ԴՆԹ-ԷՏԻԴԻՈՒՄ-ԲՐՈՄԻԴԻ ՓՈERՐԱԳՐՄԱՆ ՀԵՏԱՈՏՈՒԹՅՈՒՆՆԵՐ `Ֆլուորեսցենտային հակասոտոպլիայի ներածություն:  Լյումինեսցենտային անիզոտրոպիան լայնորեն օգտագործվում է կենսաքիմիական հետազոտությունների և բժշկական հետազոտությունների ժամանակ [2, 6]:   Այս մեթոդը հիմնված է այն փաստի վրա, որ երբ լյումինեսցենտ լույսը հուզվում է, շատ ֆտորոֆորների առաքումը նույնպես բևեռացված է: Առաքման բեռի աստիճանը բնութագրվում է անիզոտրոպիայով (r): Առաքումը կարող է բեռնաթափվել մի շարք գործընթացների միջոցով, որոնք հիմնականում կախված են քննվող նմուշի հատկություններից: Հայտնի է, որ բոլոր քրոմոֆորներն ունեն անցման պահ, որը գտնվում է որոշակի ուղղությամբ ՝ կապված մոլեկուլային առանցքի հետ:  Պտտվող դիֆուզիոն փոխում է անցողիկ պահի ուղղությունը և լիցքաթափման հիմնական պատճառն է:   Անիզոտրոպ չափումները հնարավորություն են տալիս որոշել ֆտորոֆորի միջին անկյունային տեղաշարժը, որը տեղի է ունենում հետագա առաքման ընթացքում ֆոտոնների կլանման ժամանակ:   Անկյունային տեղաշարժը կախված է հուզված վիճակում պտտվող դիֆուզիայի մեծությունից և արագությունից: Հայտնի է նաև, որ լյումինեսցենտային անիզոտրոպիայի չափումների նմուշը ենթարկվում է ուղղահայաց լույսի:  Գրգռման լույսի էլեկտրական վեկտորը զուգահեռ է ուղղահայաց (z) առանցքին:  Radառագայթման ինտենսիվությունը չափվում է ուժեղացուցիչով անցնելուց հետո:   Երբ բեռնիչը զուգահեռ է գրգռվածությանը, ինտենսիվությունը նշանակվում է IVV- ին, ուղղահայաց դասավորության դեպքում ինտենսիվությունը նշանակվում է IVH (V- ուղղահայաց, H- հորիզոնական):   Ինտենսիվության այս արժեքներն օգտագործվում են անիզոտրոպիան չափելու համար: որտեղ G- գործոնը որոշվում է հետևյալ առնչությամբ. Անիզոտրոպիան չափված մեծություն չէ, կախված չէ նմուշի ընդհանուր ինտենսիվությունից:   Պատճառն այն է, որ ինտենսիվությունների տարբերությունը (IVV - GIVH) նորմալացվում է ընդհանուր ինտենսիվության, որը հավասար է. IT = IVV + 2GIVH: Հին հրատարակություններում, ինչպիսիք են բժշկական գրականությունը, ավելի հաճախ օգտագործվում է բևեռացում:   «Անիզոտրոպ» կապը տրվում է հետևյալ արտահայտությամբ. «Անիզոտրոպիա» կլանման փոխանցման մոնտաժի անկյան միջին արժեքի միջին արժեքը տրված է հետևյալ արտահայտությամբ. Եկեք այժմ դիտարկենք ԴՆԹ-էթիդիում բրոմիդի (ԵԲ) համակարգը:  Վերջերս մեծ հետաքրքրություն է առաջացրել տարբեր տեսակի նյութերի ազդեցության ուսումնասիրությունը ԴՆԹ-ի կառուցվածքի վրա, մասնավորապես պարուրաձեւ-կծիկային անցումների վրա [1, 5, 7]:  Հայտնի է, որ EB- ն սովորաբար օգտագործվում է կենսաբանական լաբորատորիաներում `նուկլեինաթթուները հայտնաբերելու համար:   Այն հաճախ օգտագործվում է կենսաքիմիական լաբորատորիաներում `ԴՆԹ-ի մոլեկուլը« տեսանելի »դարձնելու համար սպեկտրոսկոպիկ ուսումնասիրություններում, քանի որ ԴՆԹ-ն չի լուսավորում:  Վերջինիս համար հիմք է հանդիսանում այն ​​փաստը, որ EB մոլեկուլը լուսածորում է ուլտրամանուշակագույն լույսի ազդեցության տակ և տեսանելի մասում լույս է արձակում:   EB- ի ցիկլային կառուցվածքը ունի հիդրոֆոբ բնույթ, ներթափանցելով երկլար ԴՆԹ-ի ներքին հիդրոֆոբիզմը ՝ կազմելով ուժեղ Վան դեր Վալսի կապեր ԴՆԹ հիմքերի հետ:  Այս մեխանիզմի միջոցով կապելը կոչվում է փոխազդեցություն, իսկ մոլեկուլները `փոխազդեցության միջոցներ: Օգտագործված նյութերը ման հետազոտության մեթոդով:   Ուսումնասիրություններում օգտագործվել է հորթի ուրցի ԴՆԹ, էտիդի բրոմիդ, որը ձեռք է բերվել «Սիգմա» ընկերությունից:   ԴՆԹ-ի լուծույթը պատրաստվել է ցիտրատի բուֆերում (0,015 Մ NaCl և 0,0015 Մ նատրիումի ցիտրատ ՝ Na3C6H5O5,5H2O), pH 7,5: ԴՆԹ լուծույթների պատրաստման ժամանակ նախապես ցիտրատի բուֆերում ստացվել է էթիդի բրոմիդի համապատասխան կոնցենտրացիայով լուծույթ: Արդյունքում առաջացած լուծույթը խառնվեց այնքան ժամանակ, երբ լավ լուծվեց, ապա ավելացվեց համապատասխան քանակությամբ ԴՆԹ լուծույթ:  Լուծույթներում ԴՆԹ Բ EB- ի կոնցենտրացիաները համապատասխանաբար կազմել են 7.95010-5 M  5.87510-5 M, վերջինս որոշվում է էլեկտրոնների կլանման սպեկտրոսկոպիայի միջոցով `SPECORD 50PC սպեկտրոսկոպի միջոցով:   ԴՆԹ-ի և ԵԲ-ի կլանման մոլային գործակիցները համապատասխանաբար հավասար են. Ε260 նմ = 6600 և ε480 նմ = 5680 Մ-1-սմ -1: Լյումինեսցենտային չափումները կատարվել են 1 սմ լայնությամբ քվարց կանգունի մեջ Varian Cary Eclipse ցերեկային լույսի սպեկտրաֆոտոմետրով:  Գրգռման ալիքի երկարությունը ամրագրված էր 520 նմ, իսկ առաքումը ՝ 605 նմ:   Գրգռման-առաքման ճաքերի լայնությունները համապատասխանաբար կազմում էին 5 և 10 նմ:  Չափումները կատարվել են 22 0C ջերմաստիճանում:   UDերմաստիճանը կարգավորվել է LAUDA A100 ջերմաստիճանի միջոցով:  Լուծույթի ջերմաստիճանը ամրագրվեց ուղղակիորեն կիվտե խցիկում տեղադրված ջերմաստիճանի ցուցիչի միջոցով: Ստացված արդյունքները և դրանց քննարկումը:  EB- ով դրական լիցքավորված մոլեկուլներին հարակից ԴՆԹ-ի ֆոսֆատային խմբերի միջեւ առկա են էլեկտրաստատիկ փոխազդեցություններ, որոնք որոշում են ԴՆԹ-էթիդիում բրոմիդի բարդի կայունությունը:   Փորձարարական ուսումնասիրությունները ցույց են տալիս, որ էթիդի բրոմի լյումինեսցենտային անիզոտրոպիան 23 rr21cos32r- ը ԴՆԹ բազային զույգ / լիգանդ հարաբերակցության