Մեկուսացված է լիտոֆիտիկ քարաքոսից ACINETOBACTER SP. A1 ԷՆԴՈՖԻՏԻԿ Մանրէազերծման փուլի բնութագրերը քարաքոսերը գոյություն ունեն կայուն օրգանիզմներ, որոնք բաղկացած են սնկային (միկոբիոնտ) և ֆոտոավոտրոֆիկ ջրիմուռների (ֆոտոբիոնտ) բաղադրիչներից [1]: Վերջին գիտական ​​ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ բացի միկոբիոնատ-ֆոտոբիոնտ բաղադրիչից, քարաքոսերի թալուսը պարունակում է էնդոֆիտիկ մանրէների բազմազանություն:  Էնդոֆիտային մանրէները էկոլոգիական մեծ նշանակություն ունեն կենսաբազմազանության մեջ, հատկապես համակեցության մեջ ազոտի ինքնաբավարարություն ապահովելու տեսանկյունից [2, 3]:   Ուցադրվել է, որ քարաքոսերի մեջ կենսաբանորեն ակտիվ նյութերի արտադրությունը պայմանավորված է այս էնդոֆիտ մանրէներով:   Հետևաբար, այդ մանրէների մեկուսացումը և ուսումնասիրությունը կարող են խոստումնալից լինել կենսատեխնոլոգիական գործընթացներում արժեքավոր կենսաբանորեն ակտիվ միացությունների սինթեզի համար [3]:  Քաղցկեղածին նյութերը դարեր շարունակ օգտագործվել են ավանդական բժշկության մեջ `որպես ախտահանիչ, ջերմացնող և ցավազրկող վերքերի համար:  Քարաքոսերն այժմ լայնորեն օգտագործվում են բիոտեխնոլոգիայում հակաբակտերիալ, հակաօքսիդիչ և հակաուռուցքային պատրաստուկներ պատրաստելու համար [4, 2, 5]: Հայաստանի բուսական աշխարհը հարուստ է տարածաշրջանին բնորոշ քարաքոսերով:  Այս աշխատանքի նպատակն էր մեկուսացնել և բացահայտել էնդոֆիտիկ մանրէները Հայաստանի Հանրապետության տարածքում ամենատարածված լիտոֆիտիկ քարաքոսից: Նյութ և մեթոդ:  Ուսումնասիրության առարկա են դարձել Տավուշի մարզից հավաքված լիտոֆիտիկ քարաքոսի նմուշները: Էնդոֆիտ բակտերիաների մեկուսացման համար օգտագործվել է հետևյալ սննդարար միջավայրը (գ / լ). Գլյուկոզա 20, KNO3 1, K2HPO4 0,5, MgSO4 x 7H2O 0,5, NaCl 0,5 CaCO3 1, FeSO4 x 7H2O հետք, ագար-ագար 20. pH - 7.0-7.2.  Նախ մակերեսային աղտոտումները ստերիլիզացնելու համար քարաքոսի թալոնը մի քանի անգամ ողողվել է ստերիլ թորած ջրով և 1 ժամով բուժվել 1000 C ջերմաստիճանի ափսեի վրա:  Այնուհետև մաքրված քարաքոսի նստվածքը ստերիլ պայմաններում հոմոգենացվեց, կասեցվեց ստերիլացված թորած ջրով, և առանձին գաղութներ ստանալու համար կախոցը 103-106 անգամ տարածվեց սպաթուլայի հետ ՝ պետրի ամաններով լցված պինդ միջավայրի մակերեսին օրական 300C ջերմաստիճանում): Բակտերիալ գաղութները բնութագրվում էին իրենց արտաքին բնութագրերով. Ձու, չափ, մակերես, գույն, եզրերի կառուցվածք:   Բջիջների մորֆոլոգիական առանձնահատկությունների շարքում նշվել են ձուն, դասավորությունը, սպորներ արտադրելու կարողությունը:  Մշակույթի ջերմաստիճանի սահմանը որոշելու համար դրանք համապատասխանաբար ինկուբացվել են 