31979L1067
L 327/29
ОФИЦИАЛЕН ВЕСТНИК НА ЕВРОПЕЙСКИЯ СЪЮЗ
ПЪРВА ДИРЕКТИВА НА КОМИСИЯТА
от 13 ноември 1979 година
относно определяне на методи на Общността за анализ за проверка на някои частично или напълно дехидратирани консервирани млека, предназначени за консумация от човека
(79/1067/ЕИО)
КОМИСИЯТА НА ЕВРОПЕЙСКИТЕ ОБЩНОСТИ,
като взе предвид Договора за създаване на Европейската икономическа общност,
като взе предвид Директива 76/118/ЕИО на Съвета от 18 декември 1975 г. относно сближаване на законодателствата на държавите-членки по отношение на някои видове частично и напълно дехидратирани консервирани млека за консумация от човека (1), и по-специално член 11 от нея,
като има предвид, че съгласно член 11 от Директива 76/118/ЕИО се изисква проверка на състава на някои частично или изцяло дехидратирани консервирани млека чрез методи на Общността за анализ;
като има предвид, че е желателно да се приеме първоначална серия методи, по отношение на които са приключени проучванията;
като има предвид, че предвидените в настоящата директива мерки съответстват на становището на Постоянния комитет по храните,
ПРИЕ НАСТОЯЩАТА ДИРЕКТИВА:
Член 1
Държавите-членки вземат всички мерки, необходими да се гарантира, че анализите за проверка на критериите, посочени в приложение I, се извършват в съответствие с методите, описани в приложение II.
Член 2
При определяне на алтернативни методи за единично определяне на проба може да се използва всеки един от методите. В протокола от изпитването, посочен в приложение II, трябва да се посочи кой метод е използван.
Член 3
Държавите-членки въвеждат в сила законовите, подзаконовите и административните разпоредби, необходими за да се съобразят с настоящата директива в срок от 18 месеца от нотифицирането ѝ. Те незабавно информират за това Комисията.
Член 4
Адресати на настоящата директива са държавите-членки.
Съставено в Брюксел на 13 ноември 1979 година.
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PRIMA DIRETTIVA DELLA COMMISSIONE
del 13 novembre 1979
recante fissazione di metodi comunitari per l ' analisi di taluni tipi di latte conservato parzialmente o totalmente disidratato destinato all ' alimentazione umana
( 79/1067/CEE )
LA COMMISSIONE DELLE COMUNITÀ EUROPEE ,
visto il trattato che istituisce la Comunità economica europea ,
vista la direttiva 76/118/CEE del Consiglio , del 18 dicembre 1975 , relativa al ravvicinamento delle legislazioni degli Stati membri concernenti taluni tipi di latte conservato parzialmente disidratato destinato all ' alimentazione umana ( 1 ) , in particolare l ' articolo 11 ,
considerando che , ai sensi dell ' articolo 11 della 76/118/CEE , la composizione di taluni tipi di latte conservato , parzialmente o totalmente disidratato , deve essere verificata secondo metodi di analisi comunitari ;
considerando che è opportuno adottare una serie iniziale di metodi di cui è stata ultimata l ' elaborazione ;
considerando che le misure previste dalla presente direttiva sono conformi al parere del comitato permanente per i prodotti alimentari ,
HA ADOTTATO LA PRESENTE DIRETTIVA :
Articolo 1
Gli Stati membri curano che le analisi necessarie per la verifica dei criteri fissati nell ' allegato I vengano eseguite in conformità dei metodi descritti nell ' allegato II .
Articolo 2
Se per una singola determinazione sono indicati metodi alternativi , il campione può essere analizzato secondo uno di detti metodi . La relazione dell ' analisi di cui all ' allegato II deve precisare il metodi impiegato .
Articolo 3
Gli Stati membri mettono in vigore le disposizioni legislative , regolamentari e amministrative necessarie per conformarsi alla presente direttiva entro 18 mesi a decorrere dalla sua notifica . Essi ne informano immediatamente la Commissione .
Articolo 4
Gli Stati membri sono destinatari della presente direttiva .
Fatto a Bruxelles
Per la Commissione
Étienne DAVIGNON
Membro della Commissione
( 1 ) GU n . L 24 del 30 . 1 . 1976 , pag . 49 .
ALLEGATO I
CAMPO DI APPLICAZIONE DEI PRIMI METODI DI ANALISI COMUNITARI DA APPLICARSI AI SENSI DELLA DIRETTIVA CONCERNENTE TALUNI TIPI DI LATTE PARZIALMENTE O TOTALMENTE DISIDRATATO
I . Disposizioni generali
II . Determinazione della sostanza secca nel :
- latte concentrato ricco di materia grassa o latte concentrato non zuccherato ricco di materia grassa ( allegato II , metodo 1 ) ,
- latte concentrato o latte concentrato non zuccherato o latte intero concentrato ( allegato II , metodo 1 ) ,
- latte concentrato parzialmente scremato o latte concentrato parzialmente scremato non zuccherato ( allegato II , metodo 1 ) ,
- latte concentrato scremato o latte concentrato scremato non zuccherato ( allegato II , metodo 1 ) ,
- latte concentrato zuccherato e latte intero concentrato zuccherato ( allegato II , metodo 1 ) ,
- latte concentrato parzialmente scremato zuccherato ( allegato II , metodo 1 ) ,
- latte concentrato scremato zuccherato ( allegato II , metodo 1 ) .
III . Determinazione dell ' umidità nel :
- latte in polvere ricco di materia grassa o polvere di latte ricco di materia grassa ( allegato II , metodo 2 ) ,
- latte in polvere , latte intero in polvere , polvere di latte o polvere di latte intero ( allegato II , metodo 2 ) ,
- latte parzialmente scremato in polvere o polvere di latte parzialmente scremato ( allegato II , metodo 2 , )
- latte scremato in polvere o polvere di latte scremato ( allegato II , metodo 2 ) .
IV . Determinazione del grasso nel :
- latte concentrato ricco di materia grassa o latte concentrato non zuccherato ricco di materia grassa ( allegato II , metodo 3 ) ,
- latte concentrato o latte concentrato non zuccherato o latte intero concentrato ( allegato II , metodo 3 ) ,
- latte concentrato parzialmente scremato o latte concentrato parzialmente scremato non zuccherato ( allegato II , metodo 3 ) ,
- latte concentrato scremato o latte concentrato scremato non zuccherato ( allegato II , metodo 3 ) ,
- latte concentrato zuccherato e latte intero concentrato zuccherato ( allegato II , metodo 3 ) ,
- latte concentrato parzialmente scremato zuccherato ( allegato II , metodo 3 ) ,
- latte concentrato scremato zuccherato ( allegato II , metodo 3 ) ,
- latte in polvere ricco di materia grassa o polvere di latte ricco di materia grassa ( allegato II , metodo 4 ) ,
- latte in polvere , latte intero in polvere , polvere di latte o polvere di latte intero ( allegato II , metodo 4 ) ,
- latte parzialmente scremato in polvere o polvere di latte parzialmente scremato ( allegato II , metodo 4 ) ,
- latte scremato in polvere o polvere di latte scremato ( allegato II , metodo 4 ) .
V . Determinazione del saccarosio nel :
- latte concentrato zuccherato o latte intero concentrato zuccherato ( allegato II , metodo 5 ) ,
- latte concentrato parzialmente scremato zuccherato ( allegato II , metodo 5 ) ,
- latte concentrato scremato zuccherato ( allegato II , metodo 5 ) .
VI . Determinazione dell ' acido lattico e dei lattati nel :
- latte in polvere ricco di materia grassa o polvere di latte ricco di materia grassa ( allegato II , metodo 6 ) ,
- latte in polvere , latte intero in polvere , polvere di latte o polvere intero ( allegato II , metodo 6 ) ,
- latte parzialmente scremato in polvere o polvere di latte parzialmente scremato ( allegato II , metodo 6 ) ,
- latte scremato in polvere o polvere di latte scremato ( allegato II , metodo 6 ) .
VII . Determinazione dell ' attività fosfatasica nel :
- latte in polvere ricco di materia grassa o polvere di latte ricco di materia grassa ( allegato II , metodi 7 e 8 ) ,
- latte in polvere , latte intero in polvere , polvere di latte o polvere di latte intero ( allegato II , metodi 7 e 8 ) ,
- latte parzialmente scremato in polvere o polvere di latte parzialmente scremato ( allegato II , metodi 7 e 8 ) ,
- latte scremato in polvere o polvere di latte scremato ( allegato II , metodi 7 e 8 ) .
ALLEGATO II
METODI DI ANALISI RELATIVI ALLA COMPOSIZIONE DI TALUNI TIPI DI LATTE CONSERVATO PARZIALMENTE O TOTALMENTE DISIDRATATO DESTINATO ALL ' ALIMENTAZIONE UMANA
DISPOSIZIONI GENERALI
1 . PREPARAZIONE DEL CAMPIONE PER L ' ANALISI
1.1 . Latte concentrato ricco di materia grassa o latte concentrato non zuccherato ricco di materia grassa
Latte concentrato o latte concentrato non zuccherato o latte intero concentrato
Latte concentrato parzialmente scremato o latte concentrato parzialmente scremato non zuccherato
Latte concentrato scremato o latte concentrato scremato non zuccherato
Scuotere e capovolgere la scatola chiusa . Aprire la scatola e versare lentamente il latte in un secondo recipiente provvisto di chiusura ermetica , mescolando per ripetuto travaso . Fare in modo che tutto il grasso e il latte aderenti alla parete e ai due fondi del recipiente risultino ben mescolati al resto del campione . Chiudere il recipiente . Se il contenuto non è omogeneo , riscaldare in fagnomaria a 40° C . Agitare energicamente ogni 15 minuti . Dopo 2 ore , togliere il recipiente dal bagnomaria e lasciare che ritorni a temperatura ambiente . Togliere il coperchio e rimescolare bene il contenuto del recipiente con un cucchiaio o una spatola ( se il grasso si è separato , il campione non può essere analizzato ) . Conservare al fresco .
1.2 . Latte concentrato zuccherato o latte concentrato zuccherato
Latte concentrato parzialmente scremato zuccherato
Latte concentrato scremato zuccherato
Scatole : Riscaldare la scatola chiusa in bagnomaria a 30-40° C per 30 minuti circa . Aprire la scatola e , con un cucchiaio o una spatola , rimescolarne bene il contenuto , in senso verticale e rotatorio , in modo da miscelare intimamente gli strati superiori ed inferiori col resto del contenuto . Fare in modo che il latte aderente alla parete e ai fondi della scatola sia incorporato nel campione . Per quanto possibile , versare il contenuto in un secondo recipiente fornite di coperchio a tenuta d ' aria . Chiudere il recipiente e conservarlo in luogo fresco .