ֆունկցիա է:   Սա որակական է: Քանակական բացատրությունը պահանջում է հաշվի առնել մի քանի գործընթացներ, որոնք կարող են հանգեցնել անիզոտրոպի փոփոխության. ապաբևեռացում:   Փորձարարական տվյալները բացատրելու համար օգտագործված մոդելները հաշվի են առնում ԴՆԹ-ԷԲ բարդ կողմնորոշումը և պտտվող դինամիկան:   Ապամոնտաժման պատճառ հանդիսացող երկու հիմնական գործոններն են ՝ ԴՆԹ-ի այն մասի ռոտացիոն շարժումը, որին կցված է էթիդի բրոմիդ, էներգիայի փոխանցում ԷԲ մոլեկուլներից այլ մոլեկուլներին տարբեր ուղղություններով ՝ ԴՆԹ-ի բարձր պարունակությամբ: Փոքր քանակությամբ ԴՆԹ-ի դեպքում միայն ԴՆԹ-ի նշված հատվածների ռոտացիան է հանգեցնում տարանջատման:  Այնուամենայնիվ, փորձնականորեն հնարավոր է չափել միայն դրամական մաշվածությունը:   Նույն ապամոնտաժման պատճառ կարող են լինել երկու գործոններ. Նշանակալի պտտվող շարժում, որը զուգորդվում է փոքր պրոյեկտման անկյունով (φ), որը կազմում է ԵԲ անցման դիպոլային պահը, ԴՆԹ-իպարի առանցքին ուղղահայաց հարթությունը կամ պակաս ցայտուն պտտվող շարժում: զուգորդվում է համեմատաբար մեծ φ անկյունով:   Այս սահմանումը վերացնելու համար պետք է ենթադրել, որ պտտվող շարժումը նկարագրող մեծությունները հաստատուն են կամ φ անկյունը հաստատուն է:   Ethidium ibromide- ն ունի բավականին մեծ հուզված կյանքի տևողություն ՝ 25 n և մեծ φ անկյուններով, մոտ 700:   ԴՆԹ-էթիդիում բրոմիդային կոմպլեքսի համար անկյունի φ արժեքը կարելի է ենթադրել փոքր է փոքր քանակությամբ կայուն ԴՆԹ-ի դեպքում, քանի որ ավելի մեծ պարունակության դեպքում կապակցումը տեղի է ունենում միջխորհրդակցական մեխանիզմի միջոցով, որն առաջացնում է ԴՆԹ շարանը մասամբ կոտրվելու է [3]:  Մեր աշխատանքում որոշվել է առաքման գործընթացում անցումային դիպոլի պահի անկյունային տեղաշարժը ԴՆԹ-ԷԲ համակարգի անիզոտրոպային արժեքը:   Այս մոտեցմամբ կարելի է ուսումնասիրել ԴՆԹ-ԷԲ համակարգի վրա տարբեր գործոնների ազդեցությունը: Պատրաստվել է լուծույթ, որը պարունակում է ԴՆԹ էթիդի բրոմիդի վերը նշված կոնցենտրացիաները, ԴԹՆ-ի էթիդի բրոմիդի հետ փոխազդեցությանը հակազդելու համար:   Ethidium bromide մոլեկուլները, փոխազդելով ԴՆԹ հետազոտական ​​հիմքերի հետ, դառնում են ավելի քիչ շարժունակ, քան ազատ վիճակում, ինչը հանգեցնում է լյումինեսցենտային անիզոտրոպիայի ավելացմանը:  Այսինքն, անիզոտրոպիայի փոփոխությունից հետո կարելի է նկարագրել ԴՆԹ-ի փոփոխությունները, որոնք տեղի են ունենում տարբեր գործոնների ազդեցության տակ, ինչպիսիք են ջերմաստիճանը, ԴՆԹ-ի կոնցենտրացիան, pH- ը, լուծույթում աղերի առկայությունը և խառը լուծիչները (ջուր / օրգանական