30'44 և 37 0C ջերմաստիճանում:  Որպես ածխածնի աղբյուր, Na ցիտրատի, լակտատի, ասպարատի, L-fenylalanine, β-alanine, L-arginine- ի, ինչպես նաև ժելատինազի և հեմոլիտիկ գործունեության էթանոլիզը որոշվելու է ըստ ընդունված մեթոդների [7, 8]: և Ֆիլոգենետիկ վերլուծությունը կատարվել է 16S RNA գենի հաջորդականությունների հաջորդականությամբ:   ԴՆԹ-ի պառակտումը կատարվել է ացետիլտերմեթիլամոնիումի բրոմիդի միջոցով `համաձայն բակտերիալ գենոմիկական ԴՆԹ-ի մասնատման ընդունված մեթոդի [9]:   16S RNA գենը ուժեղացնելու համար գենոմիկական ԴՆԹ-ն (PCR) օգտագործվել է որպես պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայի (ունիվերսալ GAAAGGAGGTGATCCAGCC-3 ') նախաներկերի ձևանմուշ:  Ամպլիկոնները մաքրվեցին GenEluteTMPCR մաքրման հավաքածուի միջոցով (Սիգմա, ԱՄՆ) և դրանց հաջորդականությունը տրվեց ABI PRISM մազանոթային համադրիչով:   Հաջորդականության արդյունքները մշակվել և վերծանվել են ՝ օգտագործելով BioEdit (7.0.5.3) և Chromas Lite (2.1):  Շտամների նույնականացման համար ստացված հաջորդականությունները վերլուծվել են առցանց «BLAST», «NCBI» (http: //blast.ncbi. nlm.nih.gov/Blast.cgi) տիրույթ:   Էֆիլոգենետիկ ծառը կառուցվել է «MEGA 6.06» ծրագրի միջոցով ՝ համեմատելով «Հարևան միանալու» մեթոդի հետ ԳԵՆԲԱՆԿ-ում առցանց հասանելի հաջորդականությունների հետ: Արդյունքներ և քննարկում:  Լիտոֆիտիկ քարաքոսից մեկուսացվել է բակտերիալ մշակույթ, որն ստացել է A1 անվանումը:   Մշակույթը կազմում է համակենտրոն, հարթ պրոֆիլ, հարթ մակերես, ձանձրալի, կաթնագույն, անկանոն գաղութներ:  Բջիջները ձողաձեւ են, ասպորոգեն, շղթաներ են կազմում: 16S RNA գենը հաջողությամբ ուժեղացվեց PCR- ի միջոցով A1 մշակույթից մեկուսացված գենոմային ԴՆԹ-ից և հաջորդականացվեց:   «BLAST» վերլուծության արդյունքները ներկայացված են Աղյուսակ 1-ում:   Ինչպես երեւում է աղյուսակից, A1 մշակույթն ամենամոտ փոխկապակցվածությունն ունի Acinetobacter lwoffii (KX495293) - ի հետ `16S RNA գենի վերլուծության 97% նմանությամբ: Աղյուսակ 1 Մեկուսացված մշակույթի «BLAST» վերլուծության արդյունքները Մեկուսացված Մշակույթ 16 S RNA igen երկարություն (nz) Նմանություն Աստիճան ամենամոտ համընկնում GenBank- ում Ըստ նույնականացման արդյունքների, ֆիլոգենետիկ ծառ է կառուցվել `օգտագործելով BLAST- ի և NCBI տիրույթներում առցանց BL հասանելի նմանատիպ հաջորդականությունները` որպես հղումային հաջորդականություններ (Նկար 1): Նկար 1. A1 մշակույթի ֆիլոգենետիկ դիրքը ծառի մեջ:  Pseudomonas aeruginosa- ն օգտագործվել է որպես հեռավոր ֆիլոգենետիկ ցուցանիշ:  Սանդղակը (0,01) համապատասխանում է 1 նուկլեոտիդային տարբերությանը յուրաքանչյուր 100 նուկլեոտիդների համար: Հաշվի առնելով «BLAST» վերլուծության արդյունքները `հայտնաբերված հատկությունները համեմատվել են Acinetobacter lwoffii- ի բնորոշ տեսակների հետ:  Արդյունքները ամփոփված են Աղյուսակ 2-ում: լարում ֆենտիպիկ աղյուսակ 2 Մեկուսացված մանրէի ֆենոտիպային բնութագրերի համեմատություն Բնութագրերը Աճը. 300C բնութագրեր latելատինի հիդրոլիզը citիտրատի լակտատ ասպարտատի հեմոլիզ L-fenylalanine β-alanine L-arginineEthanol Մեկուսացված մշակույթի աճի օպտիմալ ջերմաստիճանը 300 ° C է, ի տարբերություն 300 ° C ջերմաստիճանի:  Ավելին, ի տարբերություն բնորոշ շտամի, A1 կուլտուրան յուրացնում է ցիտրատը, L- ֆենիլալանին, β- ալանինը, L- արգինինը, հիդրոիզացնում է ժելատինը, բայց յուրացնում է լակտատը և էթանոլը: Լիքենի բիֆիլմ Մշակույթի ֆենոտիպային ախտանիշների ֆիլոգենետիկ վերլուծության արդյունքների հիման վրա կարելի է եզրակացնել, որ Acinetobacter և սեռին պատկանող մեկուսացված մշակույթը հավանաբար նոր տեսակ է: Այդ պատճառով մենք այն անվանել ենք Acinetobacter sp. լարվածություն A1: Մեկուսացված էկոլոգիական նշանակությունը, մասնավորապես, պայմանավորված է էկոհամակարգերում մթնոլորտային ազոտի յուրացմամբ `օքսիդացված կամ նվազեցված ազոտական ​​միացությունների աղբյուրների իսպառ բացակայության պայմաններում:   Acinetobacter սեռը բնութագրվում է դիազոտրոֆիայով, ուստի լիտոֆիտիկ քարաքոսում գտնվող մեր մեկուսացված մանրէը, հավանաբար, կատարում է ազոտի ամրագրման գործառույթ: Մանրէաբանության գործակալներ Ներսում  Քարաքոսի երկրորդային նյութափոխանակություններ. Եդ. Rankovic B. et al., Springer, էջ 81-104. Հակաքաղցկեղային գործունեություն  Քարաքոսի երկրորդային նյութափոխանակություններ. Եդ. Rankovic B. et al., Springer, [4] Crawford SD, (2015) Ավանդական բժշկության մեջ օգտագործվող քարաքոսեր: Ներսում  Lichen Secondary Մետաբոլիտներ: Ներսում  Քարաքոսի երկրորդային նյութափոխանակություններ. Եդ. Rankovic B. et al., Springer, էջ 1-27: Մեկուսացված է քարաքոսերից:  Նրանց բազմազանության գնահատում և կենսասինթետիկ գենի հայտնաբերում [9] Брюханов А. L., Rybak KV, Netrusov AI, մոլեկուլային միկրոկենսաբանություն: Учебник для вузов., М.  Հրատարակիչ ՝ Московского университета, 2012, 480 էջ. Հասմիկ Հունանյան, Ռազմիկ Սարգսյան Մեկուսացված լիտոֆիտիկ քարաքոսից ACINETOBACTER SP. A1 ԷՆԴՈՖԻՏԻԿ ԲԱԿՏԵՐԱՅԻՆ ԲAՇԿԱՅԻՆ ԲՆՈՒԹԱԳԻՐ Բանալի բառեր. Լիտոֆիտիկ քարաքոսեր, էնդոֆիտներ, ացինետոբակտեր, 16S ՌՆԹ: ։

ՀՀ տարածքում առավել տարածված լիթոֆիտային քարաքոսից մեկուսացվել է  էնդոֆիտային բակտերիա, որն ըստ ֆենոտիպական հատկանիշների և 16S ռՌՆԹ  գեների ֆիլոգենետիկական վերլուծության նույնականացվել է որպես Acinetobacter sp.  շտամ A1։