Tubetti : Aprire il tubetto tagliandone le estremità . Versarne il contenuto in un recipiente fornito di coperchio a tenuta d ' aria . Tagliare poi il tubetto nel senso della lunghezza . Raschiar via tutto il materiale che aderisce all ' interno e mescolarlo accuratamente col resto del contenuto . Conservare il recipiente al fresco .
1.3 . Latte in polvere ricco di materia grassa o polvere di latte ricco di materia grassa
Latte in polvere , latte intero in polvere , polvere di latte o polvere di latte intero
Latte parzialmente scremato in polvere o polvere di latte parzialmente scremato
Latte scremato in polvere o polvere di latte scremato
Trasferire la polvere di latte in un recipiente pulito e asciutto provvisto di coperchio a tenuta d ' aria , di una capacità doppia rispetto al volume della polvere . Chiudere immediatamente il recipiente e mescolare bene la polvere di latte agitandolo e capovolgendolo ripetutamente . Durante la preparazione del campione , evitare , per quanto possibile , che la polvere di latte venga a contatto con l ' atmosfera , in modo da rendere minimo l ' assorbimento di umidità .
2 . REATTIVI
2.1 . Acqua
2.1.1 . Dovunque venga fatto riferimento all ' acqua , ai fini della dissoluzione , della diluizione o del lavaggio , deve essere impiegata acqua distillata od acqua demineralizzata di purezza almeno equivalente .
2.1.2 . Dovunque si parli , senza ulteriori precisazioni , di « dissoluzione » , « soluzione » o « diluizione » , s ' intende che il solvente da adoperare è l ' acqua .
2.2 . Reattivi
Tutti i reattivi impiegati debbono avere purezza analitica riconosciuta , salvo indicazioni in contrario .
3 . APPARECCHIATURA
3.1 . Elenchi delle apparecchiature
Gli elenchi delle apparecchiature comprendono unicamente apparecchi per uso specializzato e con caratteristiche speciali .
3.2 . Bilancia analitica
Per « bilancia analitica » si intende una bilancia della sensibilità di almeno 0,1 mg .
4 . ESPRESSIONE DEI RISULTATI
4.1 . Calcolo delle percentuali
Salvo indicazioni in contrario , i risultati vanno calcolati come percentuale in peso del campione quale è stato ricevuto dal laboratorio .
4.2 . Numero di cifre significative
Il risultato non deve contenere più cifre significative di quante ne giustifichi la precisione del metodo d ' analisi impiegato .
5 . RELAZIONE DELL ' ANALISI
La relazione deve precisare il metodo d ' analisi impiegato e i risultati ottenuti . Essa deve inoltre menzionare tutti i particolari del procedimento non specificati nel metodo d ' analisi o facoltativi , nonchù ogni circostanza che possa avere influenzato i risultati ottenuti .
La relazione dovrà fornire tutti di dati necessari per identificare completamente il campione .
METODO 1 - DETERMINAZIONE DEL CONTENUTO IN SOSTANZA SECCA
( IN STUFA , A 99° C )
1 . OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE
Il presente metodo serve a determinare il contenuto in sostanza secca del :
- latte concentrato ricco di materia grassa o latte concentrato non zuccherato ricco di materia grassa ,
- latte concentrato o latte concentrato non zuccherato o latte intero concentrato ,
- latte concentrato parzialmente scremato o latte concentrato parzialmente scremato non zuccherato ,
- latte concentrato scremato o latte concentrato scremato non zuccherato ,
- latte concentrato zuccherato e latte intero concentrato zuccherato ,
- latte concentrato parzialmente scremato zuccherato ,
- latte concentrato scremato zuccherato .
2 . DEFINIZIONE
Per contenuto in sostanza secca dei latti concentrati si intende il contenuto in sostanza secca determinato col presente metodo .
3 . PRINCIPIO
Una quantità nota del campione viene diluita con acqua , mescolata con sabbia ed essiccata alla temperatura di 99° ± 1° C . La massa ottenuta dopo l ' essiccazione rappresenta la massa della sostanza secca e viene calcolata come percentuale rispetto alla massa del campione .
4 . REATTIVI
Sabbia di quarzo o sabbia di mare trattata con acido cloridrico ( granulometria 0,18 - 0,5 mm , la sabbia deve cioè passare attraverso un setaccio da 500 micron ed essere trattenuta da un setaccio da 180 micron ) . Essa deve soddisfare alla seguente prova di controllo :
nella stufa ( 5.3 ) riscaldare per 2 ore 25 g circa di sabbia , secondo le modalità indicate da 6.1 a 6.3 . Aggiungere 5 ml d ' acqua , riscaldare di nuovo in stufa per 2 ore , lasciar raffreddare e ripesare . La differenza fra le due pesate non deve eccedere 0,5 mg .
Se necessario , trattare la sabbia con una soluzione di acido cloridrico al 25 % , per la durata di 3 giorni , rimescolando di tanto in tanto . Lavare con acqua fino a scomparsa dell ' acidità o della reazione dei cloruri nell ' acqua di lavaggio . Essicare a 160° C e ricontrollare come sopra descritto .
5 . APPARECCHIATURA
5.1 . Bilancia analitica
5.2 . Capsule di metallo , preferibilmente di nichel , d ' alluminio o d ' acciaio inossidabile . Le capsule devono essere provviste di coperchi a ottima tenuta ma facili da togliere . Dimensioni consigliabili : diametro = 60 - 80 mm ; profondità = 25 mm circa .
5.3 . Stufa di essiccazione a pressione atmosferica , ben ventilata e termostatata a 99 ± 1° C . La temperatura deve essere uniforme in tutti la stufa .
5.4 . Essiccatore , contenente gel di silice addizionato di un indicatore dell ' umidità e attivato di recente , ovvero una sostanza essiccante equivalente .
5.5 . Bacchette di vetro , appiattite a un ' estremità , di lunghezza tale da poter essere contenute nelle capsule di metallo 5.2 .
5.6 . Bagnomaria , bollente .
6 . MODO DI OPERARE
6.1 . Nella capsula ( 5.2 ) , porre circa 25 g di sabbia ( 4 ) e una bacchetta di vetro ( 5.5 ) .
6.2 . Senza coprire , porre capsula , contenuto e coperchio nella stufa ( 5.3 ) e riscaldare per 2 ore .
6.3 . Porre il coperchio sulla capsula e metterla nell ' essiccatore ( 5.4 ) . Lasciar raffreddare a temperatur ambiente e pesare con la precisione di 0,1 mg ( sia M0 la massa trocata ) .
6.4 . Inclinando la capsula , spostare tutta la sabbia da un lato . Nello spazio libero , introdurre 1,5 g circa di campione di latte concentrato zuccherato ( 3,0 nel caso del latte concentrato non zuccherato ) . Rimettere a posto il coperchio e pesare con la precisione di 0,1 mg ( sia M1 la massa trovata ) .
6.5 . Togliere il coperchio , aggiungere 5 ml d ' acqua ed , aiutandosi con la bacchetta di vetro , mescolare fra loro prima i due liquidi , poi la sabbia e la miscela liquida . Lasciare la bacchetta nella miscela .
6.6 . Porre la capsula su bagnomaria bollente ( 5.6 ) finchù l ' acqua sia evaporata ; ciò richiede abitualmente 20 minuti . Con la bacchetta , agitare di tanto in tanto la mescolanza , in modo da mantenere la massa ben acrata e da evitare che essa si agglomeri una volta secca . Deporre la bacchetta all ' interno della capsula .
6.7 . Porre la capsula ed il coperchio nella stufa per un ' ora e mezzo circa .
6.8 . Rimettere il coperchio alla capsula e depositarla nell ' essiccatore ; lasciarla raffreddare a temperatura ambiente e pesarla con la precisione di 0,1 mg .
6.9 . Rimettere capsula e coperchio nella stufa , scoprire la capsula e riscaldarla insieme al coperchio per un ' altra ora .
6.10 . Ripetere l ' operazione descritta al punto 6.8 .
6.11 . Ripetere le operazioni descritte ai punti 6.9 e 6.10 , finchù la differenza di messa fra due successive pesate sia inferiore a 0,5 mg , ovvero finchù si osservi un aumento della massa . Se talle aumento si verifica , nel calcolo di cui al punto 7.1 impiegare il valore più basso trovato per la massa . Sia M2 la massa finale registrata .
7 . ESPRESSIONE DEI RISULTATI
7.1 . Metodo di calcolo
Il contenuto in sostanza secca , espresso come percentuale sulla massa del campione , è dato dalla formula :
M2 - M° / M1 - M0 x 100
dove :
M0 = massa totale , espressa in grammi , della capsula , del coperchio e della sabbia dopo l ' operazione 6.3 ;
M1 = massa totale , espressa in grammi , della capsula , del coperchio , della capsula , del coperchio , della sabbia e del campione , dopo l ' operazione 6.4 ;
M2 = massa totale , espressa in grammi , della capsula , del coperchio , della sabbia e del campione essiccato , dopo l ' operazione 6.11 .
7.2 . Ripetibilità
La differenza fra i risultati di due determinazioni effettuate simultaneamente o in rapida successione dallo stesso analista adoperando lo stesso campione e nelle stesse condizioni , non devono superare 0,2 g di estratto secco per 100 g del prodotto .
8 . CALCOLO DELL ' ESTRATTO SECCO TOTALE PROVENIENTE DAL LATTE ( SOLIDI TOTALI DEL LATTE ) E DELL ' ESTRATTO SECCO AL NETTO DELLA MATERIA GRASSA ( SOLIDI MAGRI DEL LATTE )
8.1 . I solidi totali del latte , contenuti in un latte concentrato zuccherato , sono dati dall ' espressione :
estratto secco totale ( ottenuto secondo il metodo 1 dell ' allegato II ) - saccarosio ( ottenuto secondo il metodo 5 dell allegato II ) .
8.2 . I solidi magri del latte , contenuti in un latte concentrato zuccherato , sono dati dall ' espressione :
estratto secco totale ( ottenuto col metodo 1 dell ' allegato II ) ) - contenuto in saccarosio ( ottenuto col metodo 5 dell ' allegato II ) - tenore in materia grassa ( ottenuto col metodo 3 dell ' allegato II ) .
8.3 . I solidi magri del latte , contenuti in un latte concentrato non zuccherato , sono dati dall ' espressione :
estratto secco totale ( ottenuto col metodi 1 dell ' allegato II ) - contenuto in sostanza grassa ( ottenuto col metodo 3 dell ' allegato II ) .
