ICS65.120
B46
中华人民共和国国家标准
GB××××—××××
饲料添加剂第5部分：微生物
植物乳杆菌
Feedadditive—Part5：Livemicroorganisms—Lactobacillusplantarum
（征求意见稿）
××××-××-××发布 ××××-××-××实施
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会发布GBXXXX—XXXX
1前言
GB7300《饲料添加剂》按产品分为若干部分：
本文件为GB7300的第503部分。
本文件按照GB/T1.1-2020给出的规则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本文件由中华人民共和国农业农村部提出并归口。
本文件起草单位：国家粮食局科学研究院。
本文件主要起草人：张晓琳、韩伟、李爱科、魏永刚、李晓敏、赵晨、黄颖、郝淑红。GBXXXX—XXXX
2饲料添加剂第5部分：微生物植物乳杆菌
1范围
GB7300的本部分规定了饲料添加剂植物乳杆菌的术语和定义、产品要求、试验方法、检测规则、
标签、包装、运输、储存、保质期的要求。
本文件适用于仅含植物乳杆菌的饲料添加剂。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
文件。
GB/T4789.2 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定
GB/T4789.3 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群测定
GB/T4789.5 食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验
GB/T4789.10 食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验
GB/T4789.15 食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数
GB/T6435 饲料中水分的测定
GB/T8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定
GB/T10648 饲料标签
GB/T13079 饲料中总砷的测定
GB/T13080 饲料中铅的测定原子吸收光谱法
GB/T13081 饲料中汞的测定
GB/T13082 饲料中镉的测定方法
GB/T13091 饲料中沙门氏菌的测定
GB/T14699.1 饲料采样
GB/T17480 饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法
3术语和定义GBXXXX—XXXX
3植物乳杆菌Lactobacillusplantarum
属于乳杆菌科、乳杆菌属，革兰氏阳性，菌体杆状，无芽孢，模式菌株为ATCC14917。
4要求
4.1微生物学指标
4.1.1菌体形态
菌体细胞呈圆端直杆状，通常0.9μm～1.2μm宽，3μm～8μm长，单个、成对或成短链。
4.1.2菌落形态
植物乳杆菌在改良TJA、改良MC或MRS培养基上菌落生长形态特征如表1。.
表1植物乳杆菌在不同培养基上菌落特征
改良TJA 改良MC MRS
平皿底为黄色，菌落中等大小，微白
色，湿润，边缘不整齐，直径3mm±
1mm，如棉絮团状菌落平皿底为粉红色，菌落较小，圆形，红
色，边缘似星状，直径2mm±1mm，
有淡淡的晕菌落为白色，较大，直径3mm±1mm
4.1.3生理生化特征
在改良TJA、改良MC或MRS琼脂斜面上，于36℃±1℃，24h～48h培养，刮取菌苔，进行表2中
试验，以验证植物乳杆菌生理生化特征。
表2植物乳杆菌生理生化特征
特征 结果 特征 结果
革兰氏染色 + 蔗糖 +
4%牛磺胆酸钠 + 麦芽糖 +
精氨酸产氨 - 甘露醇 +
碳水化合物反应 水杨苷 +
七叶苷 + 山梨醇 +
纤维二糖 + 棉籽糖 +
注：+为阳性反应；-为阴性反应。
4.2感官指标GBXXXX—XXXX
4产品性状应符合包装上标明的产品固有的形状、色泽、气味、均匀程度、杂质等，无异臭味。
4.3水分
不高于8.0%。
4.4活菌数
植物乳杆菌活菌数≥1.0×109CFU/g。