լուծիչ): , ) դիմում [4, 9]:  Մեր աշխատանքում որոշվել է ԴՆԹ-ի հետ կապված էթիդի բրոմիդի անիզոտրոպիայի արժեքը:   Նկար 1-ը ցույց է տալիս այս համակարգի լյումինեսցենտային սպեկտրները լիցքավորիչների տարբեր դիրքերում: Նկար 1. ԴՆԹ էթիդի բրոմիդային համալիրի ցերեկային լույսի սպեկտրները տարանջատիչների տարբեր դիրքերում: A. HV, B. HH, C. VV, D. VH Ելնելով լյումինեսցենցիայի ինտենսիվության արժեքներից, ըստ (1) հավասարման, ԴՆԹ-ով կապված էտիդի բրոմիդի անիզոտրոպիայի արժեքը որոշվեց 0,09:  Անիզոտրոպիայի այս արժեքի հիման վրա միջին արժեքը հավասար է 510-ի:  Այս հաշվարկը կատարվում է ենթադրելով, որ էթիդի բրոմիդի մոլեկուլը սիմետրիկ է z առանցքի նկատմամբ:   Հարկ է նշել, որ հետազոտության մեջ օգտագործվում են ինչպես քիմիապես կապված, այնպես էլ ոչ քիմիապես կապակցված լիգանդներ, որոնք կախված են ուսումնասիրվող համակարգի առանձնահատկություններից: Այսպիսով, ԴՆԹ-էթիդիում բրոմիդ համակարգը ուսումնասիրվել է ցերեկային լույսի անիզոտրոպիայի միջոցով, և որոշվել է ԴՆԹ-ով կապված էթիդի բրոմիդանիզոտրոպիայի արժեքը:   Անիզոտրոպի արժեքի հիման վրա որոշվել է առաքման ընթացքում դիպոլի պահի միջին անկյունային տեղաշարժը: Գրականություն 1. Ազնաուրյան Մ., Խաչատրյան Ա., Մարգարյան Շ., Լյումինեսցենտային սպեկտրոսկոպիայի միջոցով դիալկիլ սուլֆօքսիդների առկայության դեպքում ԴՆԹ-ի ջերմային դինատուրացիայի ուսումնասիրություն, «ԵՊՀ գիտական ​​տեղեկագիր. Քիմիա և կենսաբանություն», 3. Barcellona M., Grattont E. , ԴՆԹ / DAPI համալիրի ցերեկային լույսի անիզոտրոպիա:  Պտտվող Dy5. Gore M., Spectrophotometry and Spectrofluorimetry.   Գործնական մոտեցում, Նյու Յորք, փոխադարձ կապող պարտավորեցում:  Եթիդիում-դինուկլեոզիդ մոնոֆոսֆատ բյուրեղային կոմպլեքսի կառուցվածք ՝ էթիդիում:   5-յոդուրիդիլիլ (3 '-5') ադենոզին, Proc. Բն. Ակադ. Գիտ. ԱՄՆ, 1975, հատ. 72, թիվ 2, Կարեն Ամիրբեկյան, Հայկ Պետրոսյան DATO-ETIDIUM BROMIDE INTERACTION հետազոտություն ըստ ֆլուորեսցենտային հակամանրէազերծման, pt Բանալի բառեր. ԴՆԹ ։

Ֆլուորեսցենտային  անիզոտրոպիայի  մեթոդով  ուսումնասիրվել  է  ԴՆԹ-ի  լուծույթը  ցիտրատային բուֆերում։
  Որպես ԴՆԹ-ի ֆլուորեսցենտային նշանակիր օգտագործվել է էթիդիումի բրոմիդը։
  Որոշվել է ԴՆԹ-ին կապված էթիդիումի բրոմիդի ֆլուորեսցենտային անիզոտրոպիայի արժեքը։
  Անիզոտրոպիայի ստացված արժեքից որոշվել է առաքման ժամանակ էթիդիումի բրոմիդի  մոլեկուլի  անցման  դիպոլ  մոմենտի  պտույտի  միջին  անկյունը,  որը  նկարագրում  է  ֆլուորոֆորի  մոլեկուլների պտտական դիֆուզիան և շարժումը ԴՆԹ-ի ներքին հիդրոֆոբ տիրույթում։