METODO 2 - DETERMINAZIONE DEL TENORE IN UMIDITÀ
( IN STUFA A 102° C )
1 . OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE
Il presente metodo serve a determinare il tenore umidità :
- del latte in polvere ricco di materia grassa o polvere di latte ricco di materia grassa ,
- del latte in polvere , latte intero in polvere , polvere di latte o polvere di latte intero ,
- del latte parzialmente scremato in polvere o polvere di latte parzialmente scremato ,
- del latte scremato in polvere o polvere di latte scremato .
2 . DEFINIZIONE
Per tenore umidità si intende la perdita di massa all ' essiccazione , determinata con il presente metodo .
3 . PRINCIPIO
Si determina la massa residua di un opportuno campione , dopo averlo essiccato fino a costanza della massa , a pressione atmosferica , in una stufa a 102 ± 1° C . La perdita di massa viene calcolata come percentuale sulla massa del campione .
4 . APPARECCHIATURA
4.1 . Bilancia analitica
4.2 . Capsule , preferibilmente di vetro , di nichel , di alluminio o di o di acciaio inossidabile . Le capsule devono essere provviste di coperchi a ottima tenuta ma facili da togliere . Dimensioni consigliabili : diametro = 60 - 80 mm ; profondità = 25 mm circa .
4.3 . Stufa da essiccazione a pressione atmosferica , ben ventilata , termostatata a 102 ± 1° C . La temperatura deve essere uniforme in tutta la stufa .
4.4 . Essiccatore , contenente gel di silice addizionato di un umidità e attivato di recente , ovvero una sostanza essiccante equivalente .
5 . MODO DI OPERARE
5.1 . Aprire la capsula ( 4.2 ) e porla insieme al coperchio nella stufa ( 4.3 ) ; riscaldare per un ' ora circa .
5.2 . Porre il coperchio sulla capsula e metterla nell ' essiccatore ( 4.4 ) . Lasciar raffreddare a temperatura ambiente e pesare con la precisione di 0,1 mg . Sia M0 il peso riscontrato .
5.3 . Porre nella capsula 2 g circa del campione di latte essiccato , chiudere e pesare quanto più rapidamente possibile la capsula chiusa , con l ' approssimazione di 0,1 mg . Sia M1 il peso trovato .
5.4 . Aprire la capsula e rimetterla in stufa per 2 ore insieme al coperchio .
5.5 . Chiudere la capsula , trasferirla nell ' essiccatore , lasciarla raffreddare a temperatura ambiente e pesarla quanto più rapidamente possibile , con l ' approssimazione di 0,1 mg .
5.6 . Aprire la capsula e rimetterla in stufa per 1 ora , insieme al coperchio .
5.7 . Ripetere l ' operazione 5.5 .
5.8 . Ripetere le operazioni 5.5 e 5.6 finchù la differenza di massa fra due successive pesate sia inferiore a 0,5 mg ovvero finchù si osservi un aumento della massa . Se tale aumento si verifica , nel calcolo di cui al punto 6.1 impiegare il valore più basso trovato per la massa . Sia M2 il peso finale registrato .
6 . ESPRESSIONE DEI RISULTATI
6.1 . Metodo di calcolo
La perdita di massa all ' essiccazione , espressa come percentuale sulla massa del campione , è data dalla formula :
M1 - M2 / M1 - M0 x 100
dove :
M0 = massa totale , espressa in grammi , della capsula e del coperchio dopo l ' operazione 5.2 ;
M1 = massa totale , espressa in grammi , della capsula , del coperchio e del campione , dopo l ' operazione 5.3 ;
M2 = massa finale , espressa in grammi , della capsula , del coperchio e del campione dopo l ' operazione 5.7 .
6.2 . Ripetibilità
La differenza fra i risultati di due determinazioni effettuate simultaneamente o in rapida successione dallo stesso analista adoperando lo stesso campione e nelle stesse condizioni , non devono superare 0,1 g di umidità per 100 g del prodotto .
METODO 3 - DETERMINAZIONE DEL CONTENUTO IN MATERIA GRASSA ( METODO ROESE-GOTTLIEB )
1 . OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE
Il presente metodo serve a determinare il contenuto di materia grassa nel :
- latte concentrato ricco di materia grassa o latte concentrato non zuccherato ricco di materia grassa ,
- latte concentrato o latte concentrato non zuccherato o latte intero concentrato ,
- latte concentrato parzialmente scremato o latte concentrato parzialmente scremato non zuccherato ,
- latte concentrato scremato o latte concentrato scremato non zuccherato ,
- latte concentrato zuccherato e latte intero concentrato zuccherato ,
- latte concentrato parzialmente scremato zuccherato ,
- latte concentrato scremato zuccherato .
2 . DEFINIZIONE
Per contenuto in materia grassa dei vari tipi di latte concentrato , s ' intende il contenuto di materia grassa determinato con il presente metodo .
3 . PRINCIPIO
Il contenuto in materia grassa viene determinato per estrazione , con etere etilico ed etere di petrolio , del grasso contenuto in una soluzione alcolica-ammoniacale del campione , seguita da evaporazione dei solventi , pesata del residuo e suo calcolo come percentuale sulla massa del campione , in conformità del principio di Roese-Gottlieb .
4 . REATTIVI
Tutti i reattivi devono essere conformi ai requisiti specificati per la prova in bianco ( 6.1 ) .
Se necessario , i reattivi possono essere ridistillati in presenza di circa 1 g di grasso di burro per ogni 100 ml di solvente .
4.1 . Soluzione di ammoniaca , al 25 % circa ( m/m ) di NH3 ( densità a 20° C = 0,91 ) , o soluzione più concentrata a titolo noto .
4.2 . Etanolo al 96 ± % ( v/v ) ovvero , se esso non è disponibile , etanolo denaturato con metanolo , etilmentilmentone od etere di petrolio .
4.3 . Etere etilico , esente da perossidi
Nota 1 :
Per verificare l ' assenza di perossidi , introdurre in un piccolo cilindro di vetro a tappo smerigliato , previamente lavato con etere , 10 ml dell ' etere stesso ed 1 ml di soluzione al 10 % di ioduro di potassio , preparata di recente . Agitare e lasciar riposare per 1 minuto . Nessuno dei due strati deve colorarsi di giallo .
Nota 2 :
L 'etere etilico può essere mantenuto esente da perossidi introducendovi una lamina di zinco , umida per essere stata completamente immersa per 1 minuto in una soluzione diluita e acidificata di solfato di rame e successivamente risciacquata con acqua . Per ogni litro di soluzione impiegare circa 8 000 m² di lamina di zinco , tagliata in strisce abbastanza lunghe da raggiungere almeno la metà superiore del recipiente .
4.4 . Etere di petrolio , con intervallo di ebollizione compreso tra 30 e 60° C .
4.5 . Solvente misto , da preparare poco prima dell ' uso mescolando volumi uguali di etere etilico ( 4.3 ) e di etere di petrolio ( 4.4 ) ( tutte le volte che si parla di solvente misto , esso può essere sostituito dall ' etere etilico o dall ' etere di petrolio da soli ) .
5 . APPARECCHIATURA
5.1 . Bilancia analitica
5.2 . Tubi o palloni da estrazione , provvisti di tappo di vetro smerigliato o di altri materiali inerti rispetto ai solvente impiegati .
5.3 . Palloni a pareti sottili e a fondo piatto , della capacità di 150-250 ml .
5.4 . Stufa da essiccazione a pressione atmosferica , ben ventilata e termostatata a 102 ± 1° C .
5.5 . Granuli per regolare l ' ebollizione , esenti da grassi , non porosi e non friabili durante l ' uso , come ad esempio perline di vetro o frammenti di carburo di silicio ( l ' impiego di questo materiale è facoltativo : vedi punto 6.2.1 . ) .
5.6 . Sifone , adattabile ai tubi da estrazione .
Centrifuga .
6 . MODO DI OPERARE
6.1 . Prova in bianco
Contemporaneamente alla determinazione del contenuto in materia grassa nel campione , effettuare una prova in bianco su 10 ml d ' acqua , usando lo stesso tipo di apparecchiatura di estrazione , gli stessi reagenti nelle stesse quantità e lo stesso procedimento qui di seguito descritto , salvo il punto 6.2.2 . Se il risultato sulla prova in bianco supera 0,5 mg , i reattivi vanno sottoposti a controllo e quelli impuri vanno purificati o sostituiti .
6.2 . Determinazione
6.2.1 . Essiccare un pallone ( 5.3 ) ( se necessario , unitamente ad alcuni granuli ( 5.5 ) , destinati a regolare l ' ebollizione durante la successiva eliminazione dei solventi ) , mantenendolo in stufa ( 5.4 ) per 30 minuti-1 ora . Lasciare che il recipiente assuma la temperatura della sala delle bilance e pesare con precisione , dopo raffreddamento , con l ' approssimazione di 0,1 mg .
6.2.2 . Agitare il campione preparato , ed immediatamente dopo pesare 2 - 2,5 g di latte concentrato zuccherato ( o4 - 5 g nel caso dei caso dei derivati del latte scremato ) , con l ' approssimazione di 1 mg , direttamente nell ' apparecchio da estrazione ( 5.2 ) , o per differenza . Aggiungere acqua fino a 10,5 ml ed agitare dolcemente , riscaldando un poco ( 40 - 50° C ) finchù il prodotto è completamente disperso . La dipersione del campione dev ' essere completa ; in caso contrario la determinazione va ripetuta .
6.2.3 . Aggiungere 1,5 ml di ammoniaca al 25 % ( 4.1 ) , od un corrispondente volume di soluzione più concentrata e mescolare bene .
6.2.4 . Aggiungere 10 ml di etanolo ( 4.2 ) , e mescolare i liquidi , dolcemente ma a fondo , nell ' apparecchio non chiuso .
6.2.5 . Aggiungere 25 ml di etere dietilico ( 4.3 ) . Se necessario , raffreddare sotto acqua corrente ; chiudere l ' apparecchio e agitarlo vigorosamente per 1 minuto , capovolgendolo più volte .
6.2.6 . Togliere precauzione il tappo ed aggiungere 25 ml di etere di petrolio ( 4.4 ) , utilizzando i primi ml per lavare il tappo e l ' interno del collo dell ' apparecchio , raccogliendo il liquido di lavaggio nell ' interno di questo . Riapplicare il tappo ; scuotere e capovolgere più volte per 30 secondi . Non agitare troppo vigorosamente se non è previsto l ' uso della centrifuga ( vedi punto 6.2.7 ) .
6.2.7 . Lasciar riposare l ' apparecchio finchù lo strato superiore di liquido è divenuto limpido e si è nettamente separato dallo strato acquoso inferiore . Si può anche effettuare la separazione adoperando una centrifuga adatta .
Nota :
Se si impiega una centrifuga non azionata da un motore trifase , possono aversi delle scintille , e pertanto si curerà di evitare esplosioni o incendi dovuti a vapori di etere ( provenienti , ad esempio , da una provetta rotta ) .