注：活菌数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。
4.5卫生标准
植物乳杆菌饲料添加剂应符合表3的要求。
表3植物乳杆菌饲料添加剂卫生指标
项目 指标
杂菌率，% ≤1.0
黄曲霉毒素B1，μg/kg ≤10.0
砷的允许量，mg/kg ≤2.0
铅的允许量，mg/kg ≤5.0
汞的允许量，mg/kg ≤0.1
镉的允许量，mg/kg ≤0.5
大肠菌群的允许量，CFU/100g ≤400
霉菌和酵母总数的允许量，CFU/g ＜ 1.0×104
致病菌（志贺氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌） 不得检出
5试验方法
5.1抽样
按GB/T14699.1进行样品的采集。采样时应特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准
备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋、均质袋或广口瓶、金属勺和刀。在卫生学调查基础上，采
取有代表性的样品，样品采集后应立即进行检验。
5.2感官检验
取一定量（250g）的样品于无色玻璃杯中，自然光线下采用目测、鼻嗅的方法进行检验。
5.3水分测定
按GB/T6435检测。GBXXXX—XXXX
55.4植物乳杆菌检测
5.4.1检验程序
植物乳杆菌检验程序流程图如图1。
图1植物乳杆菌检验程序流程图
5.4.2菌种鉴定
5.4.2.1样品制备
在按照GB/T14699.1进行采样基础上，称取25.0g±0.01g样品，加入225ml无菌生理盐水中均质，
待均匀后，再将样品用无菌生理盐水按十倍稀释法制成不同浓度稀释液。取1.0ml合适浓度稀释液，注36℃±1℃
24h～48h产品样品
样品25g+225ml无菌生理盐水
10倍系列稀释
选择2～3个适宜稀释度，各以1ml加入平
皿，将45℃～50℃的改良TJA、改良MC
或MRS培养基倾注平板，摇匀培养
挑取5～10个菌落
菌体、菌落形态检验
生理生化特征检验
菌种鉴定 菌落计数
报告GBXXXX—XXXX
6入无菌平板，每个稀释度做3次重复。将融化并冷却至45℃～50℃的改良TJA、改良MC或MRS培养
基，向每个培养皿中倒入约15ml～20ml，摇匀并凝固，制成相应培养基的琼脂平板。36℃±1℃倒置培
养24h～48h。
5.4.2.2菌落选择：用接种针或接种环随机挑取5～10个菌落。
5.4.2.3菌体形态检验：涂片染色，用光学显微镜观察菌体形态。
5.4.2.4菌落形态检验：观察菌落颜色、形态。
5.4.2.5生理生化特征检验：接种并进行4.1.3表2中各项试验。
5.4.3菌落计数
5.4.3.1植物乳杆菌计数
5.4.2.1项中菌落总数减去杂菌数之差，即得植物乳杆菌计数结果。
5.4.3.2稀释度
选取适宜的稀释度，菌落在30～300之间的平板进行计数。
5.4.3.3计算方法
计算方法见公式（1）。
N=∑C/[V(n1+0.1n2)d]…………………………………………（1）
式中：N——样品中菌落总数
∑C——两个连续稀释度全部平板上菌落数总和
V——每个平板上接种的体积，ml
n1——第1个稀释度（低稀释倍数）平板个数
n2——第2个稀释度（高稀释倍数）平板个数
d——相对第1稀释度的稀释因数
结果为每克产品微生物菌落数，以科学计数法表示结果。
具体结果输出实例应参考GB/T4789.2-2010。
5.4.3.4允许差
两次平行测定结果的相对偏差不大于2%。
5.5卫生检验
5.5.1杂菌率检测
杂菌率=杂菌数/（植物乳杆菌活菌数+杂菌数）×100%……………………………（2）
5.5.2黄曲霉素B1检验GBXXXX—XXXX
7按照GB/T17480执行。
5.5.3砷含量测定
按照GB/T13079执行。
5.5.4汞含量测定
按照GB/T13081执行。
5.5.5镉含量测定
按照GB/T13082执行。
5.5.6铅含量测定
按照GB/T13080执行。
5.5.7霉菌和酵母总数检测
按照GB/T4789.15执行。
5.5.8大肠菌群检测
按照GB/T4789.3执行。
5.5.9致病菌检测
按照GB/T4789.5、GB/T4789.10、GB/T13091执行。
6检验规则
6.1出厂检验（交收检验）
感官指标、水分、微生物含量（包括活菌数和杂菌）为出厂检验项目，由生产厂家或公司的质检部
