նյարդաբանությունը և կենսաբժշկական ճարտարագիտությունը, 2014. 2:  էջ 81-86.2013 թ. 1 (2)  էջ 28-34. Փոխպատվաստում, 1964 թ. 2 (նոյ.)  էջ 685-694.7. Քրյուգեր, Նյու երսի, Բրեդֆորդի մեթոդը սպիտակուցների քանակացման համար: Մեթոդներ Mol Biol, 1994. 32:  էջ T. Avetisyan, QE Danielyan, A. Ս. OXANTASE OXIDASE HEAD փորձնական իշեմիայի հակաօքսիդիչ հատկություններով օտարվող ռեզիդենտների կիրառումը գլխարկով, հիմնաբառեր. ։

Նախորդ աշխատանքում մենք ցույց տվեցինք, որ ալոպուրինոլը, որը հանդիսանում է  ՔՕ-զի  (քսանտին  օքսիդազի)  արգելակիչ,  ընդունակ  է  խթանել  բջջային  պրոլիֆերացիան։
   Մեր  կողմից  հայտնաբերվել  է  նաև  մեկ  այլ  նոր  ՔՕ-զի  արգելակիչ՝  պիրիդոքսինը։
   Մեթոդներ։
   Կիրառվել  է  մարդու  ուղեղից  ստացված  առաջնային  բջջային  մշակույթը։
   Ջրածնի  3%  պերօքսիդի լուծույթը ներուղեղային ուղիով սրսկվել է սահմանափակ, կետային կրանիոտոմիայից  հետո`հանդիսանալով  էքսպերիմենտալ  ինսուլտի  մոդել։
   Եզրակացություններ  և  տվյալներ։
   Մենք  եզրակացրեցրինք,  որ  պիրիդոքսինը  ցուցաբերում  է  նյարդապաշտպանիչ  հատկություններ և կանխարգելում է հեմատոէնցեֆալիկ պատնեշի վնասումը։