6.2.8 . Togliere il tappo , lavare il tappo stesso e l ' interno del collo dell ' apparecchio con pochi millilitri di solvente misto ( 4.5 ) , raccogliendo il liquido di lavaggio nell ' apparecchio . Travasare con precauzione la massima parte possibile dello strato superiore di liquido decantandolo o sifonandolo ( 5.6 ) nel pallone preparato ( 6.2.1 ) .
Nota :
Se il travaso non viene effettuato per sifonaggio , può essere necessario aggiungere un po ' d ' acqua per sollevare la superficie di contatto fra i due liquidi in modo da facilitare la decantazione .
6.2.9 . Lavare l ' esterno del collo dell ' apparecchio o l 'estremità e la parte inferiore del sifone con pochi millilitri di solvente misto . Fare in modo che il liquido di lavaggio dell ' esterno dell ' apparecchio defluisca nel pallone e che il liquido di lavaggio dell ' interno del collo e del sifone defluisca nell ' apparecchio di estrazione .
6.2.10 . Procedere a una seconda estrazione ripetendo le fasi da 6.2.5 a 6.2.9 compresa , ma adoperando soltanto 15 ml di etere dietilico e 15 ml di etere di petrolio .
6.2.11 . Effettuare una terza estrazione ripetendo il procedimento 6.2.10 , ma omettendo il lavaggio finale ( 6.2.9 ) .
Nota :
Quando si analizzano campioni di latte concentrato scremato non zuccherato o zuccherato , questa terza estrazione non è necessaria .
6.2.12 . Evaporare o distillare con precauzione la massima quantità possibile di solvente ( compreso l ' etanolo ) . Se il recipiente è di piccola capacità , dopo ogni estrazione sarà necessario eliminare nel modo sopra indicato una parte del solvente .
6.2.13 . Quando l ' odore di solvente non è più percepibile , porre il recipiente nella stufa , coricato su un fianco , e riscaldarlo per un ' ora .
6.2.14 . Togliere il recipiente dalla stufa , lasciarlo raffreddara alla temperatura della sala delle bilance e pesarlo con l ' approssimazione di 0.1 mg .
6.2.15 . Ripetere le operazioni 6.2.13 e 6.2.14 con tempi di riscaldamento di 30 - 60 minuti finchù la differenza fra due successive pesate sia inferiore a 0,5 mg ovvero si osservi un aumento della massa . Se tale aumento si verifica , nel calcolo di cui al punto 7.1 impiegare il valore più basso trovato per la massa . Sia Mi la massa finale registrata .
6.2.16 . Aggiungere 15 - 25 ml di etere di petrolio , per confermare che la sostanza estratta è completamente solubile . Riscaldare blandamente ed agitare il solvente in senso rotatorio finchù il grasso è disciolto .
6.2.16.1 . Se la sostanza estratta è completamente solubile nell ' etere di petrolio , la massa del grasso è data dalla differenza fra i pesi determinati nel modo indicato ai punti 6.2.1 e 6.2.15 .
6.2.16.2 . Se è presente una certa quantità di residuo insolubile , o in caso di dubbio , estrarre completamente il grasso dal recipiente lavando ripetutamente con etere di petrolio tiepido , facendo in modo che il residuo insolubile si depositi prima di ogni decantazione . Risciacquare tre volte l ' esterno del collo del recipiente . Riscaldare per 1 ora in stufa il recipiente , deposto sul fianco ; lasciarlo raffreddare alla temperatura della sala delle bilance come prima indicato al punto 6.2.1 e pesare con l ' approssimazione di 0,1 mg . La massa del grasso è data dalla differenza tra la massa ottenuta al punto 6.2.15 e la massa finale così trovata .
7 . ESPRESSIONE DEI RISULTATI
7.1 . Calcolo
La massa del grasso estratto , espressa in grammi , è data dalla formula :
( M1 - M2 ) - ( B1 - B2 )
e il contenuto in grasso del campione , espresso come percentuale , è dato dalla formula :
( M1 - M2 ) - ( B1 - B2 ) / S × 100
dove :
M1 = massa , espressa in grammi , del pallone e del grasso dopo l ' operazione 6.2.15 ;
M2 = massa , espressa in grammi del pallone dopo l ' operazione 6.2.1 o , in caso di presenza di residuo insolubile o di dubbio , dopo la fase 6.2.16.2 ;
B1 = massa , espressa in grammi , del pallone adoperato per la prova in bianco , dopo la fase 6.2.15 ;
B2 = massa , espressa in grammi del pallone adoperato per la prova in bianco , dopo l ' operazione 6.2.1 o , in caso di presenza di residuo insolubile o di dubbio , dopo la fase 6.2.16.2 ;
S = massa , espressa in grammi , del campione usato .
7.2 . Ripetibilità
La differenza fra i risultati di due determinazioni , effettuate simultaneamente o in rapida successione dallo stesso analista adoperando lo stesso campione , non deve superare 0,05 g di grasso per 100 g del prodotto .
METODO 4 - DETERMINAZIONE DEL CONTENUTO DI MATERIA GRASSA ( METODO ROESE-GOTTLIEB )
1 . OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE
Il presente metodo serva a determinare il contenuto di materia grassa del :
- latte in polvere ricco di materia grassa o polvere di latte ricco di materia grassa ,
- latte in polvere , latte intero in polvere , polvere di latte o polvere di latte intero ,
- latte parzialmente scremato in polvere o polvere di latte parzialmente scremato ,
- latte scremato in polvere o polvere di latte scremato .
2 . DEFINIZIONE
Per contenuto in materia grassa dei vari tipi di latte concentrato s ' intende il contenuto di materia grassa determinato con il presente metodo .
3 . PRINCIPIO
Il contenuto in materia grassa viene determinato per estrazione , con etere etilico ed etere di petrolio , del grasso contenuto in una soluzione alcolica ammoniacale del campione , seguita da evaporazione dei solventi , pesata del residuo e suo calcolo come percentuale sulla massa del campione , in conformità del principio di Roese-Gottlieb .
4 . REATTIVI
Tutti i reattivi devono essere conformi ai requisiti specificati per la prova in bianco ( 6.1 ) . Se necessario , i reattivi possono essere ridistillati in presenza di circa 1 g di grasso di burro per ogni 100 ml di solvente .
4.1 . Soluzione di ammoniaca , al 25 % circa ( m/m ) di NH3 ( densità 20° C = 0,91 ) , o soluzione più concentrata a titolo noto .
4.2 . Etanolo al 96 ± 2 % ( v/v ) , ovvero , se esso non è disponibile , etanolo denaturato con metanolo , etilmetilchetone od etere di petrolio .
4.3 . Etere etilico , esente da perossidi .
Nota 1 :
Per verificare l ' assenza di perossidi , introdurre in un piccolo cilindro di vetro a tappo smerigliato , previamente lavato con etere , 10 ml dell ' etere stesso ed 1 ml di soluzione al 10 % di ioduro di potassio , preparata di recente . Agitare e lasciar riposare per 1 minuto . Nessuno dei due strati deve colorarsi di giallo .
Nota 2 :
L ' etere etilico può essere mantenuto esente da perossidi introducendovi una lamina di zinco , umida per essere stata completamente immersa per 1 minuto in una soluzione diluita e acidificata di solfato di rame e successivamente risciacquata con acqua . Per ogni litro di soluzione impiegare circa 8 000 mm² di lamina di zinco , tagliata in strisce abbastanza lunghe da raggiungere almeno la metà superiore del recipiente .
4.4 . Etere di petrolio , con intervallo di ebollizione compreso tra 30 e 60° C .
4.5 . Solvente misto , da preparare poco prima dell ' uso mescolando volumi uguali di etere etilico ( 4.3 ) e di etere di petrolio ( 4.4 ) ( tutte le volte che si parla di solvente misto , esso può essere sostituito dall ' etere etilico o dall ' etere di petrolio da soli ) .
5 . APPARECCHIATURA
5.1 . Bilancia analitica .
5.2 . Tubi o palloni da estrazione , provvisti di tappo di vetro smerigliato , o di altri materiali inerti rispetto ai solventi impiegati .
5.3 . Palloni , a pareti sottili e a fondo piatto , della capacità di 150 - 250 ml .
5.4 . Stufa da essiccazione a pressione atmosferica , ben ventilata e termostatata a 102 ± 1° C .
5.5 . Granuli per regolare l ' ebollizione , esenti da grassi , non porosi e non friabili durante l ' uso , come ad esempio perline di vetro o frammenti di carburo di silicio ( l ' impiego di questo materiale è facoltativo ; vedi punto 6.2.1 ) .
5.6 . Bagnomaria , a 60 - 70° C .
5.7 . Sifone , adattabile ai tubi da estrazione .
5.8 . Centrifuga .
6 . MODO DI OPERARE
6.1 . Prova in bianco
Contemporaneamente alla determinazione del contenuto in materia grassa nel campione , effettuare una prova in bianco su 10 ml d ' acqua , usando lo stesso tipo di apparecchiatura di estrazione , gli stessi reagenti nelle stesse quantità e lo stesso procedimento qui di seguito descritto , salvo il punto 6.2.2 . Se il risultato sulla prova in bianco supera 0,5 mg , i reattivi vanno sottoposti a controllo e quelli impuri vanno purificati o sostituiti .
6.2 Determinazione
6.2.1 . Essiccare un pallone ( 5.3 ) ( se necessario , unitamente ad alcuni granuli ( 5.5 ) , destinati a regolare l ' ebollizione durante la successiva eliminazione dei solventi ) , mantenendolo in stufa ( 5.4 ) per 30 minuti - 1 ora . Lasciare che il recipiente assuma la temperatura della sala delle bilance e pesare con precisione , dopo raffreddamento , con l ' approssimazione di 0,1 mg .
6.2.2 . Pesare accuratamente , direttamente nell ' apparecchio da estrazione o per differenza , con l ' approssimazione di 0,1 mg , circa 1 g di latte intero in polvere o circa 1,5 g di latte in polvere parzialmente o totalmente scremato . Aggiungere 10 ml d ' acqua e agitare dolcemente fino a dispersione completa ( per taluni campioni può essere necessario riscaldare ) .
6.2.3 . Aggiungere 1,5 ml di ammoniaca al 25 % ( 4.1 ) , od un corrispondente volume di soluzione più concentrata e riscaldare in bagnomaria a 60 - 70° C per 15 minuti , agitando di tanto in tanto . Raffreddare ( per esempio , sotto acqua corrente ) .
6.2.4 . Aggiungere 10 ml di etanolo ( 4.2 ) , e mescolare i liquidi , dolcemente ma a fondo , nell ' apparecchio non chiuso .