门进行检验，检验合格并签发质量合格证的产品方可出厂。
6.2型式检验（例行检验）
6.2.1一般情况下，企业一年进行一次型式检验，下列检验项应包括：
a）菌种遗传特征检验；与《Bergey’sManualofSystematicBacteriology》（《伯杰氏系统细菌学手册》）
所列模式菌株ATCC14917的16SrRNA(16S核糖体核糖核酸)基因全序列进行比对，相似度在
99%以上。
b）国家质量监督机构要求的其它型式检验。
6.2.2但有下列情况之一时，企业半年进行一次型式检验，下列检验项应包括：
a）更改主要原辅材料和关键生产工序；
b）新试制的产品或正常生产的产品停产3个月以上（或半年），重新恢复生产时；
c）国家质量监督机构提出要求进行型式检验。GBXXXX—XXXX
87判定规则
7.1所验项目全部合格，判定为该批次产品合格。
7.2检验结果中有任何指标不符合本部分规定时，可自同批产品中重新加倍取样进行复检。复检结果
即使有一项指标不符合本部分规定，则判定该批产品不合格。
7.3各项目指标的极限数值判定按GB/T8170中全数值比较法执行。
8标签、包装、运输、储存、保质期
8.1标签
8.1.1采用鲜明的标签贴于外包装显著位置；
8.1.2标签内容应符合GB10648的要求；
8.1.3标签应标明所添加微生物的学名和数量。
8.2包装
应采用符合国家相关标准的、无毒的包装材料。
8.3运输
运输中应避免日晒，搬运装卸时小心轻放，不得与有毒物质混装混运。
8.4储存
应保存于干燥、阴凉、通风的仓库中，避免直接日晒和高温地表放置，防止长时间30℃以上高温，
不得和有毒、有害物质一起堆放，严防污染。建议使用10℃以下的冷藏条件。
8.5保质期
本产品保质期为6个月。GBXXXX—XXXX
9附录A
（资料性附录）
专用培养基及试剂
A.1改良番茄琼脂培养基（改良TJA培养基）
A.1.1成分
番茄汁 50.0ml
酵母抽提液 5.0g
牛肉膏 10.0g
乳糖 20.0g
葡萄糖 2.0g
磷酸氢二钾 2.0g
吐温-80 1.0g
乙酸钠 0.5g
琼脂 18.0g
蒸馏水 加至1000ml
pH6.8±0.2
A.1.2制法
番茄汁的制作：将新鲜番茄洗净，切碎（切勿捣碎），放入锥形瓶，置4℃冰箱8h～12h，取出后
用纱布过滤。如一次使用不完，可将其置入0℃冰箱，可保存四个月。使用时让其常温下自然溶解。
制法：将所有成分加入蒸馏水中，加热溶解，校正pH6.8±0.2。分装，121℃高压灭菌15min～20min。
临用时加热熔化琼脂，冷至45℃～50℃时使用。
A.2改良MC培养基
A.2.1成分
大豆蛋白胨 5.0g
牛肉浸膏 5.0g
酵母浸膏 5.0g
葡萄糖 20.0gGBXXXX—XXXX
10乳糖 20.0g
碳酸钙 10.0g
琼脂 18.0g
1%中性红溶液 5ml
硫酸多粘菌素B（酌情而加）10万IU
蒸馏水 加至1000ml
pH6.0
A.2.2制法
将前面7种成分加入蒸馏水中，加热溶解，校正pH6.0，加入中性红溶液。分装烧瓶，121℃高压
灭菌15min～20min。临用时加热熔化琼脂，冷至45℃～50℃时使用，酌情加或不加硫酸多粘菌素B
（疑有杂菌污染时，可加多粘菌素B，混匀后使用）。
A.3MRS培养基
A.3.1成分
蛋白胨 10.0g
牛肉浸膏 10.0g
酵母浸膏 5.0g
葡萄糖 20.0g
吐温-80 1.0g
柠檬酸铵 2.0g
乙酸钠 5.0g
硫酸镁 0.1g
硫酸锰 0.05g
磷酸氢二钾 2.0g
琼脂 18.0g
蒸馏水 加至1000ml
pH7.3±0.2
A.3.2制法
将各成分加入蒸馏水中，加热不断搅拌，煮沸使琼脂完全溶解，115℃高压灭菌25min～30min。
A.4营养琼脂培养基GBXXXX—XXXX
11A.4.1成分
蛋白胨 10.0g
牛肉膏 3.0g
氯化钠 5.0g
琼脂 18.0g
蒸馏水 加至1000ml
pH7.0±0.2
A.4.2制法
将各成分加入蒸馏水中，加热不断搅拌，煮沸使琼脂完全溶解，121℃高压灭菌25min～30min。
A.5生理盐水
A.5.1成分
氯化钠 8.5g
蒸馏水 加至1000ml
A.5.2制法
将氯化钠加入蒸馏水中，搅拌溶解，分装，121℃高压灭菌15min。
A.6革兰氏染色液
A.6.1结晶紫染色液
A.6.1.1成分
结晶紫 8.5g
95%乙醇 20ml
1%草酸铵水溶液 80ml
A.6.1.2制法
