चरण एक, बायूरेट रिएक्शन के समान है, जहां प्रोटीन, प्रोटीन कॉपर कॉम्प्लेक्स बनाने के लिए एल्कलाइन मीडिया में क्यूप्रिक आयनों के साथ संयोजन करेगा और यह प्रोटीन कॉपर कॉम्प्लेक्स फोलिन सिओक्लेटु रीजेंट के साथ रिएक्शन करेगा जिसमें फॉस्फोटुंगस्टिक एसिड और फॉस्फोमोलीबडिक एसिड होता है।