6.2.5 . Aggiungere 25 ml di etere etilico ( 4.3 ) . Se necessario , reffreddare sotto acqua corrente ; chiudere l ' apparecchio e agitarlo vigorosamente per 1 minuto , capovolgendolo più volte .
6.2.6 . Togliere con precauzione il tappo ed aggiungere 25 ml di etere di petrolio ( 4.4 ) , utilizzando i primi ml per lavare il tappo e l ' interno del collo dell ' apparecchio e raccogliendo il liquido di lavaggio nell ' interno di questo . Riapplicare il tappo ; scuotere e capovolgere più volte per 30 secondi . Non agitare troppo vigorosamente se non è previsto l ' uso della centrifuga ( vedi punto 6.2.7 ) .
6.2.7 . Lasciar riposare l ' apparecchio finchù lo strato superiore di liquido è divenuto limpido e si è nettamente separato dallo strato acquoso inferiore . Si può anche effettuare la separazione adoperando una centrifuga adatta .
Nota :
Se si impiega una centrifuga non azionata da un motore trifase , possono aversi delle scintille , e pertanto si curerà di evitare esplosioni o incendi dovuti a vapori di etere ( provenienti , ad esempio , da una provetta rota ) .
6.2.8 . Togliere il tappo , lavare il tappo stesso e l ' interno del collo dell ' apparecchio con pochi millilitri di solvente misto ( 4.5 ) , raccogliendo il liquido di lavaggio nell ' aparecchio . Travasare con precauzione la massima parte possibile dello strato superiore di liquido decantandolo o sifonandolo ( 5.6 ) nel pallone preparato ( 6.2.1 ) .
Nota :
Se il travaso non viene effettuato per sifonaggio , può essere necessario aggiungere un po ' d ' acqua per sollevare la superficie di contratto fra i due liquidi in modo da facilitare la decantazione .
6.2.9 . Lavare l ' esterno e l ' interno del collo dell ' apparecchio o l ' estremità e la parte inferiore del sifone con pochi millilitri di solvente misto . Fare in modo che il liquido di lavaggio dell ' esterno dell ' apparecchio defluisca nel pallone e che il liquido di lavaggio dell ' interno del collo e del sifone defluisca nell ' apparecchio di estrazione .
6.2.10 . Procedere a una seconda estrazione ripetendo le fa da 6.2.5 a 6.2.9 compresa , ma adoperando soltanto 15 ml di etere etilico e 15 ml di etere di petrolio .
6.2.11 . Effettuare una terza estrazione ripetendo il procedimento 6.2.10 , ma omettendo il lavaggio finale ( 6.2.9 ) .
Nota :
Quando si analizzano campioni di latte scremato in polvere , questa terza estrazione non è necessario .
6.2.12 . Evaporare o distillare con precauzione la massima quantità possibile di solvente ( compreso l ' etanolo ) . Se il recipiente è di piccola capacità , dopo ogni estrazione sarà necessario eliminare nel modo sopra indicato una parte del solvente .
6.2.13 . Quando l ' odore di solvente non ù più percepibile , porre il recipiente nella stufa , coricato su un fianco , e riscaldarlo per un ' ora .
6.2.14 . Togliere il recipiente dalla stufa , lasciarlo raffreddare alla temperatura della sala delle bilance e pesarlo con l ' approssimazione di 0,1 mg .
6.2.15 .Ripetere le operazioni 6.2.13 e 6.2.14 , con tempi riscaldamento di 30 - 60 minuti finchù la differenza fra due successive pesate sia inferiore a 0,5 mg ovvero si osservi un aumento della massa . Se tale aumento si verifica , nel calcolo di cui al punto 7.1 impiegare il valore più basso trovato per la massa . Sia M1 la massa finale registrata .
6.2.16 . Aggiungere 15 - 25 ml di etere di petrolio , per confermare che la sostanza estratta è completamente solubile . Riscaldare blandamente ed agitare il solvente in senso rotatorio finchù il grasso è disciolto .
6.2.16.1 . Se la sostanza estratta è completamente solubile nell ' etere di petrolio , la massa del grasso è data dalla differenza fra i pesi determinati nel modo indicato ai punti 6.2.1 e 6.2.15 .
6.2.16.2 . Se è presente una certa quantità di residuo insolubile , o in caso di dubbio , estrarre completamente il grasso dal recipiente lavando ripetutamente con etere di petrolio tiepido , facendo in modo che il residuo insolubile si depositi prima di ogni decantazione . Risciacquare tre volte l ' esterno del collo del recipiente .
Riscaldare per 1 ora in stufa il recipiente , deposto sul fianco ; lasciarlo raffreddare alla temperatura della sala delle bilance come prima indicato al punto 6.2.1 e pesare con l ' approssimazione di 0,1 mg . La massa del grasso è data dalla differenza tra la massa ottenuta al punto 6.2.15 e la massa finale cosi trovata .
7 . ESPRESSIONE DEI RISULTATI
7.1 . Calcolo
La massa del grasso estratto , espressa in grammi , è data dalla formula :
( M1 - M2 ) - ( B1 - B2 )
e il contenuto in grasso del campione , espresso come percentuale , è dato dalla formula :
( M1 - M2 ) - ( B1 - B2 ) / s × 100
dove :
M1 = massa , espressa in grammi , del pallone e del grasso dopo l ' operazione 6.2.15 ;
M2 = massa , espressa in grammi , del pallone , dopo l ' operazione 6.2.1 o , in caso di presenza di residuo insolubile o di dubbio , dopo la fase 6.2.16.2 ;
B1 = massa , espressa in grammi , del pallone adoperato per la prova in bianco , dopo la fase 6.2.15 ;
B2 = massa , espressa in grammi del pallone adoperato per la prova in bianco , dopo l ' operazione 6.2.1 o , in caso di presenza di residuo insolubile o di dubbio , dopo la fase 6.2.16.2 ;
S = massa , espressa in grammi , del campione usato .
7.2 . Ripetibilità
La differenza fra i risultati di due determinazioni , effettuate simultaneamente o in rapida successione dallo stesso analista adoperando lo stesso campione e nelle stesse condizioni , non devono superare 0,2 g di grasso per 100 g del prodotto , ad eccezione del latte scremato per il quale non deve superare 0,1 g per 100 g di prodotto .
METODO 5 - DETERMINAZIONE DEL CONTENUTO IN SACCAROSIO ( METODO POLARIMETRICO )
1 . OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE
Il presente metodo serve a determinare il contenuto di saccarosio nel :
- latte concentrato zuccherato e latte intero concentrato zuccherato ,
- latte concentrato parzialmente scremato zuccherato ,
- latte concentrato scremato zuccherato .
I campioni non devono contenere zucchero invertito .
2 . DEFINIZIONE
Per « contenuto in saccarosio » nei latti condensati zuccherati s ' intende il contenuto in saccarosio determinato col metodo qui indicato .
3 . PRINCIPIO
Il metodo è basato sul principio dell ' inversione secondo Clerget , consistente in un blando trattamento del campione con un acido , tale da provocare l ' idrolisi del saccarosio ma da restare praticamente senza effetto sul lattosio o su altri zuccheri . Il contenuto di saccarosio viene ricavato dalla variazione del potere rotatorio della soluzione .
Si prepara un filtrato limpido del campione , esente da mutarotazione dovuta al lattosio , trattando la soluzione con ammoniaca , poi neutralizzandola e defecandola per aggiunta successiva di soluzioni di acetato di zinco e di ferrocianuro di potassio .
Si procede quindi all ' idrolisi specifica del saccarosio su un ' aliquota del filtrato .
Dal potere rotatorio del filtrato prima e dopo inversione è possibile , mediante opportune formule , calcolare il contenuto in saccarosio .
4 . REATTIVI
4.1 . Soluzione di acetato di zinco , 1 M : sciogliere in acqua 21,9 g di acetato di zinco diidrato cristallizzato , Zn ( C2H3O2 ) 2 . 2H2O e 3 ml di acido acetico glaciale , e portare con acqua a 100 ml .
4.2 . Soluzione di ferrocianuro di potassio , 0,25 M : sciogliere in acqua 10,6 g di ferrocianuro di potassio triidrato , K4 ( Fe ( CN ) 6 ) . 3H2O , e portare a 100 ml con acqua .
4.3 . Soluzione di acido colridrico , 6,35 ± 0,20 M ( 20-22 % ) o 5,0 ± 2,0 M ( 16-18 % ) .
4.4 . Soluzione di ammoniaca 2,0 ± 0,2 M ( 3,5 % ) .
4.5 . Soluzione di acido acetico , 2,0 ± 0,2 M ( 12 % ) .
4.6 . Blu di bromotimolo ( indicatore ) : soluzione all ' 1 % ( m/v ) in etanolo .
5 . APPARECCHIATURA
5.1 . Bilancia , sensibilità 10 mg .
5.2 . Tubo polarimetrico , della lunghezza di 2 dm esattamente misurata .
5.3 . Polarimetro o saccarimetro :
a ) Polarimetro a luce di sodio o a luce verde di mercurio ( lampada a vapori di mercurio con prisma o schermo speciale Wratten n . 77 A ) , leggibile con la precisione di almeno 0,05 gradi d ' angolo ;
b ) saccarimetro con scala saccarimetrica internazionale , illuminato facendo passare la luce bianca attraverso un filtro costituito da uno spessore di 15 mm di una soluzione al 6 % di bicromato di potassio , ovvero mediante una lampada al sodio , e leggibile con la precisione di almeno 0,1 gradi della scala saccarimetrica internazionale .
5.4 . Bagnomaria , regolato su 60 ± 1° C .
6 . MODO DI OPERARE
6.1 . Determinazione di controllo
Per standardizzare il procedimento , i reattivi e l ' apparecchiatura , effettuare in doppio una determinazione di controllo , nel modo appresso indicato , impiegando una miscela di 100 g di latte , o 110 g di latte scremato , più 18,00 g di saccarosio puro , corrispondente a 40,00 g di latte concentrato contenente il 45 % di saccarosio . Calcolare il contenuto di zucchero applicando la formula indicata al punto 7 , sostituendo rispettivamente ad M , F e P , nella formula 1 , la quantità di latte prelevata e il contenuto in grassi e in proteine di tale latte , e sostituendo ad M , nella formula 2 , il valore di 40,00 . La media dei valori trovati deve essere uguale a 45,0 ± 0,2 % .
6.2 . Determinazione
6.2.1 . In un becher da 100 ml , pesare con l ' approssimazione di 10 mg circa 40 g del campione ben rimescolato . Aggiungere 50 ml di acqua calda a 80 - 90° C e mescolare bene .