将结晶紫完全溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
A.6.2革兰氏碘液
A.6.2.1成分
碘 1.0g
碘化钾 2.0g
蒸馏水 300ml
A.6.2.2制法GBXXXX—XXXX
12将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300ml。
A.6.3沙黄复染液
A.6.3.1成分
沙黄 0.25g
95%乙醇 10ml
蒸馏水 90ml
A.6.3.2制法
将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
A.6.4染色法
A.6.4.1将涂片在酒精灯火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。
A.6.4.2滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。
A.6.4.3滴加95%乙醇脱色，约15s～30s，直至染色液被洗掉，不要过分脱色，水洗。
A.6.4.4滴加复染液，复染1min。水洗、待干、镜检。
A.74%牛磺胆酸钠或糖发酵管
A.7.1基础成分
牛肉膏 5.0g
蛋白胨 5.0g
酵母浸膏 5.0g
吐温80 0.5ml
琼脂 1.5g
1.6%溴甲酚紫酒精溶液 1.4ml
蒸馏水 1000ml
A.7.2制法
按4%加入牛磺胆酸钠或按0.5%加入所需糖类，并分装小试管，121℃高压灭菌15min～20min。
A.8精氨酸产氨
A.8.1PY基础培养基
A.8.1.1成分
蛋白胨 0.5g
胰酶解酪朊 0.5gGBXXXX—XXXX
13酵母提取物 1.0g
盐溶液 4.0ml
蒸馏水 100ml
A.8.1.2盐溶液
无水氯化钙 1.0g
七水硫酸镁 0.48g
磷酸氢二钾 1.0g
磷酸二氢钾 1.0g
碳酸氢钠 10.0g
氯化钠 2.0g
蒸馏水 1000ml
A.8.1.3制法
A.8.1.4.1将无水氯化钙和七水硫酸镁混合溶解于300ml，再加500ml水，一边搅拌一边加入其它盐类，
直至全部溶解，加入200ml水，混合均匀，即为盐溶液；存于4℃，备用。
A.8.1.4.2将4.0ml盐溶液加至A.8.1.1中其它成分组成的溶液，121℃高压灭菌15min～20min。
A.8.2精氨酸溶液
A.8.2.1成分
L-精氨酸 1.5g
半胱氨酸（1g/10mlH2O） 0.05ml
蒸馏水 10ml
pH7.0±0.2
A.8.2.2制法
将3滴精氨酸溶液滴入3mlPY培养基中。
A.8.3奈氏试剂
A.8.3.1配方
A液
氢氧化钾 20g
蒸馏水 50ml
B液GBXXXX—XXXX
14碘化钾 5g
碘化汞 10g
蒸馏水 50ml
A.8.3.2制法
将A液、B液混合、过滤，贮存于暗色瓶中。
A.8.4接种和培养
接种试验菌至含精氨酸的培养基中，并同时接种于不含精氨酸的培养基作为对照。至室温培养24
h～72h。GBXXXX—XXXX
15附录B
（资料性附录）
模式菌株ATCC14917的16SrRNA基因序列
1gctggcggcgtgcctaatacatgcaagtcgaacgaactctggtattgattggtgcttgca
61tcatgatttacatttgagtgagtggcgaactggtgagtaacacgtgggaaacctgcccag
121aagcgggggataacacctggaaacagatgctaataccgcataacaacttggaccgcatgg
181tccgagtttgaaagatggcttcggctatcacttttggatggtcccgcggcgtattagcta
241gatggtggggtaacggctcaccatggcaatgatacgtagccgacctgagagggtaatcgg
301ccacattgggactgagacacggcccaaactcctacgggaggcagcagtagggaatcttcc
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421aaactctgttgttaaagaagaacatatctgagagtaactgttcaggtattgacggtattt
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