6.2.2 . Trasferie quantitativamente la miscela in un pallone tarato da 200 ml , risciacquando successivamente il becher con acqua a 60° C , finchù il volume totale sia compreso tra 120 e 150 ml . Mescolare e raffreddare a temperatura ambiente .
6.2.3 . Aggiungere 85 ml della soluzione diluita ammoniaca ( 4.4 ) . Mescolare di nuovo e lasciar riposare per 15 minuti .
6.2.4 . Neutralizzare l ' ammoniaca aggiungendo una quantità equivalente della soluzione diluita di acido acetico ( 4.5 ) . Determinare in precedenza il numero esatto di ml titolando la soluzione di ammoniaca impiegando come indicatore il blu bi bromotimolo ( 4.6 ) . Mescolare .
6.2.5 . Mescolando dolcemente facendo ruotare il pallone inclinato , aggiungere 12,5 ml di soluzione di acetato di zinco ( 4.1 ) .
6.2.6 . Aggiungere 12 ml di soluzione di ferrocianuro di potassio ( 4.2 ) , analogamente a quanto fatto per la soluzione di acetato .
6.2.7 . Portare il contenuto del pallone a 20° C e diluire a 200 ml con acqua a 20° C .
Nota :
Durante ciascuna delle fasi fin qui descritte , tutte le aggiunte di acqua o di reattivi debbono essere fatte in modo da evitare la formazione di bolle d ' aria ; per la stessa ragione bisogna rimescolare facendo ruotare il pallone anzichù scuotendolo . L ' eliminazione delle bolle d ' aria eventualmente presenti prima di portare al volume di 200 ml può essere ficilitata collegando provvisoriamente il pallone a una pompa a vuoto e facendolo ruotare .
6.2.8 . Chiudere il pallone con un tappo asciutto e mescolare intimamente scuotendo con energia .
6.2.9 . Lasciar riposare per qualche minuto , poi filtrare su filtro asciutto , scartando i primi 25 ml di filtrato .
6.2.10 . Polarizzazione diretta : determinare la rotazione ottica del filtrato a 20 ± 1° C .
6.2.11 . Inversione : in un pallone tarato da 50 ml pipettare 40 ml del filtrato sopra ottenuto . Aggiungere 6,0 ml di acido cloridrico 6,35 M ( 4.3 ) oppure 7.6 ml di acido cloridrico 5,00 M ( 4.3 ) .
Porre il pallone in bagnomaria a 60° per 15 minuti , accertandosi che la soluzione resti completamente immersa . Mescolare con un movimento rotatorio per i primi 5 minuti , durante i quali il contenuto del pallone dovrebbe aver raggiunto la temperatura del bagno . Raffreddare a 20° C e portare a volume con acqua a 20° C . Rimescolare e lasciar riposare per un ' ora a tale temperatura .
6.2.12 . Polarizzazione dopo l ' inversione
Determinare la rotazione ottica a 20 ± 0,2 C della soluzione invertita ( se durante la misura il campo di variazione della temperatura T del liquido contenuto nel tubo del polarimetro varia di oltre ± 0,2° C , va applicata la correzione per la temperatura di cui al punto 7.2 ) .
7 . ESPRESSIONE DEI RISULTATI
7.1 . Metodo di calcolo
Calolare il contenuto in saccarosio mediante le seguenti formule :
1 . v = M / 100 ( 1,08 F + 1,55 P )
2 . S = D-1,25I / Q × V-v / V × V / L × M %
dove :
S = contenuto in saccarosio ,
M = massa in grammi del campione pesato ,
F = percentuale di materia grassa contenuta nel campione ,
P = percentuale di proteine ( N × 6,38 ) contenuta nel campione ,
V = volume in ml al quale il campione è stato diluito prima della filtrazione ,
v = correzione in ml per il volume di precipitato formato durante la defecazione ,
D = lettura diretta al polarimetro ( polarizzazione prima dell ' inversione ) ,
I = lettura al polarimetro dopo l ' inversione ,
L = lunghezza in dm del tubo polarimetrico ,
Q = fattore d ' inversione ( i relativi valori sono indicati più oltre ) ,
Osservazioni :
a ) Quando si pesano esattamente 40,00 g di latte condensato e si impiegano un polarimetro a luce di sodio graduato in gradi d ' angolo e un tubo polarimetrico da 2 dm alla temperatura di 20,0° C ± 0,1° C , il contenuto in saccarosio del latte concentrato normale ( C = 9 ) può essere calcolato con la seguente formula :
S = ( D - 1,25 I ) ( 2,833 - 0,00612 F - 0,00878 P ) .
b ) Se la polarizzazione dopo inversione è misurata a temperatura diversa da 20° C , i valori trovati vanno moltiplicati per il fattore 1 + 0,0037 ( T - 20 ) .
7.2 . Valori del fattore d ' inversione Q
Le seguenti formule danno dei valori precisti di Q per varie sorgenti luminose , con le opportune correzioni per la concentrazione e la temperatura :
luce di sodio e polarimetro graduato in gradi d ' angolo :
Q = 0,8825 + 0,006 ( C - 9 ) - 0,0033 ( T - 20 ) ;
luce verde del mercurio e polarimetro graduato in gradi d ' angolo :
Q = 1,0392 + 0,007 ( C - 9 ) - 0,0039 ( T - 20 ) ,
luce bianca con filtro al dicromato e saccarimetro graduato in gradi saccarimetrici internazionali :
Q = 2,549 + 0,0017 ( C - 9 ) - 0,0095 ( T - 20 ) .
Nelle precedenti formule :
C = percentuale degli zuccheri totali nella soluzione invertita polarizzata ,
T = temperatura della soluzione invertita durante la lettura polarimetrica .
Nota 1 :
La percentuale di zuccheri totali C nella soluzione invertita può essere calcolata nel modo abituale in base alla lettura diretta e al cambiamento d ' inversione , adoperando i valori usuali per la rotazione specifica del saccarosio , del lattosio e dello zucchero invertito .
La correzione 0,006 ( C - 9 ) ecc . è precisa soltanto se è C * 9 ; per il normale latte condensato essa può essere trascurata , in quanto C è vicino a 9 .
Nota 2 :
Variazioni di ± 1° C dalla temperatura di 20° C non influiscono gran che sulla lettura diretta , ma una variazione di oltre 0,2° C nella lettura della soluzione invertita impone una correzione .
La correzione - 0,0033 ( T - 20 ) ecc . è precisa soltanto fra i 18° e 22° C .
7.3 . Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni effettuate simultaneamente o in rapida successione dallo stesso analista , adoperando lo stesso campione e nelle stesse condizioni , non devono superare 0,3 grammi di saccarosio per 100 g di latte condensato .
METODO 6 - DETERMINAZIONE DEL CONTENUTO IN ACIDO LATTICO E LATTATI
1 . OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE
Il presente metodo serve a determinare la quantità di acido e di lattati , espressi come acido lattico :
- nel latte in polvere ricco di materia grassa o polvere di latte ricca di materia grassa ,
- nel latte in polvere , latte intero in polvere , polvere di latte o polvere di latte intero ,
- nel latte parzialmente scremato in polvere o polvere di latte parzialmente scremato ,
- nel latte scremato in polvere o polvere di latte scremato .
2 . DEFINIZIONE
Per contenuto in acido lattico e lattati dei latti in polvere s ' intende il contenuto in acido lattico e lattati , espressi come acido lattico , determinato con il metodo qui indicato .
3 . PRINCIPIO
Da una soluzione del campione si provvede ad eliminare contemporaneamente la materia grassa , le proteine ed il lattosio aggiungendo soluzione di solfato di rame e di idrossido di calcio e filtrando .
L ' acido lattico e i lattati contenuti nel filtrato vengono tasformati in acetaldeide aggiungendo acido solforico concentrato in presenza di solfato di rame .
Il contenuto di acido lattico viene determinato colorimetricamente impiegando p-idrossidifenile .
L ' acido lattico ed i lattati sono espressi come milligrammi di acido lattico contenuti in 100 g di solidi magri .
4 . REATTIVI
4.1 . Soluzione di solfato rameico , sciogliere in acqua 250 g di solfato rameico ( CuSO4.5H2O ) e portare a 1 000 ml con acqua .
4.2 . Sospensione di idrossido di calcio
4.2.1 . In un mortaio , frantumare con acqua 300 g di idrossido di calcio ( Ca ( OH ) 2 ) , impiegando in tutto 900 ml di acqua . La sospensione deve essere preparata prima dell ' uso .
4.2.2 . Sospensione di idrossido di calcio , in un mortaio , frantumare con acqua 300 g di idrossido di calcio ( Ca ( oh ) 2 ) , impiegando in tutto 1 400 ml di acqua . La sospensione deve essere preparata prima dell ' uso .
4.3 . Soluzione acido solforico-solfato rameico , a 300 ml di acido solforico al 95,5 - 97,0 % ( m/m ) di H2SO4 , aggiungere 0,5 ml della soluzione di solfato rameico ( 4.1 ) .
4.4 . Soluzione di p-idrossidifenile ( C6H5C6H4OH ) agitando e riscaldando leggermente , sciogliere 0,75 g di p-idrossidifenile in 5 ml di soluzione acquosa di idrossido di sodio contenente 5 g di NaOH in 100 ml . Portare a 50 ml con acqua in un pallone tarato . Conservare la soluzione in bottiglie di vetro bruno e in luogo oscuro e fresco . La soluzione non va impiegata se si manifestano variazioni di colore o intorbidamenti . La massima conservabilità è di 72 ore .
4.5 . Soluzione standard di acido lattico , poco prima dell ' uso , sciogliere in acqua 0,1067 g di lattato di litio ( CH3CHOHCOOLi ) , e portare a 1 000 ml in pallone tarato . 1 ml di questa soluzione corrisponde a 0,1 mg di acido lattico .
4.6 . Latte ricostituito standard , analizzare in precedenza diversi campioni di latte in polvere di ottima qualità . Per la preparazione della curva di taratura , scegliere il campione con il più basso contenuto di acido lattico , non più 30 mg di acido lattico in 100 g di solidi magri . Seguire le modalità descritte più oltre ai punti 6.2.1 e 6.2.2 .
5 . ATTREZZATURA
5.1 . Bilancia analitica .
5.2 . Spettrofotometro , adatto a letture alla lunghezza d ' onda di 570 nm .
5.3 . Bagnomaria a 30 ± 2° C .
5.4 . Mortaio e pestello
5.5 . Carta da filtro ( Schleicher & Schull 595 , Whatman 1 o equivalente )
5.6 . Tubi da saggio , in pirex o equivalenti ( dimensioni : 25 × 150 mm ) .
Nota :
Tutta la vetreria deve essere perfettamente pulita e destinata ad essere usata soltanto per questa determinazione . Prima di essere lavata , la vetreria contenente residui di precipitato , va risciacquata con acido cloridrico concentrato .
6 . MODO DI OPERARE
6.1 . Prova in bianco
Effettuare una prova in bianco ponendo 30 ml di acqua in un matraccio tarato da 50 ml e trattando come prescritto ai punti da 6.2.4 a 6.2.11 compreso . Se il bianco , misurato in confronto con l ' acqua , supera l ' equivalente di 20 mg di acido lattico in 100 g di solidi magri , i reattivi devono essere controllati e reagenti impuri sostituiti . La prova in bianco va effetuata contemporaneamente all ' analisi del campione .
6.2 . Determinazione
Nota :
Evitare la contaminazione con impurezze , specialmente con saliva e sudore .
6.2.1 . Determinare il contenuto in solidi non lipidici ( a ) del campione , sottraendo da 100 il contenuto in grassi ( ottenuto con il metodo 4 ) e il contenuto in umidità ( ottenuto con il metodo 2 ) .
6.2.2 . Pesare ( 1 000 / a - 10 ) grammi del campione con l ' approssimazione di 0,1 g . Trasferire in pallone tarato , portare a 100 ml di acqua e mescolare energicamente .
6.2.3 . Pipettare 5 ml della soluzione ottenuta in un tubo graduato da 50 ml ; diluire con acqua a 30 ml .
6.2.4 . Agitando continuamente , aggiungere 3 ml della soluzione di solfato rameico ( 4.1 ) e lasciar riposare 10 minuti .
6.2.5 . Agitando continuamente , aggiungere 10 ml della sospensione di idrossido di calcio .
6.2.6 . Portare a 50 ml con acqua , agitare vigorosamente , lasciar riposare per 10 minuti poi filtrare . Buttar via la prima porzione di liquido che defluisce .
6.2.7 . Pipettare 1 ml del filtrato in un tubo da saggio ( 5.6 ) .
6.2.8 . Con una buretta o pipetta graduata , aggiungere nel tubo 6,0 ml della soluzione di acido solforico e solfato di rame ( 4.3 ) Mescolare .
6.2.9 . Riscaldare in bagnomaria bollente per 5 minuti . Riportare a temperatura ambiente sotto acqua corrente .
6.2.10 . Aggiungere 2 gocce di reattivo al p-idrossidifenil ( 4.4 ) ed agitare vigorosamente in modo da distribuire omogeneamente il reattivo in tutto il liquido . Porre il tubo in bagnomaria a 30 ± 2° C ; mantenervelo per 15 minuti , agitando di tanto in tanto .
6.2.11 . Porre il tubo in bagnomaria bollente per 90 secondi . Riportare a temperatura ambiente sotto acqua corrente .
6.2.12 . Misurare entro 3 ore la densità ottica contro la prova in bianco ( 6.1 ) , alla lunghezza d ' onda specificata al punto 5.2 .
6.2.13 . Se la densità ottica supera quella del punto più elevato della curva standard , ripetere la prova sul filtrato ottenuto al punto 6.2.6 , adeguatamente diluito .
6.3 . Preparazione della prova standard
6.3.1 . In 5 cilindri graduati da 50 ml pipettare 5 ml del latte ricostituito ( 4.6 ) , poi , rispettivamente , 0 , 1 , 2 , 3 e 4 ml della soluzione standard ( 4.5 ) , in modo da ottenere un campo di standard corrispondenti a 0 , 20 , 40 , 60 e 80 mg di acido lattico aggiunto riferiti a 100 g di solidi magri del latte essiccato .
6.3.2 . Diluire con acqua a 30 ml circa e trattare come descritto ai punti da 6.2.4 a 6.2.11 compreso .
6.3.3 . Misurare le densità ottiche degli standard ( 6.3.1 ) contro il « bianco » ( 6.1 ) , alla lunghezza d ' onda specificata al punto 5.2 . Diagrammare le densità ottiche in funzione delle quantità di acido lattico indicate al punto 6.3.1 , cioè 0 , 20 , 40 , 60 e 80 mg in 100 g di solidi magri . Tracciare la retta che si adatta meglio ai punti riportati sul diagramma ricavare la curva standard spostando tale retta parallelamente a sù stessa in modo da farla passare attraverso l ' origine .
7 . ESPRESSIONE DEI RISULTATI
7.1 . Metodo di calcolo
Facendo riferimento alla curva standard , trasformare la densità ottica misurata secondo 6.2.12 o 6.2.13 in mg di acido lattico riferiti a 100 g di solidi magri contenuti nel campione . Qualora il filtrato sia stato diluito secondo 6.2.13 , moltiplicare il risultato per i fattori di diluizione .
7.2 . Ripetibilità
La differenza fra i risultati di due determinazioni effettuate simultaneamente o in rapida successione dallo stesso analista adoperando lo stesso campione e nelle stesse condizioni , non deve superare 8 mg di acido lattico riferiti a 100 g di solidi magri . Ciò vale per contenuti fino a 80 mg . Per valori più alti , la differenza non deve superare il 10 % del valore più basso .
METODO 7 - DETERMINAZIONE DELL ' ATTIVITÀ FOSFATASICA ( METODO SANDERS E SAGER MODIFICATO )
1 . OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE
Il presente metodo descrive la determinazione dell ' attività fosfatasica nel :
- latte in polvere ricco di materia grassa o polvere di latte ricco di materia grassa ;
- latte in polvere , latte intero in polvere , polvere di latte o polvere di latte intero ;
- latte parzialmente scremato in polvere o polvere di latte parzialmente scremato ;
- latte scremato in polvere o polvere di latte scremato .
2 . DEFINIZIONI
L ' attività fosfatasica del latte in polvere è una misura della quantità di fosfatasi alcalina attiva ( libera ) presente . Essa viene espressa come la quantità di fenolo ( in mg ) liberata da 1 ml del latte ricostituito , nel modo indicato dalla procedura appresso descritta .
3 . PRINCIPIO
L ' attività fosfatasica del latte in polvere è determinata dalla capacità della fosfatasi di liberare fenolo dal fenilfosfato disodico . La quantità di fenolo liberata nelle condizioni prescritte viene determinata per misura spettrofotometrica del colore ottenuto col reattivo di Gibbs .
4 . REATIVITI
4.1 . Soluzione A
Tampone borato-idrossido di bario : pH 10,6 ± 0,1 a 20° C .
Sciogliere in acqua 25,0 g di idrossido di bario ( Ba ( OH )2 . 8H2O ) e portare a 500 ml .
Sciogliere in acqua 11,0 g di acido borico ( H3B3 ) e portare a 500 ml .
Riscaldare le due soluzioni a 50° C e mescolare .
Agitare e lasciar raffreddare a temperatura ambiente .
Regolare il pH a 10,6 ± 0,1 con la soluzione di idrossido di bario ; filtrare .
Conservare la soluzione in recipiente ermeticamente chiuso .
Prima dell ' uso , diluire il tampone con un ' uguale quantità d ' acqua .
4.2 . Soluzione B
Tampone per lo sviluppo del colore .
Sciogliere in acqua 6,0 g di metaborato sodico ( NaBO2 ) ( o 12,6 g di NaBO2.4H2O ) e 20,0 g di cloruro di sodio ; diluire con acqua a 1 000 ml .
4.3 . Soluzione C
Substrato tamponato .
4.3.1 . Sciogliere 0,5 g di fenilfosfato disodico ( Na2C6H5PO42H2O ) in 4,5 ml di soluzione B ( 4.2 ) . Aggiungere 2 gocce di soluzione E ( 4.5 ) e lasciar riposare 30 minuti . Estrarre il colore con 2,5 ml di butanolo ( 4.10 ) . Se necessario , ripetere l ' estrazione del colore . Dopo separazione buttar via il butanolo . Questa soluzione può conservarsi in frigorifero per diversi giorni . Sviluppare ed estrarre il colore ancora una volta prima dell ' uso .
4.3.2 . Pipettare 1 ml di questa soluzione in un pallone tarato da 100 ml e portare a volume con la soluzione A . Preparare la soluzione tampone immediatamente prima dell ' uso .
4.4 . Soluzione D
Precipitante .
Sciogliere 3,0 g di solfato di zinco ( ZnSO4 . 7H2O ) e 0,6 g di soluzione di solfato rameico ( CuSO4 . 5H2O ) e portare a 100 ml con acqua .
4.5 . Soluzione E
Reattivo di Gibbs .
Sciogliere 0,040 g di 2,6 - dibromochinon 1,4 - cloroimmide ( O . C6H2Br2 . NC1 ) in 10 ml di alcool etilico al 96 % . Conservare in frigorifero in bottiglie di vetro scuro . Il reattivo va buttato via quando cambia colore .
4.6 . Tampone per la diluizione del colore
Diluire a 100 ml , con acqua , 10 ml di soluzione ( 4.2 ) ( tampone B per lo sviluppo del colore ) .
4.7 . Soluzione di solfato rameico
Sciogliere in acqua 0,05 g di solfato rameico ( CuSO4 . 5H2O ) e portare a 100 ml con acqua .
4.8 . Soluzione standard fi fenolo
Sciogliere in acqua 0,200 ± 0,001 g di fenolo puro e portare con acqua a 100 ml in pallone tarato . Questa soluzione può essere conservata per diversi mesi in frigorifero . Con acqua , diluire 10 ml di questa soluzione a 100 ml . La soluzione diluita contiene 200 mg di fenolo per 1 ml , e può essere utilizzata per preparare soluzioni più diluite .
4.9 . Acqua distillata bollita .
4.10 . n-Butanolo .
5 . APPARECCHIATURA
5.1 . Bilancia analitica .
5.2 . Bagnomaria , termostatato a 37° C ± 1° C .
5.3 . Spettrofotometro , adatto a letture alla lunghezza d ' onda di 610 mm .
5.4 . Carta da filtro ( Schleicher e Schull 597 , Whatman 42 o equivalente ) .
5.5 . Bagnomaria bollente .
5.6 . Foglio di alluminio .
6 . PROGRAMMA
Precauzioni :
1 . Evitare l ' esposizione diretta alla luce solare .
2 . Vetreria , tappi , spatole , ecc . , devono essere perfettamente puliti . Si raccomanda di risciacquarli e farli bollire con acqua o di trattarli con vapore .
3 . Evitare l ' impiego di materiali plastici ( ad esempio per i tappi ) , in quanto possono contenere fenoli .
4 . La saliva contiene fosfatasi ; bisogna perciò evitare accuratamente la contaminazione da tracce di saliva .
6.1 . Preparazione del campione
6.1.1 . Pesare 10 g del campione con l ' approssimazione di 0,1 g e scioglierli in 90 ml di acqua . La temperatura a cui viene disciolta la polvere non deve in nessun caso superare i 35° C .
6.2 . Determinazione
6.2.1 . In 2 tubi introdurre 1 ml di latte ricostituito preparato come descritto al punto 6.1.1 .
6.2.2 . Riscaldare per 2 minuti uno dei tubi in acqua bollente . Coprire con foglio di alluminio il tubo e il bagnomaria ( 5.5 ) , che potrebbe ad esempio essere un becher , in modo da assicurare che tutto il tubo venga riscaldato . Raffreddare in acqua fredda fino a temperatura ambiente . Impiegare questo tubo per la prova in bianco . Per tutte le operazioni successive , i due tubi vanno trattati allo stesso modo .
6.2.3 . Aggiungere 10 ml della soluzione C ( 4.3.2 ) . Mescolare e porre il tubo in bagnomaria a 37° C ( 5.2 ) .
6.2.4 . Tenere in incubazione nel bagnomaria per 60 minuti , agitando di tanto in tanto .
6.2.5 . Trasferire immediatamente le provette in bagno bollente ( 5.5 ) e riscaldarle per 2 minuti ; raffreddare a temperatura ambiente in acqua fredda .
6.2.6 . Aggiungere 1 ml di soluzione D ( 4.4 ) , mescolare e filtrare per filtro asciutto ; buttar via le prime perzioni del filtrato , finchù esso diviene limpido .
6.2.7 . Porre 5 ml di ciascun filtrato in due provette , aggiungere 5 ml di soluzione B ( 4.2 ) e 0,1 ml di soluzione E ( 4.5 ) . Mescolare .
6.2.8 . Lasciar sviluppare il colore a temperatura ambiente , per 30 minuti , al riparo dalla luce solare .
6.2.9 . Misurare la densità ottica della soluzione del campione contro quella del « bianco » , alla lunghezza d ' onda indicata al punto 5.3 .
6.2.10 . Ripetere la determinazione qualora la densità ottica della soluzione sia superiore a quella del campione standard preparato secondo il punto 7 e contenente 20 l di fenolo .
Se tale limite è superato , diluire un opportuno volume dei latte ricostituito secondo quando indicato in 6.1.1 , con un adeguato volume dello stesso latte , fatto accuratamente bollire come indicato al punto 6.2.2 in modo da inattivare la fosfatasi in esso contenuta .
7 . COSTRUZIONE DELLA CURVA STANDARD
7.1 . In quattro matracci tarati da 100 ml pipettare rispettivamente 1 , 3 , 5 e 10 ml della soluzione standard , diluita secondo quanto descritto al punto 4,8 e portare a volume con acqua ; queste diluizioni conterranno rispettivamente 2 , 6 , 10 e 20 ug/ml di fenolo .
7.2 . Pipettare nelle provette 1 ml ciascuna delle soluzioni standard 7.1 , in modo da ottenere una serie di campioni contenente 0 , 2 , 6 , 10 e 20 ug di fenolo . Preparare un « bilanco » con 1 ml di acqua .
7.3 . In ciascuna delle provette , pippettare successivamente 1 ml della soluzione di solfato di rame ( 4.7 ) , 5 ml della soluzione tampone per la diluizione del colore ( 4.6 ) , 3 ml di acqua e 0,1 ml della soluzione E ( 4.5 ) . Mescolare .
7.4 . Lasciar riposare le provette per 30 minuti , a temperatura ambiente e al riparo dalla luce solare diretta .
7.5 . Misurare l ' assorbanza delle soluzioni in ciascuno dei tubi , in confronto col « bilanco » , alla lunghezza d ' onda indicata al punto 5.3 .
7.6 . Costruire la curva standard riportando i valori dell ' assorbanza in funzione delle quantità di fenolo espresse in ug , come indicato al punto 7.2 .
8 . ESPRESSIONE DEI RISULTATI
8.1 . Calcolo
8.1.1 . Facendo riferimento alla curva di taratura , trasformare in ug di fenolo i valori trovati secondo 6.2.9 .
8.1.2 . Calcolare l ' attività fosfatasica , espressa in ug di fenolo/ml di latte ricostituito , mediante la seguente formula :
attività fosfatasica = 2,4 P
dove P - quantità di fenolo in ug secondo 8.1.1 .
8.1.3 . Se è stato necessario diluire come indicato in 6.2.10 , moltiplicare per il fattore di diluizione il risultato ottenuto secondo 8.1.2 .
8.2 . Ripetibilità
La diferenza fra i risultati di due determinazioni effettuate simultaneamente o in rapida successione dallo stesso analista adoperando lo stesso campione e nelle stesse condizioni , non debbono superare i 2 ug di fenolo liberati per ogni ml di latte ricostituito .
METODO 8 - DETERMINAZIONE DELL ' ATTIVITÀ FOSFATASICA ( PROCEDIMENTO ASCHAFFENBURG E MULLEN )
1 . OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE
Questo metodo descrive la determinazione dell ' attività fosfatasica nel :
- latte in polvere ricco di materia grassa o polvere di latte ricco di materia grassa ;
- latte in polvere , latte intero in polvere , polvere di latte , o polvere di latte intero ;
- latte parzialmente scremato in polvere o polvere di latte parzialmente scremato ;
- latte scremato in polvere o polvere di latte scremato .
2 . DEFINIZIONI
L ' attività fosfatasica del latte in polvere è una misura della quantità di fosfatasi alcalina attiva presente nel prodotto . Essa è espressa come quantità di p-nitrofenolo , espressa in microgrammi , che viene liberata nelle condizioni descritte da 1 ml di latte riscostituito .
3 . PRINCIPIO
Il campione di latte ricostituito viene diluito con un substrato tamponato a pH 10,2 e messo in incubazione alla temperatura di 37° C per 2 ore . In queste condizioni , qualunque fosfatasi alcalina presente nel campione provocherà la liberazione del p-nitrofenilfosfato disodico aggiunto . Il p-nitrofenolo liberato viene determinato in un comparatore semplice , alla luce riflessa , per confronto con vetri standard .
4 . REATTIVI
4.1 . Soluzione tampone carbonato-bicarbonato sodico .
Sciogliere in acqua 3,5 g di carbonato sodico anidro ed 1,5 g di bicarbonato sodico ; portare con acqua a 1 000 ml in pallone tarato .
4.2 . Substrato tamponato
Sciogliere 1,5 g di p-nitrofenilfosfato disodico nel tampone carbonato sodico ( 4.1 ) e portare a 1 000 ml con soluzione tampone in pallone tarato .
Questa soluzione , se conservata in frigorifero ( T 4° C ) , è stabile per un mese , ma su di essa va effettuato un controllo del colore ( vedi punto 6 , precauzione n . 3 ) .
4.3 . Soluzioni defecanti
4.3.1 . Soluzione di solfato di zinco
Sciogliere in acqua 30,0 g di solfato di zinco ( ZnSO4 ) e diluire con acqua a 100 ml in pallone tarato .
4.3.2 . Soluzione di ferrocianuro di potassio
Sciogliere in acqua 17,2 g di ferrocianuro di potassio triidrato ( K4Fe ( CN ) 6 . 3H20 ) e diluire con acqua a 100 ml in pallone tarato .
5 . APPARECCHIATURA
5.1 . Bilancia analitica .
5.2 . Bagnomaria , termostatato a 37 ± 1° C .
5.3 . Colorimetro a comparazione , con disco-speciale contenente vetri colorati standard tarati p-nitrofenolo per ml di latte e provvisto di celle da 2 × 25 mm .
6 . MODO DI OPERARE
Precauzioni :
1 . Dopo l ' impiego le provette vanno vuotate , risciacquate con acqua , lavate in acqua calda contenente un detergente alcalino , poi risciacquate energicamente in acqua di rubinetto calda e pulita . Alla fine , esse devono essere risciacquate con acqua ed essiccate prima dell ' uso .
Le pipette devono essere energicamente risciamente risciacquate immediatemente dopo l ' uso in acqua fredda di rubinetto , poi risciacquate con acqua ed essiccate prima dell ' uso .
2 . I tappi delle provette devono essere sciacquati bene con acqua calda di rubinetto immediatamente dopo l ' uso , poi fatti bollire 2 minuti in acqua .
3 . La soluzione tamponata del substrato ( 4.2 ) deve rimanere stabile per almeno 1 mese se conservata in frigorifero a 4° C o meno . L ' eventuale instabilità è indicata da una colorazione gialla . La prova viene sempre letta in confronto con un prodotto di riferimento previamente bollito e contenente lo stesso substrato tamponato ; si raccomanda di non usare la soluzione qualora essa , confrontata nel comparatore con acqua distillata in celle da 25 mm , dia una lettura colorimetrica superiore a 10 ug .
4 . Adoperare per ciascun campione una pipetta a parte , evitando di contaminarla con la saliva .
5 . L ' illuminazione solare diretta va evitata in qualunque momento .
6.1 . Preparazione del campione
Sciogliere 10 g della polvere in 90 ml di acqua . La temperatura di dissoluzione non deve supera re i 35° C .
6.2 . Determinazione
6.2.1 . Pipettare 15 ml di substrato tamponato ( 4.2 ) in una provetta pulita ed asciuta , aggiungendo subito dopo 2 ml del campione ricostituito ( 6.1 ) da esaminare . Tappare la provetta , mescolare capovolgendo e porre a bagnomaria a 37° C ( 5.2 ) .
6.2.2 . Contemporaneamente , porre nel bagnomaria una provetta di riferimento contenente 15 ml di substrato tamponato e 2 ml di campione ricostituito bolito analogo a quello sotto prova .
6.2.3 . Dopo 2 ore togliere ambedue i tubi dal bagnomaria , aggiungere 0,5 ml di precipitante al solfato di zinco ( 4.3.1 ) , rimettere il tappo , agitare energicamente e lasciar riposare per 3 minuti . Aggiungere 0,5 ml di soluzione di precipitante al ferrocianuro di potassio ( 4.3.2 ) , mescolare bene e filtrare per filtro a pieghe ( 5.4 ) , raccogliendo il filtrato limpido in una provetta pulita .
6.2.4 . Trasferire il filtrato in una cella da 25 mm e confrontare nel colorimetro a comparazione contro il filtrato del campione di riferimento bolito , adoperando il disco speciale ( 5.3 ) .
7 . ESPRESSIONE
7.1 Calcolo
La lettura diretta ottenuta al punto 6.2.4 viene registrata come ug di p-nitrofenolo per ml di campione o per ml di campione ricostituito .
7.2 . Ripetilibità
La differenza fra i risultati di due determinazioni effettuate simultaneamente o in rapida successione dallo stesso analista , adoperando lo stesso campione e nelle stesse condizioni , non deve superare 2 ug di p-nitrofenolo per ml del latte ricostituito .